全 文 :来提高 ApoA1/ ApoB 的值。表明复方贞术调脂胶
囊可以调节 AS 兔模型的脂代谢异常。
中医理论认为 ,AS 属本虚标实、血瘀痰浊之范
畴 ,“肝肾亏虚、痰瘀阻络”是其基本病机 ,治从补益
肝肾、健脾益气、滋阴养血、活血化瘀、祛痰降浊等
法[10 ] 。复方贞术调脂胶囊由女贞子、白术、黄连、三
七、丹参等药味组成 ,方中女贞子滋补肝肾 ,白术益
气健脾 ,与女贞子相配 ,则脾肾双补 ;三七与丹参均
具有活血化瘀之功效 ,配伍使用 ,使瘀浊更易祛除 ;
黄连兼具清热燥湿解毒之功效 ,诸药合用 ,集“调肝
降脂、健脾补肾、祛瘀解毒”功效于一方。现代药理
学研究表明 ,女贞子能降低喂饲胆固醇和猪油家兔
的血清 TC 及 T G ,可预防和消减动脉粥样硬化斑
块 ,减轻斑块厚度 ,减少冠状动脉粥样硬化病变数 ,
降低血管的阻塞程度[11 ] 。白术可使自发性高血压
脑卒中大鼠甘油三酯 ( T G) 明显降低 ,体质量增长
受到抑制 ,脂肪沉着量减少。三七能降低血清总胆
固醇 ,对主动脉壁的总胆固醇和总脂质也有减少作
用 ,致使斑块消退[12 ] 。丹参所含的丹参素能降低血
液中的甘油三酯和总胆固醇的量 ,抑制低密度脂蛋
白的形成[13 ] 。黄连的主要成分为小檗碱 ,研究表
明 ,它能明显地降低血清 T G、TC 及极低密度脂蛋
白2胆固醇 (VLDL2C) 的量[14 ,15 ] 。
本研究通过动物实验对复方贞术调脂胶囊抗
AS 的作用进行了初步探讨 ,结果表明 ,复方贞术调
脂胶囊除了可以调节 AS 家兔模型的血脂水平外 ,
还能够降低主动脉中脂质的量 ,抑制主动脉脂质斑
块形成 ,改善主动脉病变情况 ,提示复方贞术调脂胶
囊具有抗 AS 的作用。今后将从抗炎、抗氧化、影响
内皮功能等方面进一步对复方贞术调脂胶囊抗 AS
的作用机制进行研究 ,为其进一步开发利用提供实
验依据。
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青蒿琥酯对骨髓瘤 RPMI 8226 细胞增殖、凋亡及对 Survivin、
Caspase23、Caspase27 的影响
王素云1 ,2 ,杨晓阳1 ,邓 凯1 ,成志勇1 ,陈 浩1 ,杨静慈1 ,尚银涛1 ,潘 崚1 3 ①
(11 河北医科大学第二医院 ,河北 石家庄 050000 ; 21 河北省人民医院 血液科 ,河北 石家庄 050051)
摘 要 :目的 探讨青蒿琥酯对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI8226 的增殖、凋亡及对凋亡相关基因
survivin 及 caspase23、caspase27 表达的影响。方法 采用 M TT 法检测青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞增殖的抑制作
·587·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
①收稿日期 :2009208211
基金项目 :河北省科技攻关计划项目 (072761130)
作者简介 :王素云 (1974 —) ,女 ,河北人 ,博士 ,副主任医师 ,研究方向为恶性血液病微小残留病变的诊治与信号转导。
Tel : 13831198857 E2mail : suyunwcn @163. com3 通讯作者 潘 崚 E2mail : lingpan20002000 @yahoo. com. cn
用 ,光镜下观察细胞形态学变化 ,流式细胞仪分析细胞凋亡率 ,荧光定量 PCR ( FQ2PCR) 检测 survivin 和 caspase2
3、caspase27 mRNA 表达水平变化 ,Western blotting 检验 Survivin 蛋白表达变化 ,应用 Caspase23/ 7 试剂盒检测
Caspase23、Caspase27 蛋白活性。结果 青蒿琥酯质量浓度从 215μg/ mL 增加至 50μg/ mL 时 ,青蒿琥酯体外对
RPMI8226 细胞的抑制率由 33155 % 增加到 74171 %。细胞凋亡率呈剂量依赖性增加 ,50μg/ mL 青蒿琥酯诱导
