全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 1 期 2011 年 1 月 • 78 •
高压炮制对何首乌中二苯乙烯苷和卵磷脂的影响
许冬瑾,陶 艳*,王三姓,程文胜,钟小芳,尤北宏
康美药业股份有限公司,广东 普宁 515300
摘 要:目的 考察高压炮制方法对二苯乙烯苷和卵磷脂的影响,优选何首乌炮制工艺。方法 用不同辅料润制何首乌,然
后采用高压方法进行炮制,炮制时间为 4、6、8、10 h;分别采用钼蓝比色法和 HPLC 法测定炮制品中卵磷脂和二苯乙烯苷。
结果 随着各种炮制方法时间的延长,卵磷脂和二苯乙烯苷量均有所降低,并且高压豆制品>高压酒制品>高压酒豆制品>
高压清蒸品,以豆制为佳。结论 以卵磷脂与二苯乙烯苷为考察指标,建议可采用高压豆制 4 h 方法炮制何首乌。
关键词:何首乌;高压炮制;二苯乙烯苷;高效液相色谱;卵磷脂;钼蓝比色法
中图分类号:R284.2; R286.02 文献标识码:B 文章编号:0253 - 2670(2011)01 - 0078 - 03
Effect of high pressure processing on stilbene glycoside and phosphatidylcholine
in Polygoni Multiflori Radix
XU Dong-jin, TAO Yan, WANG San-xing, CHENG Wen-sheng, ZHONG Xiao-fang, YOU Bei-hong
Kangmei Pharmaceutical Co., Ltd., Puning 515300, China
Key words: Polygoni Multiflori Radix; high pressure processing; stilbene glycoside; HPLC; phosphatidylcholine; molybdenum blue
colorimetric method
何 首 乌 为 蓼 科 植 物 何 首 乌 Polygonum
multiflorum Thunb.的干燥块根,生品性平,味苦,
微甘,生津润燥,解毒散结;炮制品性变温,味转
甘,补肝肾,益精血。临床多采用制首乌入药,该
药主要有效成分为卵磷脂、二苯乙烯类化合物、蒽
醌类化合物等。卵磷脂可促进血液细胞的生长发育,
能阻止胆固醇在肝内沉积,阻止类脂类在血清滞留
或渗透到动脉内膜而减轻动脉硬化,具抗纤溶活性,
能促进纤维蛋白裂解,减轻动脉粥样硬化和降低血液
高凝状态等功效[1],是何首乌补肝肾、益精血的主要
成分;二苯乙烯苷(2, 3, 5, 4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-
葡萄糖苷)是何首乌的主要有效成分之一,具有抗
衰老、降低胆固醇、保肝、神经保护等作用,为何
首乌的主要质量控制指标[2-7]。何首乌炮制方法有清
蒸、加黑豆汁蒸制、米泔豆共制及酒制等,通过炮
制可以降低何首乌的毒性,但其有效成分也随即降
低[8-9]。本实验选取卵磷脂和二苯乙烯苷作为考察指
标,从有效成分的角度探讨高压清蒸、豆制、酒制、
酒豆制何首乌之间的差异,为合理、高效炮制何首
乌工艺选择提供依据。
1 仪器与试药
岛津 UV—2401PC 型紫外可见分光光度计;
Shangping FA2104 型电子天平;Agilent 1100 高效液
相色谱仪(四元泵 VWD 检测器)。
生何首乌购于广东德庆,经笔者鉴定为蓼科植
物何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.干燥块根的
切片;二苯乙烯苷对照品(中国药品生物制品检定
所,批号 110844-200505);乙腈为色谱纯,水为纯
化水,其他试剂均为分析纯,黑豆为市场购买的普
通黑豆,黄酒为普通食用黄酒。
2 方法与结果
2.1 不同何首乌炮制品的制备
按《中国药典》制何首乌项下方法制备黑豆汁,
取何首乌片,去除杂质,分别加入 60%的水、20%
的黄酒、黑豆汁,润透,即得清蒸、酒制、豆制用
何首乌片;用黑豆汁润透后,再加入 20%的黄酒润
制,即得酒豆制用何首乌片,置蒸气压力锅内进行
高压蒸制,压力 0.1 MPa,温度 120 ℃,时间分别
收稿日期:2010-08-23
作者简介:许冬瑾(1970—),女,广东普宁人,主管药师,澳门科技大学工商管理专业硕士,中国中药协会中药饮片专业委员会专家、广州
