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专论

幼朴与传统厚朴的等效性研究
曾建国1, 2, 3 , 常新亮2 ,贺晓华2 ,鄢  伟2 ,蔡光先1 ,梁鑫淼4
( 1
湖南中医药大学,湖南 长沙  410007; 2
湖南省中药提取工程研究中心, 湖南 长沙  410331; 3
湖南农业大学,
湖南 长沙  410128; 4
中国科学院大连化学物理研究所,辽宁 大连  116023)
摘 要:目的  针对目前传统厚朴资源短缺的现状, 研究以 2~ 5年生厚朴的根皮(以下简称幼朴 )快速高效产业化
获取厚朴总酚的方法,并比较幼朴与传统厚朴的化学与生物等效性。方法  研究不同生长年限( 1~ 20 年)凹叶厚
朴中厚朴总酚在不同生长部位中的代谢积累变化规律, 并采用密集种植提高 2~ 5 年生幼朴产量的方式, 与按传统
种植方式采用 10、15、20 年生的厚朴植物获取厚朴总酚进行分析对比, 以证实幼朴能快速高效产业化获取厚朴总
酚;利用 H PLC、GCM S 色谱法对幼朴与市售根朴、筒朴进行化学表征分析,同时进行急性毒性、药效试验和临床观
察,以确定其等效性。结果  2~ 5年生幼朴可以替代传统厚朴作为获取厚朴总酚的原料; 幼朴与传统厚朴具有化
学等效性;急性毒性实验结果表明, 幼朴与传统厚朴均没有显示毒性, 在使用上是安全的; 药效试验结果表明幼朴
入药的厚朴三物汤与传统厚朴入药的厚朴三物汤对正常小鼠和便秘小鼠的肠道功能作用没有显著差异; 临床观察
结果显示幼朴入药的厚朴三物汤与传统厚朴入药的厚朴三物汤在治疗老年功能性便秘的疗效上作用一致。结论
幼朴与厚朴在厚朴总酚方面具有化学、生物等效性,幼朴可以代替传统厚朴使用。
关键词:幼朴; 厚朴;代谢框架; 等效性
中图分类号: R285
5    文献标识码: A    文章编号: 02532670( 2010) 05067308
  厚朴是我国传统药材, 为木兰科植物厚朴
Magnol ia of f icinal is Rehd
et Wils
或凹叶厚朴
Magnol ia of f i cinali s Rehd
et Wils
var
bi loba
Rehd
et Wils
的干燥干皮、根皮和枝皮[ 1] 。自古
以来其被用于治疗消化系统疾患及用作镇静和缓解
骨骼肌紧张药[ 2] ,主要生物活性成分是厚朴酚、和厚
朴酚[ 3] ,!中国药典∀中明确规定厚朴中厚朴总酚的
量不得低于 2
0% , 方可入药。目前厚朴的传统栽
培与传统用药途径通常是厚朴或凹叶厚朴种植 15
年以上,砍伐后,剥取茎皮、枝皮入药,茎皮称为干朴
或筒朴,枝皮称枝朴,也有少部分以后不再种植厚朴
的,直接挖去厚朴根皮入药为根朴[ 4]。这种传统的
采收与用药途径存在着种植周期长、平均收益低、资
源破坏大的弊端。因此, 找到一种种植周期短、平均
收益高、实现厚朴资源高效利用的方法尤显重要。
植物中具有生物活性的次生代谢产物的积累是
决定中药品质和高效利用的关键因素。植物代谢组
学是系统、全面地研究植物中所有小分子代谢产物的
一门前沿技术,很多学者对天然产物进行代谢轮廓分
析,即对少数所预设的一些代谢产物的定量分析,如
某一类结构、性质相关的化合物、某一代谢途径的所
有中间产物或多条途径的标志性组分[ 5]。但由于药
用植物功能成分的复杂性和目前技术水平的限制,在
制定植物原料质量标准时只能对某一种或某一类成
分进行定量分析。基于植物代谢组学技术的基础上,
笔者尝试性地提出#代谢框架∃研究的概念,即以药用
植物中某一种或某一类功能有效成分作为指标,研究
不同生长年限、不同生长期、不同生长环境下目标成
分(组)在药用植物不同生长部位(根、茎、叶、花、果实
等)的代谢积累变化规律,描绘出目标成分(组)在特
征条件下药用植物不同生长部位代谢积累的量化表
征,以指导资源利用与资源改良。
本研究在#代谢框架∃思路指导下,以厚朴酚、和
厚朴酚为指标成分, 研究产地为湖南桂东的不同生
长年限( 1~ 20年)的凹叶厚朴中厚朴总酚在不同生
长部位中的代谢积累变化规律, 证实 2~ 5年生厚朴