RPMI8226 细胞最大凋亡率达 (6811 ±519) %。不同质量浓度青蒿琥酯干预 48 h 后 Survivin mRNA 及蛋白表达
水平明显降低 ,Caspase23、Caspase27 mRNA 及蛋白活性明显升高 ( P < 0101) 。结论 青蒿琥酯对 RPMI8226 细
胞有生长抑制和诱导凋亡作用 ,其机制可能与增强 Caspase23、Caspase27 活性 ,抑制抗凋亡分子 survivin 表达有关。
关键词 :青蒿琥酯 ; 多发性骨髓瘤 ; 细胞增殖 ; 细胞凋亡 ; Survivin ; Caspase
中图分类号 :R286191 文献标识码 :A 文章编号 :025322670 (2010) 0520785205
青蒿琥酯 (artesunate) 是青蒿素的一种衍生
物 ,是我国首创的高效低毒新型抗疟药 ,具有抗疟、
抗血吸虫等功能。近年来许多学者发现青蒿琥酯具
有抗肿瘤作用[1 ] 。李世辉等[ 2 ]发现青蒿琥酯对小鼠
骨髓瘤细胞株有增殖抑制、促凋亡作用 ,可使 SP2/ 0
细胞周期阻滞于 G0 / G1 期。本实验进一步体外验
证青蒿琥酯对人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI8226
增殖、凋亡的影响 ,并对青蒿琥酯的抗肿瘤作用进行
分子机制探讨 ,为青蒿琥酯治疗多发性骨髓瘤的临
床应用提供理论依据。
1 材料与方法
111 材料 :人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI8226 为
本实验室长期保存细胞系 ,用含 10 % 胎牛血清 (杭
州四季青生物工程材料有限公司) RPMI1640 培养
基 ,在 37 ℃、5 % CO2 、饱和湿度环境孵育。青蒿琥
酯购于上海复星医药有限公司 ,规格为 60 mg/ 支 ,
批号 071114 ,溶于 1 mL 二甲基亚砜 (DMSO) 中 ,
配成 100μg/ mL 的母液 ,超滤除菌 ,以 RPMI1640
稀释青蒿琥酯质量浓度至 5、25、50、100μg/ mL 的
工作液。逆转录反应体系购自美国 Promega 公司 ;
SYBR Green Real Master Mix 购自北京天根生化
科技有限公司 ;Survivin 单克隆抗体购自美国 Santa
Cruz 公司 , HRP 标记的山羊抗鼠二抗购自北京鼎
国生物技术有限公司 ;Caspase23/ 7 活性检测试剂盒
购自美国 Promega 公司。
112 M T T 法测定细胞增殖 :取对数生长期的 RP2
MI8226 细胞 ,调整密度为 5 ×104 / mL ,接种于 96
孔培养板中 ,每孔 200μL 。青蒿琥酯的终质量浓度
为 0、215、1215、25、50μg/ mL 。设 2 个复孔 ,实验
重复 6 次。细胞在 37 ℃、5 % CO2下培养 48 h 后加
10μL M T T (0. 5 mg/ mL) ,继续培养 4 h 后离心弃
上清 ,每孔加入 200μL DMSO ,振荡数分钟终止反
应 ,应用全自动酶标仪测 490 nm 处的吸光度 ( A )
值。计算增殖抑制率。
抑制率 = (对照组 A 值 - 药物组 A 值) / 对照组 A 值×100 %
113 青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞形态学变化的影
响 :取对数生长期的 RPMI8226 细胞 ,调整密度为
5 ×104 / mL ,接种于 6 孔培养板中 ,每孔 115 mL 。
每孔加入 RPMI1640 培养基 115 mL 或青蒿琥酯工
作液 115 mL ,终质量浓度分别为 0、25、50μg/ mL ,
设两个复孔 ,重复 3 次。处理 48 h 后 ,倒置显微镜
下计数细胞数量及观察细胞形态。
114 Annexin V/ PI 标记染色测定细胞凋亡率 :取
对数生长期的 RPMI8226 细胞 ,调整密度为 1 ×
106 / mL ,接种于 12 孔培养板中 ,每孔各加入细胞悬
液 2 mL ,不同质量浓度的青蒿琥酯工作液各 115
mL ,终质量浓度为 0、25、50μg/ mL ,处理 24 h 后 ,
