全 文 :基地的龙胆样品相似度非常接近,说明共有模式可
以包容其他产地的同类样品; 同属的 1号样品(三花
龙胆)、8号样品(坚龙胆)与 19 号、20 号样品(小秦
艽)同样可以达到依次的区分;与不同科的植物草本
威灵仙( 27号、28号)、桃儿七( 29 号、30号)区别更
大。这种相似度依次区分的结果与理论上由科属种
界定的亲缘关系规律相一致。桃儿七样品有剧毒,
曾经发生过将其误投为龙胆而引起的中毒事件 [ 7] ,
因此共有模式将其区分, 完全可以控制龙胆药材的
质量。从表 3上还可以看到产于同一 GA P 生产基
地的栽培品的相似度还略有差别,这是由于生长年
限、采收季节、土壤环境等因素的影响, 龙胆药材所
含的有效成分的种类和量存在一定的波动, 但总体
来看 类品种的相似度一般在 0. 9~ 1. 0。
3. 5 指认了共有模式中的马钱苷、獐牙菜苦苷、龙
胆苦苷和獐牙菜苷 4 个化合物, 它们都是裂环环烯
醚萜苷类化合物, 这类成分是龙胆药材的药效成分,
也是其苦味的来源。
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丹参种子的超干贮藏研究
成清琴,王 磊, 陈 娟,慕小倩*
(西北农林科技大学生命学院, 陕西 杨凌 712100)
摘 要:目的 确定丹参种子的最适超干方法和不同贮藏时间内的最适超干水分,并探索耐藏机制。方法 用硅
胶常温干燥法和恒温鼓风箱 50 ! 干燥法将丹参种子干燥到不同的含水量后进行贮藏,通过测定种子发芽率、发芽
势、活力指数等指标确定最适超干方法及超干水分; 通过测定可溶性糖的量和 MDA 量来探索种子耐藏性。结果
采用硅胶脱水比用烘箱更安全;超干丹参种子在贮藏初期耐藏性优势明显,随着贮藏时间的延长,超干种子相对于
对照的耐藏性优势下降;常温密封贮藏丹参种子的最适含水量约为 7. 5% ; 种子耐藏性与种子中可溶性糖量密切相
关。结论 丹参种子可以采用超干贮藏方法来保存种质资源。
关键词:丹参种子; 超干贮藏;最适含水量
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 05082505
Studies on ultradry storage of Salvia miltiorrhiza seeds
CHENG Qingqin, WANG Lei, CHEN Juan, MU Xiaoqian
( Co llege of Life Science, Nor thwest Univer sity o f A& F , Yang ling 712100, China)
Abstract: Objective To study the opt imum ult radry method and mo isture at dif ferent storage t ime
fo r S alvia mil t iorr hiz a seeds and f ind the pr inciple of storability Methods S mil tior rhi z a seeds w ere
dried by silica gel at room temperatur e and by the oven at constant temperatur e 50 ! to obtain var ious
moisture content before stored sealed at room temperature T he optimum ult radry method and the opt imal
moisture w ere evaluated by measuring the germ ination rate, g erminat ion tendency, and vigor index, etc
Soluble sugar and MDA content w ere measured to invest igate the seed storability Results Desiccat ion by
