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Determination of C21 steroidal glycosides in total glycosides H from Marsdenia tenaccima

乌骨藤总苷H中C21甾体苷的测定



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 5 期 2011 年 5 月 ·909·
乌骨藤总苷 H 中 C21甾体苷的测定
何依玲 1,李晓誉 2,张韩清 1
1. 金华市中心医院,浙江 金华 321000
2. 浙江省医学科学院,浙江 杭州 310013
摘 要:目的 建立乌骨藤总苷 H 中 C21 甾体苷的测定方法。方法 采用茴香醛硫酸显色比色法测定乌骨藤总苷 H 中 C21
甾体苷的量。结果 选定检测波长 432 nm;通光藤苷B 在 5.05~65.65 μg/mL 与吸光度呈良好线性关系,回归方程 Y=0.012 9 X+
0.017 8,R2=0.999 3;平均回收率为 99.3%,RSD 为 2.16%。结论 该方法简便、灵敏、准确、重现性好,可用于乌骨藤总
苷 H 中 C21甾体苷的测定和质量控制。
关键词:乌骨藤;乌骨藤总苷 H;茴香醛硫酸;C21甾体苷;通光藤苷 B
中图分类号:R286.02 文献标志码:B 文章编号:0253 - 2670(2011)05 - 0909 - 02
Determination of C21 steroidal glycosides in total glycosides H from Marsdenia
tenaccima
HE Yi-ling1, LI Xiao-yu2, ZHANG Han-qing1
1. Jinhua Central Hospital, Jinhua 321000, China
2. Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310013, China
Key word: Marsdenia tenaccima (Roxb) Wight et Arn.; total glycosides H from Marsdenia tenaccima; p-anisaldehyde-sulfuric acid;
C21 steroidal glycoside; tenacissoside B

C21 甾体苷是一类广泛存在于萝藦科植物中的
化合物[1-3],研究发现其具有明显的抗肿瘤、免疫调
节、抗生育、抗癫痫等多方面的生物活性和药理作
用,因此对 C21 甾体苷的分离、结构鉴定及其药理
作用的研究日益被各国学者所关注。
乌骨藤,又名通光藤,系萝藦科植物乌骨藤
Marsdenia tenocissima (Roxb) Wight et Arn.的藤茎。
具有清热解毒、化痰软坚之功效。文献报道从通光
藤中分离得到几十个 C21 甾体苷——通光藤苷 A~
E[4],F~I[5],marsdenoside I~K[6]等。以乌骨藤单
味药制成的制剂“消癌平片”和“消癌平注射液”
临床用于治疗食道癌、胃癌、肺癌、肝癌,取得较
好的疗效,但存在提取工艺有待改进,质量控制技
术落后,有效成分有待确证等问题。因此十分有必
要对乌骨藤的抗癌作用进行二次研究与开发,阐明
其中的有效成分或有效部位,最终开发成中药一类
或二类新药。
鉴于此,本课题组进行了乌骨藤抗肿瘤药效物
质基础的研究,结果发现其主要药效部位为乌骨藤
总苷 H,对乌骨藤总苷 H 进行 HPLC-MS/MS 分析,
共发现 18 个 C21 甾体苷类化合物[7],对其中含量较
高的化合物进行了分离与纯化,共得到 6 个 C21 甾
体苷,并对它们的结构进行了鉴定。为进一步控制
其质量,本实验拟建立乌骨藤总苷 H 中的主要成分
C21 甾体苷的测定方法。
1 仪器与材料
W501 恒温水浴锅(上海申生科技有限公司),
BP211D 电子天平(德国 Sartorius),TU—1800 型
紫外可见分光光度仪(北京普析通用仪器公司)。
通光藤苷 B 对照品(自制,质量分数 98%)。
乌骨藤总苷 H(自制,批号 20050524、20070805、
20071017)。硫酸、茴香醛、乙醇、甲醇均为分析纯。
茴香醛硫酸显色剂的配制:量取茴香醛 0.2 mL
与硫酸 2.0 mL,加无水乙醇 37.8 mL 混匀,即得[8]。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备

收稿日期:2010-08-23
作者简介:何依玲(1971—),副主任药师,主要从事药物制剂的研究。Tel: (0579)82100082 E-mail: heyiling_428@yahoo.com.cn
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 5 期 2011 年 5 月 ·910·
精密称取干燥至恒定的通光藤苷 B 对照品 5.05
mg,置 10 mL 量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,
摇匀,即得通光藤苷 B 质量浓度为 0.505 mg/mL 的
对照品溶液[7]。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取乌骨藤总苷 H 12 mg,用乙醇定容至
10 mL 量瓶中,摇匀,即得乌骨藤总苷 H 质量浓度
为 1.2 mg/mL 的供试品溶液。
2.3 检测波长的选择
精密量取 0.5 mL 对照品溶液、0.5 mL 供试品
溶液分别至具塞试管中,挥干溶剂,各加入 0.5 mL
茴香醛硫酸显示剂于 100 ℃下反应 15 min,冰水浴
10 min 终止反应,精密加入 10 mL 甲醇,分别在
400~600 nm 扫描。对照品溶液和供试品溶液均在
432 nm 处有最大吸收,因此选择检测波长 432 nm。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、
0.6、0.7、0.8、0.9、1.1、1.3 mL 置具塞试管中,按
“2.3”项下操作并测定 432 nm 处吸光度值。以吸光
度值为纵坐标,通光藤苷 B 质量浓度为横坐标进行
线性回归,得回归方程 Y=0.012 9 X+0.017 8,R2=
0.999 3,表明通光藤苷 B 在 5.05~65.65 μg/mL 与
吸光度值线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取供试品溶液 0.5 mL 至具塞试管中,按
“2.3”项下操作并测定 432 nm 处吸光度值。连续测
定 6 次,计算得吸光度值的 RSD 为 0.05%。
2.6 稳定性试验
精密量取 0.5 mL 供试品溶液置具塞试管中,按
“2.3”项下操作,分别于 0、5、10、15、20、30 min
测定 432 nm 处吸光度值。计算得吸光度值的 RSD
为 1.16%,表明供试品溶液在 30 min 内稳定。
2.7 重现性试验
按“2.2”项方法制备 6 份供试品溶液,分别精
密吸取样品液 0.5 mL 置具塞试管中,按“2.3”项
下操作并测定 432 nm 处吸光度值,外标法计算得
C21 甾体苷质量分数的 RSD 为 1.63%。
2.8 加样回收率试验
精密称取乌骨藤总苷 H 约 6 mg,6 份,置 10 mL
量瓶中,各精密加入 5.1 mg 通光藤苷 B 对照品,
甲醇定容,混匀。分别精密吸取 0.5 mL 置具塞试管
中,按“2.3”项下操作并测定 432 nm 处吸光度值,
计算回收率,结果平均回收率为 99.3%,RSD 为
2.16%。
2.9 样品测定
取 3批次(批号 20050524、20070805、20071017)
乌骨藤总苷 H,各样品测定 3 次,得 C21 甾体苷的
质量分数分别为 83.47%、85.03%、81.95%。
3 讨论
C21 甾体苷类化合物除了萝藦科黑鳗藤属的少
数化合物因为含有 N-甲基邻氨基苯甲酰基而在 360
nm 左右有强烈荧光外[9-10],基本上都没有紫外吸
收。从乌骨藤总苷 H 中分离到的 C21甾体苷就属于
没有紫外吸收的。本实验选用茴香醛硫酸法对乌骨
藤总苷 H 中的 C21 甾体苷进行测定,方法简单,有
一定的专一性,可用于控制乌骨藤总苷 H 的质量。
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