全 文 ：·药理与临床·
二妙丸水提取物对高尿酸血症小鼠尿酸失衡及其相关基因
和蛋白水平的影响
吕耀中1 ,胡庆华1 ,王 　星1 ,欧阳臻2 ,孔令东1 3 ①
(11 南京大学 医药生物技术国家重点实验室 ,江苏 南京 　210093 ; 21 江苏大学药学院 ,江苏 镇江 　212013)
摘　要 :目的 　研究二妙丸水提取物对高尿酸血症小鼠尿酸失衡及其相关基因和蛋白水平的影响。方法 　用氧嗪
酸钾盐诱导小鼠以建立高尿酸血症模型。二妙丸 (319、718 g/ kg) 、黄柏 (1195、319 g/ kg) 和苍术 (1195、319 g/
kg) 各水提取物分别连续 ig 给予小鼠 1 周 ,末次给药 1 h 后 ,分别测定小鼠血清、肝脏和尿液中尿酸水平 ,测定血
肌酐 (SCr) 和尿肌酐 (UCr) 水平及肝脏黄嘌呤氧化酶 (XOD) 活性 ;采用 RT2PCR 方法测定小鼠肝脏 XOD 和肾
脏尿酸盐重吸收转运子 mU RA T1 mRNA 表达水平 ;利用 Western Blotting 方法测定小鼠肝脏 XOD 和肾脏
mU RA T1 蛋白水平。结果 　与模型组比较 ,二妙丸水提取物低、高剂量和黄柏水提取物高剂量均显著降低血清和
肝脏尿酸水平 ,及 SCr 水平 ,增加尿液中尿酸水平和 UCr 水平。二妙丸和黄柏水提取物 2 个剂量均显著抑制肝脏
XOD 活性 ,下调 XOD mRNA 和蛋白表达 ,降低肾脏 mU RA T1 mRNA 和蛋白表达水平。而苍术水提取物 2 个剂
量对上述指标均无显著影响。结论 　二妙丸水提取物具有抑制高尿酸血症小鼠尿酸生成和促进尿酸排泄的双重
调节作用 ,以降低血清尿酸水平 ,其机制可能与抑制 XOD 与 mU RA T1 mRNA 和蛋白表达水平有关。
关键词 :二妙丸水提取物 ; 高尿酸血症 ; 黄嘌呤氧化酶 ; 尿酸盐重吸收转运子
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320418206
Effects of Ermiao Pill water extracts on imbalance of urate levels and its related genes
and protein levels in hyperuricemic mice
L Β Yao2zhong1 , HU Qing2hua1 , WAN G Xing1 , OU YAN G Zhen2 , KON G Ling2dong1
(11 State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology , Nanjing University , Nanjing 210093 , China ;
2. College of Pharmacy , Jiangsu University , Zhenjiang 212013 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he effect s of Ermiao Pill water ext ract s on imbalance of urate
levels and it s related genes and protein levels in hyperuricemic mice. Methods 　A mouse model of hyper2
uricemia was established by oxygen hydrochloride acid potassium salt . The water ext ract s of Ermiao Pill
(3. 9 and 7. 8 g/ kg) , Cortex Phellodendri Chinensis (1. 95 and 3. 9 g/ kg) , and Rhizoma A tracty lodis (1. 95 and
3. 9 g/ kg) were ig administered in a volume of 15 mL/ kg once daily to the different groups of animals continuously
for one week , respectively. One hour after the final treatment , the urate levels in serum , urinary , and liver , as
well as the creatinine levels in serum and urinary , and the hepatic xant hine oxidase ( XOD) activity were
measured. Expressions of hepatic XOD mRNA and renal mU RA T1 mRNA were analyzd by semi2quantita2
tive R T2PCR met hod and t heir p rotein levels were assayed by Western blot ting met hod. Results 　Com2
pared to vehicle2model group , Ermiao Pill water ext ract s at two doses and Cortex Phel lodend ri Chi nensis
at high dose significantly reduced serum uric acid , liver uric acid , and serum creatinine levels , elevated uri2
nary uric acid , and creatinine levels. In addition , The water ext ract s of Ermiao Pill and Cortex Phel loden2
d ri Chi nensis at two doses remarkably inhibited hepatic XOD activity , down2regulated it s mRNA and p ro2
tein levels , and suppressed mRNA and protein levels of renal mU RA T1. However , R hi z om a A t ract y lodis
at two doses had no significant effect s in t he p resent study. Conclusion 　Ermiao Pill water ext ract s p rocess
bidirectional actions of inhibiting t he production of hepatic uric acid and promoting t he excretion of urinary
uric acid , resulting in serum urate reduction in hyperuricemic mice. The mechanisms might be involved in
down2regulation of mRNA and protein levels of hepatic XOD and renal mU RA T1.
