全 文 ：了主要作用并参与肿瘤的形成和转移。应用化学致
癌剂对小鼠结肠诱导建立损伤和炎症模型 ,当除去
结肠上皮细胞中特异的 IκKβ后 ,由于 IκB 不能降
解而导致 N F2κB 活化受限 ,最终引起肿瘤发生率下
降。因此 ,半边旗提取物 5F 在体外引起非小细胞
肺癌细胞凋亡可能是与抑制 N F2κB 活性有关。
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附子生物碱与甘草活性物质组合抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究
杨洁红 ,张宇燕 ,万海同 3 ① ,朱振洪 ,李金辉
(浙江中医药大学 , 浙江 杭州 　310053)
摘 　要 :目的 　观察附子生物碱与甘草活性物质 (三萜皂苷和黄酮等) 组合对大鼠佐剂性关节炎 (AA) 模型的抗
炎效应 ,研究两者配伍的抗炎作用机制 ,探讨两者配伍的意义。方法 　设对照组、模型组、附子组 (即附子生物碱
组) 、附子甘草配伍组 (即附子生物碱与甘草活性物质配伍组) 、雷公藤组 ,观察各组大鼠足肿胀程度和关节炎指数
(A I) 变化 ;检测大鼠血清和关节浸液内细胞因子如白细胞介素21β ( IL21β) 、肿瘤坏死因子2α ( TN F2α) 及前列腺素
E2 ( P GE2 ) 水平 ;用 RT2PCR 检测踝关节组织 IL21β基因表达 ;观察踝关节组织病理改变。结果 　与对照组比较 ,
AA 模型组大鼠关节肿胀严重 ,AI 明显升高 ,血清和关节浸液内 IL2β、TN F2α、P GE2水平显著升高 ,踝关节组织 IL2
1 基因表达明显增加 ,并发生明显病理改变 ;与模型组相比 ,附子组、附子甘草配伍组大鼠关节肿胀得到改善 ,AI 降
低 ,血清和关节浸液内 IL21β、TN F2α、P GE2水平降低 ,踝关节组织 IL21β基因表达减弱 ,病理组织改善 ,且附子甘草
配伍组优于附子组。结论 　附子生物碱与甘草活性物质配伍组合能有效抗炎 ,缓解 AA 症状 ,改善 AA 大鼠免疫
功能和组织结构 ,两者配伍作用优于单用附子生物碱 ,体现了附子生物碱、甘草活性物质是附子甘草两者配伍抗炎
效应的重要物质基础。
关键词 :附子生物碱 ; 甘草活性物质 ; 佐剂性关节炎 ; 抗炎 ; 细胞因子
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320439206
·934·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30873430 ,30973933) ; 浙江省自然科学基金资助项目 ( Y207759) ; 教育部高校博士点基金资助项
目 (20093322110001)
作者简介 :杨洁红 (1969 —) ,女 ,广东揭西人 ,副教授 ,医学博士 ,主要从事方剂配伍研究。
Tel : (0571) 86613711 　E2mail : yannoo7376 @sina. com3 通讯作者　万海同
　　附子为毛茛科植物乌头 A coni t um carmichael i
Debx. 的子根加工品 ,具有回阳救逆、补火助阳、逐
风寒湿邪等功效 ,用于亡阳虚脱 ,肢冷脉微 ,阳萎 ,宫
冷 ,心腹冷痛 ,虚寒吐泻 ,阴寒水肿 ,阳虚外感 ,寒湿
痹痛 ,阴疽疮疡。临床上广泛用于治疗风湿、类风
湿、关节炎等症。附子发挥药效的主要成分为其所
含的乌头碱等生物碱类物质 (主要为二萜类) ,具有
明显的镇痛、抗炎、对免疫功能的影响、对心血管系
统的影响等作用。甘草为豆科甘草属植物甘草
Gl ycy rrhi z a uralensis Fisch. 、光果甘草 G. gl abra
L . 或胀果甘草 G. i n f l at a Bat . 的根及根茎 ,是一
种常用的重要中药 ,主要成分为甘草酸等三萜皂苷
和甘草苷为主的甘草黄酮 ,能补脾益气、清热解毒、