中医药大学兼职副教授、全国中药标准化技术委员会委员;1992—1995 年,普宁市国际信息咨询服务有限公司业务员;1995—1997
年,广东省康美药业有限公司副董事长兼副总经理;1997 年至今,康美药业股份有限公司副董事长兼副总经理,研究方向为药品
生产、研发及药品、医疗器械营销。Tel: (0663)2917777 E-mail: kangmei@126.com
*通讯作者 陶 艳 Tel: (0663)2920350 E-mail: taoyan830801@yahoo.com.cn
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是 4、6、8、10 h,取出,低温烘干,即得。
2.2 卵磷脂的测定
2.2.1 磷标准溶液的制备[10] 精密称取磷酸二氢
钾 213.00 mg,加水定容至 50 mL,作为磷储备液。
临用时吸取磷储备液 1.0 mL,稀释至 50 mL。
2.2.2 显色剂的制备[11] 称取钼酸铵 0.66 g,精密
称定,加水溶解并定容至 250 mL,摇匀;另称取抗
坏血酸 2.50 g,精密称定,加水溶解并定容至 25 mL,
得 10%抗坏血酸溶液。临用时两种溶液按照 9∶1
混合均匀作为显色剂。
2.2.3 标准曲线的制备 精密吸取磷稀释液 0.1、
0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL,分别置于 10 mL 量瓶
中,加 2.5 mol/L 硫酸溶液 1.2 mL,再加显色剂 4.0
mL,最后加水至刻度,摇匀,于沸水中加热 5 min,
同时作空白,冷却后以空白溶剂调零,于 828 nm
处测定吸光度。以磷质量为横坐标,吸光度为纵坐
标绘制曲线,得回归方程 Y=84.581 X-0.021,r=
0.999 7。
2.2.4 供试品溶液的制备 取何首乌炮制品粉末
(过 4 号筛)0.5 g,精密称定,加无水乙醇 100 mL,
60 ℃超声(240 W、100 kHz)提取 1.5 h,滤过,
收集滤液,置于坩埚内挥干溶剂,于 550 ℃马福炉
中灰化,残渣加稀盐酸 10 mL 溶解,移至 20 mL 量
瓶中,用水洗坩埚,洗液并入量瓶中,最后加水稀
释至刻度,摇匀,即得。精密移取供试品溶液 2.0
mL,置于 10 mL 量瓶中,其余操作同标准曲线的
制备项下。同时作空白,计算磷的质量浓度,并计
算卵磷脂的量。
2.2.5 不同何首乌炮制品中卵磷脂的测定 取何首
乌炮制品,制备供试品溶液,分别精密吸取溶液 2.0
mL,按标准曲线的制备项下方法操作,测定吸光度,
由回归方程计算磷的量,结果见表 1。
表 1 何首乌高压炮制品中卵磷脂的测定结果 (n= 3)
Table 1 Determination of phosphatidylcholine in Polygoni
Multiflori Radix processed by high pressure (n= 3)
卵磷脂/(mg·g−1)
炮制品
4 h 6 h 8 h 10 h
1.15 1.13 1.12 1.11 高压清蒸品
高压豆制品 1.45 1.40 1.31 1.26
高压酒制品 1.20 1.15 1.06 1.00
高压酒豆制品 1.17 1.12 1.02 0.98
随着蒸制时间延长,卵磷脂的量有所降低,从
整体来看卵磷脂的保留效果依次为高压豆制品>高
压酒制品>高压酒豆制品>高压清蒸品,以高压豆
制 4 h 为佳。
2.3 二苯乙烯苷的 HPLC 法测定
2.3.1 色谱条件 Hypersil ODS 色谱柱(200 mm×
4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(20∶80),检测
波长 320 nm,体积流量 1.0 mL/min,柱温 15 ℃,
进样量 10 μL。色谱图见图 1。
0 4 8 12 0 4 8 12
t/min
*二苯乙烯苷
* stilbene glucoside
图 1 二苯乙烯苷对照品(A)和何首乌(B)的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC chromatograms of stilbene glucoside reference
substance (A) and Polygoni Multiflori Radix (B)
