全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 16期 2016年 8月
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大株红景天化学成分及其心肌细胞保护活性研究
王雪晶 1, 2, 3,罗 鑫 1, 2, 3,周建明 1, 2, 3,宋亚玲 1, 2, 3,赵祎武 1, 2, 3,黄文哲 1, 2, 3,王振中 1, 2, 3,萧 伟 1, 2, 3*
1. 江苏康缘药业股份有限公司,江苏 连云港 222000
2. 中药制药过程新技术国家重点实验室,江苏 连云港 222000
3. 中药提取精制新技术重点研究室,江苏 连云港 222000
摘 要:目的 对大株红景天 Rhodiola wallichiana var. cholaensis根茎的化学成分进行研究,并探讨其对心肌细胞 H9c2损伤
的保护作用。方法 采用动态轴向压缩柱色谱、硅胶柱色谱以及 HPLC 等方法进行分离纯化,利用现代波谱学技术鉴定化
合物结构。对分离得到的化合物进行细胞损伤保护活性实验。结果 从大株红景天根茎中共分离并鉴定了 16个单体化合物,
分别为红景天苷(1)、没食子酸(2)、没食子酸甲酯(3)、槲皮素(4)、邻苯三酚(5)、6″-O-galloylsalidroside(6)、没食
子酸乙酯(7)、山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷(8)、草质素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、草质素-7-O-(3″-O-β-D-葡萄糖基)-α-L-
鼠李糖苷(10)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、草质素(12)、草质素-7-O-α-L-鼠李糖苷(13)、小麦黄素(14)、芦丁(15)、
山柰酚-3-O-(2″-O-β-D-木糖基)-β-D-葡萄糖苷(16)。样品质量浓度为 25 μg/mL 时,化合物 2、6、8、12和 15对心肌细胞H9c2的
保护率分别为 20.40%、31.54%、67.61%、44.27%和 47.84%。结论 化合物 5为首次从红景天属植物中分离得到,化合物 7~16
为首次从该植物中分离得到。化合物 2、6、8、12和 15在一定程度上对心肌细胞H9c2损伤具有保护作用。
关键词:大株红景天;邻苯三酚;山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷;草质素;芦丁;心肌细胞保护作用
中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2016)16 - 2822 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.16.007
Chemical constituents from rhizomes of Rhodiola wallichiana var. cholaensis and
their protective effects on myocardium
WANG Xue-jing1, 2, 3, LUO Xin1, 2, 3, ZHOU Jian-ming1, 2, 3, SONG Ya-ling1, 2, 3, ZHAO Yi-wu1, 2, 3, HUANG
Wen-zhe1, 2, 3, WANG Zhen-zhong1, 2, 3, XIAO Wei1, 2, 3
1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222000, China
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222000, China
3. The Key Laboratory for the New Technique Research of TCM Extraction and Purification, Lianyungang 222000, China
Abstract: Objective To investigate the chemical constituents from the rhizomes of Rhodiola wallichiana var. cholaensis and their
protective effects on myocardium of H9c2 cells. Methods The compounds were isolated by dynamic axial compression
chromatography, silica gel column chromatography, and HPLC. Their structures were identified on the basis of spectral data analysis.
The protective effects of all isolated compounds on myocardium were determined. Results Sixteen compounds were isolated from the
rhizomes of R. wallichiana var. cholaensis and identified as salidroside (1), gallic acid (2), methyl gallate (3), quercetin (4), pyrogallol (5),
6″-O-galloylsalidroside (6), ethyl gallate (7), kaemnpferol-7-O-α-L-rhamnopyranoside (8), herbacertin-7-O-β-D-glucopyranoside (9),
rhodiosin (10), kaemnpferol-3-O-β-D-glucopyranoside (11), herbacetin (12), herbacertin-7-α-L-rhamnopyranoside (13), tricin (14), rutin (15),
and kaemnpferol-3-O-(2″-O-β-D-xylosyl)-β-D-glucopyranoside (16). Compounds 2, 6, 8, 12, and 15 showed the significant protective effects
against H9c2 cells at the concentration of 25 μg/mL and the protective ratios were 20.40%, 31.54%, 67.61%, 44.27%, and 47.84%.
Conclusion Compound 5 is isolated from the species of genus Rhodiola L. for the first time, and compounds 7—16 are obtained from the
plant for the first time. Compounds 2, 6, 8, 12, and 15 could protect the myocardium of H9c2 cells to some extent.