∀825∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 20090810 基金项目:国家# 十一五∃科技支撑计划;丹参生产精准管理与远程信息控制试验与示范( 2007BAD79B06)作者简介:成清琴( 1984 % ) ,女,硕士研究生在读,研究方向为药用植物资源保护与利用。
T el : 15829532442 Email: sicho520@ 163. com
* 通讯作者 慕小倩 T el: 13700243612 Email: muxiaoqian@ 126. com
silica gel w as mor e proper than by oven; ult radry storage o f seeds has obvious advantag es at the early
stage, but w ith the pr olong o f the storage t ime, the advantages decreased; T he opt imal moisture for S
mil t iorr hiz a seeds storage at ro om temperature is about 7. 5% ; Seed sto rability is closely related to so luble
sugar content in the seeds Conclusion S mil tiorr hi z a seeds can be ult radry sto red to preserve germ
plasm resour ces
Key words: Salviam il tiorr hiz a Bunge seeds; ultr a dry ; opt imal moisture content
丹参 Salvia mi l tior r hi z a Bunge, 又名血参、紫
丹参、赤参,是唇形科鼠尾草属多年生草本药用植
物。现代药理研究表明, 丹参具有保护血管内皮细
胞、抗心律失常、抗动脉粥样硬化、改善微循环、保护
心肌、抑制和解除血小板聚集、增加冠脉流量、提高
机体耐缺氧能力、抑制胶原纤维的产生和促进纤维
蛋白的降解、抗炎、抗脂质过氧化和清除自由基以及
保护肝细胞、抗肺纤维化等作用,化学成分分为水溶
性和脂溶性成分 [ 1, 2] , 丹参酮 &A、隐丹参酮定量测
定有相关报道[ 3] 。种子繁殖是丹参最常用的繁殖方
法,但由于其种子不耐贮藏,给丹参栽培和种质资源
保存带来了很大的困难[ 4] 。
种子超干贮藏是一种新兴的简便易行、高效低
耗的种子保藏方法。据报道贮藏温度和含水量之间
存在一定程度上的互补关系, 通过降低种子含水量
有可能达到与低温贮藏同样或更好的贮藏效果 [ 5]。
自 20世纪 80年代末期, 种子超干贮藏成为国内外
种子学和植物资源保护学的一个研究热点, 但所涉
及的物种主要集中在农作物和林木上, 关于药用植
物方面的研究还比较少, 只有桔梗、牛膝、党参、红
花、黄芩等 [ 5, 6] ,关于丹参种子超干贮藏的研究未见
报道。本研究旨在确定丹参种子的最适超干方法以
及短期贮藏的最适超干水分, 并进一步分析影响丹
参种子耐藏性的可能原因, 为丹参种子科学贮藏提
供参考依据。
1 材料与方法
1. 1 材料:供试丹参种子于 2008年采收自陕西天
士力植物药业有限公司商洛丹参基地, 由陕西人民
政府中药现代化领导小组专家顾问、天士力集团公
司中药现代化研究院技术顾问梁宗锁教授鉴定。
1. 2 方法
1. 2. 1 种子含水量的测定[ 7] : 依据∋国际种子检验
规程(1996年版的标准方法进行。
1. 2. 2 种子超干与贮藏:根据测定的未超干丹参种
子(对照)含水量( 10. 3% ) , 计算出达到不同含水量
需去掉的水分, 分别用硅胶干燥法、恒温鼓风箱 50
! 干燥法对丹参种子进行超干处理 [ 8] , 隔一年时间
称量种子质量, 直至种子含水量为 1. 5%、2. 5%、
3. 5%、4. 5%、5. 5%、7. 5% [ 9]。所得超干种子及对
照分别用铝箔袋密封, 室温贮藏(本实验中所有经过
干燥处理的丹参种子统称#超干种子∃, 按国际标准
只有当含水量低于 5%~ 7%时才称为#超干种子∃;
