全 文 ：甲醇乙腈水( 15 15 70) ; 甲醇0. 5%醋酸溶液
( 25 75) 3 种流动相系统进行试验, 结果表明采用
甲醇0. 5%醋酸溶液( 2575)系统祖师麻甲素色谱
峰保留时间适中,与相邻峰的分离度均达到 2。
3. 2 提取溶剂及提取方式的选择: 选用批号为
200707、070925、071024 3 批祖师麻药材, 采用水、
50%甲醇、甲醇作提取溶剂,分别采用超声提取、加
热回流及冷浸过夜 3 种方法进行提取, 以祖师麻甲
素和祖师麻乙素峰面积比值进行评价。结果表明, 3
种溶剂及提取方法比较, 所测得二者峰面积之和基
本一致,而二者峰面积之差不同。采用甲醇作为提
取溶剂, 3种提取方法二者峰面积比值基本一致; 采
用 50%甲醇作为提取溶剂,加热回流与超声提取 2
者峰面积比值基本一致, 但低于冷浸过夜的比值; 采
用水作为提取溶剂,加热回流、超声提取、冷浸过夜
3种方法所测比值呈现由低到高递增, 200707 及
071024两批药材均未检出祖师麻乙素。
祖师麻甲素是祖师麻乙素的苷元, 当后者去除
葡萄糖后即变为前者。由此推测,在药材中可能存
在一种酶,以水作溶剂提取时, 超声提取与冷浸过
夜,易发生酶解现象,使祖师麻乙素转化为祖师麻甲
素。采用加热回流, 热水抑制了酶解现象发生,采用
甲醇及 50%甲醇作为溶剂, 有机溶剂亦可抑制酶解
现象的发生。鉴于目前中国药品生物制品检定所尚
无祖师麻乙素对照品,因此, 选用 50%甲醇提取, 采
用水解方式将祖师麻乙素全部转化为祖师麻甲素后
测定质量分数, 能够更全面地反映药材中有效成分
的量。
选用 50%甲醇作为提取溶剂,分别采用超声提
取及加热回流两种方式提取,采用 10%盐酸作为水
解溶剂,分别采用不同时间进行正交试验测定, 比较
后采用超声处理方法加热回流水解方式进行。
3. 3 测定结果比较: 3 批黄瑞香平均测定结果为
1. 53% ( 1. 32%~ 1. 80%) ; 20批甘肃瑞香平均测定
结果为 1. 62% ( 0. 45% ~ 2. 90% ) ; 7批凹叶瑞香平
均测定结果为 0. 84%( 0. 14% ~ 1. 83% )。3种原植
物中以黄瑞香资源较少,量也较为平均;甘肃瑞香最
为常见,量较高,但范围跨度较大;凹叶瑞香量较低,
仅有 1批量较高, 最低的仅为 0. 14%。药材不同部
位定量测定表明茎皮中祖师麻甲素的量明显高于根
皮中的量。由以上数据可为祖师麻药材的选用提供
理论依据。
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1098
HPLC测定不同产地莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱
何晓娟1, 2 ,孙长海2 ,于江华2 ,王俊杰2 ,高文远1 *
( 1 天津大学药物科学与技术学院, 天津 300072; 2 天津红日药业股份有限公司研发中心,天津 301700)
摘 要:目的 建立高效液相色谱测定不同产地莲子心药材中 3 种生物碱的方法。方法 采用高效液相色谱法,
Polaris C18A 色谱柱( 250 mm ! 4. 6 mm, 5 m) , 甲醇0. 1% 三乙胺水溶液( 62 38)为流动相, 检测波长为 282
nm, 体积流量为 1. 0 mL / min。结果 3 种生物碱平均回收率为莲心碱 96. 99% , 异莲心碱 104. 26% , 甲基莲心碱
100. 71% ; RSD值分别为 0. 47%、0. 21%、0. 16%。结论 该方法简便、快速、准确、重现性好,可用于莲子心中 3 种
生物碱的测定。
∀834∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 20090825 作者简介:何晓娟( 1976 # ) ,陕西人,在读硕士,药物化学专业。
* 通讯作者 高文远 Email: pharmgao@ tju . edu. cn
关键词:高效液相色谱法; 莲心碱;异莲心碱; 甲基莲心碱
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 05083403
莲子是睡莲科植物莲 N elumbo nuci f er a
Gaertn的成熟果实,主要产于湖南、湖北、浙江和江
苏等地,莲子心是其成熟种子中的干燥幼叶及胚根,
又名莲心、薏、苦薏、莲薏。莲子心在我国有着悠久
的药用历史, ∃本草纲目%中记载, 其入心、肺、肾三
经,具有&清心火,固精血∋的功效,现代药效学实验
