全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 5 期 2013 年 3 月 ·571·
UPLC 法同时测定胆木注射液中原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸
朱粉霞 1，贾晓斌 1*，李秀峰 2，王静静 1，郑红毅 1
1. 江苏省中医药研究院 国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室，江苏 南京 210028
2. 海南制药厂有限公司 黎药工程中心，海南 五指山 572200
摘 要：目的 建立同时测定胆木注射液中原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的方法。方法 采用 UPLC 法，色谱
柱 Waters Acquity UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），流动相为甲醇（A）-0.1%乙酸水溶液（B），梯度洗脱；检测
波长为 260 nm（原儿茶酸）和 325 nm（新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸）；体积流量 0.4 mL/min；柱温 35 ℃。结果 原儿茶
酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸分别在 3.984～159.400、1.440～57.600、1.204～48.160、1.056～42.240 μg/mL 内具有良好
的线性关系；平均回收率分别 98.66%、96.76%、101.1%、103.6%。结论 UPLC 分离效果及重复性好，且快速、准确，可
作为胆木注射液的质量控制方法。
关键词：胆木注射液；原儿茶酸；新绿原酸；绿原酸；隐绿原酸；UPLC
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)05 - 0571 - 03
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.05.014
Simultaneous determination of protocatechuic acid, neochlorogenic acid,
chlorogenic acid, and cryptochlorogenic acid in Danmu Injection by UPLC
ZHU Fen-xia1, JIA Xiao-bin1, LI Xiu-feng2, WANG Jing-jing1, ZHENG Hong-yi1
1. Key Laboratory of New Drug Delivery System of Chinese Meteria Medica, Jiangsu Provincial Academy of Chinese Medicine,
Nanjing 210028, China
2. Engineering Center for Li Nationality Medicine, Hainan Pharmaceutical Factory, Co., Ltd., Wuzhishan 572200, China
Key words: Danmu Injection; protocatechuic acid; neochlorogenic acid; chlorogenic acid; cryptochlorogenic acid; UPLC

胆木注射液是由胆木单味药材开发研制而成的
中药注射剂，临床常用于治疗上呼吸道感染、支气
管炎、急性扁桃体炎及咽喉炎等症。胆木药材为茜
草科乌檀属植物，是黎族医学常用植物药，收载于
《黎族医药》[1]，其主要含有生物碱[2-5]，为胆木注
射液发挥疗效的药效组分。本课题组对胆木注射液
中间体的化学成分进行系统研究，发现原儿茶酸的
量很高，且从中鉴定出新绿原酸、绿原酸和隐绿原
酸等酚酸类物质，这类化合物被证实具有良好抗氧
化、抗炎、抗微生物等生物活性[6-7]，很可能是胆木
注射液发挥临床疗效的重要药效组分。
目前对胆木药材和胆木注射液的质量控制研究
仅见生物碱异长春花苷内酰胺的定量测定[8-9]，本实
验选择了具有一定抗炎抗菌作用的酚酸类化合物作
为质量控制指标进行定量测定，结果表明，所建立
的方法专属性强，准确、快速，可为全面控制胆木
注射液质量提供新的分析手段，并为胆木注射液的
再评价提供新的研究思路。
1 仪器与试药
Acquity UPLC（美国 Waters 公司，包括二元高
压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二
极管阵列检测器、Empower 2 色谱工作站）；Mettler
Toledo AB135—S 分析天平（瑞士 Mettler Toledo 公
司）；Milli—Q 超纯水机（美国 Millipore 公司）。原
儿茶酸（批号 110809）和绿原酸（批号 110753）对
照品（中国药品生物制品检定所），新绿原酸（批号
N100620）和隐绿原酸（批号 C100616）购自成都
普瑞科技开发有限公司；甲醇（色谱纯，德国 Merck