#硅 2. 5%∃表示用硅胶干燥到含水量为 2. 5%的丹
参种子; #烘 2. 5%∃表示采用恒温鼓风箱干燥到含
水量为 2. 5%的丹参种子)。
1. 2. 3 回湿:参考水分逐级回湿方法 [ 9]。
1. 2. 4 种子相对电导率测定[ 10] :取 0. 1 g 种子, 4次
重复,装入尼龙网袋中,先回湿,再用无离子水冲洗数
次,吸干种子表面水分,加6 mL 无离子水室温下浸泡
12 h(以充分吸胀为准) , 用 DDS % IIA 型电导仪测定
种子浸出液电导率( A 1 ) ,再将测定完的样品和浸出液
在沸水浴中煮 15 min,冷却至 25 ! 时测定其绝对电
导率( A 2 ) ,相对电导率为 A 1与 A 2 的比值。
1. 2. 5 发芽试验:种子置培养皿, 2层滤纸为发芽床,
每皿 100粒, 25 ! 暗培养, 4个重复,第 5天计算发芽
势,第 12天计算发芽率, 测定胚根的平均长度, 计算
活力指数(活力指数= 发芽率) 胚根平均长度 [7] )。
1. 2. 6 丙二醛( MDA)测定: 参照侯福林( 2004)方
法。取 0. 3 g 种子用 5%三氯乙酸( TCA) 5 mL 匀
浆, 3 000 r/ m in 冷冻离心 10 min, 取上清液 1 mL,
加 5 mL 0. 5%硫代巴比妥酸( TBA) ,混匀后在沸水
浴中保持 10 m in, 用冷水迅速冷却至室温, 混合物
于 3 000 r/ min 冷冻离心 10 min,分别测定上清液
在 450、532和 600 nm 下的吸光度值。单位种子中
MDA 质量分数计算公式: M DA ( mmol/ g FW ) =
[ 6. 452 ) ( A 532- A 600 )- 0. 599 A 450 ] V t
FW ) V s ,其中
FW为种子鲜质量( g) ; V t 为提取液体积( mL) ; V s
为测定用提取液体积( mL)。
1. 2. 7 可溶性糖量测定[ 7] : 采用蒽酮硫酸法。
1. 2. 8 丹参种子人工老化: 根据程红焱等[ 5, 6] 的方
法,将不同含水量的丹参种子用双层铝箔袋密封,于
50 ! 的恒温箱中放置 10 d后取出,进行发芽试验,预
测不同含水量种子的耐贮藏性(即活力与生活力)。
∀826∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
2 结果与分析
2. 1 人工老化法预测不同含水量丹参种子活力及
生活力:由表 1可知, 除硅 2. 5%外, 超干丹参种子
发芽率、发芽势、活力指数均高于对照, 其中硅
5. 5%、硅 7. 5%、烘 4. 5%超干种子发芽率、发芽势、
发芽指数均显著高于对照, 这说明超干种子的活力
及生活力整体均高于对照种子; 除烘 7. 5%外, 超干
种子相对电导率均低于对照, 且硅 2. 5%、硅 3. 5%、
硅 5. 5%、烘 2. 5%、烘 3. 5%相对电导率显著低于
对照,这说明超干种子细胞膜损伤小于对照, 超干种
子在老化过程中膜的结构和功能保持得更完善。经
人工老化的结果可预测出, 超干贮藏丹参种子的最
适含水量为硅 5. 5%~ 7. 5%或烘 4. 5%。
表 1 贮藏两个月并人工老化 10 d后不同含水量丹参种子
发芽率、发芽势、活力指数及相对电导率变化
Table 1 Changes of germination rate, germination tendency,
vigor index, and relative electrical conductivity
of S miltiorrhiza seeds with different moisture
contents after storage for two months and accelerated
aging for 10 d
处 理 发芽率/ % 发芽势/ % 活力指数/ ( mm∀% ) 相对电导率/ %
对照 36. 00 ∗ 1. 00 30. 00 ∗ 1. 15 197. 99 ∗ 39. 46 56. 48 ∗ 2. 12
硅 2. 5% 37. 67 ∗ 1. 67 31. 67 ∗ 1. 33 178. 10 ∗ 18. 00 45. 17 ∗ 2. 34*