Key words: Rhodiola wallichiana (HK.) S. H. Fu var. cholaensis (Praeger) S. H. Fu; pyrogallol; kaemnpferol-7-O-α-L-rhamnopyranoside;
herbacetin; rutin; protective effects on myocardium
收稿日期:2016-01-12
基金项目:科技部重大新药创制:现代中药创新集群与数字制药技术平台(2013ZX09402203)
作者简介:王雪晶,助理研究员,主要从事中药新药研究工作。Tel: 15261395101 E-mail: wangxuejing87@126.com
*通信作者 萧 伟,男,研究员级高级工程师,博士,研究方向为中药新药的研究与开发。Tel: (0518)81152367 E-mail: kanionlunwen@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 16期 2016年 8月
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大株红景天 Rhodiola wallichiana (HK.) S. H. Fu
var. cholaensis (Praeger) S. H. Fu 为 景 天 科
(Crassulaceae)红景天属 Rhodiola L. 多年生草本植
物,又名大株粗茎红景天,主产于西藏及云南西北部
等地。大株红景天作为传统藏药,应用广泛且用药历
史悠久[1]。现代临床及药理学研究表明,红景天属植
物具有明显的抗肿瘤、抗衰老、抗缺氧、抗辐射、抗
疲劳以及调节神经系统等作用[2-4],其主要化学成分有
酪醇及其苷类、黄酮苷类、苯丙素类及萜类等[5]。目
前对红景天属的大花红景天 Rhodiola crenulata (HK.
f. et Thoms.) H. Ohba、库页红景天 Rhodiola
sachalinensis A. Bor.、玫瑰红景天 Rhodiola rosea L.、
长鞭红景天 Rhodiola fastigiata (HK. f. et Thoms.) S. H.
Fu、唐古特红景天 Rhodiola algida (Ledeb.) Fisch. et
Mey. var. tangutlca (Maxim.) S. H. Fu及四裂红景天
Rhodiola quadrifida (Pall.) Fisch. et Mey. 等研究报道
较多,但有关大株红景天的化学成分研究却鲜有报
道[6]。本实验对大株红景天展开了系统的化学成分
研究,从其水提取物中分离得到 16 个化合物,并
采用现代波谱学手段鉴定其结构,分别为红景天苷
(salidroside,1)、没食子酸(gallic acid,2)、没食子
酸甲酯(methyl gallate,3)、槲皮素(quercetin,4)、
邻苯三酚(pyrogallol,5)、6″-O-galloylsalidroside(6)、
没食子酸乙酯(ethyl gallate,7)、山柰酚-7-O-α-L-鼠
李糖苷(kaemnpferol-7-α-L-rhamnopyranoside,8)、
草 质 素 -7-O-β-D-吡 喃 葡 萄 糖 苷 ( herbacertin-
7-O-β-D-glucopyranoside,9)、草质素 -7-O-(3″-O-
β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖苷(rhodiosin,10)、山柰
酚 -3-O-β-D- 吡 喃 葡 萄 糖 苷 ( kaemnpferol-3-O-
β-D-glucopyranoside,11)、草质素(herbacetin,12)、
草 质 素 -7-O-α-L- 鼠 李 糖 苷 ( herbacertin-7-α-L-
rhamnopyranoside,13)、小麦黄素(tricin,14)、芦
丁(rutin,15)、山柰酚-3-O-(2″-O-β-D-木糖基)-β-D-
葡萄糖苷 [kaemnpferol-3-O-(2″-O-β-D-xylosyl)-β-D-
glucopyranoside,16]。其中化合物 5 为首次从红景
天属植物中分离得到,化合物 7~16为首次从大株
红景天中分离得到。体外活性实验结果表明化合物
2、6、8、12 和 15 对 H2O2所致的 H9c2 细胞损伤
具有一定的保护作用。
1 仪器与材料
动态轴向压缩反相柱色谱(江苏汉邦科技有限
公司),Agilent 1260制备型高效液相色谱仪(美国
Agilent 公司),Bruker-AV-400 型核磁共振光谱仪
(Bruker公司)。Sephadex LH-20(Pharmacia公司);
Fuji C18(50 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;Welch
Ultimate Polar-Rp(21.2 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;
色谱乙腈(OCEANPAK),薄层及柱色谱硅胶(青岛
海洋化工厂),分析纯试剂(南京化学试剂有限公司)。
SW-CJ-2F 型超净工作台(苏净集团苏州安泰
空气技术有限公司),二氧化碳培养箱(Thermo
scientific 3100),CKX41SF倒置显微镜(OLYPUS),
96 孔细胞培养板(美国 Costar),25 cm2细胞培养
瓶(美国 Costar), infinite M200 PRO 酶标仪
(TEKEN),移液枪(Eppendorf),BXM-30R 高压
蒸汽灭菌锅(立式压力蒸气灭菌锅),LD4-2A离心
机(北京众益中和生物技术有限公司),c1028细胞
自动计数仪(invitrogen)。DMEM培养基(Gibco,
批号 8112420),胎牛血清(Gibco,批号 608759),
胰蛋白酶(Biotopped,批号 BH01018),G3580 MTS
细胞毒性检测试剂盒(Promage),H9c2 心肌细胞
株(中国科学院典型培养物保藏中心上海细胞库)。
大株红景天由南京中医药大学吴启南教授鉴