的根皮(以下简称幼朴)能替代传统厚朴作为获取厚
朴总酚的原料。同时通过密集种植提高 2~ 5年生
幼朴产量的方式, 与按传统种植方式采用 10、15、20
年生的厚朴植物获取厚朴总酚进行对比, 考察年单
产厚朴总酚的收益, 以期实现幼朴能快速高效产业
化获取厚朴总酚, 达到厚朴资源高效利用的目的。
为验证幼朴是否能替代传统厚朴入药, 本研究
利用 GCMS 法对 3 年生幼朴与市售筒朴、根朴的

673
中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 20091223                     作者简介:曾建国( 1965 % ) ,男,湖南常德人,教授,湖南中医药大学博士,湖南农业大学教授,研究方向为中药资源及其成分(包括植物提取物)应用开发。  T el: ( 0731) 84686489  Email: ginkgo@ w orldway
net
挥发性组分进行化学表征,并通过 H PLC法对主要
生物活性成分厚朴酚、和厚朴酚定量分析,阐述 3年
生幼朴与传统厚朴具有化学等效性;通过急性经口
毒性实验,验证幼朴与传统厚朴在使用上的安全性;
分析比较幼朴入药的厚朴三物汤(下文简称为幼朴
三物汤)与传统厚朴入药的厚朴三物汤(下文简称为
厚朴三物汤)对正常小鼠和便秘型小鼠肠道功能的
影响,验证幼朴与传统厚朴的药效等效性;观察幼朴
三物汤与厚朴三物汤对老年功能性热结型便秘的治
疗作用,验证二者的临床疗效的等效性。
1  材料
1
1  药物:幼朴( 3年生)采自湖南桂东, 由湖南中
医药大学药学院药用植物学周日宝教授鉴定为木兰
科植物凹叶厚朴 Magnolia of f i cinal i s Rehd
et
Wils
var
biloba Rehd
et Wils
的根皮; 市售筒
朴、根朴购买自湖南省长沙市高桥药材批发市场, 产
地为湖南安化, 由周日宝教授鉴定为!中国药典∀所
收载的厚朴品种。厚朴三物汤颗粒、幼朴三物汤颗
粒委托湖南中医药研究院中药研究所生产, 批号:
20090905。和厚朴酚(批号: 110729200310)、厚朴
酚(批号: 110730200307) , 购自中国药品生物制品
检定所。
营养性半固体药糊的配制:取羧甲基纤维素纳
10 g 溶于 250 mL 蒸馏水中,分别加入奶粉 16 g、糖
8 g、淀粉 8 g、活性炭末 2 g , 搅拌均匀, 配制成 300
mL 的黑色营养性半固体糊状物。取传统厚朴入药
厚朴三物汤颗粒5 g 溶于 100 mL 半固体糊, 配成质
量浓度为 0
05 g / mL 营养性半固体糊; 照此方法,
分别配制质量浓度为 0
10、0
05、0
025 g / mL 的幼
朴入药厚朴三物汤颗粒; 将配好的药液冰箱冷藏, 用
时恢复至室温。
1
2  动物:清洁级昆明种小鼠 170只, 雌雄各半, 体
质量( 20 & 2) g ,由湖南斯莱克景达实验动物公司提
供, 实验动物生产许可证号为 SCXK (湘) 2009
0004,实验动物合格证号为 0047587, 全价颗粒饲料
由上海西普尔必凯试验动物有限公司提供。
1
3  仪器及试剂
1
3
1  GCMS色谱联用仪:美国 Ag ilent T echno
logies公司 HP6890GC/ 5973MS 气相色谱质谱联
用仪; HP5 M S 石 英 毛 细 管 柱 ( 30 mm ∋
0
25 mm ∋ 0
25
m)。
1
3
2  HPLC 色谱法分析测试仪器: Waters 1525
高效液相色谱仪 (美国,包括 Waters 2998 PAD 检
测器, Waters 2707自动进样品) ; 色谱柱为 Waters
XBridge C18柱( 250 mm ∋ 4
6 mm, 5
m)。
1
3
3  动物实验仪器及试剂: E60 冰冻切片机 (英
国 T hermo 公司) , BX51光学显微镜及 ImagePr o
Express图像分析系统 ( 日本 Olympus 公司 ) ,
DY89 % 1型电动匀浆机 (宁波新芝科器研究所) ,
GIS % 1000数码凝胶图像分析系统(上海天能科技