证实莲子心中生物碱类成分具有抗心律失常作
用[ 1, 2] , 对心肌缺血、高血压等心血管疾病有治疗作
用,还具有抗血小板聚集、抗脂质氧化、降血脂[ 3]、逆
转白血病细胞多药耐药[ 4]等作用。莲子心中含有生
物碱类、挥发油类、甾醇类、黄酮类以及棕榈油、叶绿
素和一些微量元素等, 主要成分为双苄基异喹啉类
生物碱, 其提取方法有醇提取法、酸水有机溶剂提
取法、醇酸水有机溶剂提取法、碱水有机溶剂提取
法等。对于生物碱检测方法有薄层扫描法、紫外分
光光度法、高效液相色谱法,目前应用较多的是高效
液相色谱法[ 5, 6]。近年来, 对莲子心不同成分药效
作用的研究不断取得进展, 其临床应用前景十分广
阔,是一味具有开发前景的心血管药物 [ 7]。本实验
采用高效液相色谱法检测不同产地莲子心中 3种生
物碱的量。
1 仪器与材料
1. 1 仪器: Ag ilent 1200常规分析型, Polaris C18A
( 150 mm ! 4. 6 mm, 5 m)色谱柱, 万能粉碎机(天
津泰斯特) ,超声波(昆山 KQ5200B) ,十万分之一天
平(赛多利斯 BP211D)。
1. 2 材料:高氯酸莲心碱盐对照品(购自中国药品
生物制品检定所)、异莲心碱对照品和甲基莲心碱对
照品(天津市药品检验所中药室寿国香主任惠赠, 质
量分数) ; 莲子心药材来源于湘潭、襄樊、南京、甄城、
乐至、蕲春、白洋淀、洪湖、杭州、建德, 以上 10 个不
同产地莲子心药材经天津市药品检验所中药室寿国
香主任药师鉴定为莲子心药材;甲醇为色谱纯;硅藻
土为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱 条 件[ 8] : 色谱 柱 为 Polaris C18A
( 250 mm ! 4. 6 mm, 5 m) ; 流动相为甲醇0. 1%
三乙胺水溶液( 62 38) ; 检测波长为 282 nm; 体积
流量为 1. 0 mL/ min; 进样量 10 L; 柱温为室温。
色谱图见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备:分别精密称取高氯酸莲心
碱盐、异莲心碱和甲基莲心碱对照品各适量制成每
毫升甲醇中约含 25、25和 70 g 的混合溶液, 即得。
1莲心碱 2异莲心碱 3甲基莲心碱
1liensinin e 2 isoliensinin e 3neferin e
图 1 对照品( A)和样品( B)HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatograms of reference
substance ( A) and sample ( B)
2. 3 供试品溶液的制备:分别取不同产地莲子心药
材,碾成细粉,取约 0. 25 g 精密称定, 各加硅藻土约
0. 1 g ,置 25 mL 量瓶中, 加 80%乙醇约 20 mL, 超
声 30 m in,放至室温,定容至 25 mL,摇匀,滤过,滤
液再用微孔滤膜( 0. 45 m)滤过,取续滤液,即得。
2. 4 线性关系考察: 以不同浓度混合对照品溶液依
次进样,进样量为 10 L,以质量分数为横坐标,峰面
积为纵坐标分别进行线性回归, 得回归方程:莲心碱
Y= 969. 585 358 X- 2. 731 506 8, R
2
= 0. 999 69;异
莲心碱 Y = 805.555 05 X - 0. 342 465 8, R2 =
0. 999 94; 甲 基 莲 心 碱 Y = 783. 165 382 X -
1. 452 054, R2= 0. 999 98。结果表明 3 种生物碱分别
在 3. 868~ 34. 842 g/ mL; 6. 016~ 54. 241 g/ mL,
15. 584~ 141. 236 g/ mL 呈现良好的线性关系。
2. 5 稳定性试验: 取对照品溶液, 分别于 0、4、8、
12、16 h各进样 10 L,测定对照品中各生物碱的峰
面积,计算 RSD值。结果表明莲心碱异连心碱和甲
基莲心碱 RSD 值分别为 0. 65%、0. 71%、0. 37%,
说明在 16 h内对照品溶液稳定性良好。
2. 6 精密度试验:精密称取甄城莲子心药材粉末 6
份,按照& 2. 3供试品溶液制备∋方法制备样品溶液,
分别进样 10 L, 测定各样品生物碱的量, 计算 RSD
值。结果表明莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱 RSD