定为景天科植物大株红景天 Rhodiola wallichiana
(HK.) S. H. Fu var. cholaensis (Praeger) S. H. Fu的干
燥根及根茎。
2 提取与分离
大株红景天干燥根茎 10 kg,水回流提取 2次,
每次 2 h,提取液合并浓缩后加适量 95%乙醇醇沉,
静置,离心,减压浓缩上清液。浓缩液与反相 C18
拌样,经 DAC 反相色谱以乙腈(A)-水(B)为流
动相,0~70 min,10%~75% A,70~85 min,75%~
100% A进行梯度洗脱,收集得到 8个流分(Fr. 1~8)。
Fr. 1经硅胶柱色谱,以二氯甲烷-甲醇(50∶1→1∶1)
梯度洗脱,再经 Sephadex LH-20柱色谱纯化,得化合
物 1(50 mg)、2(63 mg)。Fr. 2经硅胶柱色谱,以
二氯甲烷-甲醇(50∶1→1∶1)梯度洗脱,再经HPLC,
以 5%~45%乙腈-水 0~60 min梯度洗脱及 Sephadex
LH-20反复分离纯化,得到化合物 3(15 mg)、4(14
mg)、5(8 mg)、6(64 mg)。Fr. 3经硅胶柱色谱以
醋酸乙酯 -甲醇(30∶1→1∶1)梯度洗脱结合
Sephadex LH-20柱色谱纯化,得到化合物 7(77 mg)、
8(43 mg)、9(22 mg)。Fr. 4经HPLC结合 Sephadex
LH-20柱色谱反复分离纯化,得到化合物 13(14 mg)、
15(10 mg)、11(8 mg)、12(9 mg)。Fr. 6重结晶得
到化合物 10(48 mg),除去结晶后溶液经 HPLC制
备得到化合物 16(7 mg)、14(9 mg)。
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3 结构鉴定
化合物 1:白色粉末,ESI-MS m/z: 301 [M+H]+。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.06 (2H, d, J = 8.5 Hz,
H-2,6), 6.69 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3, 5), 4.29 (1H, d, J =
7.8 Hz, H-1′), 2.82 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-7), 3.18 (2H, m,
H-8);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 155.4 (C-1),
129.6 (C-4), 129.3 (C-3, 5), 114.7 (C-2, 6), 103.0 (C-1′),
73.7 (C-2′), 76.5 (C-3′), 70.7 (C-8), 70.2 (C-4′), 76.7
(C-5′), 61.3 (C-6′), 35.0 (C-7)。以上数据与文献报道[7]
一致,故鉴定化合物 1为红景天苷。
化合物 2:无色针状结晶(甲醇),ESI-MS m/z: 169
[M-H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.06 (2H, s,
H-2, 6);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 122.3 (C-1),
146.5 (C-2, 6), 110.6 (C-3, 5), 139.8 (C-4), 170.6
(-COOH)。数据与文献报道[8]一致,故鉴定化合物 2
为没食子酸。
化合物 3:浅黄色粉末,ESI-MS m/z: 183 [M-
H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.04 (2H, s,
H-2, 6), 3.81 (3H, s, -CH3);13C-NMR (100 MHz,
CD3OD) δ: 120.0 (C-1), 145.1 (C-2, 6), 108.6 (C-3,
5), 138.4 (C-4), 167.6 (-COO), 50.8 (-CH3)。数据与文
献报道[9]一致,故鉴定化合物 3为没食子酸甲酯。
化合物 4:黄色粉末,ESI-MS m/z: 303 [M-
H]−。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.32 (1H, d,
J = 1.8 Hz, H-6), 6.53 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-8), 7.00
(1H, d, J = 8.1 Hz, H-5′), 7.69 (1H, dd, J = 8.1, 2.4
Hz, H-6′), 7.83 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-2′), 9.41 (1H, s,
3-OH), 10.77 (1H, s, 7-OH), 12.18 (1H, s, 5-OH);
13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 94.6 (C-8), 99.3
(C-6), 104.3 (C-10), 115.9 (C-2′), 116.4 (C-5′), 120.8
(C-6′), 121.5 (C-1′), 136.9 (C-3), 162.5 (C-9), 145.9
(C-3′), 146.9 (C-2), 148.5 (C-4′), 157.8 (C-7), 176.6
(C-4)。以上数据与文献报道[10]一致,故鉴定化合物
4为槲皮素。
化合物 5:白色粉末,ESI-MS m/z: 127 [M+
H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 6.48 (1H, t, J =
8.0 Hz, H-5), 6.31 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-4, 6);
