全 文 ：HPLC法测定功能红曲中红曲可林 K、红曲可林 L和脱水红曲可林 K
李 艳1 ,张现涛2 ,秦民坚1*
( 1 中国药科大学中药学院, 江苏 南京 210009; 2 广东省中药研究所,广东 广州 510520)
摘 要: 目的 建立 H PLC 同时测定功能红曲中红曲可林 K( monacolin K)、红曲可林 L ( monaco lin L )和脱水红曲
可林 K( dehydromonacolin K )的方法。方法 色谱柱为 Ag ilent Zorbax SB C18柱( 250 mm 4 6 mm, 5m) ; 流动相
为甲醇0 05%磷酸( 78 22) ; 检测波长 238 nm; 体积流量 1 0 mL / min;柱温 35 ! ; 进样量 20 L。结果 红曲可
林 K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 的线性范围分别为0 08~ 0 84、0 04~ 0 38、0 04~ 0 40 g ;加样回收率分别
为 99 2%、99 6%、99 3% , RSD分别为 1 7%、1 5%、1 4%( n= 9)。结论 本方法简便、灵活、准确, 重复性好, 可
用于功能红曲中红曲可林 K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 的测定。
关键词:功能红曲; 红曲可林 K;红曲可林 L ; 脱水红曲可林 K;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 08128603
红曲亦名丹曲, 是以大米为原料, 经红曲霉
Monascus pur pur eus Went 发酵而成的一种紫红色
米曲,是中国传统的具有活血化瘀、健脾消食等功效
的药食两用的中药[ 1]。红曲有功能红曲和普通红曲
两种,功能红曲含有多种生理活性物质, 如红曲可林
( monaco lin)类物质、麦角甾醇、氨基丁酸、天然植
物激素等; 普通红曲不含有明显降脂成分红曲可林
类物质,更多的应用于酿酒和食品。1979年红曲霉
被发现可产生具有抑制胆固醇合成的物质红曲可林
K( monaco lin K)后, 红曲的降血糖、调血脂及降胆
固醇的功效成为众人关注的焦点[ 2]。广为医生和患
者接受的血脂康胶囊、脂必妥片、脂必妥胶囊等心血
管一线中药均以红曲为主要原料。近年来本课题组
开发了以红曲为主要原料的银曲胶囊已获得临床批
文[ 34] ;通过对全国 20多份功能红曲样品检测发现
大部分样品除了洛伐他汀外再无其他红曲可林类物
质。主要是由于普通红曲价格约为 4元/ kg, 功能
红曲的价格约为 150元/ kg, 而化学合成的洛伐他
汀较为便宜,部分不法商人将洛伐他汀添加到普通红
曲中以冒充功能红曲,使用∀中国药典#方法无法鉴别
真伪。功能红曲的化学成分和药理作用多样,洛伐他
汀是无法替代的。因此为了寻找更合理的红曲质量
评价方法, 本课题组对红曲进行系统的化学成分研
究,从中共得到化合物 60多个,其中红曲可林类化合
物17个, 包括 7 个新的化合物和 6 个新的天然产
物[ 5] ;这些红曲可林类化合物中, 红曲可林 K( mona
colin K)、红曲可林L( monacolin L)和脱水红曲可林 K
( dehydromonacolin K)量较高。为了更好地评价和控
制药品质量,建立更加高效准确的分析检测方法,本
实验建立了利用高效液相色谱法同时测定功能红曲
中这 3种成分的测定方法,并参照文献在前处理中用
NaOH 处理样品使闭环结构(内酯型)完全转化为开
环结构(酸型)的方法,测定开环结构的量,即为红曲
可林 K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 的总量,取得
了满意的效果[ 6]。
1 仪器与试药
Ag ilent 1200系列高效液相色谱仪( DAD检测
器) ; AG285分析天平 ( M et ter T oledo 公司) ; 华南
超声波清洗器 (功率 250 W, 频率 45 H z) ; 离心机
(上海常思工贸有限公司)。
红曲药材经中国药科大学中药资源教研室主任
秦民坚教授鉴定为红曲 Rubrum F ermentum , 购自
上海红太阳生物制品有限公司, 批号分别为
091001、091002、091003; 红曲可林 K、红曲可林 L
和脱水红曲可林 K 对照品(内酯型)均为自制,质量
分数均大于 98 0% ;甲醇为色谱纯,磷酸、氢氧化钠
均为分析纯, 水为纯化水。
2 方法与结果
2 1 检测波长的选择:分别取 20 g/ mL 红曲可林
K、5 g/ mL 红曲可林 L 和5 g/ mL 脱水红曲可林K
对照品溶液,在 200~ 400 nm扫描,结果均在 238 nm
波长处有最大吸收,故选择 238 nm 为测定波长。
2 2 色谱条件:色谱柱为 Ag ilent Zor bax SB C18柱
( 250 mm 4 6 mm, 5 m) ; 流动相为甲醇0 05%
∃1286∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20100129 基金项目:广东省科技计划项目( 2009A0309011)作者简介:李 艳( 1984 % ) ,女,湖南耒阳人,硕士,研究方向为中药质量控制。