Key words : Ermiao Pill water ext ract s ; hyperuricemia ; xant hine oxidase ( XOD) , mU RA T1
·814· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206222　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :教育部 2006 年新世纪优秀人才支持计划项目 (NCET20620442)
作者简介 :吕耀中 (1983 —) ,男 ,山西省长治市人 ,南京大学生命科学院 2005 级研究生 ,主要从事中药抗痛风作用的研究。
Tel : 13913897763 　E2mail : zhong12921 @sohu. com
　　痛风是一组嘌呤代谢紊乱的慢性终身罹患性疾
病 ,其高发率、复发率和危害性日趋严重。现代医学
将痛风归属于中医“历节痛”、“黄汗”、“痛风”、“白虎
历节”或“脚气病”等范畴。湿毒内生是本病主要病
机 ,在痛风发病过程中湿热瘀浊是贯穿始终的中医
症候。清热燥湿是中医治疗痛风主要治则之一 ,其
代表方二妙散/ 丸始载于《丹溪心法》,由黄柏、苍术
两味中药组成 ,在中医临床上常用二妙丸为基本方
治疗高尿酸血症和痛风 ,取得了良好效果[1 ,2 ] ,该方
一直被《中国药典》收载。高尿酸血症是痛风主要病
理特征 ,尿酸生成增多或排泄减少均可导致血清尿
酸水平的升高 ,实验研究表明二妙丸系列类方具有
显著的免疫增强、抗炎、镇痛、降尿酸等作用[3 ] 。本
课题组在氧嗪酸钾盐所致高尿酸血症小鼠模型上证
实了二妙丸和黄柏水提取物具有降血清尿酸作用 ,
其作用与肝脏尿酸合成酶黄嘌呤氧化酶 ( xant hine
oxidase , XOD) 活性抑制有一定相关性 ,但还可能
存在其他降尿酸的途径[4 ] 。二妙丸水提取物干预高
尿酸血症尿酸失衡作用机制尚需进一步探索。本实
验基于前期工作 ,在评价二妙丸水提取物对高尿酸
血症小鼠血清、肝脏和尿中尿酸水平、肾功能等影响
基础上 ,重点研究其对肝脏 XOD 和肾脏尿酸盐重
吸收转运子 mU RA T1 的 mRNA 和蛋白表达的影
响 ,为其治疗高尿酸血症和痛风提供依据。
1 　材料
111 　动物 :昆明种小鼠 ,雄性 ,体质量 25～30 g ,购
自河南省实验动物中心 ,生产许可证号 :SCXK (豫)
200520001。实验前适应环境 1 周 ,自由饮水、进食 ,
每日 12 h 照明 ,室温 (25 ±2) ℃。
112 　主要试剂和仪器 :黄柏 (生) 产地四川 ,由安
徽协和成药业饮片有限公司生产 ,批号 080722 ;苍
术 (炒)产地江苏 ,由安徽协和成药业饮片有限公司
生产 ,批号 080212 ;药材均经南京中医药大学药学
院陈建伟教授鉴定。氧嗪酸钾盐和别嘌呤醇均购自
SIGMA2ALDRICH 公司 ;肌酐 ( Cr) 试剂盒 ,购自
南京建成生物工程研究所 ,批号 20080918。其他试
剂为国产分析纯。XHF —高速分散器 (宁波新芝生
物科技股份有限公司) ;3 K15 台式高速冷冻离心机
(德国 Sigma 公司) ; T6 紫外可见分光光度计 (北京
普析通用仪器有限责任公司) ; PCR 扩增仪 (美国
BIO2RAD 公司) ;Chemi Doc XRS 化学发光成像系
统 (美国 BIO2RAD 公司) 。
2 　方法
　样品提取液制备 取二妙丸组方中黄柏与苍术
各 125 g ,加 10 倍量水煎煮 2 次 ,每次 60 min ,合并
滤液浓缩至 48018 mL , 含生药量 0152 g/ mL
( HPL C 法测定 ,含盐酸小檗碱 10 mg/ kg、苍术素
0176μg/ g) ,冷藏备用。另取黄柏、苍术各 125 g ,分
别加 10 倍量水 ,煎煮 2 次 ,每次 60 min ,合并滤液浓
缩至 48018 mL ,含生药量为 0126 g/ mL ,冷藏备用。
二妙丸、黄柏、苍术的给药剂量均按生药量计算。
212 　实验分组及给药 :昆明种雄性小鼠 72 只 ,随
机分为 9 组 ,即对照组 ,模型组 ,二妙丸水提取物低、
高剂量 (319、718 g/ kg) 组 ,黄柏水提取物低、高剂量
(1195、319 g/ kg) 组 ,苍术水提取物低、高剂量 (1195、
319 g/ kg) 组 ,别嘌呤醇 (510 mg/ kg) 组 ,每组 8 只。
二妙丸、黄柏、苍术、别嘌呤醇各剂量组分别 ig 给药 ,
给药容积为 15 mL/ kg ,对照组和模型组 ig 给予等量
生理盐水。每天上午给药 1 次 ,连续给药 7 d。
213 　动物造模 :采用氧嗪酸钾盐法诱导小鼠产生高
尿酸血症 ,每天在给药前 1 h ,除对照组 ig 给予等量