祛痰止咳、缓急止痛 ,具有明显的抗肿瘤、抗氧化作
用 ,在胃溃疡、肝损害、病原微生物和抗变态反应等
方面都有明显的药理作用[1～4 ] 。
《金匮要略》:“痉湿谒病脉证治第二”,“风湿相
搏 ,骨节疼烦掣痛 ,不得屈伸 ,近之则痛剧 ,汗出短
气 ,小便不利 ,恶风不欲去衣 ,或身微肿者 ,甘草附子
汤主之”。甘草附子汤由甘草、附子、白术和桂枝组
成 ,此系风湿表里阳气俱虚证治。方中各药配伍表
里同治祛风除湿 ,尤其甘草意在缓急止痛 ,又缓附子
燥烈有毒之性。在临床附子也常与甘草配伍 ,甘草
不仅能降低附子毒性 ,还可以增强附子的药效[ 5 ] 。
以往多从临床疗效、单味药或方剂层次上进行
中药研究 ,本实验突破以上研究方法 ,以主要的药效
物质基础为切入点 ,进行附子生物碱与甘草活性物
质组合及其与抗炎效应的相关性研究 ,探讨抗炎效
应的物质基础及机制 ,从而为临床提供科学依据 ,为
中药复方研究提供新的思路与方法。
大鼠佐剂性关节炎 (adjuvant art hritis , AA)
是研究类风湿性关节炎的重要模型[6 ] 。本实验采用
AA 大鼠模型 ,通过观察附子生物碱及其与甘草活
性物质 (三萜皂苷和黄酮等) 配伍后对大鼠关节炎
的治疗作用、对相关炎症介质及基因表达的影响 ,以
及病理学的改变 ,研究附子生物碱与甘草活性物质
配伍对类风湿性关节炎的治疗作用 ,探讨两者配伍
抗炎效应的物质基础及机制。
1 　材料与方法
111 　主要仪器 : ARA520 电子天平 ,奥豪斯仪器
(上海)有限公司 ; KW65 —3A 型高频电刀 ,北京医
用电子仪器厂 ; L EICA RM2016 切片机、ZMN —
7803 型组织包埋机、L EICA 普通光学显微镜 ,上海
徕卡仪器有限公司 ;Universal 32 高速离心机 ,德国
Hettich 公司 ; Tanon EPS100 电泳仪 ,北京六一仪
器厂 ; PCR 仪 ,德国 What man Biomet ra 公司 ;凝胶
成像系统 ,上海天能科技有限公司。
112 　药品与试剂 :附子生物碱、甘草活性物质 (三
萜皂苷和黄酮等) 自行制备提取 ,其中附子生物碱
部位含生物碱 0163 % ,甘草活性物质中含甘草酸
78140 %、甘草黄酮 17151 %。通过预实验 ,附子生
物碱的最低有效剂量为 3177 mg/ kg ,甘草活性物质
配伍用量为 17179 mg/ kg (以附子甘草原药用量
1 ∶1 计算) 。雷公藤多苷片 ,浙江普洛康裕天然药
物有限公司 ,批号 070101。临用时均用生理盐水配
制成相应的浓度。弗氏完全佐剂 ,美国 Sigma 公司
产品 ; 白细胞介素21β ( IL21β) 、肿瘤坏死因子2α
( TN F2α) 、前列腺素 E2 ( P GE2 ) EL ISA 试剂盒 ,购
自上海晶美生物技术有限公司 ; Trizol 溶液、DEPC、
Olig (dt) 18、RNase Inhibitor (核酶抑制剂) 、反转
录酶均为上海泽衡生物技术有限公司产品 ; IL21β、
β2actin 引物于上海泽衡生物技术有限公司合成 , IL2
1β的扩增片段大小 (产物长度) 810 bp ,上游引物
5′2A T GGCAACT GT TCCT GAACTC23′,下游引物
5′2T TA GGAA GACACGGA T TCCA T23′; β2actin
的扩 增 片 段 大 小 410 bp ; 上 游 引 物 5′2
GAAA TCGT GCGT GACA T TAA G23′, 下游引物
5′2CTA GAA GCA T T T GCGGT GCA23′。
113 　动物 :清洁级 SD 大鼠 ,雄性 ,50 只 ,体质量
(150 ±10) g ,在室温为 22～25 ℃条件下饲养。实
验动物由浙江中医药大学动物中心供应 ,实验室符
合国家动物实验设施屏障系统标准 ,动物实验条件
合格证 :SYXK (浙) 200320003 号。
114 　AA 大鼠模型的建立与给药方法 :随机从 50