值分别为 0. 73%、0. 58%、0. 91%。
2. 7 重现性试验:精密称取甄城莲子心药材粉末 1
份,按照& 2. 3供试品溶液制备∋方法制备样品溶液,
连续进样 5 次, 每次 10 L, 测定各样品中生物碱
量,计算 RSD值。结果表明莲心碱、异莲心碱和甲
∀835∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
基莲心碱 RSD值分别为 0. 84%、0. 49%、0. 57%。
2. 8 加样回收率试验: 精密称取 6份甄城莲子心样
品各约 0. 125 g, 分别精密加入对照品溶液各 12. 5
mL,再按照& 2. 3供试品溶液的制备∋方法制备,进样
10 L,按上述色谱条件测定 3次,计算各生物碱的平
均回收率及 RSD值。结果 3种生物碱平均回收率为
莲心碱 96. 99%、异莲心碱 104. 26%和甲基莲心碱
100. 71%; RSD值分别为 0. 47%、0. 21%、0. 16%。
2. 9 样品测定:取不同产地莲子心药材, 按照& 2. 3
供试品溶液的制备∋方法制备样品溶液, 分别进样
10 L, 结果见表 1。
表 1 不同产地莲子心中莲心碱、异莲心碱
和甲基莲心碱的测定
Table 1 Detemination of liensinine, isoliensinine, and nefer
ine in Plumula Nelumbinis from different habitats
产地 莲心碱/ % 异莲心碱/ % 甲基莲心碱/ %
湘潭 0. 32 0. 34 0. 95
襄樊 0. 25 0. 50 0. 89
南京 1. 25 # #
甄城 0. 32 0. 36 0. 97
乐至 0. 29 0. 46 0. 82
蕲春 0. 42 0. 41 0. 64
白洋淀 0. 33 0. 36 0. 73
洪湖 1. 31 # #
杭州 0. 91 0. 36 0. 19
建德 0. 94 0. 23 0. 23
3 讨论
3. 1 不同产地莲子心中 3种生物碱量差异很大, 洪
湖和南京产莲子心中异莲心碱、甲基莲心碱几乎检
测不出, 湘潭和甄城 3种莲心碱量都比较高。应该
根据项目需要选择合适的莲子心产地。
3. 2 根据文献资料建立了简单、准确、可操作性强
的莲子心中 3种生物碱量检测方法。与∃中国药典%
2005年版(一部)等所用流动相比较简单, 毒性也小
一些, 3种生物碱分离度很好。
3. 3 混合对照品溶液中异莲心碱、甲基莲心碱结构
不稳定,在日光条件下长时间放置成分会破坏, 无法
标定样品的量,笔者在实验过程中将混合对照品溶
液避光,冷藏 1 个月时间各成分量变化不大。建议
实验者将混合对照品溶液避光, 冷藏保存。
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江西道地药材山蜡梅叶质量标准的研究
李诒光1, 2 ,卢建中2 , 陈 杰3* , 舒任庚3 ,卢瑞芝3 ,祝丰溪3
( 1 北京中医药大学, 北京 100029; 2 江中药业股份有限公司,江西 南昌 330096; 3 江西中医学院,江西 南昌 330008)
摘 要:目的 研究建立江西道地药材山蜡梅叶的质量标准。方法 采用薄层色谱法建立芦丁和蜡梅碱的鉴别
项,采用反相高效液相色谱法建立槲皮素、山柰酚、蜡梅碱的定量测定项。结果 首次建立了山蜡梅叶中芦丁和蜡
梅碱的薄层鉴别方法,并首次采用高效液相色谱法建立了槲皮素、山柰酚、蜡梅碱的测定方法,平均回收率分别为
96. 55%、98. 72%、99. 02% 。结论 建立的方法操作简便,专属性好, 结果准确。
关键词:山蜡梅叶; 槲皮素;山柰酚; 蜡梅碱;高效液相色谱法
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 05083603
∀836∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 20090919 基金项目:国家& 十一五∋科技支撑计划项目( 2006BAI06A0101)作者简介:李诒光( 1974 # ) ,男,江西赣州人,北京中医药大学在读博士,江中药业股份有限公司研究员,江西中医学院兼职硕士生导师,副主任中药师,长期从事中药质量与开发工作,已发表论文 10篇。 T el: ( 0791) 8115036 Emai l: lyg@ jzjt . com
* 通讯作者 陈 杰 Email: cjcsh@ tom. com