2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取二苯乙烯苷对
照品 5.32 mg,置于 25 mL 棕色量瓶中,加入稀乙
醇溶液溶解并定容,即得 212.8 μg/mL 二苯乙烯苷
溶液。
2.3.3 供试品溶液的制备 取何首乌炮制品粉末
0.2 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入稀乙醇 25
mL,称定质量,80 ℃水浴回流 30 min,冷却后再
称定质量,用稀乙醇补足减失的质量,摇匀,静置,
上清液过 0.45 μm 滤膜,取续滤液,即得。
2.3.4 线性关系考察 精密吸取已配制好的二苯乙
烯苷对照品溶液 0.1、0.2、0.5、1、2、4、6、8、10、
12 μL 注入高效液相色谱仪,按照上述方法测定峰
面积。以进样质量对峰面积进行线性回归,得回归
方程 Y=4047.2 X-48.063,R2=0.999 9,线性范围
为 2.128~255.36 μg/mL。
2.3.5 精密度试验 精密吸取已配制好的二苯乙烯
苷对照品溶液 10 μL,注入高效液相色谱仪,连续
进样 6 次,测定峰面积值,结果 RSD 为 0.21%。
2.3.6 稳定性试验 取何首乌炮制品(高压清蒸 4 h)
供试品溶液,分别在 0、4、8、12、18、24 h 按上
述条件进样,测定二苯乙烯苷峰面积,其 RSD 为
1.91%,结果表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.3.7 重现性试验 取何首乌炮制品(高压清蒸 4 h)
粉末 5 份,制备供试品溶液,按上述条件进样测定,
计算,二苯乙烯苷质量分数的 RSD 为 1.74%。
* *
A B
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2.3.8 加样回收率试验 取何首乌炮制品(高压清
蒸 4 h)粉末 6 份,每份 0.2 g,精密称定,分别精
密加入 12.8 μg /mL 二苯乙烯苷对照品溶液 2 mL,
制备供试品溶液,进样分析,计算得二苯乙烯苷的
平均回收率为 101.20%,RSD 为 1.89%。
2.3.9 样品中二苯乙烯苷的测定 按上述确定的测
定方法对高压清蒸、高压豆制、高压酒制、高压酒
豆制何首乌中二苯乙烯苷进行测定,结果见表 2。
表 2 何首乌高压炮制品中二苯乙烯苷的测定结果 (n= 3)
Table 2 Determination of stilbene glucoside in Polygoni
Multiflori Radix processed by high pressure (n= 3)
二苯乙烯苷/%
炮制品
4 h 6 h 8 h 10 h
0.73 0.49 0.37 0.15 高压清蒸品
高压豆制品 1.37 0.98 0.62 0.53
高压酒制品 1.27 1.06 0.92 0.66
高压酒豆制品 0.89 0.6 0.60 0.59
随着蒸制时间延长,二苯乙烯苷的量有所降低,
高压炮制 4 h,二苯乙烯苷的量依次为高压豆制品>
高压酒制品>高压酒豆制品>高压清蒸品。其中高
压清蒸和酒豆制何首乌二苯乙烯苷的量下降较快,
4 h 之后其值低于 0.7%(《中国药典》2010 年版规
定制何首乌中二苯乙烯苷不得低于 0.7%),高压豆
制品和酒制品在同一炮制时间二苯乙烯苷的量均高
于清蒸和酒豆制品,说明黑豆汁制和酒制有利于二
苯乙烯苷的保留,以高压豆制 4 h 为佳。
3 讨论
《中国药典》2010 年一部中采用的传统炮制方
法,根据现有的文献研究与报道,高压炮制能有效
减少活性成分的损失,同时消除何首乌的致泄作用,
缩短炮制周期等优点,故本实验选择高压炮制方法
进行研究。
何首乌中卵磷脂和二苯乙烯苷的量与药效密切
相关,随着炮制时间的延长,卵磷脂和二苯乙烯苷
的量有所降低,这可能与二苯乙烯苷和卵磷脂长时
间加热不稳定有关,故在何首乌炮制过程中,应注
意炮制方法、工艺参数的选择,尽可能减少药用活
性成分的损失。综合高压炮制对何首乌中二苯乙烯
苷及卵磷脂的影响,建议何首乌炮制方法以高压豆
制 4 h 为佳。
根据现有文献与报道研究,为考虑消除何首乌
的致泄作用,选择以 4 h 炮制时间为起点,至于 4 h
以内的效果如何,将根据正在进行的药理药效研究,
考虑是否要进一步考察。
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