全 文 ：·化学成分·
一个新颖的人参皂苷元衍生物及其抗 HL260 肿瘤细胞活性
李辉峰1 ,郭洪祝1 ,2
①
,果德安1
(11 北京大学药学院 生物技术室 ,北京 　100083 ; 21 北京市药品检验所 ,北京 　100035)
摘 　要 :目的 　研究人参皂苷元衍生物及其抗 HL260 肿瘤细胞活性。方法 　利用 Smith 降解处理人参总皂苷 ,采
用硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱技术分离、纯化人参皂苷元等产物。通过波谱数据分析产物结构。采用 M TT
法测试产物抗 HL260 肿瘤细胞活性。结果 　分离鉴定了原人参二醇 ( PD) 、原人参三醇 ( PT)和 24 ,252烯23β,6α2二
羟基212 ,202(1′2羟基)双氧乙基2达玛烷 (1) ,化合物 1 为新化合物命名为 1′2羟基双氧乙基原人参三醇。结论 　化
合物 1 为新型人参皂苷元衍生物 ,其抑制 HL260 细胞增殖的作用强于 PD 和 PT。
关键词 :1′2羟基双氧乙基原人参三醇 ;人参皂苷元衍生物 ; HL260 细胞
中图分类号 :R28411 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0006 - 03
A novel derivative of ginsenoside sapogenin and its activity against HL260 cells
L I Hui2feng1 , GUO Hong2zhu1 ,2 , GUO De2an1
(11 Department of Biotechnology , School of Pharmaceutical Sciences , Peking University , Beijing 100083 , China ;
21 Beijing Institute for Drug Control , Beijing 100035 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he derivatives of ginsenoside sapogenins and their activities
against HL260 cells1 Methods 　The total ginsenoside ext ract was t reated by Smit h degradation1 All p rod2
uct s were isolated by silica gel chromatograp hy and p urified by preparative HPL C1 On t he basis of 1D and
2D NMR data , st ruct ures were elucidated1 The activity against HL260 cells was measured by M T T
method1 Results 　Three compounds were isolated and identified as 20 ( S)2protopanaxadiol ( PD) , 20 ( S)2
protopanaxat riol ( P T) , and 24 , 252en23β, 6α2dihydroxy212 , 202( 1′2hydroxy) et hanedioxy2dammarane
(1) . Conclusion 　Compound 1 , named 1′2hydroxy et hanedioxy P T , is a novel derivate of sapogenin wit h
higher inhibitory activity against HL260 cells t han PD and P T1
Key words : 1′2hydroxy et hanedioxy protopanaxat riol ; ginsenoside sapogenin derivative ; HL260 cells
　　人参 Panax gi nseng C1 A1 Mey1 是常用名贵
中药 ,现代应用和研究证实人参具有抗衰老、抗肿
瘤、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗血栓和抗动脉
硬化等作用。近年来 ,针对人参中主要活性成分人
参皂苷的研究发现 ,无论是体外细胞实验 ,还是流行
病学调查 ,结果均表明此类化合物具有明确的抗肿
瘤活性[1 ] ,体外试验发现人参皂苷苷元的抗肿瘤作
用优于人参皂苷[2 ] 。为了更好地研究人参皂苷类化
合物的抗肿瘤作用机制及其构效关系 ,对人参皂苷
元2原人参二醇、原人参三醇及其衍生物进行了抗肿
瘤作用研究 ,对原人参三醇进行了系统的生物转化
研究 ,发现了大量结构新颖的转化产物 ,并初步阐明
了抗肿瘤构效关系[3 ,4 ] 。近来 ,在对人参总皂苷采
用 Smith 水解[5 ] 过程中 ,发现了一个结构新颖的人
参皂苷元衍生物 ,其抗 HL260 肿瘤细胞活性优于原
人参二醇、原人参三醇 ,该产物产量仅次于原人参二
醇和原人参三醇。通过一维、二维核磁共振波谱解
析 ,结合高分辨质谱分析 ,确定此化合物结构为 24 ,
252烯23β,6α2二羟基212 , 202( 1′2羟基) 双氧乙基2达
玛烷。通过查阅文献未见报道 ,为新化合物 ,命名为
1′2羟基双氧乙基原人参三醇。结构式见图 1。