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 145.7 (C-1, 3),
132.9 (C-2), 118.7 (C-5), 106.9 (C-4, 6)。以上数据与
文献报道[11]一致,故鉴定化合物 5为邻苯三酚。
化合物 6:白色粉末,ESI-MS m/z: 453 [M+H]+。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.10 (2H, s, H-2, 6),
6.98 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2″, 6″), 6.65 (2H, d, J = 8.4
Hz, H-3″, 5″), 4.33 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1′), 2.79 (2H, t,
J = 7.5 Hz, H-7″);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ:
120.0 (C-1), 108.9 (C-2, 6), 145.1 (C-3, 5), 138.5 (C-4),
166.9 (-COO), 103.1 (C-1′), 73.7 (C-2′), 76.5 (C-3′), 70.9
(C-4′), 74.1 (C-5′), 63.4 (C-6′), 129.2 (C-1″), 129.5
(C-2″, 6″), 114.7 (C-3″, 5″), 155.3 (C-4″), 35.1 (C-7″),
70.3 (C-8″)。以上数据与文献报道[12]一致,故鉴定化
合物 6为 6″-O-galloylsalidroside。
化合物 7:无色针晶(甲醇),ESI-MS m/z: 197
[M-H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.05 (2H,
s, H-2, 6), 4.27 (2H, q, J = 7.0 Hz, H-8), 1.34 (3H, t,
J = 7.0 Hz, H-9);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ:
167.2 (C-7), 145.1 (C-3, 5), 138.3 (C-4), 120.4 (C-1),
108.6 (C-2, 6), 60.3 (C-8), 13.2 (C-9)。以上数据与文
献报道[13]一致,故鉴定化合物 7为没食子酸乙酯。
化合物 8:黄色粉末,ESI-MS m/z: 433 [M+
H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.12 (2H, d, J =
8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.93 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3′, 5′),
6.76 (1H, s, H-8), 6.45 (1H, s, H-6), 5.54 (1H, s,
H-1″), 1.25 (3H, d, J = 7.5 Hz, H-6″);13C-NMR (100
MHz, CD3OD) δ: 177.6 (C-4), 163.4 (C-5), 162.4
(C-7), 160.9 (C-4′), 157.9 (C-9), 148.9 (C-2), 137.7
(C-3), 130.9 (C-2′, 6′), 123.7 (C-1′), 116.5 (C-3′, 5′),
106.4 (C-10), 99.9 (C-6), 95.5 (C-8);100.1 (C-1″),
73.8 (C-4″), 72.0 (C-3″), 71.9 (C-2″), 71.4 (C-5″),
18.2 (C-6″)。以上数据与文献报道[14]一致,故鉴定
化合物 8为山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷。
化合物 9:黄色粉末,ESI-MS m/z: 477 [M-
H]−。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.65 (1H, s,
H-6), 6.97 (2H, d, J = 9.2 Hz, H-3′, 5′), 8.15 (2H, d,
J = 9.2 Hz, H-2′, 6′), 5.18 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-1″);
13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 176.5 (C-4), 151.6
(C-5), 150.6 (C-7), 159.5 (C-4′), 143.6 (C-9), 147.4
(C-2), 135.5 (C-3), 129.6 (C-2′, 6′), 121.6 (C-1′),
115.7 (C-3′, 5′), 104.7 (C-10), 99.9 (C-6), 97.7 (C-8),
101.3 (C-1″), 73.4 (C-2″), 75.5 (C-3″), 69.8 (C-4″),
77.3 (C-5″), 60.6 (C-6″)。以上数据与文献报道[15]一致,
故鉴定化合物 9为草质素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物 10:黄色粉末,ESI-MS m/z: 611 [M+
H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.91 (1H,
5-OH), 8.15 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-2′, 6′), 6.95 (2H, d,
J = 8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.61 (1H, s, H-6), 5.56 (1H, d,