只大鼠中选 10 只作为对照 ,其余用于模型复制。
按照文献方法[ 7 ] ,于大鼠左后足跖皮内注射弗氏完
全佐剂 011 mL 致炎 ,致炎后大鼠随机分为 4 组 ,即
模型组、附子组 (附子生物碱 3177 mg/ kg) 、附甘组
即附子甘草配伍组 (附子生物碱 3177 mg/ kg、甘草
活性物质 17179 mg/ kg) 、雷公藤组 (雷公藤多苷
片 ,9 mg/ kg) 。对照组予以生理盐水注射液同法注
射。各组动物于致炎后当天分别 ig 给药 ,对照组和
模型组给予等容积的生理盐水 ,每日 1 次 ,连续 28 d。
注射佐剂前后不同时期进行病情观察 ,在致炎后 7、
14、21、28 d 计算关节炎指数 (arthritis index , AI) 。
115 　大鼠足肿胀程度测定 :在大鼠踝关节处作标
记 ,根据排水法原理自制测定仪 ,分别测量造模前和
造模后 7、14、21、28 d 大鼠右后足体积 2 次 ,取平均
·044· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
值 ,以致炎前后各组大鼠排水量 (mL) 差值代表右
后足跖的肿胀度。
116 　A I 的计算[7 ] :致炎后第 7 天开始观察并记录
全身关节病变程度 ,每 7 d 记录 1 次。全身病变按 5
级评分法评价 ,根据未注射佐剂的其余 3 只肢体的
病变程度累计积分 ,计算出 A I。0 分 :无红肿 ;1 分 :
小趾关节红肿 ;2 分 :趾关节和足跖肿胀 ;3 分 :踝关
节以下的足爪肿胀 ;4 分 :包括踝关节在内的全部足
爪肿胀。把各个关节的积分累计起来 ,即为每只大
鼠的 A I。
117 　血清和关节浸液的获取与 IL21β、TN F2α、
P GE2的检测 :大鼠致炎给药后 28 d ,用 10 % 水合
氯醛 (014 mL/ 100 g) ip 麻醉 ,由腹主动脉抽取 4～
6 mL 血液 ,4 000 r/ min ,离心 10 min ,取血清 ,置 -
80 ℃冰箱待测 ;在大鼠非致炎侧踝关节上方 015
cm 处摘取肿胀足爪 ,纵向切开 ,放入存有 5 mL 生
理盐水的试管中 4 ℃ 浸泡过夜 , 离心取上清 ,
- 80 ℃保存待测。血清、关节浸液中的 IL21β、
TN F2α、P GE2的检测采用酶联免疫吸附试验方法
( EL ISA) ,按试剂盒说明书操作。
118 　大鼠关节滑膜组织中 IL21βmRNA 表达水平
的测定 :处死大鼠后 ,立即取踝关节组织滑膜 ,投入
液氮中保存 ,备用。用 Trizol 法提取总 RNA ,用逆
转录2聚合酶链反应 ( R T2PCR) 方法扩增 cDNA ,
扩增产物经电泳分离后 ,凝胶成像系统成像 ,检测
IL21βmRNA 在各组大鼠踝关节组织中相对表达量
的变化。
119 　大鼠关节组织病理切片 :处死大鼠后 ,切取四
肢/ 掌趾部 ,置于 4 % 多聚甲醛溶液中固定 ,常规脱
钙后 ,石蜡包埋 ,切片 ,片厚约 3～5μm ,经 H E 染色
后 ,光镜下观察。
1110 　统计学处理 :各组数据均以 x ±s 表示 ,采用
SPSS 1115 统计软件进行分析 ,组间比较采用单因
素方差分析。
2 　结果
211 　对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用 :模型组于注射
佐剂次日呈明显肿胀 ,注射部位发红、肿、热、痛 ;逐日
加重达高峰 ,然后逐渐减轻 ,于第 10 天后出现继发性
肿胀。其余各组 (附子组、附子甘草配伍组、雷公藤组)
大鼠的毛色、活力等状况总体优于模型组。
212 　对 AA 大鼠 A I 的影响 :结果见表 1。与模型
组比较 ,附子组、附子甘草配伍组、雷公藤组的关节
状况均有明显改善 ( P < 0105、0101) ,附子甘草配伍
组作用优于附子组 ( P < 0105) 。
213 　对 AA 大鼠足肿胀程度的影响 :结果见表 2。
