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HPLC法测定白花蛇舌草注射液中去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷
姚鑫宁 ,纪 　菁 ,陈 　静 ,郭兴杰 3 ①
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 　110016)
摘　要 :目的 　建立白花蛇舌草注射液中去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷的测定方法。方法 　采用 HPLC 法测
定 ,色谱柱为 Diamonsil C18柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相为甲醇2乙腈2011 %冰醋酸 (3 ∶2 ∶95) ,检测波长
230 nm ,体积流量 110 mL/ min。结果 　去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷的浓度分别在 7150～9010μg/ mL ( r =
01999 7)和 6100～7210μg/ mL ( r = 01999 9) 线性关系良好 ;平均加样回收率分别为 9811 %、9910 % ,RSD 分别为
112 %、111 %。结论 　本法快速、简便、准确 , 可用于同时测定白花蛇舌草注射液中上述两种环烯醚萜类成分。
关键词 :白花蛇舌草注射液 ;去乙酰基车叶草苷酸 ;鸡屎藤次苷 ; HPLC
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0420580203
　　白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草 Hedyotis
di f f usa Willd1 的干燥全草 ,研究表明该植物主要
含有黄酮类、三萜类、蒽醌类、环烯醚苷萜类、多糖类
等成分 , 具有抗肝炎、抗肿瘤、抗病毒、抗炎抑菌、调
血脂及降血糖等多种药理活性[1 ] 。白花蛇舌草注射
液是以白花蛇舌草制成的注射剂 ,具有清热解毒、利
湿消肿的作用。临床用于湿热蕴毒所致的呼吸道感
染、扁桃体炎、肺炎、胆囊炎、阑尾炎、痈疖脓肿及手
术后感染 ,亦可用于癌症辅助治疗。本实验室从白
花蛇舌草中分离得到了两种环烯醚萜苷类成分 ,通
过 IR、1 H2NMR 和13 C2NMR 解析 ,以及与文献报道
的图谱比较 ,确证此两种成分结构分别为去乙酰基
车叶草苷酸和鸡屎藤次苷[2 ] ,结构式见图 1。已有
文献报道测定白花蛇舌草药材或注射液中对香豆
酸[3 ] 、反式 62O2对香豆酰鸡屎藤苷甲酯[ 4 ] 、齐墩果
酸[5 ]和熊果酸[6 ]等 ,但未见有关于去乙酰基车叶草
苷酸和鸡屎藤次苷的测定方法的文献报道 ,且在研
究中发现去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷在注射
液中的量较高。因此本研究首次建立了同时测定白
花蛇舌草注射液中去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次
苷的方法 ,并应用于市售白花蛇舌草注射液的测定
中 ,为进一步控制白花蛇舌草注射液的质量提供了
依据。
图 1 　去乙酰基车叶草苷酸( A)和鸡屎藤次苷( B)的结构
Fig11 　Structures of deacetyl asperuloside acid ( A)
and scandoside ( B)
1 　仪器与试药
岛津 L C —10A T 型高效液相色谱仪 , SPD —
10A 型紫外可见检测器 ,ANASTAR 色谱工作站 ;
乙腈、甲醇均为色谱纯 ,冰醋酸为分析纯 ,重蒸水 (自
制) ;去乙酰基车叶草苷酸、鸡屎藤次苷对照品均为
本实验室自制 (质量分数均不小于 9910 %) ;白花蛇
舌草注射液 (2 mL/ 支) 来自 3 个不同厂家 (批号为
080312、080510、080203) 及本实验室自制 (批号为
080127) 。
·085· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
①收稿日期 :2009207207　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :教育部“春晖计划”科研合作项目 (Z20052110016)
作者简介 :姚鑫宁 (1984 —) ,女 ,辽宁鞍山人 ,药物分析专业硕士研究生 ,2007 年毕业于沈阳药科大学药学专业 ,主要从事药物分析及中药质
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :色谱柱为 Diamonsil C18 (250 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相为甲醇2乙腈201 1 %冰醋酸
(3 ∶2 ∶95) ;体积流量为 110 mL/ min ;柱温为 25
℃;检测波长为 230 nm ;进样量为 20μL ;在上述色
谱条件下 ,取对照品溶液和供试品溶液分别进样 ,记
录色谱图。理论塔板数按去乙酰基车叶草苷酸计算
不低于 8 000 ,按鸡屎藤次苷计算不低于 10 000。两