J = 1.2 Hz, H-1″), 4.48 (1H, d, J = 7.0 Hz, H-1′′′),
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1.13 (3H, d, J = 6.0 Hz, H-6″);13C-NMR (100 MHz,
DMSO-d6) δ: 147.8 (C-2), 136.2 (C-3), 176.8 (C-4),
150.6 (C-5), 98.7 (C-6), 152.0 (C-7), 127.5 (C-8),
144.9 (C-9), 105.2 (C-10), 122.3 (C-1′), 130.3 (C-2′,
6′), 115.9 (C-3′, 5′), 159.8 (C-4′), 99.6 (C-1″), 69.8
(C-2″), 81.4 (C-3″), 70.2 (C-4″), 69.4 (C-5″), 18.3
(C-6″), 104.9 (C-1′′′), 74.5 (C-2′′′), 76.7 (C-3′′′), 70.9
(C-4′′′), 77.3 (C-5′′′), 61.4 (C-6′′′)。以上数据与文献报道[16]
一致,故鉴定化合物 10为草质素-7-O-(3″-O-β-D-葡萄
糖基)-α-L-鼠李糖苷。
化合物 11:淡黄色粉末,ESI-MS m/z: 447 [M-
H]−。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.02 (2H, d,
J = 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.88 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3′, 5′),
6.42 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-8), 6.17 (1H, d, J = 1.6 Hz,
H-6), 5.44 (1H, d, J = 7.3 Hz, H-1″);13C-NMR (100
MHz, DMSO-d6) δ: 156.2 (C-2), 133.0 (C-3), 177.2
(C-4), 161.0 (C-5), 98.5 (C-6), 164.0 (C-7), 93.3
(C-8), 158.4 (C-9), 104.2 (C-10), 120.7 (C-1′), 130.7
(C-2′), 115.0 (C-3′), 161.3 (C-4′), 116.4 (C-5′), 130.7
(C-6′), 100.8 (C-1″), 74.2 (C-2″), 76.2 (C-3″), 70.1
(C-4″), 77.4 (C-5″), 60.4 (C-6″)。以上数据与文献报
道[17]基本一致,故鉴定化合物11为山柰酚-3-O-β-D-
吡喃葡萄糖苷。
化合物 12:黄色粉末,ESI-MS m/z: 303 [M+
H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.22 (2H, d,
J = 8.9 Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-3′, 5′),
6.64 (1H, s, H-6);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ:
147.0 (C-2), 135.7 (C-3), 176.4 (C-4), 151.5 (C-5),
98.4 (C-6), 153.1 (C-7), 125.0 (C-8), 145.2 (C-9),
104.1 (C-10), 122.3 (C-1′), 130.2 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′,
5′), 159.5 (C-4′)。以上数据与文献报道[18]一致,故鉴
定化合物 12为草质素。
化合物 13:黄色粉末,ESI-MS m/z: 449 [M+
H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.15 (2H, d,
J = 8.9 Hz, H-2′, 6′), 6.95 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-3′, 5′),
6.60 (1H, s, H-6), 5.12 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-1″), 1.13
(3H, d, J = 6.4 Hz, H-6″);13C-NMR (100 MHz,
DMSO-d6) δ: 147.8 (C-2), 136.2 (C-3), 176.8 (C-4),
150.6 (C-5), 98.7 (C-6), 152.0 (C-7), 127.5 (C-8),
144.9 (C-9), 105.0 (C-10), 122.3 (C-1′), 130.3 (C-2′,
6′), 115.9 (C-3′, 5′), 159.8 (C-4′), 99.8 (C-1″), 70.5
(C-2″), 70.3 (C-3″), 72.1 (C-4″), 70.3 (C-5″), 18.3
(C-6″)。以上数据与文献报道[19]基本一致,故鉴定
化合物 13为草质素-7-O-α-L-鼠李糖苷。
化合物 14:淡黄色针晶(丙酮),ESI-MS m/z:
353 [M+Na]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ:
7.33 (2H, s, H-2′, 6′), 6.98 (1H, s, H-3), 6.56 (1H, d,
J = 2.0 Hz, H-8), 6.20 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 3.89
(6H, s, 3′, 5′-OCH3);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)