公司) , GE % 100 凝胶电泳仪, T C % 48/ T / H ( a)基
因扩增仪(杭州大和热磁电子有限公司)。小鼠抗大
鼠 5羟色胺( 5HT )受体 1、多巴胺( DA)受体 1单
克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司) , SABC
免疫组化试剂盒、AEC 显色剂(北京中杉金桥生物
技术有限公司) , 焦碳酸二乙酯 ( Solarbio ) , T rizo l
( Invit rog en) , T aKaRa RNA PCR Kit 试剂盒(宝生
物工程有限公司)。色谱用甲醇、乙腈为德国 Mer ck
公司生产。
2  方法
2
1  厚朴酚、和厚朴酚 HPLC 定量测定方法:参照
!中国药典∀ 2005年版(一部)厚朴的测定方法。
2
1
1  色谱条件:以甲醇水( 75 ( 25)为流动相,体
积流量为 0
8 mL/ m in;检测波长为 294 nm;柱温为
25 ) ;理论塔板数以厚朴酚峰计算应不低于3 800。
2
1
2  对照品溶液的制备: 精密称取厚朴酚、和厚
朴酚对照品适量, 加甲醇分别制成含厚朴酚 40
g/
mL、和厚朴酚 24
g/ mL 的溶液,即得。
2
1
3  供试品溶液的制备:取样品粉末(过 3号筛)
1 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入 100 mL
甲醇,密塞, 超声提取 1 h, 滤过, 精密量取续滤液 5
mL,置 25 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
2
1
4 检测方法:分别精密吸取上述两种对照品溶液
和供试品溶液各 5
L,注入液相色谱仪,测定。
2
2  GCMS测定方法
2
2
1  GCMS 条件: HP5MS 石 英毛细 管柱
( 30 mm ∋ 0
25 mm∋ 0
25
m) ; 柱温 60~ 240 ) ,程
序升温 5 ) / min;柱流量为 1
0 mL/ min;进样口温度
250 ) ;柱前压 100 kPa;进样量 0
20
L(其中根朴样
品的进样量为 0
1
L) ;分流比 10 (1;载气为高纯氦
气。电离方式 EI; 电子能量 70 eV; 传输线温度 250
) ;离子源温度 230 ) ;四极杆温度 150 ) ;质量范围
35~ 450。采用Wiley7n
1标准谱库检索定性。
2
2
2  供试品制备方法; 取样品粉末(过 3号筛)
50
0 g,精密称定,置圆底烧瓶中, 加入醋酸乙酯,水
浴回流提取两次, 每次 1 h, 醋酸乙酯用量每次为
500 mL, 合并两次提取液浓缩至干, 加 50 mL 甲醇
使溶解,即得。其中根朴供试品精密吸取 10 mL 定

674
中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
容至 50 mL, 即得。
2
3  急性毒性试验
2
3
1  动物分组与给药:根据预实验结果, 采用测
定最大给药量法观察样品的急性毒性。小鼠(雌雄
各半)随机分为 4 组, 每组 20只, 另设正常对照组
20只。给药方法: 首日 ig 两次, 两次给药间隔 8 h
以上,给药体积 40 mL/ kg,正常对照组予生理盐水。
2
3
2  样品制备: 将传统厚朴与幼朴分别粉碎, 精
密称取 200 g 药材,加入 8倍量蒸馏水或 90%乙醇
提取 2次,每次2 h, 滤过提取液浓缩成浸膏 20 g(提
取率均为 10%) , 制成传统厚朴水提取物、厚朴醇提
取物和幼朴水提取物、幼朴醇提取物。
2
3
3  给药剂量: 传统厚朴水、醇提取物配成质量
浓度为 0
5 g/ mL 的混悬液 (相当于给药量 200 g/
kg ,以原药材计) , 幼朴水、醇提取物配成质量浓度
为 0
5 g/ mL 的混悬液(相当于给药量 200 g / kg, 以
原药材计)。
2
3
4  观察期限及指标:观察 14 d,观察体质量、饮
食、外观、行为、分泌物、排泄物、中毒及死亡情况, 动