生理盐水外 ,其余各组分别 ig 给予氧嗪酸钾溶液
(250 mg/ kg) ,给药容积为 15 mL/ kg。
214 　实验取材 :在末次给药后 1 h ,小鼠眼球后静
脉丛取血 (取血前 12 h 禁食 ,不禁水) ,离心取血
清 ,置于 4 ℃保存。断颈处死动物后 ,于冰台快速
分取肝脏、肾脏等组织 ,液氮冷冻后置于 - 70 ℃条
件下保存。
215 　尿酸水平测定
21511 　小鼠血清尿酸测定 :按文献方法[4 ] ,采用磷
钨酸还原法测定血清中尿酸水平。
21512 　小鼠肝脏中尿酸水平测定 :小鼠肝脏组织加
10 倍量 50 mmol/ L 、p H 7. 4 预冷的磷酸钾盐酸缓
冲液 ,匀浆 ,在 4 ℃、12 000 ×g 条件下冷冻离心 40
min。弃去上层脂质及沉淀 ,吸取中层清液 ,采用磷
钨酸还原法[4 ]测定尿酸水平。
21513 　尿液中尿酸水平测定 :同血清尿酸测定方
法 ,以 100μL 稀释尿液代替血清加入反应体系。
216 　血清肌酐 (SCr) 和尿液肌酐 (UCr) 测定 :按
试剂盒说明书进行测定。
217 　肝脏 XOD 活性测定 :按文献方法[ 4 ] ,采用比
色法测定。
218 　R T2PCR 法测定 XOD 和 mU RA T1 mRNA
表达 :小鼠组织 (肝脏或肾脏) 011 g 加入 1 mL
Trizol Reagent ( Invit rogen) ,按照试剂盒说明书提
取总 RNA。取总 RNA 1μL ,加 DEPC 水稀释后 ,
在 260、280 nm 下测定吸光度 ( A) 值 ,以 A 260 / A 280
值确定其纯度。利用 琼脂糖凝胶电泳方法鉴
·914·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
定 ,在紫外灯下观察总 RNA 完整性。
取 1μL 总 RNA ,按照 Promaga 试剂盒说明书
上操作步骤进行反转录 ,合成 cDNA。分别根据基
因库中 XOD、mU RA T1 和 GA PD H mRNA 的核
苷酸序列 ( NM _ 017154 , NM _ 009203 和 NM _
008084) ,用 Primer p remier 5. 0 软件设计引物 ,并
由南京生兴生物工程技术服务有限公司合成。引物
序列分别为 XOD (5′2T GA GGCCGGT GCT GA G2
TA T GT23′; 5′2CA GTCT TCT GGGT GGCA GT G2
A T23′) 、mU RA T1 ( 5′2GCTACCA GAA TCGGCA2
CGCT23′; 5′2CACCGGGAA GTCCACAA TCC23′)
和 GA PD H (5′2GA GAA GA T T T GGCACCACAC2
3′; 5′2CA TCACAA T GCCA GT GGTAC23′) 。PCR
反应体系总体积为 25μL 。XOD 扩增条件为 94 ℃
预变性 2 min ; 94 ℃变性 30 s、58 ℃退火 30 s、
72 ℃45 s ,共 30 个循环 ;72 ℃延伸 10 min。mU2
RA T1 扩增条件为 94 ℃预变性 2 min ;94 ℃变性
30 s、58 ℃退火 35 s、72 ℃延伸 45 s ,共 35 个循
环 ;72 ℃延伸 10 min。GA PD H 扩增条件为 94 ℃
预变性 2 min ; 94 ℃变性 30 s ,58 ℃退火 35 s、
72 ℃延伸 45 s ,共 35 个循环 ;72 ℃延伸 10 min。
PCR 扩增产物 - 20 ℃保存。
各取 PCR 产物 8μL ,经 115 % 琼脂糖凝胶电
泳、溴化乙啶染色后 ,在凝胶影像分析仪 (Bio2Rad
Chemi Doc XRS) 上进行成像 ,并对条带进行吸光
度分析。计算待测基因与 GA PD H 的比值 ,从而得
到待测基因的相对表达值。
219 　Western Blotting 法测定 XOD 和 mU RA T1
蛋白表达 :小鼠肝脏在 10 倍量的 10 mmol/ L Tris2
HCl、1 mmol/ L ED TA 和 250 mmol/ L sucrose 裂
解液 (p H 7. 4 ,含有 15μg/ mL aprotinin、5μg/ mL
leupeptin 和 011 mmol/ L phenylmethanesulfonyl flu2
oride) 中匀浆。匀浆液在 3 000 ×g、4 ℃条件下离心
15 min。取上清 ,12 000 ×g、4 ℃条件下离心 20
min ,获得上清液 ,用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度。