1 　仪器与材料
旋光用 Perkin2Elmer2243B 测定 ;熔点用 X4 型
显微熔点仪测定 (温度计未校正) ; 红外光谱用
·6· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009206212
　　基金项目 :教育部博士点基金课题 (20040001136)
　　作者简介 :李辉峰 (1983 —) ,女 ,河南人 ,北京大学药学院 2006 级生药学研究生 ,研究方向为天然产物生物转化。
　　3 通讯作者　郭洪祝　Tel : (010) 83226434 　E2mail :guohz @bjmu1 edu1cn
图 1 　化合物 1 的化学结构
Fig11 　Structure of compound 1
Nicolet Avatar 红外光谱仪测定 ;质谱用 ABI Qstar
型质谱仪测定 ,核磁共振用 Varian INO VA 500 型
核磁共振仪测定 ,高效液相色谱仪 (分析型) 为 Agi2
lent 1100 ,配有二极管阵列检测器、柱温箱及四元梯
度泵。分析用色谱柱为 YMC2PAC K ,ODS2A 填料 ,
5μm ,150 mm ×416 mm ,串以 YMC 预柱 ODS2A
填料 ,5μm ,30 mm ×10 mm。制备所用色谱柱为
YMC2PAC K ,填料为 ODS2A , 5 μm , 250 mm ×10
mm。所有样品分析或制备前以 0145μm 微孔滤膜
滤过。
柱色谱用硅胶 (200～300 目) 、预制薄层硅胶板
GF254购自青岛海洋化工集团公司 ;NaO H 为北京化
工厂生产 ,NaB H4 为北京东方龙顺化学合成技术开
发中心生产 ,NaIO4 为北京化学试剂公司生产 ,均为
分析纯 ;所用化学试剂均为北京化工厂生产的分析
纯 试 剂 ; 液 相 分 析 用 甲 醇、乙 腈 为 色 谱 纯
(J1 T1BA KER ,U SA) ;超纯水由本校毒理学教研室
生产。人参总皂苷由湖南九汇现代中药公司提供 ,
人参总皂苷的质量分数大于 80 %。
2 　提取与分离
将 50 g 人参总皂苷溶于4 000 mL 水中 ,加入
217 g NaIO4 ,置于室温下搅拌 5 h ,滤除液体 ,收集
沉淀 ,分别用稀 H2 SO4 和水将沉淀洗至中性。将沉
淀溶解在 750 mL 75 %乙醇溶液中 , 加入 17 g
NaB H4 ,在室温下放置 17 h。然后加入 750 mL 的
水将反应液稀释一倍 ,并用 1 mol/ L H2 SO4 将反应
液的 p H 值调至 118～210。继续在室温下放置 24
h。反应液以醋酸乙酯等体积萃取 3 次 ,萃取液用
水洗至中性 ,减压蒸干 ,得到粗产物约。
将产物进行硅胶柱色谱分离 ,以氯仿2醋酸乙
酯2无水乙醇 (5 ∶1 ∶3～1 ∶1 ∶3) 系统梯度洗脱 ,得
到衍生物粗品 ,再用制备 HPL C 纯化 ,洗脱剂为
60 %的 CH3 CN2H2 O 系统 ,得到化合物 (1) 014 g (产
率为 018 %) , 原人参三醇 ( P T ) 211 g (产率为
412 %)和原人参二醇 ( PD) 110 g (产率为 2 %) 。
3 　结构鉴定
化合物 1 : 白色无定形粉末 , [α]25D + 4010 ( c
012 , MeO H ) , mp 234～ 236 ℃。IR νKBrmax ( cm - 1 ) :
3 370 ,2 964 ,2 930 ,1 677 ,1 384。HR2ESI2MS 高分
辨质谱在5411386 0显示 [ M + Na ] + 峰 ,提示其分子
式为 C32 H54 O5 。通过与已知的原人参三醇的
13 C2NMR数据进行比对发现 (表 1) ,除 12 ,17 ,20 位
数据差异大以及多出的 1′,2′位外 ,其余位置数据与
原人参三醇 ( P T)基本一致 ,由此推断该化合物为原
人参三醇的衍生物 ,同时也提示变化可能发生在
12、17、20 这些位点上。与原人参三醇相比 ,该化合
物13 C2NMR和 DEP T 谱中 ,多了一个δ9613 的连氧
叔碳和δ6516 的连氧次甲基。联合分析 HSQC 谱 ,
1 H21 H COSY谱中观察到这两个碳上质子之间存在
相关关系 ,提示他们自成一偶合体系 ,存在含氧乙基
结构片段 ,该结构片段可能以含氧取代形式与骨架
表 1 　化合物 1 的核磁共振波谱数据
Table 1 　NMR Data for compound 1
碳位 13 C2NMR 1 H2NMR P T
1 3917 11 04 ,11 63 391 3
2 2811 11 88 m 281 0
3 7815 31 54 m 781 3
4 4015 401 3
5 6119 11 23 611 7
6 6717 41 40 671 6
7 4715 11 90 471 4
8 4111 411 1
9 5013 11 60 501 0
10 3915 391 3
11 2913 11 98 311 9
12 7817 31 52 711 0
13 4817 21 08 (t ,101 8) 481 2
14 5018 511 6
15 3311 11 07 311 3
16 2512 11 52 261 8
17 4817 21 52 541 7
18 1712 11 05 s 171 5
19 1717 01 97 s 171 4
20 7818 721 9
21 2617 11 31 s 271 0
22 3711 11 62 ,11 84 351 8