调整待测细胞浓度为 1 ×106 / mL ,取 1 mL 细胞悬
液 ,400 ×g ,4 ℃离心 10 min ,弃上清 ,加入 1 mL
冷 PBS ,轻轻震荡使细胞悬浮 ,400 ×g ,4 ℃离心 10
min ,弃上清 ,重复 2 次 ,将细胞用 200μL 结合缓冲
液重悬 ,加入 10μL Annexin V2FITC 和 5μL PI ,
轻轻混匀 ,避光室温反应 15 min ,加入 300μL 结合
缓冲液 ,立即用流式细胞仪进行检测。
115 实时荧光定量 PCR :收集未用药组及 25、50
μg/ mL 青蒿琥酯组干预 48 h 后 RPMI8226 细胞 ,
Trizol 提取细胞总 RNA ,电泳鉴定 RNA 并定量 ,
逆转录合成 cDNA。实时荧光定量 PCR 反应 :
SYBR 反应体系共 25 μL 。反应条件为 94 ℃、5
min ,94 ℃、45 s ,60 ℃、1 min ,30 个循环 ,设空白对
照 ,记录循环阈值 (Ct 值) 。根据ΔCt = Ct目的基因 -
Ctβ2actin ,ΔΔCt = 2 - ΔCt计算目的基因与β2actin 相对表
达量。PCR 引物由北京赛百盛生物公司合成 ,检测
基因 序 列 如 下 : survivin 正 向 ; 5′2GACCACCG2
CATCTCTACATTC 23′,反向 :5′2TGCTTTTTATGT2
TCCTCTATGGG 23′; caspase23 正 向 : 5′2TTCA2
GA GGGGATCGTTGTA GAA GTC 23′, 反 向 : 5′2
CAA GCTTGTCGGCATACTGTTTCA G23′;caspase27
正 向 : 5′2TGACCTATCCTGCCCTCA 23′, 反 向 : 5′2
TCTCCTGCCTCACTGTCC23′;β2actin 正向 :5′2CTG2
GCACCACACCTTCTACAAT 23′,反向 : 5′2AATGT2
CACGCACGATTTCCCGC 23′。
·687· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
116 Western blot ting 检测 Survivin 蛋白表达 :收
集未用药组及 25、50μg/ mL 青蒿琥酯组作用 48 h
后 RPMI8226 细胞 ,每组收集 1 ×107 个细胞 ,加入
200μL 预冷的蛋白裂解液 4 ℃裂解 1 h ,冰浴下超
声裂解 15 min。12 000 r/ min、4 ℃离心 20 min ,取
上清 ,用考马斯亮蓝试剂盒测定蛋白浓度 ,分装后
置 - 20 ℃保存。用 BCA 蛋白浓度检测试剂盒测
定各组蛋白浓度 ,取 80μg 样品蛋白加入等体积上
样缓冲液 ,经 SDS2PA GE 凝胶电泳后 ,用水浴式电
转仪转至硝酸纤维素膜上。经 5 % BSA 37 ℃封闭
1 h ,分别加入 1 ∶500 稀释的小鼠抗人单克隆抗体 ,
4 ℃培育过夜。TBS 漂洗 5 min ×3 次 ,加入山羊
抗小鼠 HRP 标记二抗 ,37 ℃孵育 1 h , TBS 漂洗 5
min ×3 次。化学发光检测后分析结果。对蛋白条
带灰度进行相对定量分析 ,并以β2actin 条带作为参
照。取目的蛋白条带与相应的β2actin 相对灰度比
值进行半定量分析。
117 Caspase23/ 7 蛋白活性检测 :应用 Caspase23/ 7
活性检测试剂盒检测 Caspase23/ 7 蛋白活性。将
RPMI8226 细胞以 1 ×105 / mL 接种于 96 孔板上 ,
每孔 100μL ,设 3 个复孔 ,并设对照组。加入青蒿
琥酯工作液 ,使青蒿琥酯终质量浓度为 0、25、50
μg/ mL 。在 37 ℃、5 % CO2体积分数的条件下培养
24 h 后 ,每孔加入混合后的 Caspase23/ 7 试剂 100
μL ,再孵育 3 h 后 ,取出 96 孔板 ,检测酶标仪测波长
405 nm 处的吸光度值 ,空白孔作对照 ,计算处理组吸
光度值与对照组吸光度值的比值 ,确定活化程度。
118 统计学方法 :数据以 x ±s 表示 ,两样本均数
比较应用 t 检验 ,多样本均数比较应用单因素方差