小鼠肾脏在 10 倍量的 buffer 1 (300 mmol/ L
D2甘露醇、5 mmol/ L EGTA、p H 7. 4 10 mmol/ L
Hepes2Tris) 中匀浆 ,在匀浆液中加入 120 mmol/ L
MgCl2至终浓度为 12 mmol/ L ,静置 20 min ,在
2 400 ×g、4 ℃条件下离心 15 min ,其上清液在
30 000 ×g、4 ℃条件下离心 30 min。取沉淀用
buffer 2 ( 150 mmol/ L D2甘露醇、215 mmol/ L
EGTA、5 mmol/ L p H 7. 4 Hepes2Tris) 悬浮 ,加入
至终浓度 静置
min 后 ,在 2 400 ×g、4 ℃条件下离心 15 min ,取上
清液在 30 000 ×g、4 ℃条件下离心 30 min ,所得沉
淀用裂解液溶解 ,用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度。
上述所提取的蛋白分别经 12 % SDS2PA GE 胶
电泳分离后 ,在 300 mA 条件下转移 2 h ,将蛋白转
移到 PVDF 膜上 ,并在 5 % 脱脂奶粉封闭 1 h 后分
别用 XOD (1 ∶1 000) 、mU RA T1 (1 ∶500) 一抗及
其对应的内参 GA PD H ( 1 ∶5 000) 和 Na + 2K+
A TPase ( 1 ∶1 000) 在 4 ℃条件下孵育过夜。
PVDF 膜经 015 % PBS2T 溶液洗膜 3 次 ,每次 5
min。PVDF 膜再与 HRP 标记的二抗 (1 ∶4 000)
进行反应 ,室温摇床轻摇 1 h 后再用 015 % PBS2T
溶液洗膜 3 次 ,每次 5 min。在膜上加入显色液
L umi GLO (Cell Signaling , Beverly , MA) 2 mL ,
室温 1 min ,曝光于 X 光胶片上 ( Kodak , New
Haven , CT) 。
2110 　数据处理及统计 :所有实验数据均用 x ±s
表示。采用 SPSS 进行单因素方差分析 ,两组均数
间差异采用 t 检验。同时采用 Bonferroni alp ha 修
正方法防止假阳性结果。
3 　结果
311 　对小鼠血清、肝脏和尿液中尿酸水平的影响 :
与对照组比较 ,模型组血清和肝脏中尿酸水平显著
升高 ( P < 01001) ,而尿液中尿酸水平显著降低
( P < 01001) 。与模型组比较 ,二妙丸和黄柏水提取
物 2 个剂量组、阳性对照组均显著降低血清和肝脏
中尿酸水平 ( P < 01001、0101、0105) ,增强尿液中尿
酸水平 ( P < 0101、01001) 。而苍术水提取物 2 个剂
量组对各尿酸水平均无显著影响 ( P > 0105) 。结果
见表 1。
312 　对小鼠血肌酐 ( SCr) 、尿肌酐 (UCr) 水平的
影响 :与对照组比较 ,模型组 SCr 水平升高 ( P <
01001) ,而 UCr 水平降低 ( P < 01001) 。与模型组
比较 ,二妙丸和黄柏水提取物 2 个剂量组、阳性对照
组均显著降低 SCr 水平 ( P < 0101、01001) ,除黄柏
水提取物低剂量组外 ,其他各组均增加 UCr ( P <
0101) ,有一定的量效关系。而苍术水提取物 2 个剂
量组对 SCr 和 UCr 水平均无显著影响 ( P >
0105) 。结果见表 1。
313 　对小鼠肝脏 XOD 活性、XOD mRNA 和蛋白
表达的影响 :与对照组比较 ,模型组肝脏 XOD 活性
及XOD mRNA和蛋白表达均提高 ( P < 01 0 0 1 ) 。
与模型组比较 ,二妙丸和黄柏水提取物 2 个剂量组、
阳性对照组均显著抑制 活性 ( < 01001、0101、
·024· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
表 1 　二妙丸、黄柏、苍术水提取物对高尿酸血症小鼠生化指标的影响 ( x ±s , n = 8)
Table 1 　Effects of water extracts of Ermiao Pill , Cortex Phellodendri Chinensis and Rhizoma At ract ylodis
on biochemical indexes in hyperuricemic mice ( x ±s , n = 8)
组别 剂量/ (g·kg - 1 ) 血清尿酸/ (mg·L - 1 ) 尿液尿酸/ (mg·mL - 1 ) 肝脏尿酸/ (mg·g - 1 ) SCr/ (mg·L - 1 ) UCr/ (mg·mL - 1 ) 肝 XOD/ (nmol ·mg - 1 ·min - 1 )