δ: 181.9 (C-4), 164.1 (C-7), 163.6 (C-2), 161.4 (C-9),
157.3 (C-5), 148.2 (C-3′, 5′), 139.8 (C-4′), 120.4
(C-1′), 104.3 (C-2′, 6′), 103.7 (C-10), 103.6 (C-3),
98.8 (C-6), 94.2 (C-8), 56.3 (-OCH3)。以上数据与文
献报道[20]基本一致,故鉴定化合物 14为小麦黄素。
化合物 15:黄色粉末,ESI-MS m/z: 633 [M+
Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 6.21 (1H, d, J =
2.0 Hz, H-6), 6.40 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 7.67 (1H, d,
J = 2.0 Hz, H-2′), 6.87 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5′), 7.63
(1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz, H-6′), 5.12 (1H, d, J = 7.6 Hz,
H-1″), 4.96 (1H, d, J = 6.8 Hz, H-1′′′);13C-NMR (100
MHz, CD3OD) δ: 158.4 (C-2), 135.5 (C-3), 179.3
(C-4), 162.9 (C-5), 99.8 (C-6), 165.9 (C-7), 94.7 (C-8),
159.2 (C-9), 105.5 (C-10), 122.9 (C-1′), 115.9 (C-2′),
145.7 (C-3′), 149.7 (C-4′), 115.9 (C-5′), 123.4 (C-6′),
102.3 (C-1″), 73.8 (C-2″), 77.1 (C-3″), 71.3 (C-4″),
78.1 (C-5″), 68.4 (C-6″), 104.6 (C-1′′′), 75.6 (C-2′′′),
71.9 (C-3′′′), 72.1 (C-4′′′), 69.6 (C-5′′′), 17.7 (C-6′′′)。以
上数据与文献报道[21]基本一致,故鉴定化合物 15
为芦丁。
化合物 16:淡黄色粉末,ESI-MS m/z: 579 [M-
H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 6.19 (1H, d, J =
2.0 Hz, H-6), 6.39 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 8.07 (2H,
d, J = 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.89 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3′,
5′), 5.48 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-1″), 4.74 (1H, d, J = 6.8
Hz, H-1′′′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 158.5
(C-2), 135.0 (C-3), 179.7 (C-4), 163.2 (C-5), 99.7
(C-6), 165.8 (C-7), 94.6 (C-8), 161.5 (C-9), 105.8
(C-10), 122.8 (C-1′), 132.3 (C-2′, 6′), 116.2 (C-3′, 5′),
158.3 (C-4′), 100.7 (C-1″), 82.5 (C-2″), 77.2 (C-3″),
71.1 (C-4″), 78.4 (C-5″), 62.4 (C-6″), 105.5 (C-1′′′),
75.0 (C-2′′′), 78.2 (C-3′′′), 71.0 (C-4′′′), 66.7 (C-5′′′)。
以上数据与文献报道[22]基本一致,故鉴定化合物 16
为山柰酚-3-O-(2″-O-β-D-木糖基)-β-D-葡萄糖苷。
4 心肌细胞保护实验
以 H9c2大鼠心肌细胞株为受试对象,将培养 3
代以后的 H9c2 细胞用 0.25%的胰酶消化,制成单
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 16期 2016年 8月
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细胞悬液并计数,以每孔 3 000个的密度接种于 96
孔板,于 37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中培养 24 h,
吸弃上清,将细胞分成空白组、模型组、给药组,
每组 6个复孔。空白组加入 100 μL 无血清 DMEM
培养基;模型组及给药组均加入含 200 μmol/L H2O2
的无血清 DMEM培养基 100 μL 氧化损伤 3 h后,
给药组分别加入 100 μL 质量浓度为 25 μg/mL 的化
合物 1~16共培养,阳性对照组加入质量浓度为 25
μg/mL 的槲皮苷。3 h后每孔加入 20 μL MTS 溶液
培养 4 h,于 490 nm下测定吸光度(A)值。每次
测定均需同时测定空白组与阳性对照组。根据公式
计算细胞保护率。
细胞保护率=(A 给药-A 模型)/(A 空白-A 模型)
实验结果表明,在 25 μg/mL 的条件下,化合
物 2、6、8、12和 15作用 4 h后细胞保护率分别为
20.40%、31.54%、67.61%、44.27%和 47.84%。同
等条件下,槲皮苷的细胞保护率为 20.15%。说明化
合物 2、6、8、12和 15对 H2O2所致的 H9c2细胞
损伤具有一定程度的保护作用。
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