与模型组比较 ,附子组、附子甘草配伍组、雷公藤组
均能不同程度改善关节炎大鼠足肿胀度 ( P < 0105、
0101) ,且附子甘草配伍组优于附子组 ( P < 0105) 。
214 　对 AA 大鼠血清和关节浸液内炎症细胞因子
的影响 :结果见表 3。与对照组比较 ,模型组大鼠血
表 1 　附子甘草配伍对 AA 大鼠 AI 的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 1 　Effects of compatibility of Radix Aconiti L ateralis Prepa rata and Radix Glycyr rhizae on AI in AA rats ( x ±s , n = 10)
组　别
剂量/
(mg ·kg - 1)
AI
7 d 14 d 21 d 28 d
模型 - 31 10 ±01 74 6120 ±0179 7130 ±0162 7120 ±01 54
附子 31 77 21 80 ±01 42 5100 ±0182 3 6150 ±0178 6110 ±01 65 3
附子甘草配伍 31 77 + 17179 21 70 ±01 48 4190 ±0199 3 6130 ±0154 3 5101 ±01 55 3 3 △
雷公藤 9 21 60 ±01 52 4110 ±0188 3 3 5140 ±0170 3 3 5130 ±01 67 3 3
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 ; 与附子组比较 : △P < 01 05
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group ; △P < 0105 vs aconiti group
表 2 　附子甘草配伍对 AA 大鼠足肿胀的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Effects of compatibility of Radix Aconiti L ateralis Prepa rata and Radix Glycyr rhizae on swelling degree
of joints in AA rats ( x ±s , n = 10)
组　别
剂量/
(mg ·kg - 1)
造模前体积/
mL
足肿胀/ mL
7 d 14 d 21 d 28 d
模型 - 11 08 ±0111 11 05 ±01 04 0199 ±01 05 01 89 ±01 05 0187 ±0105
附子 3177 11 08 ±0112 11 02 ±01 03 0194 ±01 07 3 01 86 ±01 04 0184 ±0106 3
附子甘草配伍 3177 + 171 79 11 07 ±0110 11 01 ±01 03 0193 ±01 09 3 01 85 ±01 03 3 0180 ±0102 3 △
雷公藤 9 11 06 ±0110 11 00 ±01 05 3 0191 ±01 03 3 3 01 84 ±01 06 3 0178 ±0103 3 3
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 ; 与附子组比较 : △P < 01 05
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group ; △P < 0105 vs aconiti group
·144·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
表 3 　附子甘草配伍对 AA 大鼠血清和关节浸液内炎症细胞因子的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 3 　Effects of compatibility of Radix Aconiti L ateralis Prepa rata and Radix Glycyr rhizae on levels of cytokine