对照 - 3612 ±113 01609 ±01019 01358 ±01006 818 ±011 11041 ±01064 3107 ±0114
模型 - 4811 ±114 △△△ 01407 ±01018 △△△ 01409 ±01006 △△△ 1014 ±013 △△△ 01669 ±01059 △△△ 4164 ±0108 △△△
二妙丸 3190 4211 ±019 3 3 01728 ±01079 3 3 01369 ±01007 3 3 3 817 ±014 3 3 11013 ±01090 3 3 3177 ±0121 3 3
7180 3919 ±112 3 3 3 01795 ±01066 3 3 3 01340 ±01008 3 3 3 812 ±013 3 3 3 11106 ±01069 3 3 3 3136 ±0119 3 3 3
黄柏 1195 4316 ±111 3 01592 ±01041 3 3 01368 ±01013 3 911 ±013 3 3 01817 ±01087 3182 ±0128 3
3190 4116 ±016 3 3 3 01709 ±01058 3 3 3 01351 ±01017 3 3 814 ±013 3 3 3 11034 ±01033 3 3 3 3138 ±0123 3 3 3
苍术 1195 4515 ±118 01403 ±01035 01384 ±01011 917 ±014 01637 ±01058 4137 ±0124
3190 4413 ±213 01458 ±01050 01389 ±01013 1014 ±017 01796 ±01101 4143 ±0122
别嘌呤醇 01005 3211 ±111 3 3 3 01646 ±01072 3 3 01317 ±01012 3 3 3 814 ±013 3 3 3 01904 ±01069 1189 ±0120 3 3 3
　　与对照组比较 : △△△P < 01 001 ; 　与模型组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001
　　△△△P < 01001 vs cont rol group ; 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs model group
0105) ,下调 XOD mRNA 表达 ( P < 01001、0101、
0105) ,二妙丸和黄柏水提取物高剂量组、阳性对照组
降低 XOD 蛋白表达水平 ( P < 0105、0101) ,而苍术水
提取物 2 个剂量组对肝脏 XOD 活性及其表达均无显
著影响 ( P > 0105) 。结果见表 1、图 1 和图 2。
314 　对小鼠肾脏 mU RA T1 mRNA 和蛋白表达的
影响 :与对照组比较 ,模型组肾脏 mU RA T1 mRNA
和蛋白表达均提高 ( P < 01001) 。与模型组比较 ,二
12对照组　22模型组　3、42二妙丸水提取物 (3190、7180 g ·kg - 1)
组　5、62黄柏水提取物 (1195、3190 g ·kg - 1) 组　7、82苍术水提取
物 (1195、3190 g ·kg - 1) 组　92别嘌呤醇 (5 mg ·kg - 1) 组
12cont rol group 　22model group 　3 , 42Ermiao Pill water ex2
t ract s (3. 90 and 7. 80 g ·kg - 1) group 　5 , 62Cortex Phelloden2
dri Chinensis water ext ract s (1. 95 and 3. 90 g ·kg - 1) group 　
7 , 82R hi zoma A t ract y lodis (1. 95 and 3. 90 g ·kg - 1) group
92allopurinol (5 mg ·kg - 1) group
　　与对照组比较 : △△△P < 01 001
　　与模型组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001
　　△△△P < 01001 vs cont rol group
　　3 P < 0105 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs model group
图 1 　二妙丸、黄柏、苍术水提取物对高尿酸血症小鼠肝脏
XOD mRNA 表达的影响 ( x ±s , n = 4)
Fig. 1 　Effects of water extracts of Ermiao Pill , Cortex