硅 3. 5% 38. 00 ∗ 3. 06 32. 00 ∗ 3. 79 222. 94 ∗ 9. 85 47. 37 ∗ 3. 05*
硅 4. 5% 40. 33 ∗ 1. 45 36. 00 ∗ 2. 08 262. 47 ∗ 27. 98 49. 22 ∗ 2. 56
硅 5. 5% 51. 33 ∗ 1. 76* 41. 33 ∗ 1. 86* 316. 79 ∗ 33. 16* 41. 86 ∗ 2. 40*
硅 7. 5% 50. 00 ∗ 3. 00* 40. 67 ∗ 2. 0* 362. 67 ∗ 17. 08* 52. 41 ∗ 1. 61
烘 1. 5% 45. 00 ∗ 4. 62 36. 67 ∗ 3. 28 261. 00 ∗ 25. 73 49. 19 ∗ 1. 82
烘 2. 5% 45. 00 ∗ 1. 15 40. 67 ∗ 1. 45* 302. 14 ∗ 34. 51* 44. 61 ∗ 2. 36*
烘 3. 5% 44. 33 ∗ 3. 53 37. 67 ∗ 2. 67 255. 07 ∗ 14. 74 44. 27 ∗ 1. 88*
烘 4. 5% 49. 67 ∗ 4. 06* 42. 00 ∗ 4. 73* 305. 95 ∗ 24. 98* 52. 17 ∗ 0. 49
烘 5. 5% 41. 33 ∗ 4. 91 36. 00 ∗ 5. 03 287. 68 ∗ 34. 18* 55. 40 ∗ 3. 43
烘 7. 5% 42. 00 ∗ 5. 03 35. 67 ∗ 4. 67 265. 00 ∗ 16. 08 57. 18 ∗ 2. 08
* 表示处理与对照间差异显著( P< 0. 05)
* means there is significant difference between sample and control ( P< 0. 05)
2. 2 不同贮藏时间内丹参种子活力及生活力的变化
2. 2. 1 不同贮藏时间内丹参种子发芽率变化:如图
1 所示, 贮藏 2 个月后, 硅 3. 5% ~ 7. 5% 和烘
2. 5% ~ 4. 5%以及烘 7. 5%的超干种子均具有较高
的发芽率,且显著高于对照;但综合贮藏 3、4、5个月
的发芽率曲线来看,继续贮藏后超干种子在发芽率
上的优势下降, 仅硅 5. 5% ~ 7. 5%和烘 7. 5%超干
种子发芽率高于对照, 其他超干种子发芽率均和对
照持平或低于对照,这说明常温密封贮藏丹参种子
的最适含水量为 5. 5% ~ 7. 5%。
2. 2. 2 不同贮藏时间内丹参种子发芽势变化:如图
2所示, 贮藏 2 个月后, 除硅 2. 5%、烘 1. 5%、烘
4. 5%外, 其他超干种子的发芽势都显著高于对照;
但经过 3、4、5个月的贮藏后, 超干种子的发芽势下
降较快,仅硅 7. 5%的发芽势仍高于对照, 这说明常
温密封贮藏丹参种子的最适含水量为硅 7. 5%。
图 1 不同贮藏时间不同含水量种子发芽率变化
Fig. 1 Germination rate of S miltiorrhiza seeds with
dif ferent moisture contents af ter storage for vari
ous months at room temperature
图 2 不同贮藏时间不同含水量种子发芽势变化
Fig. 2 Germination tendency of S miltiorrhiza seeds
with different moisture contents after storage
for various months at room temperature
2. 2. 3 不同贮藏时间内丹参种子活力指数变化:如
图 3所示,在前 3个月的贮藏过程中,多数超干种子
活力指数高于或显著高于对照; 但经过 4 个月的贮
藏后,超干种子的活力指数下降较对照要快, 5个月
后,超干种子在活力指数上的优势变得不明显, 仅硅
7. 5%显著高于对照,这说明硅 7. 5%更有利于延长
种子贮藏时间。
图 3 不同贮藏时间不同含水量种子活力指数变化