分析 ,率的比较采用χ2检验。
2 结果
211 青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞的增殖抑制作
用 :不同质量浓度青蒿琥酯作用 48 h 后 ,体外对
RPMI8226 细胞增殖均有一定的抑制作用 ,质量浓
度从 215μg/ mL 增加至 50μg/ mL 时 ,青蒿琥酯体
外对 RPMI8226 细胞的抑制率由 33155 % 增加到
74171 % ,呈现剂量依赖性。经 Logit 方法计算青蒿
琥酯的 IC50为 36147μg/ mL (表 1) 。
表 1 青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞增殖的抑制作用
( x ±s , n = 12)
Table 1 Inhibition of artesunate on proliferation
of RPMI8226 cells ( x ±s , n = 12)
青蒿琥酯/ (μg ·mL - 1) A 值 抑制率/ %
0 (对照) 11193 ±01 350 0
21 5 01793 ±01 426 3 3 33155
121 5 01772 ±01 485 3 3 35131
25 01662 ±01 389 3 3 44151
50 01302 ±01 194 3 3 74171
与对照组比较 : 3 3 P < 01 01
3 3 P < 0101 vs cont rol group
212 青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞形态学的影响 :
终质量浓度为 0、25、50 μg/ mL 的青蒿琥酯处理
RPMI8226 细胞 48 h 后 ,在普通光学显微镜下观察
可见 RPMI8226 细胞数明显减少、细胞体积缩小、
细胞碎裂等改变 ;而对照组细胞数量多 ,细胞核较
大 ,胞浆丰富 (见图 1) 。
图 1 青蒿琥酯干预 48 h RPMI8226 细胞形态学改变
Fig. 1 Morphologic change of RPMI8226 cells after treatment with artesunate for 48 h
213 青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞凋亡的影响 :An2
nexin V/ PI 双染检测法检测细胞凋亡率结果显示 ,
终质量浓度为 25、50μg/ mL 的青蒿琥酯各作用 24
h 后的细胞与对照组细胞相比 ,细胞凋亡率呈剂量
依赖性增加 (见图 2) 。50 μg/ mL 青蒿琥酯诱导
RPMI8226 细胞凋亡的作用最明显 ,最大凋亡率达
(6811 ±519) % ,明显高于对照组 (见表 2) 。 214 青 蒿 琥 酯 对 RPMI8226 细 胞 survivin、caspase23、caspase27 mRNA 的影响 :不同质量浓度青蒿琥酯作用 48 h 后 ,survivin、caspase23、caspase27 mRNA 表达水平见表 3。青蒿琥酯减弱 survivinmRNA 的表达 ,而增强 caspase23、caspase27 mRNA的表达。215 青蒿琥酯 4 8 h对 RPMI 8 2 2 6 细胞 Survivin
·787·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
图 2 青蒿琥酯干预 24 h RPMI8226 细胞早期凋亡
Fig. 2 Early apoptosis rate of RPMI8226 cells after treatment with artesunate for 24 h
表 2 青蒿琥酯干预 24 h RPMI8226 细胞凋亡率 ( x±s , n = 6)
Table 2 Apoptosis rate of RPMI8226 cells treated
with artesunate for 24 h ( x ±s , n = 6)
青蒿琥酯/ (μg ·mL - 1 ) 早期凋亡率/ % 中晚期凋亡率/ % 总凋亡率/ %