Phellodendri Chinensis , and Rhizoma At ract y2
lodis on hepatic XOD mRNA expression
±
12对照组　22模型组　3、42二妙丸水提取物 (3190、7180 g ·kg - 1)
组　5、62黄柏水提取物 (1195、3190 g ·kg - 1) 组　7、82苍术水提取
物 (1195、3190 g ·kg - 1) 组　92别嘌呤醇 (5 mg ·kg - 1) 组
12cont rol group 　22model group 　3 , 42Ermiao Pill water
ext ract s (3. 90 and 7. 80 g ·kg - 1) group 　5 , 62Cortex Phello2
dendri Chinensis water ext ract s (1. 95 and 3. 90 g ·kg - 1) group
7 , 82Rhizoma A t ract y lodis water ext ract s ( 1. 95 and
3. 90 g ·kg - 1) group 　92allopurinol (5 mg ·kg - 1) group
　　与对照组比较 : △△P < 0101
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　△△P < 0101 vs cont rol group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
图 2 　二妙丸、黄柏、苍术水提取物对高尿酸血症小鼠肝脏
XOD 蛋白表达水平的影响 ( x ±s , n = 4)
Fig. 2 　Effects of water extracts of Ermiao Pill , Cortex
Phellodendri Chinensis , and Rhizoma At ract y2
lodis on hepatic XOD protein levels
in hyperuricemic mice ( x ±s , n = 4)
妙丸和黄柏水提取物 2 个剂量组、阳性对照组均显
著抑制 mU RA T1 mRNA 高表达 ( P < 01001、
0101、0105) 和 mU RA T1 蛋白表达 ,而苍术水提取
物 2 个剂量组对肾脏 mU RA T1 表达均无显著影响
( P > 0105) 。结果见图 3 和 4。
4 　讨论
　　随着人们高蛋白、高嘌呤饮食的增加 ,高尿酸血
·124·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
12对照组 　22模型组 　3、42二妙丸水提取物 ( 3190、7180 g ·
kg - 1) 组　5、62黄柏水提取物 (11 95、31 90 g ·kg - 1 ) 组 　7、82
苍术水提取物 (11 95、31 90 g ·kg - 1) 组 　92别嘌呤醇 (5 mg ·
kg - 1) 组
12cont rol group 　22model group 　3 , 42Ermiao Pill water ex2
t ract s (3. 90 and 7. 80 g ·kg - 1) group 　5 , 62Cortex Phelloden2
dri Chinensis (1. 95 and 3. 90 g ·kg - 1 ) group 　7 , 82R hizoma
A t ract y lodis water ext ract s (1. 95 and 3. 90 g ·kg - 1 ) group 　
92allopurinol (5 mg ·kg - 1) group
　　与对照组比较 : △△△P < 01 001
　　与模型组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001
　　△△△P < 01001 vs cont rol group
　　3 P < 0105 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs model group
图 3 　二妙丸、黄柏、苍术水提取物对高尿酸血症小鼠
肾脏 mURAT1 mRNA 表达的影响 ( x ±s , n = 4)
Fig. 3 　Effects of water extracts of Ermiao Pill , Cortex
Phellodendri Chinensis , and Rhizoma At ract y2
lodis on renal mURAT1 mRNA expression
in hyperuricemic mice ( x ±s , n = 4)