物死亡或观察结束进行解剖, 发现器官病变时进行
病理检察。
2
4  对正常小鼠肠道功能的影响
2
4
1  动物分组与给药: 50 只小鼠, 雌雄各半, 将
小鼠随机分为 5组,对照组,厚朴三物汤颗粒 1
5 g/
kg 组,幼朴三物汤颗粒高、中、低剂量( 3、1
5、0
75
g/ kg)组, 每组 10只。对照组 ig 蒸馏水; 幼朴三物
汤颗粒高、中、低剂量组给予相当于成人每天用药等
效剂量 2、1、0
5倍的药糊; 厚朴三物汤颗粒组给予
相当于成人每天用药等效剂量 1倍的药糊; 均按 30
mL/ ( kg
d) ig 给药。
2
4
2  观察指标: ( 1)小鼠小肠推进实验[ 7] : ig 给药
后15 min,每组脱颈椎处死 5只小鼠,打开腹腔分离
肠系膜,剪取上端至幽门,下端至回盲部的肠管, 轻轻
将小肠拉成直线测量肠管长度作为小肠总长度。从
幽门至炭末前沿的距离作为炭末在肠内推进距离,计
算炭末推进百分率,并以 t检验统计处理数据。( 2)
小鼠排便时间和数量实验(炭末法) [ 8] : 小鼠 ig 给药
后,每组取 5只小鼠分置于铺有滤纸的单笼中观察。
记录小鼠开始排黑粪时间, 粪便性状和数目,观察 5
h。以 t检验统计处理数据。
2
5  对便秘型小鼠肠道功能的影响
2
5
1  动物分组与给药: 40 只小鼠, 雌雄各半, 将
小鼠随机分为 4组, 每组 10只,对照组、模型组、幼
朴三物汤( 1
5 g/ kg)组、厚朴三物汤( 1
5 g/ kg)组。
造模后开始 ig 给药, 对照组和模型组 ig 蒸馏水;药
物组均按 30 mL/ ( kg
d) (临床等效剂量) ig 给药;
给药 5 d。
2
5
2  模型制备:采用冰水灌胃法建立小鼠便秘型
肠易激综合征( CIBS)模型。除对照组外,其余各组
小鼠每日均以冰生理盐水( 0~ 4 ) ) ig 2次,均按 30
mL/ ( kg
d) ,连续 14 d, 制备小鼠 CIBS模型。
2
5
3  观察指标:同 2
4
2。
2
5
4  小鼠回肠组织 5HT 受体 1、DA 受体 1免
疫组化检测: 采用 SABC法, AEC显色,阳性细胞呈
紫红色。随机观察 5个放大 400倍的视野, 用计算
机图像处理软件、Olympus Micro Image 4
0图像处
理系统自动计数免疫阳性细胞数。
2
5
5  小鼠结肠组织 5HT 受体 1、DA 受体 1
mRNA 表达的检测:以 Tr izol法提取总 RNA, 组织
与 T rizo l 分别取 50 mg、1 mL。提取完成后用
1
5%琼脂糖凝胶电泳来鉴定 RNA 的完整性,如果
18S和 25S 完整性较好, 则可以进入下一步骤。逆
转录反应体系 10
L, 包括细胞总 RNA 1
L, 10 ∋
RT 缓冲液 1
L, RN ase free dH2O 3
75
L, dNTP
混合物 1
L, RNase抑制剂 0
25
L, AMV 逆转录
酶 0
5
L, Oligo dTAdaptor 引物 0
5
L。反应条
件为: 30 ) 10 m in, 45 ) 30 min, 99 ) 5 min, 5 )
5 min, 1个循环。PCR引物根据 www
ncbi
nlm

nih
gov 基因库基因序列, 用软件 Primer 5自行设
计 5HT、DA 和 act in引物, 由上海捷瑞生物工程
公司合成。PCR 反应体系为 50
L,包括逆转录产
物 10
L, 10 pmoL/
L 的上、下游引物各 0
5
L,
5 ∋ PCR 缓冲液 10
L, ddH2O 28
75
L, T aq HS
0
25
L。引物序列和各自反应条件见表 1。取 3

L 扩增产物在 1
5%琼脂糖凝胶上电泳, 采用凝胶
图像分析仪进行吸光度扫描,应用 GIS1000数码凝
胶图像分析系统观察条带灰度强弱, 结果以目标条
带与 act ion PCR产物电泳条带吸光度比值表示。
2
6  治疗老年功能性热结型便秘的临床观察
2
6
1  总体设计:本研究参阅罗马∗标准意见和相
关文献,采用分层区组随机、双盲观察、多中心临床