* 通讯作者 秦民坚 T el: ( 025) 86185130 Fax : ( 025) 83412291 Email: minjianqin@ sin a com
磷酸( 78 22) ; 检测波长 238 nm; 体积流量 1 0
mL/ min;柱温 35 ! ;进样量 20 L。理论板数按红
曲可林 K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 峰计应不
低于 4 000。
2 3 溶液的制备
2 3 1 对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷
减压真空干燥 24h的红曲可林 K、红曲可林 L 和脱
水红曲可林 K 对照品适量, 加甲醇分别制成 0 5、
0 125、0 125 mg/ mL 的单一对照品储备液。精密
移取上述单一对照品储备液各 1 mL 置同一 25 mL
量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀, 制成红曲可林 K、
红曲可林 L 和脱水红曲可林 K质量浓度分别为20、
5、5 g/ mL 的混合溶液,作为混合闭环对照品储备
液;另精密移取上述单一对照品储备液各 1mL 置同
一 25 mL 量瓶中,精密加入 0 1 mo l/ L 氢氧化钠溶
液 1 mL,摇匀,静置 10 min, 用甲醇稀释至刻度, 摇
匀,制成红曲可林K、红曲可林L 和脱水红曲可林K
质量浓度分别为 20、5、5 g/ mL 的混合溶液, 作为
混合开环对照品储备液。
2 3 2 供试品溶液的制备:分别取样品细粉 2 0 g,
精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 75%乙醇 50
mL, 称定质量, 超声处理 (功率 250 W, 频率 40
kHz) 20 min,放至室温,再称定质量, 用 75%乙醇补
足减失的质量, 摇匀,离心 10 min( 3000转/ m in) , 精
密量取上清液 5 mL, 置 50 mL 量瓶中, 精密加入
0 1 mo l/ L 氢氧化钠溶液 5 mL, 摇匀, 静置 10 m in,
用甲醇稀释至刻度, 摇匀,即得。
2 4 线性关系考察:分别精密量取混合开环对照品
储备液 0 5、1 5、2 5、4 0、5 0 mL 于 10 mL 量瓶
中,用甲醇稀释至刻度,摇匀, 制得系列对照品溶液。
精密吸取对照品溶液 20 L 分别注入液相色谱仪,测
得峰面积。以峰面积为纵坐标,进样质量的常用对数
值为横坐标,计算其回归方程。结果表明红曲可林
K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 分别在 0 08~
084、0 04~ 0 38、0 04~ 0 40 g 线性关系良好, 回
归方程分别为: Y= 5655 X- 21 66, r= 0 999 9; Y=
4153 X- 1 92, r= 0 999 8; Y= 30 50 X+ 6 79, r=
0999 9。
2 5 精密度试验: 取同一供试品溶液 ( 批号
091001) 20 L,重复进样 6次,测得峰面积。结果红
曲可林 K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 峰面积的
RSD分别为 0 76%、0 84%、0 57%。
2 6 稳定性试验: 取同一供试品溶液 ( 批号
091001) ,在 0、2、4、6、8、12 h 进样 20 L, 测定峰面
积,结果红曲可林 K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K
峰面积的 RSD 分别为 1 63%、1 45%、1 28% , 表
明 12 h内测定结果稳定。
2 7 重现性试验:取批号 091001红曲样品 6份,平
行制备供试品溶液, 进行测定, 结果红曲可林 K、红
曲可林 L 和脱水红曲可林 K 质量分数平均值分别
为 0 75%、0 06%、0 11% , RSD 分别为 0 56%、
0 92%、0 77%。
2 8 加样回收率试验: 精密称取红曲样品 (批号
091001) 9份, 每份约 0 1 g , 每 3 份为 1 组, 按高、
中、低 3个水平分别精密加入各单一对照品储备液
适量 (红曲可林 K 1 2、1 5、1 8 mL; 红曲可林 L
0 3、0 5、0 7 mL; 脱水红曲可林 K 0 8、1、1 2
mL) , 制备供试品溶液,进行检测,计算红曲可林 K、
红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 的回收率。结果平
均回收率分别为 99 2%、99 6%、99 3% , RSD分别
为 1 7%、1 5%、1 4%( n= 9)。
2 9 样品测定:取 3批红曲样品,制备供试品溶液。
精密吸取供试品溶液和混合开环对照品溶液 20
L,注入液相色谱仪进行测定, 进样 3 次取峰面积
的平均值, 根据回归方程计算质量分数, 结果见表
1。色谱图见图 1。
表 1 功能红曲中红曲可林类成分的测定结果(n= 3)