成分的色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于 115 ,
拖尾因子均在 0195～1105。色谱图见图 2。
12去乙酰基车叶草苷酸　22鸡屎藤次苷
12deacetyl asperuloside acid 　22scandoside
图 2 　对照品溶液( A)及供试品( B)溶液 HPLC图
Fig12 　HPLC Chromatograms of reference solution ( A) ,
and sample solution ( B)
212 　对照品溶液的制备 :精密称定去乙酰基车叶草
苷酸对照品 7151 mg , 鸡屎藤次苷对照品 6100 mg ,
置 25 mL 量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,即得混合
对照品储备液 (质量浓度分别为 01300 mg/ mL 和
01240 mg/ mL) 。取混合对照品储备液 1 mL 置于
10 mL 量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,即得
(质量浓度分别为 3010μg/ mL 和 2410μg/ mL) 。
213 　供试品溶液的制备 :取白花蛇舌草注射液 (批
号 080312) 015 mL 置于 25 mL 量瓶中 ,加水稀释至
刻度 ,摇匀 ,滤过 ,即得。
214 　线性关系的考察 :精密吸取混合对照品储备液
0125、015、1、115、2、3 mL 置 10 mL 量瓶中 ,加水稀
释至刻度 ,摇匀。分别吸取上述对照品溶液 20μL
注入液相色谱仪中 ,以峰面积 ( A) 对质量浓度 ( C) 进
行线性回归 ,去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷回归
方程及线性范围分别为 : A = 1109 ×104 C - 3193 ×
103 , r = 01999 7 ,7150～9010μg/ mL ; A = 916 ×103
C - 7172 ×103 , r = 01999 9 ,6100～7210μg/ mL 。
215 　精密度试验 :取供试品溶液一份 ,在上述色谱
条件下连续进样 6 次 ,记录去乙酰基车叶草苷酸和
鸡屎藤次苷峰面积 ,其 RSD 分别为 112 %、0188 %。
216 　重现性试验 :取同一批白花蛇舌草注射液 (批
号 080312) 6 份 ,制备供试品溶液 ,按上述色谱条件
进样分析 ,测定去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷
的质量浓度 ,其 RSD 分别为 113 %、115 %。
　稳定性试验 取供试品溶液 室温放置 分别在
0、1、2、4、8、12 h 进样 ,记录去乙酰基车叶草苷酸和
鸡屎藤次苷峰面积 , 计算 RSD , 其 RSD 分别为
112 %、110 % ,表明供试品溶液至少在 12 h 内稳定。
218 　回收率试验 : 精密吸取同一批号 (批号
080312)白花蛇舌草注射液 6 份 ,每份 0125 mL ,分别
精密加入去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷混合对
照品储备液 113 mL (质量浓度分别为 01300 mg/ mL
和 01240 mg/ mL) ,按供试品溶液制备方法操作 ,进
样分析 ,以外标法计算去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎
藤次苷的加样回收率。结果去乙酰基车叶草苷酸和
鸡屎藤次苷的平均回收率及 RSD 分别为 9811 %、
112 % ,9910 %、111 %。
219 　样品测定 :取各厂家白花蛇舌草注射液 ,制备
供试品溶液 ,在上述色谱条件下进样分析 ,按外标法
计算去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷质量浓度 ,
结果见表 1。
表 1 　白花蛇舌草注射液中去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤
次苷的测定结果
Table 1 　Determination of deacetyl asperuloside acid
and scandoside in different batches of Hedyotis
di f f usa injection
批　号
去乙酰基车叶草苷酸/
(mg ·mL - 1)
鸡屎藤次苷/
(mg ·mL - 1)
080312 11 62 11 38
080510 01 85 01 47
080203 11 67 21 20
080127 11 56 01 95
3 　讨论
在研究白花蛇舌草中发现 ,白花蛇舌草药材和
注射液中均含有较高量的环烯醚萜成分去乙酰基车
叶草苷酸和鸡屎藤次苷。研究表明 ,环烯醚萜苷具
有抗氧化、抗炎、免疫调节等生物活性。本实验建立
了 HPL C 法测定注射剂中去乙酰基车叶草苷酸和
鸡屎藤次苷的量 ,为进一步控制白花蛇舌草制剂质
量奠定了基础。
本实验首先考察了甲醇2醋酸水溶液和乙腈2醋
酸水溶液作流动相对分离的影响。结果表明 :使用
二元流动相时 ,被测组分与杂质分离度差 ,且使用甲
醇2水流动相体系柱效明显降低。而采用三相体系 ,
甲醇2乙腈2011 %醋酸水 (3 ∶2 ∶95) 作流动相 ,被测