试验设计方案,幼朴三物汤和厚朴三物汤平行对照
临床研究实验设计方法,试验采用优效性设计。
2
6
2  病例来源:全部病例来源于湖南省耒阳市中
医院和张家界市中医院 60~ 75 岁的患者。幼朴三
物汤组 30例,厚朴三物汤组 30例。
2
6
3  病例选择:诊断依据:参考#功能性胃肠病的
罗马∗诊断标准∃。

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中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
表 1  PCR反应引物序列及反应条件
Table 1 Primer sequence and reaction condition of PCR
基因 引物序列     PCR反应条件 产物长度/ bp
act in

正向引物CTT CCT TCT TGGGTAT GG
反向引物 TCAGT AACAGT CCGCCT A
94 ) 、45 s , 53 ) 、45 s,
72 ) 、50 s, 35循环
353

DA 受体 1

正向引物 TCCAACT CACT GACT CCA
反向引物 ATGCACCT ACCTT T ACAATC
94 ) 、45 s , 51 ) 、45 s,
72 ) 、50 s, 35循环
252

5TH 受体 1

正向引物GAGT TGT TGGGT GCCATAA T
反向引物 TT GAGT GAACAGGAAGGGT C
94 ) 、45 s , 53 ) 、45 s,
72 ) 、50 s, 35循环
234

2
6
4  功能性便秘诊断标准: ( 1)必须包括以下 2
项或 2项以上: 25%的排便费力; 至少 25% 的排便
为干球状或硬便; 至少 25% 的排便不尽感; 至少
25%的排便有肛门直肠梗阻或堵塞感;至少 25%的
排便需要手法帮助(如用手指帮助排便、盆底支持) ;
排便每周< 3 次。( 2)在不使用泻药的情况下很少
出现稀便。( 3)没有足够的证据诊断肠易激综合征
( IBS)。( 4)诊断前症状出现至少 6 个月, 且近 3 个
月症状明显。
2
6
5  热秘证的诊断: ( 1)符合功能性便秘标准。
( 2)以前使用非药物疗法至少 2 个月 IBS 症状未得
到改善者。( 3)过去 2年内在便秘症状出现后进行
过肠道内镜/放射线检查,排除了癌、炎症性肠病或
其他器质性疾患。( 4)对有大便潜血阳性的患者, 应
在过去 1年内肠镜或气钡双重造影检查结果正常
者。( 5)年龄在 60~ 75岁。
2
6
6  观察指标:包括一般指标和有效性指标,其中
有效性指标是指客观指标、综合评价指标、安全性观
察。客观指标主要是排便次数和第一次排便时间,记
录每天服药期间大便次数和服药后第 1次排便时间。
综合评价指标包括: 消化健康状态量表( DHSI) ,评
价消化不良症状与整体情况,对基线时及治疗 4周后
症状进行评估。+ 中医证候相关指标,参照!中药新
药治疗辨证临床研究指导原则∀相关内容制定。安全
性观察是 一般体格检查项目(血压、心率、体温、呼
吸) ; + 血、尿、便常规化验; , 心电图检查, 肝功能
( ALT)、肾功能( BUN、Cr)检查。
2
6
7  治疗方案: 采用随机对照研究方法, 厚朴三
物汤组予厚朴三物汤颗粒, 幼朴三物汤组予幼朴三
物汤颗粒,冲服,每次1包, 每日两次, 7 d为一疗程。
两组均用药 1个疗程,疗后随访 2周。
3  结果与讨论
3
1  厚朴中厚朴总酚的代谢框架研究: 以厚朴酚、
和厚朴酚为指标成分, 研究产地为湖南桂东的不同
生长年限( 1~ 20年)的凹叶厚朴中厚朴总酚在不同
生长部位中的代谢积累变化规律, 研究结果表明(表
2) :厚朴在种植 2~ 5年间厚朴总酚在根部积累很
快,从 0
86%增加到 7
68% ,随后增加缓慢,尤其是
10年后增加更慢(图 1) ; 2~ 5 年生厚朴的根皮 (笔
者暂命名为幼朴)中厚朴总酚量达到 2%以上,符合
!中国药典∀规定的标准,可以选择 2~ 5年生幼朴替
代传统厚朴作为获取厚朴总酚的原料。
表 2 不同生长年限桂东产厚朴中厚朴总酚的量