0 (对照) 415 ±211 413 ±117 818 ±217
25 1916 ±618 3 # 1719 ±413 3 # 3715 ±611 3 3
50 3917 ±611 3 3 # 2814 ±318 3 3 # # 6811 ±519 3 3 # #
与对照组比较 : 3 3 P < 0101
与青蒿琥酯 25μg/ mL 组比较 : # # P < 01 01
3 3 P < 0101 vs cont rol group
# # P < 0101 vs 25μg/ mL artesunate group
表 3 青蒿琥酯干预 48 h 后 RPMI8226 细胞 survivin、
caspase23、caspase27 mRNA 表达水平 ( x ±s , n = 6)
Table 3 Expression levels of survivin , caspase23 ,
and caspase27 mRNA in RPMI8226 cells
after treatment with artesunate for 48 h
( x ±s , n = 6)
青蒿琥酯/ (μg·mL - 1 ) survivin caspase23 caspase27
0 (对照) 01811 ±01310 01310 ±01201 01556 ±01137
25 01439 ±01176 3 01423 ±01245 01717 ±01188 3
50 01264 ±01122 3 # 01891 ±01345 3 3 # # 01921 ±01221 3 3 # #
与对照组比较 : 3 P < 0105 3 3 P < 0101
与青蒿琥酯 25μg ·mL - 1组比较 : # P < 0105 # # P < 0101
3 P < 01 05 3 3 P < 01 01 vs cont rol group
# P < 01 05 # # P < 01 01 vs 25μg ·mL - 1 artesunate group
蛋白表达水平的影响 :不同质量浓度青蒿琥酯干预
48 h 后 , Survivin 蛋白表达明显降低 ( P < 0105、
0101) 。见图 3。
216 Caspase23/ 7 酶活性检测结果 :对照组的 RP2
MI8226 细胞 Caspase23/ 7 的吸光度比值为 01336 ±
01041 ,25μg/ mL 青蒿琥酯处理组为 01451 ±01042 ,
两组相比差异显著 ( P < 0101) ,50μg/ mL 青蒿琥酯
处理组为 01612 ±01051 ( P < 0101) 。表明青蒿琥酯
能增强 Caspase23/ 7 的活性 ,从而促进细胞凋亡 ,并
呈剂量依赖性增加 Caspase 活性。
3 讨论
图 3 青蒿琥酯干预 48 h 后 RPMI8226 细胞
Survivin 蛋白表达
Fig. 3 Expression of Survivin protein in RPMI8226 cells
after treatment with artesunate for 48 h
多发性骨髓瘤 ( multiple myeloma) 是浆细胞
呈恶性克隆增殖性肿瘤 ,约占所有恶性疾病的 1 % ,
血液系统恶性疾病的 10 % ,临床上出现贫血、骨髓
破坏及肾功能损害等。我国大多数患者由于各种原
因不能接受治疗效果较好的自体造血干细胞移植 ,
也负担不起硼替佐米的高额费用。青蒿琥酯是一类
高效、低毒的抗疟药物 ,已广泛应用于临床。近年许
多研究发现青蒿琥酯具有抗肿瘤活性。因此 ,在本
研究中 , 观察青蒿琥酯对人骨髓瘤细胞株 RP2
MI8226 的增殖、凋亡的影响 ,探讨青蒿琥酯的抗骨
髓瘤机制 ,以为多发性骨髓瘤患者提供治疗选择。
青蒿琥酯抑制增殖、促进凋亡的作用在多种肿
瘤中已得到证实[3~6 ] 。本研究应用 M T T 法检测细
胞增殖情况 ,当青蒿琥酯质量浓度从 215μg/ mL 增
加至 50μg/ mL 时 ,对 RPMI8226 细胞的抑制率由
33155 % 增加到 74171 %。通过普通光镜观察其形
态 ,可见青蒿琥酯处理 RPMI8226 细胞 48 h 后 ,
RPMI8226 细胞数明显减少、细胞体积缩小、细胞碎