收稿日期：2012-06-17
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81203001）
作者简介：朱粉霞（1977—），女，博士，副研究员，研究方向为中药分析。Tel: (025)85608672 15850583116 E-mail: zfxcjq@126.com
*通信作者 贾晓斌 Tel: (025)85608672 E-mail: xiaobinjia_nj@126.com
网络出版时间：2013-02-22 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20130222.1655.007.html
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公司）；乙酸（色谱纯，美国 Tedia 公司）；胆木注
射液（批号 100101、100102、100201、100701），
海南制药厂有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精确称取原儿茶酸 9.96 mg、新绿原酸 2.40 mg、
绿原酸 3.01 mg 和隐绿原酸 1.76 mg，分别置 10 mL
棕色量瓶中，以适量甲醇溶解，以超纯水稀释至刻
度，制得对照品储备液，其质量浓度分别为：原儿
茶酸 0.996 mg/mL，新绿原酸 0.240 mg/mL、绿原酸
0.301 mg/mL 和隐绿原酸 0.176 mg/mL。
2.2 供试品溶液制备
量取胆木注射液 1.0 mL（2 mL/支）于 10 mL
量瓶中，以超纯水定容，过 0.22 μm 微孔滤膜，滤
液作为供试品溶液。
2.3 色谱条件
色谱柱为 Waters Acquity UPLC BEH C18柱（50
mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相为甲醇（A）-0.1%
乙酸水溶液（B），梯度洗脱，0～2 min，3%～5% A，
2～5 min，5%～6% A，5～12 min，6%～8% A；检
测波长：260 nm（原儿茶酸）和 325 nm（新绿原酸、
绿原酸和隐绿原酸）；体积流量 0.4 mL/min；柱温
35 ℃；进样量 5 μL。在上述色谱条件下，对照品
及胆木注射液样品 UPLC 色谱图见图 1。
2.4 线性关系、检测限（LOD）及定量限（LOQ）
取“2.1”项下各对照品储备液，配制成含原儿





1-原儿茶酸 2-新绿原酸 3-绿原酸 4-隐绿原酸
1-protocatechuic acid 2-neochlorogenic acid 3-chlorogenic acid 4-cryptochlorogenic acid

图 1 对照品 (A) 和样品 (B) 在 260 nm (I) 和 325 nm (II) 的 UPLC-DAD 图
Fig. 1 UPLC-DAD chromatograms of reference substance (A) and sample (B) determined at 260 (I) and 325 nm (II)

茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的质量浓度分
别为 159.36、57.60、48.16、42.24 μg/mL 的混合对
照品溶液，以超纯水稀释，稀释倍数分别为 2、4、
8、10、20、40，得到系列对照品溶液。原儿茶酸的
质量浓度依次为 79.680、39.340、19.920、15.940、
7.970、3.984 μg/mL；新绿原酸的质量浓度依次为
28.800、14.400、7.200、5.760、2.880、1.440 μg/mL；
绿原酸的质量浓度依次为 24.080、12.040、6.020、
4.820、2.410、1.204 μg/mL；隐绿原酸的质量浓度
依次为 21.120、10.560、5.280、4.220、2.110、1.056
μg/mL，过 0.22 μm 微孔滤膜后，依前述色谱条件
进样。以峰面积积分值（Y）对质量浓度（X）进行
线性回归，得到各成分的回归方程、相关系数和线
性范围，见表 1。