in serum and joint fluids of AA rats ( x ±s , n = 10)
组别
剂量/
(mg ·kg - 1 )
血清各炎症细胞因子/ (pg ·mL - 1 )
IL21β TNF2α PGE2 关节浸液各炎症细胞因子/ (pg ·mL - 1 )IL21β TNF2α P GE2
对照 - 671 19 ±101 16 101 98 ±31 70 81 31 ±21 40 2331 42 ±64137 30191 ±61 32 25180 ±71 50
模型 - 1711 76 ±121 15 ▲▲ 371 84 ±31 31 ▲▲ 261 14 ±31 00 ▲▲ 7391 42 ±76150 ▲▲ 80109 ±61 08 ▲▲ 66127 ±61 72 ▲▲
附子 31 77 1411 63 ±161 56 3 3 291 10 ±31 13 3 201 72 ±31 11 3 6031 84 ±67160 3 68180 ±51 09 3 3 52182 ±61 38 3 3
附子甘草配伍 31 77 + 171 79 1221 43 ±141 28 3 3 △231 59 ±31 09 3 3 △ 141 99 ±21 71 3 3 △ 4681 56 ±60195 3 3 △△56173 ±61 89 3 3 △△ 40131 ±51 28 3 3 △△
雷公藤 9 1061 87 ±171 74 3 3 201 60 ±31 03 3 3 111 66 ±31 26 3 3 4141 36 ±63167 3 3 54100 ±71 33 3 3 34165 ±61 79 3 3
　　与对照组比较 : ▲▲P < 0101 ; 与模型组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 0101 ; 与附子组比较 : △P < 01 05
　　▲▲P < 0101 vs cont rol group ; 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group ; △P < 0105 vs aconiti group
清、关节浸液内 IL21β、TN F2α、P GE2 水平均明显
升高 ( P < 0101) ;与模型组比较 ,附子组、附子甘草
配伍组、雷公藤组 IL21β、TN F2α、P GE2 水平均明
显降低 ( P < 0105、0101) ,且附子甘草配伍组效果优
于附子组 ( P < 0105、0101) 。说明附子生物碱与甘
草活性部位配伍能显著地降低 AA 大鼠血清和关
节浸液内炎症细胞因子的水平 ,具有显著的抗炎
作用。
215 　对 AA 大鼠关节滑膜组织中 IL21βmRNA 基
因表达的影响 :大鼠踝关节组织滑膜经 Trizol 一步
法抽提总 RNA , R T2PCR 扩增 ,电泳分离后成像 ,
用图像分析软件分析凝胶图像以检测显色条带的灰
度值 ,与内参β2actin 之比值即表示 IL21βmRNA 表
达水平。结果见表 4 ,模型组比对照组表达明显增
加 ( P < 0101) ,附子组、附子甘草配伍组比模型组表
达明显减弱 ( P < 0101) ,且附子甘草配伍组优于附
子组 ( P < 0105) 。
216 　对关节组织病理的影响 :大鼠四肢/ 掌趾经固
定、脱钙、石蜡包埋、切片后 H E 染色 ,光镜下观察
发现 :对照组关节滑膜细胞结构完整 ,排列整齐 ,细
胞下为疏松结缔组织 ,无炎症细胞 ,关节软骨完整、
光滑、软骨下骨组织清晰 ;模型组关节滑膜细胞增生
严重 ,滑膜细胞下的结缔组织因胶原纤维增生而变
得致密 ,滑膜内大量淋巴细胞浸润 ,成纤维细胞增
生 ;附子组、附子甘草配伍组病理得到明显改善 ,见