Table 2  Magnolol content in root bark of M
of f icinalis
var
biloba at various ages ( 1- 20 year)
from Guidong, Hunan Province
生长年限 根皮/ ( mg
g- 1)厚朴酚 和厚朴酚 总酚
干皮/ ( mg
g- 1 )
厚朴酚 和厚朴酚 总酚
1 2
9 5
7 8
6 2
8 1
5 4
3
2 11
1 16
5 27
6 4
0 3
1 7
1
3 34
9 41
9 76
8 5
8 3
5 9
3
4 34
1 51
2 85
3 8
4 4
8 13
2
5 40
6 53
1 93
7 11
7 5
1 16
8
10 58
9 81
4 140
3 15
3 8
8 24
1
15 53
7 94
9 148
6 25
4 13
5 38
9
20 50
2 117
7 167
9 28
7 28
1 56
8
种植年限/年
图 1  桂东产厚朴种植 1~ 20 年根皮中厚朴总酚的量
Fig
1  Magnolol contents in root bark of M
of f icinalis
var
biloba at various ages ( 1- 20 years)
from Guidong, Hunan Province
3
2  2~ 5 年生幼朴密植化生产研究: 通过密集种
植提高 2~ 5年生幼朴单位产量的方式,与按传统种
植方式采用 10、15、20 年生的厚朴植物获取厚朴总
酚进行对比, 考察年均产厚朴总酚收益(表 3)。研
究结果表明:对于不同生长年限的厚朴采用不同的
种植密度获取厚朴总酚, 厚朴年均每公顷产厚朴总
酚量随生长年限的增长而增加, 以 20年生的厚朴为

676
中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
最高,达到每年 81
9 kg/ hm2 , 但在 3~ 10年间年均
每公顷产厚朴总酚量增加缓慢(图 2) ; 2~ 5年生幼
朴年均每公顷产厚朴总酚量明显高于 10~ 15 年生
厚朴按传统种植方式以干皮获取厚朴总酚的年均每
公顷产厚朴总酚量(图 3) , 在改变种植方式后, 前者
的年均每公顷产厚朴总酚量是后者的 2 倍多, 表明
2~ 5年生幼朴可以替代传统厚朴进行规模化种植,
具有很好的产业化开发前景。2~ 5年生幼朴采用
不同的种植密度, 以 5 年生幼朴的年均每公顷产厚
朴总酚最高,但 3~ 5间年均每公顷产厚朴总酚量相
差不大。从种植周期因素考虑, 优选 3 年生幼朴作
为获取厚朴总酚的原料 [ 6]。该方法具有土地利用率
高,收效快, 单位面积厚朴总酚年产量高, 厚朴原料
厚朴总酚量高,投资见效快, 农民种植积极性高, 有
利于规模化、标准化生产厚朴药材,实现了厚朴资源
的高效利用。
表 3  2~ 5 年生幼朴采用密集种植方式与 10~ 20 年生厚朴传统种植方法获取厚朴总酚的产量比较
Table 3 Comparison on magnolol contents between younger (2- 5 years by intensive cultivation) and older
( 10- 20 years by traditional cultivation) root bark of M
of f icinalis var
biloba
生长
年限
种植密度/
(株
hm2)
单株干皮
产量/ kg
干皮产量/
( kg
hm- 2)
干皮厚朴
总酚量/ %
干皮产厚
朴总酚量 /
( kg
hm- 2)
单株根皮
产量/ g
根皮产量 /
( kg
hm- 2)
根皮厚朴
总酚量/ %
根皮产总
酚量/
( kg
hm- 2)
厚朴总
酚量/
( kg
hm- 2 )
年均产厚
朴总酚/
( kg
hm- 2 )
1 75 000 / / / / 0
80 60
00 0
86 0
45 0
52 0
52
2 49 500 / / / / 10
70 529
65 2
76 14