表 1 原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的回归方程、LOD 和 LOQ
Table 1 Linear regression equations, LOD, and LOQ for protocatechuic acid, neochlorogenic acid,
chlorogenic acids, and cryptochlorogenic acid
化合物 回归方程 线性范围 / (μg·mL−1) r LOD / (ng·mL−1) LOQ / (ng·mL−1)
原儿茶酸 Y＝50 881 X＋57 225 3.984～159.400 0.999 8 12.01 41.01
新绿原酸 Y＝21 725 X＋26 303 1.440～ 57.600 0.999 6 32.02 89.09
绿原酸 Y＝17 497 X＋16 809 1.204～ 48.160 1.000 0 36.11 93.12
隐绿原酸 Y＝24 349 X＋15 989 1.056～ 42.240 0.999 5 22.81 96.10
0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10
t / min
1
A-I
2 3 4
B-I
A-II
B-II
2
1
3
4
1
2 3
4
3
2
1
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将混合对照品以超纯水不断稀释后分析，得到
4 种成分的检测限（LOD，S/N≈3～4）和定量限
（LOQ，S/N≈10～12），结果见表 1。
2.5 精密度试验
取同一份供试品溶液（批号 100102），在相同
色谱条件下连续进样 6 次，测定各色谱峰的峰面积，
计算 RSD。4 种成分的 RSD 分别为 0.87%、1.24%、
1.12%、1.09%，表明方法精密度良好。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液（批号 100102），于 0、2、4、6、
7 h 进样 5 μL，测定各色谱峰的峰面积，计算 RSD，
4 种成分的 RSD 分别为 1.10%、1.31%、1.22%、
1.30%，表明供试品溶液中 4 种成分在 7 h 内稳定。
2.7 重复性试验
取 6 支胆木注射液（每支 2 mL，批号 100102），
混匀，按“2.2”项下制备 6 份供试品溶液，进行重
复性试验。测定各色谱峰的峰面积，计算 RSD，4
种成分的 RSD 分别为 2.25%、1.72%、0.78%、1.27%，
表明方法的重复性好。
2.8 加样回收率试验
取“2.1”项下各对照品储备液，配制成含原儿
茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的质量浓度依
次为 199.2、96.0、90.3、52.8 μg/mL 的混合对照品
溶液，分别精密量取混合对照品溶液 1.0 mL 和已知
质量分数的供试品（批号 100102）1.0 mL 6 份，置
10 mL 量瓶中，以超纯水定容，制备 6 份加样回收
样品。按上述色谱条件测定，分别计算回收率。原
儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的平均回收
率分别为 98.66%、96.76%、101.1%、103.6%，RSD
分别为 1.74%、3.57%、2.40%、2.67%。
2.9 样品测定
分别取 4 个不同批号的胆木注射液按“2.2”项
下方法操作，按上述色谱条件进样分析，以外标法
计算，测定结果见表 2。

表 2 胆木注射液中 4 种成分的测定
Table 2 Determination of four compoments
in Danmu Injection
质量浓度 / (μg·mL−1) 批 号
原儿茶酸 新绿原酸 绿原酸 隐绿原酸
100101 233.5 65.9 63.1 34.2
100102 210.6 114.7 119.9 59.7
100201 238.5 67.3 63.3 34.6
100701 193.3 155.0 153.0 83.6
3 讨论
经二极管阵列检测器对 4 种成分进行全波长扫
描，原儿茶酸最大吸收波长为 260 nm，新绿原酸、
绿原酸和隐绿原酸最大吸收波长为 325 nm，本实验
采用两个检测波长测定 4 种酚酸类化合物，即 260
nm 下测定原儿茶酸，325 nm 下测定新绿原酸、绿
原酸和隐绿原酸。
本实验首次利用 UPLC-PDA 法对胆木注射液
中的原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸进行
同时测定，分析方法灵敏、准确、快速，分析效率
高，12 min 内即可同时完成 4 种成分的准确测定，
溶剂消耗少，UPLC 作为一种新的色谱技术应用于
中药材及其制剂质量控制有着非常广阔的前景。
4 批胆木注射液样品中的绿原酸类化合物测定
结果差异较大，分析其原因可能有两方面，一是绿
原酸类化合物本身不稳定；二是胆木药材中绿原酸
类化合物的量差异较大，导致成品中的量差异较大，
需要进一步考察。
胆木注射液的临床疗效主要是抗炎作用，其主
要含生物碱成分，而具有一定抗炎作用的酚酸类成
分的定量测定未见报道，本实验可为全面控制胆木
注射液质量提供新的分析手段，并为进一步研究胆
木注射液的药理药效提供实验依据，为胆木注射液
的再评价提供新的思路。
参考文献
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