轻度结缔组织增生 ,少量淋巴细胞浸润 ,雷公藤组滑
膜表面有 1～2 层滑膜细胞覆盖 ,浅层有少量淋巴
细胞浸润和胶原纤维增生。见图 1。
表 4 　附子甘草配伍对 AA 大鼠踝关节滑膜组织中 IL2β
mRNA 表达的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 4 　Effects of compatibility of Radix Aconiti L ateralis
Prepa rata and Radix Glycyr rhizae on IL21β
mRNA expression in ankle joints tissue of
AA rats ( x ±s , n = 10)
组别 剂量/ (mg ·kg - 1) IL21βmRNA
对照 - 01 915 ±01151
模型 - 11 679 ±01114 ▲▲
附子 3177 11 348 ±01183 3 3
附子甘草配伍 3177 + 171 79 11 005 ±01161 3 3 △
雷公藤 9 11 070 ±01122 3 3
　　与对照组比较 : ▲▲P < 01 01
　　与模型组比较 : 3 3 P < 01 01 ; 与附子组比较 : △P < 0105
　　▲▲P < 0101 vs cont rol group ; 3 3 P < 0101 vs model group
　　△P < 01 05 vs aconiti group
图 1 　附子甘草配伍对 AA 大鼠关节组织病理的影响
Fig. 1 　Effects of compatibility of Radix Aconiti L ateralis Prepa rata and Radix Glycyr rhizae
on pathological changes of joint tissue of AA rats
·244· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
3 　讨论
　　在祖国医学典籍中 ,类风湿性关节炎 ( RA) 属
于痹证 ,相当于“骨痹”、“历节病”。其内因多为气血
营卫亏虚 ,外因则多责之于风寒湿热诸邪 ,而气候变
化、居住环境、以及过劳、体虚则常是重要的诱发因
素。现代医学认为 , RA 是一种以关节滑膜炎症为
主要病理表现的慢性、系统性和破坏性的自身免疫
性关节疾病。临床表现复杂多样 ,早期可有红、肿、
热、痛和关节功能障碍。晚期关节可出现不同程度
的强直和畸形 ,并有骨腐蚀和骨骼肌的萎缩 ,严重影
响日常生活和工作 ,是一种致残率较高的疾病 ,严重
危害了人类的身体健康。
RA 是一个多基因、多因素参与的病理过程。
作为 RA 的生理标志 ,各种细胞因子、趋化因子、蛋
白酶等受到广泛关注 ,它们在 RA 的发病机制研
究、早期鉴别诊断、药物治疗机制和药物疗效监测等
方面发挥着重要作用。细胞因子网络失调与 RA
发病及病程进展关系密切 ,炎症细胞因子如 IL21、
TN F2α及 P GE2在 RA 发病机制和滑膜的保护中起
到关键作用[8 ] 。RA 中的滑膜细胞、淋巴细胞、巨噬
细胞处于高度活化状态 ,可合成 IL21β与 TN F2α等
多种炎性细胞因子。释放入关节滑膜液及血液中的
细胞因子 IL21β与 TN F2α有许多相似的生物学活
性 ,在 RA 中主要参与以下病理过程 : ①激活血管
内皮细胞 ,增强内皮细胞黏附分子的表达 ,在关节炎
时 ,血液中的白细胞通过与黏附分子相互作用被汇
集到关节腔 ; ②刺激结缔组织细胞和多形核细胞产
生前列腺素等小分子炎性递质 ; ③通过刺激滑膜细
胞和软骨细胞 ,破坏骨细胞 ,并产生胶原酶和其他中
性蛋白酶 ,释放骨钙等导致骨和软骨的破坏[9 ,10 ] 。
在 RA 的病程进展中 ,滑膜细胞合成释放 IL21、
TN F 等细胞因子 ,刺激滑膜及炎性细胞产生和释放
前列腺素 ,而 P GE2可增加毛细血管通透性 ,引起炎