62 14
62 7
31
3 33 000 / / / / 42
70 1 409
10 7
68 108
22 1 08
22 36
07
4 30 000 / / / / 57
90 1 737
00 8
53 148
17 1 48
17 37
04
5 15 000 / / / / 1 39
50 2 092
50 9
37 196
07 1 96
07 39
21
10 3 000 2
31 6 930
00 2
41 167
01 5 12
40 1 537
20 14
03 215
67 3 82
68 38
27
15 3 000 3
12 9 360
00 3
31 309
82 1 1 66
10 3 498
30 14
86 519
85 8 29
66 55
31
20 3 000 4
63 13 890
00 5
68 788
95 1 6 87
10 5 061
30 16
79 849
79 1 6 38
74 81
94
种植年限/年
图 2 种植 1~ 20年桂东产厚朴年均产厚朴总酚量
Fig
2 Magnolol contents in root bark of M
of f icinalis
var
biloba in average annual output per hectare
at various ages (1- 20 years) from Guidong,
Hunan Province
3
3  化学等效性研究:用气相色谱法分离并经质谱
扫描后,利用Wiley7n
1 标准谱库的质谱数据进行
计算机检索,对 3个厚朴样品中的挥发性成分进行
了分析,结果见表 4。根朴样品共检出 38个色谱峰
及对应的质谱, 鉴定出 34 个成分;幼朴样品共检出
36个色谱峰及对应的质谱,共鉴定出 32个成分; 筒
朴样品中共检出 50 个色谱峰, 鉴定出 41个成分。
GCMS 分析结果表明, 3个样品挥发性组分中厚朴
酚、和厚朴酚为其主要成分, 面积归一化法计算根
朴、幼朴、筒朴 的厚朴总酚质量分数分 别为
85
36%、78
73%、69
72%,其他挥发性成分的量相
种植年限/年
图 3 桂东产 1~ 5 年生幼朴采用密集种植方式以
根皮获取厚朴总酚与 10~ 20 年生厚朴采用
传统种植方法以干皮获取厚朴总酚的年均
产量比较
Fig
3  Comparison of magnolol contents in average annual
output per hectare between younger ( 1- 5 yerars
by intensive cultivation) and older ( 10- 20 years
by traditional cultivation) root bark of M
of f ici
nals var
biloba
对较低,其中幼朴和根朴的挥发性成分组成十分接
近,幼朴与筒朴在挥发性化学成分组成上差别也不
大,表明幼朴与传统厚朴具有化学等效性。此外,
GCMS 实验中样品的提取采用醋酸乙酯回流提取,
而未采用!中国药典∀中规定的甲醇作为溶剂,主要
是考虑到甲醇的极性较大,提取不到一些小极性的
组分,同时会提取到一些不挥发性的组分,造成仪器
的污染。因此以根朴中厚朴总酚为考察对象,分析比

677
中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
表 4 3 种厚朴药材醋酸乙酯提取物中挥发性成分比较
Table 4  Comparison of volatile components in ethyl acetate extracts from three kinds of Cortex Magnoliae Of f icinalis
编号 成  分 质量分数/ %根朴 幼朴 筒朴
1 蒎烯 0
01 0
04 0
17
2 莰烯 0
02 0
09 0
05
3 对聚伞花素+ 柠檬烯+ 1, 8桉叶素 0
09 0
16 0
22
4 芳樟醇 0
07 0
27 0
15
5 4烯丙基苯酚 0
04 0
40 1
29
6 胡椒烯 0