23 2219 21 38 ,21 56 221 9
24 1261 2 51 24 m 1261 2
25 1311 1 1301 7
26 2519 11 66 s 251 8
27 1718 11 58 s 171 6
28 3119 21 13 s 311 9
29 1616 11 43 s 161 4
30 1615 01 92 s 171 0
　1′ 6516 41 02 (dd)
　2′ 9613 51 26 (t ,51 2)
　　1 H2NMR (500 M Hz)和13 C2NMR (125 M Hz)在 pyridine2d5 中
　　1 H2NMR (500 MHz) and 13C2NMR (125 MHz) in pyridine2d5
·7·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
连接。碳谱中 12、20 位置碳的位移较原人参三醇相
比发生了明显的变化 ,向低场位移δ6～7 ,提示连接
位置可能在 12、20 位。HMBC 谱中观察到该片段
端基质子δ5125 与骨架上的 12、20 位碳之间存在
远程相关信号 ,证实了含氧取代发生在这两个位置
上。综上分析 ,推测该化合物结构为 24 ,252烯23β,
6α2二羟基212 ,202(1′2羟基) 双氧乙基2达玛烷 ,由于
该化合物不易生成晶体 ,2′位的绝对构型暂未确定。
经文献检索 ,为一新化合物。
　　原人参三醇 ( P T) 和原人参二醇 ( PD) ,均为白
色无定形粉末。核磁共振波谱数据与文献一致[6 ] 。
　　采用 M T T 法[ 7 ] ,对 HL260 白血病细胞的抑制
作用测试结果见表2 ,该化合物的抑制作用明显强
表 2 　抗 HL260 细胞抑制试验结果
Table 2 　Inhibition against HL260 cells
化合物 IC50/ (μg ·mL - 1)
1 181 66
PD 331 02
P T 371 45
多西他塞 01 25
于原人参二醇和原人参三醇。
参考文献 :
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紫芝中的一个新三萜
刘　超 ,陈若芸
①
(中国医学科学院北京协和医学院 药物研究所 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室 ,北京 　100050)
摘 　要 :目的 　研究紫芝 Ganoderma sinense 子实体的化学成分。方法 　通过反复硅胶、凝胶柱色谱进行分离纯
化 ,利用多种波谱技术鉴定化合物的结构。结果 　分离鉴定了 4 个化合物 ,分别为紫芝酸 ( sinensoic acid , 1) 、cere2
broside D (2) 、poke2weed cerebroside (3) 、泥湖鞘鞍醇 (hemisceramide , 4) 。结论 　化合物 1 为新化合物 ,命名为紫
芝酸 ( sinensoic acid) ,其余化合物均为首次从灵芝属真菌中分离得到。
关键词 :紫芝 ;三萜 ; sinensoic acid ;脑苷
中图分类号 :R28411 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0008 - 04
A ne w triterpene from fungal fruiting bodies of Ga noderma sinense
L IU Chao , CH EN Ruo2yun
( Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine , Minist ry of Education ,
Institute of Materia Medica , Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College ,
Beijing 100050 , China)
Abstract : Objective 　To st udy t he chemical constit uent s f rom t he f ungal f ruiting bodies of Ganoderm a
si nense1 Methods 　Individual constit uent s , isolated and repeatedly p urified on silica gel and Sep hadex L H2
20 column chromatograp hy , were identified by p hysicochemical constant s and st ruct urally elucidated by
spect ral met hods1 Results 　Four compounds were isolated and identified as : sinensoic acid (1) , cerebro2
·8· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009207215
　　基金项目 :科技部科技基础性工作专项 (2007Fy130100)
　　作者简介 :刘　超 (1979 —) ,男 ,助理研究员 ,硕士 ,从事天然产物研究方面的工作。
　　3 通讯作者　陈若芸　Tel : (010) 83161622 　E2mail : rych @imm1ac1cn