症和痛风的发生率逐年升高 ,专家预测其在中国可
能成为仅次于糖尿病的代谢性疾病。鉴于其高危害
性并严重威胁健康 ,大力加强高尿酸血症、痛风研究
和防治具有重要理论和临床意义。本研究证实二妙
丸具有抑制尿酸生成和促进尿酸排泄的双重调节作
用 ,以干预高尿酸血症小鼠尿酸盐失衡。二妙丸是
清热燥湿代表方 ,本研究结果为以中医清热燥湿治
则治疗痛风提供了科学依据。
给予二妙丸及黄柏水提取物可逆转氧嗪酸钾盐
所致高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的升高 ,这与本
课题组前期工作一致[4 ] ,进一步证实二妙丸水提取
物具有降尿酸作用。
肝脏富含 XOD ,是体内尿酸合成主要部位。
XOD 是一个诱导酶 ,常作为研究高尿酸血症病理机
制和药物作用的靶点之一[5 ] 。本研究证实二妙丸及
黄柏水提取物可抑制氧嗪酸钾盐所引起小鼠肝脏
活性及其 和蛋白表达的升高 并伴随
12对照组 　22模型组 　3、42二妙丸水提取物 ( 31 90、7180 g ·
kg - 1) 组　5、62黄柏水提取物 (1195、31 90 g ·kg - 1 ) 组 　7、82
苍术水提取物 (11 95、31 90 g ·kg - 1) 组 　92别嘌呤醇 (5 mg ·
kg - 1) 组
12cont rol group 　22model group 　3 , 42Ermiao Pill water
ext ract s (3. 90 and 7. 80 g ·kg - 1) group 　5 , 62Cortex Phello2
dendri Chinensis water ext ract s (1. 95 and 3. 90 g ·kg - 1) group
7 , 82R hizoma A t ract y lodis water ext ract s (1. 95 and 3. 90 g ·
kg - 1) group 　92allopurinol (5 mg ·kg - 1) group
　　与对照组比较 : △△△P < 01 001
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 　3 3 3 P < 01 001
　　△△△P < 01001 vs cont rol group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs model group
图 4 　二妙丸、黄柏、苍术水提取物对高尿酸血症小鼠
肾脏 mURAT1 蛋白表达的影响 ( x ±s , n = 4)
Fig. 4 　Effects of water extracts of Ermiao Pill , Cortex
Phellodendri Chinensis , and Rhizoma At ract y2
lodis on renal mURAT1 protein levels
in hyperuricemicmice ( x ±s , n = 4)
肝尿酸水平的降低。表明抑制尿酸合成仅是二妙丸
及黄柏水提取物降尿酸的途径之一。
尿酸水平升高是肾功能异常的主要危险因
素[6 ] 。氧嗪酸钾盐引起 SCr 水平的升高和 UCr 水
平的降低 ,并伴随尿液中尿酸的降低 ,提示该模型动
物肾功能失常 ,且肾脏尿酸排泄能力降低。二妙丸
及黄柏水提取物可显著逆转上述作用 ,表明它们具
有一定的肾功能保护作用 ,并提示二妙丸及黄柏水
提取物降尿酸作用有可能与其增强动物肾脏排泄尿
酸功能有关。
人尿酸盐转运子 1 ( hU RA T1) 位于人肾脏近
曲端小管上皮细胞的管腔膜 ,是肾小管腔尿酸重吸
收至肾小管上皮细胞内的主要转运蛋白 ,在肾脏尿
酸盐重吸收的过程中起重要作用[7 ] 。小鼠尿酸盐转
运系统与人类具有相似性。小鼠肾脏参与尿酸盐重
吸收过程 ,其特异尿酸盐转运子 mU RA T1 与人类
hU RA T1 有 74 % 同源性 , mU RA T1 功能与人类
类似也得到证实[8 ] 。本研究发现高尿酸
·224· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
血症小鼠肾脏 mU RA T1 mRNA 和蛋白高表达 ,表
明氧嗪酸钾盐所引起小鼠血清尿酸水平的升高与肾
脏 mU RA T1 过表达致尿酸重吸收功能增强有关。
二妙丸及黄柏水提取物可显著降低高尿酸血症小鼠
肾脏 mU RA T1 mRNA 和蛋白表达 ,表明二妙丸及
黄柏水提取物可通过抑制高尿酸血症小鼠肾脏尿酸
重吸收转运子功能而达到降低血清尿酸的目的 ,
mU RA T1 可成为二妙丸水提取物干预高尿酸血症
小鼠以维持体内尿酸盐平衡的关键靶点 ,二妙丸及
黄柏水提取物对 mU RA T1 调控机制等后续的相关