Table 1 Determination of monacolin compounds
in Rubrum Fermentum (n= 3)
批号 红曲可林 K/ % 红曲可林 L/ % 脱水红曲可林 K/ %
091001 0 75 0 06 0 11
091002 0 78 0 07 0 09
091003 1 23 0 04 0 08
3 讨论
3 1 样品处理方法的选择
3 1 1 提取溶剂的选择:以 0 2 mo l/ L 氢氧化钠和
75%乙醇作为提取溶剂,结果表明, 0 2 mo l/ L 氢氧
化钠作为提取溶剂,在选定的色谱条件下, 开环红曲
可林 K峰前移并且峰形变差;而 75%乙醇提取, 红
曲可林 K、红曲可林 L 和脱水红曲可林 K 峰形良
好,无杂质干扰。
3 1 2 乙醇比例的选择: 考察了 50%、75%、95%
乙醇作为提取溶剂时对测定的开环结构总量的影
响,试验结果表明:选择 75%乙醇的提取效率较高。
3 1 3 NaOH 浓度的选择: 红曲可林类化合物均
有开环和闭环两种结构,为更准确测定红曲中指标
成分,在前处理中用 NaOH 处理样品使闭环结构完
全转化为开环结构, 再测定开环结构的量。考察
0 1、0 2、1 mol/ L 氢氧化钠水溶液对红曲样品提取
∃1287∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
1闭环红曲可林 L 2闭环红曲可林 K 3闭环脱水红曲可林 K
1&开环红曲可林 L 2&开环红曲可林 K 3&开环脱水红曲可林 K
1m onacolin L in lactone for m 2m onacol in K in lactone form 3dehydromonacolin K in lactone form
1&monacolin L in hydroxy acid form 2&monacolin K in h ydroxy acid for m 3&deh ydromonacolin K in hydroxy acid form
图 1 闭环对照品( A)、开环对照品( B)和功能红曲( C)的 HPLC色谱图
Fig 1 HPLC Chromatograms of reference substance in lactone forms ( A) , reference substance
in hydroxy acid forms (B) , and RubrumFermentum (C)
液进行碱化处理 10 min, 试验结果表明: 1 mol/ L 氢
氧化钠水溶液浓度太高, 对化合物结构有破坏; 0 1、
0 2 mo l/ L 氢氧化钠均能使闭环红曲可林类化合物
完全转化为开环结构,故选择 0 1 mol/ L 氢氧化钠,
反应 10 m in 对样品进行前处理。
3 1 4 超声时间考察:考察了超声时间分别为 10、
20、30、40 min 时对测定的开环结构总量的影响。
试验结果表明:超声 10 m in时测得量与 20 min 时
基本一致, 而超声至 40 min 时无变化, 所以确定超
声时间为 20 m in。
3 2 对于含有大量的红曲可林类化合物的功能红
曲而言,仅仅测定红曲可林 K 不能全面反映红曲的
质量;本实验选择多指标成分采用 H PLC法对功能
红曲进行质量控制,更为准确、科学,为检测市场上
流通的各种红曲产品提供了一种可行的测定方法,
可以有效防止伪劣掺假产品的出现, 同时该法还为
制定红曲药材的质量标准提供一定的参考。
参考文献:
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[ 6] 罗仁才, 孙开奇, 谢申猛, 等 红曲中 Monacolin K 总量的测
定方法[ J] 卫生研究, 2003, 32 ( 2) : 157158
马兜铃酸 I在煎煮过程中的缩合反应研究
王 勇,夏 博, 邓晓春*
(深圳大学生命科学学院,广东 深圳 518060)
摘 要:目的 研究了马兜铃酸 I的热不稳定性及其在中药煎煮过程中的化学反应。方法 利用荧光光谱和电喷
雾串联质谱技术进行考察。结果 马兜铃酸 I在加热条件下不稳定, 煎煮过程中生成相对分子质量为 414 的马兜
铃酸 I衍生物, 可能的形成机制是两个马兜铃酸分子失去硝基后缩合。结论 该反应具有普遍性, 在马兜铃单煎
液、关木通单煎液、马兜铃或关木通的药对共煎液以及马兜铃酸 I 对照品与当归的共煎液都检测到, 在各种体系中
还同时检测到未反应的马兜铃酸 I, 提示该反应进行不完全。
关键词:马兜铃酸 I; 马兜铃;关木通;缩合反应; 电喷雾质谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 08128805
马兜铃酸主要存在于马兜铃属和细辛属植物 中,是 3, 4次甲二氧基10硝基1菲酸类化合物,也
∃1288∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20091112 基金项目:深圳市科技计划项目( 200528)作者简介:王 勇( 1970 % ) ,男,副教授,主要从事质谱学和中药化学研究。Email: w yon g@ szu edu cn