裂等改变 ;而对照组细胞数量多 ,细胞核较大 ,胞浆
丰富。为了进一步证实青蒿琥酯对 RPMI8226 细
胞的增殖抑制与细胞凋亡的关系 ,采用 Annexin V/
PI 双染方法对青蒿琥酯作用后的 RPMI8226 细胞
进行凋亡的定量检测 ,结果表明细胞凋亡率呈剂量
·887· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
依赖性增加 ,50μg/ mL 青蒿琥酯诱导 RPMI8226
细胞凋亡的作用最明显 ,最大凋亡率达 (6811 ±
519) % ,明显高于对照组。以上结果均表明青蒿琥
酯对 RPMI8226 细胞的增殖有显著的抑制作用 ,并
呈现剂量依赖性。
细胞内外的许多信号刺激可以诱导细胞发生凋
亡。研究表明 , 细胞凋亡后期的共同途径是
Caspase 的激活。Caspase 酶是凋亡过程的主要调
控蛋白 ,Caspase23 是 Fas/ Apo21 介导的凋亡信号
转导途径的关键效应分子 ,又是多种凋亡途径共同
作用的因子 ,其表达水平的高低决定着细胞凋亡程
度[7 ] 。Survivin 也称生存素 ,是迄今为止发现的最
强的凋亡抑制因子。Survivin 抗凋亡作用已被研究
证实 ,它不仅通过阻断线粒体细胞色素 C 的释放 ,
与下游凋亡效应因子 Caspase23 和 Caspase27 结合
而对其活性产生直接抑制效应 ,而且还通过与纺锤
体的结合 ,间接抑制 Caspase 对纺锤体的水解作用 ,
有利于保护有丝分裂细胞的完整性 ,从而抑制细胞
凋亡[ 8 ,9 ] 。
本实验发现 ,25、50μg/ mL 青蒿琥酯作用 RP2
MI8226 细胞 24 h 后 , survivin mRNA 表达受抑和
caspase23 mRNA 表达上调 ,Caspase23/ 7 酶的活性
增高 ,Survivin 蛋白表达降低 ,并呈现剂量依赖性 ,
提示青蒿琥酯诱导 RPMI8226 细胞凋亡与上调
Caspase23/ 7 和下调 Survivin 基因表达有关 ,可能
通过抑制 RPMI8226 细胞 Survivin 基因表达 ,解除
原先 Survivin 对 Caspase3/ 7 活性的抑制 ,进而激
活细胞凋亡程序 ,诱导癌细胞凋亡。总之 ,青蒿琥酯
在一定剂量范围内呈剂量依赖性抑制 RPMI8226
细胞增殖 ,诱导其凋亡 ,提示青蒿琥酯在多发性骨髓
瘤中具有潜在治疗价值 ,但其详细分子机制尚待深
入研究。
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复方鹿茸健骨胶囊抗骨质疏松作用
李凤才1 ,谢海泉1 ,邸 琳2 ,刘新宇2
①
(11 白求恩医科大学制药厂 ,吉林 长春 130012 ; 21 吉林省中医中药研究院 ,吉林 长春 130021)
摘 要 :目的 观察复方鹿茸健骨胶囊的抗骨质疏松作用。方法 采用去卵巢或 ig 给予维甲酸造成大鼠骨质疏
松模型 ,ig 给予复方鹿茸健骨胶囊治疗 ,观察其对骨质疏松大鼠骨质量、骨长、骨密度、骨强度、骨钙、血钙、骨形态
学改变的影响。结果 复方鹿茸健骨胶囊 312、116、018 g/ kg ig 给药可明显增加去卵巢或维甲酸所致骨质疏松大
鼠骨质量、骨长、骨密度、骨强度 ;对去卵巢大鼠血钙及骨钙水平有明显增加作用 ;肱骨组织病理学结果显示 ,给予
复方鹿茸健骨胶囊大鼠骨小梁增粗 ,骨皮质厚度增加 ,软骨细胞增生活跃 ,骺板变宽 ,成骨细胞明显活跃 ,破骨细胞
减少。结论 复方鹿茸健骨胶囊有明显的抗骨质疏松作用。
关键词 :鹿茸健骨胶囊 ; 骨质疏松 ; 去卵巢 ; 维甲酸
中图分类号 :R28515 文献标识码 :A 文章编号 :025322670 (2010) 0520789203
·987·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
①收稿日期 :2009211227
作者简介 :李凤才 (1965 —) ,男 ,吉林长春人 ,高级工程师 ,主要从事新药研究与开发工作。
Tel : (0431) 85888045 E2mail : xiehaiquan2003 @163. com