症反应性水肿、渗出、充血等 ,并引起软骨下骨质吸
收破坏 ,刺激滑膜血管翳形成 ,从而加重滑膜炎症及
RA 的活动性 ,因此 ,降低病变组织 P GE2 的量是药
物改善临床症状的重要原因。
RA 与淋巴细胞、巨噬细胞、滑膜细胞等功能改
变有关。滑膜组织的多种细胞释放各种细胞因子进
入滑膜液及血液中 ,通过介导细胞间的相互作用引
起一系列组织损伤酶的释放 ,促进滑膜细胞、滑膜成
纤维细胞的增殖和滑膜微血管的增生 ,这是导致关
节破坏的重要因素 ,也是导致关节内黏连和后期关
节畸变的关键因素[11 ] 。大鼠 AA 病理学特点包括
滑膜细胞过度增生、增厚 ,单核巨噬细胞浸润 ,关节
软骨及骨的破坏。
本实验研究表明 ,与对照组相比 ,AA 模型组大
鼠的关节肿胀、疼痛和变形等均较明显 ,血清和关节
浸液内细胞因子 IL21β、TN F2α及 P GE2水平均显著
升高 ,AA 大鼠踝关节组织中 IL21β基因明显增强 ,
有明显的滑膜细胞增生、增厚 ,滑膜细胞下结缔组织
增生 ,淋巴细胞大量浸润 ,关节面软骨破坏明显 ,并有
局灶性脱落 ,体现明显的类似于 RA 的临床症状。
附子生物碱与甘草活性物质组合组炎症关节的
肿胀程度能得到有效地缓解 ,对关节炎性症状有显
著改善作用 ,血清和关节浸液内细胞因子水平显著
降低 ,踝关节组织中 IL21β基因表达减弱 ,病理明显
改善 ,滑膜细胞增生减少 ,偶见少量淋巴细胞浸润 ,
没有明显的关节面软骨破坏或局灶性脱落。且其作
用显著优于单用附子生物碱。
本实验从改善 RA 病变局部炎症、调节细胞免
疫状态、组织基因表达及病理改变等方面 ,对附子生
物碱与甘草活性物质 (三萜皂苷和黄酮等) 配伍前
后疗效进行比较 ,研究附子生物碱与甘草活性物质
配伍的意义 ,结果附子生物碱与甘草活性物质配伍
对 AA 具有显著治疗作用 ,改善各项病理生化指
标 ,且附子生物碱与甘草活性物质配伍后作用优于
单用附子生物碱 ,从组分合和的角度阐述了附子生
物碱与甘草活性物质配伍后治疗类风湿关节炎的机
制 ,表明附子生物碱与甘草活性物质是附子与甘草
配伍抗炎效应的重要物质基础 ,充分体现了附子与
甘草配伍即中医配伍理论的显著意义 ,为临床两者
的配伍应用提供了可靠的实验依据。同时本实验从
研究有效部位的角度出发 ,探讨中医药配伍的意义
和机制 ,也为中医复方的研究和新药的开发提供了
新的思路与方法。
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刺五加叶皂苷 B对急性心肌梗死大鼠的保护作用
梁启明 ,曲绍春 ,于晓风 ,徐华丽 ,韩 　冬 ,睢大筼 3 ①
(吉林大学药学院 药理教研室 ,吉林 长春 　130021)
摘 　要 :目的 　研究刺五加叶皂苷 B (ciwujianoside B) 对大鼠急性心肌梗死的影响及其机制。方法 　通过结扎大
鼠左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型 ;观测以下指标 :左室收缩压 (LVSP) 、左室舒张末期压 (LV EDP) 、左
室压最大上升/ 下降速率 ( ±d p/ d tmax ) 、动脉收缩压 ( SBP) 、动脉舒张压 (DBP) 、平均主动脉压 ( MAP) 、心率
( HR) 、心肌梗死范围 (MIS) ;肌酸激酶 ( CK) 、乳酸脱氢酶 (LD H) 、天冬氨酸转氨酶 ( AST) 活性 ;游离脂肪酸
( FFA) 及乳酸 (LA) 水平 ;超氧化物歧化酶 (SOD) 、丙二醛 (MDA) 、谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH2Px) 、肿瘤坏死因
子2α( TN F2α) 及白细胞介素26 ( IL26) 水平。结果 　与模型组比较 ,刺五加叶皂苷 B 可显著升高急性心肌梗死大鼠
LVSP、±d p/ d tmax 、HR、SBP ( P < 0105) ,降低 LV EDP ( P < 0105) ,对 DBP、MAP 的增加不显著 ;刺五加叶皂苷 B