组分与干扰成分之间能达到完全分离 ,柱效高 ,组分
保留时间合适。
去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷水溶液均在
230 nm 附近有最大吸收 ,且在此波长处干扰组分对
测定无影响 因此本实验选择 为测定波长。
·185·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
实验结果显示 ,不同厂家生产的注射液中去乙
酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷量差异较大 ,说明注
射液质量在一定程度上有较大差异。这可能与白花
蛇舌草药材的来源、产地、采收期及注射液制备工艺
等有关。
参考文献 :
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HPLC法测定麻仁丸中厚朴酚、和厚朴酚、大黄素和大黄酚
刘 　翔 3 ①
(江苏省镇江药品检验所 ,江苏 镇江 　212003)
摘 　要 :目的 　建立同时检测麻仁丸中厚朴酚、和厚朴酚、大黄素及大黄酚的测定方法。方法 　采用 HPLC 法。
C18色谱柱 ;甲醇2011 %磷酸水溶液为流动相 ,进行梯度洗脱 ;体积流量 110 mL/ min ;检测波长 254 nm。结果 　根
据回归方程 ,4 种成分线性范围 :和厚朴酚 61285～62185μg/ mL , R2 = 01999 6 ;厚朴酚 14157～14517μg/ mL , R2 =
01999 6 ;大黄素 21744～27144μg/ mL , R2 = 01999 3 ;大黄酚 61828～68128μg/ mL , R2 = 01999 2 ;平均回收率 :和厚
朴酚 9818 % ,RSD 为 110 %( n = 6) ,厚朴酚 9919 % ,RSD 为 114 %( n = 6) ,大黄素 9819 % ,RSD 为 210 %( n = 6) ,大
黄酚 9814 % ,RSD 为 116 %( n = 6) 。结论 　该方法操作简便、准确 ,重复性好 ,可用于麻仁丸的质量控制。
关键词 :麻仁丸 ;厚朴酚 ;和厚朴酚 ;大黄素 ;大黄酚 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0420582202
　　麻仁丸收载于《中国药典》2005 年版一部 ,由火
麻仁、大黄、苦杏仁、枳实 (炒) 、厚朴 (姜制) 、白芍 (炒)
组成 ,具润肠通便之功效 ,用于肠燥便秘等症。麻仁
丸的测定是检测其中的大黄素和大黄酚 ,本实验参考
相关报道[1～3 ]增加了对其中厚朴药材有效成分厚朴
酚、和厚朴酚的测定 ,并同时检测游离的大黄素和大
黄酚 ,有别于原标准中通过酸水解测定大黄素和大黄
酚总量的方法 ,该方法操作简便、准确 ,重复性好 ,有
利于更好的对麻仁丸进行质量评价和监控。
1 　仪器与试药
Waters2695 液相色谱仪 , Empower 色谱工作
站 (美国沃特斯公司) ,DAD 检测器 ;A G—245 电子
分析天平 (瑞士梅特勒公司) 。
厚朴酚 (批号 1107292200310) 、和厚朴酚 (批号
1107302200609) 、大黄素 (批号 1107562200110) 、大黄
酚 (批号 1107962200615)对照品均购自于中国药品生
物制品检定所 ;甲醇 (分析纯、色谱纯) ;麻仁丸 (批号
080618 ,杭州胡庆余堂药业有限公司 ;批号 071102 ,南
京同仁堂药业有限责任公司 ;批号 070712 ,江苏七 ○
七天然制药有限公司) ,均为小蜜丸。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 : 岛津 C18 色谱柱 ( 150 mm ×610
mm ,5μm) ; 流动相为甲醇 ( A)2011 %磷酸水溶液
(B) ;洗脱程序为 :0～4 min ,A 为 78 % ;4～18 min ,
A 为 78 %～90 % ;18～20 min ,A 为 90 %～78 % ;体
积流量 : 110 mL/ min ;检测波长 : 254 nm ;柱温为
30 ℃;进样量 10μL 。色谱图见图 1。
212 　对照品溶液的制备 :精密称取和厚朴酚、厚朴
酚、大黄素和大黄酚适量 ,分别配成质量浓度为
20195、48157、91145、22176μg/ mL 混合对照品溶液。
213 　供试品溶液的制备 :取供试品 115 g ,精密称
定 ,精密加入甲醇 50 mL ,称定质量 ,加热回流 1 h ,
用甲醇补足质量 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
214 　阴性溶液的制备 :取不加厚朴和大黄的空白样品
按照供试品溶液的制备项下的方法 ,制成溶液即得。
215 　线性关系考察 :取适量对照品溶液 ,分别进样
3、5、10、15、20、30μL ,由峰面积对浓度求得工作曲
线 ,得回归方程。和厚朴酚 : A = 57 109 C - 16 129 ,
·285· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
①收稿日期 :2009207212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :刘　翔 (1970 —) ,男 ,副主任药师 ,硕士 ,从事药品检验及质量标准研究。