Fig. 3 Vigor index of S miltiorrhiza seeds with different
moisture contents after storage for various months
at room temperature
2. 2. 4 不同贮藏时间内丹参种子相对电导率变化:
如图 4所示,整体来说,超干种子与对照相对电导率
∀827∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
的差异不显著, 因此可以得出适当的超干处理不会
引起严重的膜损伤;硅 7. 5%超干种子的相对电导
率要低于其他处理,更好地保持了膜结构和功能的
完整性。
2. 3 不同干燥方法对丹参种子活力及生活力的影
响:如图 1~ 3所示,整体来说两种超干方法所得的超
干丹参种子在发芽率、发芽势、活力指数上的差异不
明显,但随着贮藏时间的延长,硅 4. 5% ~ 7. 5%优于
烘4. 5%~ 7. 5% ,而烘 1. 5% ~ 3. 5%优于硅 2. 5%~
3.5% ;但硅 4. 5%~ 7. 5%的发芽率、发芽势、活力指
数高于低烘 1. 5%~ 3. 5%,这说明硅胶干燥种子具有
更强的耐贮藏性,硅胶干燥法更安全。
由图 4可知, 硅胶干燥种子相对电导率要低于
烘箱干燥种子, 更好地保持了膜结构和功能的完整
性,这说明硅胶干燥方法比烘箱干燥方法更安全。
图 4 不同贮藏时间不同含水量种子相对电导率变化
Fig. 4 Relative electrical conductivity of S miltiorrhiza
seeds with different moisture contents after storage
for various months at room temperature
2. 4 不同含水量丹参种子 MDA 及可溶性糖量变
化:由图 5可以看出,在对照~ 烘 3. 5%区域, 可溶性
糖和MDA有着明显的正比关系,即可溶性糖量高,
MDA 量也高; 在烘 4. 5% ~ 7. 5%区域,可溶性糖和
MDA 则存在反比关系; 因为 MDA可反映种子老化
程度,由此可推测种子耐贮藏性与可溶性糖量有关。
图 5 贮藏 5个月后不同含水量种子MDA量和
可溶性糖量的变化
Fig. 5 Soluble sugar and MDA content of S miltiorrhiza
seeds with dif ferent moisture contents af ter storage
of f ive months at room temperature
3 讨论
已有研究证实贮藏温度和含水量之间存在一定
程度上的互补关系, 通过降低种子含水量有可能达
到与低温贮藏同样或更好的贮藏效果 [ 5]。本实验研
究了超干丹参种子在常温下活力与生活力的变化,
得出硅 7. 5%的超干种子在人工老化和自然老化条
件下,其发芽率、发芽势、活力指数等指标较其他含
水量的种子均保持明显的优势, 可见超干处理对丹
参种子活力及生活力有明显影响, 丹参种子可以通
过超干贮藏的方法来保存种质资源。
世界联合国粮农组织( FAO )和国际植物遗传
资源委员会( IBPGR)制定的长期保存种子种质的理
想条件是 5%~ 7%的含水量和- 18~ - 25 ! 的贮
藏温度。本实验结果表明,贮藏丹参种子的最佳含
水量为 7. 5%左右, 基本符合国际 5% ~ 7%标准,略
高于标准也是因植物多样性所致。关于最佳贮藏温
度是否为国际标准的- 18~ - 25 ! , 还有待于进一
步考证。
人工老化实验的结果预测出超干贮藏丹参种子
的最适含水量为硅 5. 5% ~ 7. 5%或烘 4. 5% ,而超
干种子在自然条件下贮藏 2~ 5月后的实验结果表
明,随着贮藏时间的推移,超干种子的耐藏性优势逐
渐下降,仅硅 7. 5%保持着相对明显的优势, 由此可
知:自然老化结果与人工老化结果并不完全一致,采
用人工老化法预测超干种子贮藏潜力的方法并不可
靠,只能用作参考。
本实验还得出硅胶干燥种子在活力、生活力、膜
完整性等方面要优于烘箱干燥种子, 这说明采用硅
胶脱水比用烘箱更温和、更安全,所得的超干种子其