可明显缩小 MIS ,降低血清 CK、LD H、AST 活性及 MDA、FFA、LA、TN F2α、IL26 水平 ( P < 0105、0101) ;提高
SOD、GSH2Px 活性 ( P < 0105) 。结论 　刺五加叶皂苷 B 对大鼠急性心肌梗死具有明显保护作用 ,可能与其增强
抗氧化酶活性 ,减少自由基损伤 ,纠正 FFA 代谢紊乱及 LA 堆积 ,抑制炎症反应等机制有关。
关键词 :刺五加叶皂苷 B ; 心肌梗死 ; 自由基 ; 炎症
中图分类号 :R28612 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320444204
　　刺五加叶皂苷系从五加科植物刺五加 A can2
t hop ana x senticosus ( Rupr . et Maxim. ) Harms 叶
中提取分离的含 16 种活性成分的总皂苷 ,其中 13
种为邵春杰等[ 1 ,2 ] 发现的化合物 ,命名为刺五加苷
(ciwujianoside)2A1 、A2 、A3 、A4 、B、C1 、C2 、C3 、C4 、
D1 、D2 、D3和 E。其中刺五加叶皂苷 B (ciwujiano2
side B) 是一种单体成分 ,分子式为 C58 H92 O25 ·
3 H2 O ,相对分子质量为 1 242 ,化学名称为 32氧2α2
吡喃鼠李糖基2(1 →2)2β2吡喃阿拉伯糖基2302去甲
齐墩果212 , 20 (29)2二烯2282酸 282氧2α2吡喃鼠李糖
基2(1 →4)2β2吡喃葡萄糖基2(1 →6)2β2吡喃葡萄糖基
酯。前期研究表明刺五加叶皂苷可减少梗死面积及
梗死后心室重构的发生 ,对心肌缺血有明显的保护
作用[ 3～6 ] 。但具体发挥作用的单体成分还难以确
定。已有研究显示刺五加叶皂苷 B 对心室肌细胞
膜 A TP 敏感性钾通道有开放作用[7 ] ,对异丙肾上
腺素导致的大鼠急性心肌缺血有保护作用[8 ] 。本实
验通过结扎左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗
死模型 ,观察刺五加叶皂苷 B 对急性心肌梗死的保
护作用并探讨相关作用机制。
1 　材料
111 　药品与试剂 :刺五加叶皂苷 B 由吉林大学化
学院天然药物化学研究室提供 ,白色粉末 ,实验时以
蒸馏水配制 ,经过 0122μm 孔径滤膜滤过除菌后使
用 ;氯化硝基四氮唑蓝 (NB2T) 购自上海前进试剂
厂 ;丙二醛 (MDA) 、超氧化物歧化酶 (SOD) 、谷胱甘
肽过氧化物酶 ( GSH2Px) 、游离脂肪酸 ( FFA) 、乳酸
(LA) 测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所 ;肿
瘤坏死因子2α( TNF2α) 、白细胞介素26 ( IL26) 放免药
盒购自中国人民解放军总医院东亚免疫技术研究所。
112 　实验动物 : Wistar 大鼠 ,雌雄各半 ,体质量
220～250 g ,动物合格证号 : SCXK2(吉) 200320001 ,
由吉林大学实验动物中心提供。
2 　方法
211 　模型制备 :急性心肌梗死造模方法参照文献方
法[9 ] 。具体如下 :将大鼠乙醚麻醉 ,仰位固定 ,自左
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①收稿日期 :2009206205　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :吉林省中医管理局科研基金重点课题 (98A17)
作者简介 :梁启明 (1981 —) ,女 ,吉林省长春市人 ,博士 ,主要从事心血管药理学研究。
Tel : (0431) 85619705 　E2mail : lqm19810719 @yahoo. com. cn3 通讯作者　睢大筼