研究仍在进行中。
本实验在高尿酸血症小鼠模型上未观察到苍术
降尿酸及改变与尿酸合成和排泄有关组织 XOD 和
mU RA T1 表达等作用 ,提示二妙丸水提取物所具
有降尿酸作用可能主要源于黄柏。黄柏与苍术配伍
作用及其机制仍需要进一步探索。
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灵芝孢子油体内抗 Friend 鼠白血病病毒的实验研究
黄鸣清 ,谢友良 ,蒋东旭 ,陈长青 ,江 　滨 ,赖小平
①
(广州中医药大学 ,广东 广州 　510405)
摘 　要 :目的 　探讨灵芝孢子油体内抗 Friend 鼠白血病病毒 ( Friend murine leukemia virus , Fr. MuLV) 感染的疗
效和作用机制。方法 　用 Fr. MuLV 感染 BALB/ C 雌性小鼠 ,造模小鼠 ig 给药 21 d ,比较各组动物的体质量、脾
指数、胸腺指数 ,CD4 + 、CD8 + 、CD4 + / CD8 + 等指标变化情况。结果 　小鼠感染 Fr. MuLV 后体质量严重减轻 ,脾明
显肿大 ,胸腺萎缩 ,CD4 + 、CD8 + 、CD4 + / CD8 + 值均显著降低。灵芝孢子油 50、100、200 mg/ kg 剂量均可显著改善
体质量增长抑制、脾肿大及胸腺萎缩 ( P < 0101) ,100、200 mg/ kg 剂量组 CD4 + 、CD8 + 、CD4 + / CD8 + 值均有明显升
高 ( P < 0101、0105) 。结论 　灵芝孢子油对 Fr. MuLV 感染小鼠有保护作用 ,能够改善体质量增长抑制 ,抑制脾肿
大及胸腺萎缩 ,升高感染小鼠的 T 淋巴细胞。
关键词 : Friend 鼠白血病病毒 ; 灵芝孢子油 ; 淋巴细胞
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320423204
I n vivo treatment for Friend murine leukemia virus with ganoderma spore oil
HUAN G Ming2qing , XIE You2liang , J IAN G Dong2xu , CH EN Chang2qing , J IAN G Bin , L A I Xiao2ping
( Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine , Guangzhou 510405 , China)
Abstract : Objective 　To study t he effect s of ganoderma spore oil on Friend murine leukemia virus
( Fr . MuL V) and it s mechanism. Methods 　The BALB/ C female mouse was infected wit h Fr. MuL V ,
body weight , spleen index , t hymus index , t he percentages of CD4 + , CD8 + , and CD4 + / CD8 + were mea2
sured. Results 　Compared to t he cont rol group , body weight extenuation , splenomegaly , and at rop hy of
t hymus gland severely in the model group , t he percentages of CD4 + , CD8 + , and CD4 + / CD8 + were signifi2
cantly decreased in t he model . Body weight , spleen index , and thymus index ( P < 0101) in ganoderma
spore oil group were improved wit h t he dosage of 50 , 100 , and 200 mg/ kg , t he percentages of CD4 + ,
·324·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206227　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (“岭南地产药材抗流感病毒药效物质基础”,编号 u0732004)
作者简介 :黄鸣清 (1980 —) ,男 ,福建福州人 ,广州中医药大学 2007 级博士 ,主要从事中药新药研究与开发。