耐藏性也更高,这一结论与胡伟民等( 2002)对玉米
的超干处理结果一致。
关于影响丹参种子耐贮藏性的原因, 本实验着
重在丹参种子组分上进行了分析研究。由图 5可以
看出, M DA 量与可溶性糖量之间存在明显的对应
关系,而 MDA 量是反映种子老化程度的重要指标,
由此可得出种子的耐藏性与可溶性糖量有关。研究
表明,脱水过程中能产生大量的双糖,双糖能与膜磷
脂的极性头部之间形成氢键,氢键使每个磷脂分子
之间保持一定的空间距离,从而使得膜的液晶态得
以保持。据此可以推断, 可溶性糖的消耗尤其是双
糖的消耗正是用于保持膜结构和功能的稳定性, 因
此,低含水量的种子消耗了更多的可溶性糖,保持了
较高的活力, MDA 量低; 反之, 可溶性糖量高的种
子如烘 1. 5%、烘 4. 5%等超干种子活力低, MDA
∀828∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
量也高。
李绍军等[ 11]关于丹参种子组分系统分析得出丹
参种子粗脂肪量为 16. 28%,蛋白质总量为14. 46%
(其中疏水蛋白约占了 82. 97%) , 可溶性总糖量为
5. 3%。由此结论可知,丹参种子含油量较高,因此容
易引起脂质过氧化,这是丹参种子不耐贮藏的一个重
要原因:其次,疏水蛋白和粗脂肪量高,而亲水的糖量
低,因此可以得出采用合适的干燥方法可以将丹参种
子含水量降到较低水平,适当降低种子含水量可以减
少种子膜脂质过氧化, 从而提高丹参种子的耐藏性,
这一结论在本实验中也得到了证实。此外,还可以看
出丹参种子本身的可溶性糖量并不高,仅仅依靠可溶
性糖的作用来维持膜系统显然是不够的。还有研究
也表明两性物质在脱水过程中从水相进入脂相的行
为有利于种子细胞忍耐水分丧失,是种子耐脱水性的
主要因子之一。因此两性物质的研究是今后探索种
子耐藏机制的一个重要方向。
由于时间限制,本实验结果只适用于丹参种子
短期贮藏,关于丹参种子长期超干贮藏的最适含水
量有待于进一步研究。
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蒺藜全草中甾体皂苷和总黄酮醇苷量的研究
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(西安天健医药科学研究所,陕西 西安 710075)
摘 要:目的 研究蒺藜全草中甾体皂苷和总黄酮醇苷的量。方法 以蒺藜新苷为对照, 采用紫外分光光度法测
定甾体皂苷的量;以槲皮素、山柰酚、异鼠李素为对照,采用高效液相法测定总黄酮醇苷的量。结果 不同产地和
采收期蒺藜全草中甾体皂苷和总黄酮醇苷的量有较大差异, 蒺藜全草部位中以叶中量最高, 果实量最低。结论
所建立的分析方法准确可行,可用于蒺藜药材质量控制;以期为蒺藜全草的资源利用及质量控制提供一定的科学
依据。
关键词:蒺藜全草; 甾体皂苷;总黄酮醇苷
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 05082904
蒺藜 T ribulus terr estr i s L 为蒺藜科蒺藜属植
物,其果实为传统中药, 为历版药典收载, 具有平肝
解郁、活血祛风、明目、止痒的功效[ 1]。蒺藜花、苗、
根也有药用记载 [ 2]。现代研究表明, 蒺藜含有皂苷
类、黄酮类、生物碱等多种成分,已开发成多种制剂,
用于医学和保健领域 [ 3]。皂苷类成分具有防治心脑
血管疾病、增强性功能、抵制迟发型变态反应及抗衰
老等药理活性[ 3] ;黄酮类成分有促进混合培养的鼠
视网膜神经细胞存活的作用,并且在心血管系统等
方面也有一定活性 [ 4]。目前对蒺藜的质控方面研究
少有报道[ 5, 6]。笔者参考相关文献资料[ 1~ 7] , 以槲皮
素、山柰酚、异鼠李素为对照,采用高效液相色谱法
测定总黄酮醇苷的量; 并研究用紫外分光光度法,以
蒺藜新苷[ 8] 为对照, 测定蒺藜中总甾体皂苷的量。
∀829∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 20090814
* 通讯作者 李 炜 Email: xinyao21@ 126. com