04 0
01 0
07
7 石竹烯 0
10 0
21 0
24
8 石竹烯 0
04 0
07 0
13
9 !木罗烯 0
08 0
07 0
16
10 芹子烯 0
12 0
12 0
32
11 芹子烯 0
14 0
13 0
30
12 !桉叶油醇 0
11 0
04 1
76
13 桉叶油醇 0
21 0
07 2
22
14 桉叶油醇 0
22 0
12 2
60
15 石竹烯氧化物 0
11 0
05 0
55
16 十六烷酸 0
01 0
02 0
09
17 异厚朴酚 0
09 0
17 0
15
18 厚朴酚 36
11 33
16 46
08
19 邻苯二甲酸二异丁酯 0
07 0
25 0
54
20 4, 4−二烯丙基2, 3−二羟基二苯醚 6
91 5
36 7
31
21 和厚朴酚 49
25 45
57 23
64
22 龙脑基厚朴酚 0
09 0
11 0
84
23 谷甾醇 0
16 0
66 1
01
编号 成  分 质量分数/ %根朴 幼朴 筒朴
24 樟脑 0
02 0
13
25 龙脑 0
02 0
05
26 乙酸龙脑酯 0
01 0
02
27 古芸烯 0
05 0
05
28 6O甲基和厚朴酚 2
12 9
27
29 去氢白菖烯 0
06 0
08
30 蒎烯 0
04 0
02
31 木罗烯 0
08 0
05
32 ∀杜松烯 0
12 0
1
33 葎草烯氧化物 0
03 0
21
34 3蒈烯 0
02
35 己酸 0
33
36 顺呋喃型芳樟醇氧化物 0
02
37 反呋喃型芳樟醇氧化物 0
02
38 龙脑烯醛 0
02
39 异龙脑 0
02
40 龙脑 0
08
41 松油醇 0
06
42 乙酸龙脑脂 0
10
43 2, 3, 3三甲基2( 3甲基1, 3丁二 0
07
 烯基)6氧杂双环[3
2
0]庚7
 酮+ 1, 6二甲基4异丙基萘
44 十八碳二烯酸 0
02
  根朴的校正因子为 2
5∋ 106;幼朴和筒朴校正因子为 2
5∋ 105;校正因子= 样品的体积/进样体积
  root bark of M. of f i cinal is var. bi loba−s corr ect ion factor is 2
5∋ 106; y ou nger and stem branch es of M. of f icinal is var. bi loba−s correc
t ion factor is 2
5∋ 105; correct ion factors= sample volume/ in ject ion volume
较了甲醇超声提取和醋酸乙酯回流提取方法,结果显
示两种提取方法所测得厚朴总酚分别为 172
9、165
8
mg/ g, RSD分别为 1
2%、1
5%, 表明两种提取方法
对于厚朴总酚的提取率影响不大,本实验采用醋酸乙
酯回流提取即能兼顾到厚朴总酚的提取率,又能更充
分地提取挥发性成分。
  利用 HPLC色谱法对幼朴、筒朴、根朴进行定量
测定, 结果见表 5。总酚质量分数分别为 5
25%、
2
17%、17
29%, 总酚的量高低依次为: 根朴> 幼
朴> 筒朴,幼朴中总酚的质量分数高于 2
0%, 符合
!中国药典∀中关于厚朴总酚量的规定。
3
4  幼朴与传统厚朴的急性毒性比较: 结果显示,
厚朴水、醇提取物和幼朴水、醇提取物按剂量 ig 给
药,连续观察 10 d,均安然无恙,未见毒性反应。
表 5  3个厚朴药材中厚朴酚与和厚朴酚的量
Table 5 Contents of magnolol and honokol in three kinds
of Cortex Magnoliae Of f icinalis
样品 厚朴酚/
( mg
g- 1 )
和厚朴酚/
( mg
g- 1)
总酚/
( mg
g- 1)
根朴 82
6 90
3 172
9
幼朴 23
7 28
8 52
5
筒朴 13
5 8
2 21
7
3
5  药效等效性研究:
3
5
1  对正常小鼠肠道功能的影响: ( 1)对正常小
鼠小肠推进的影响:与对照组比较,厚朴三物汤组和
幼朴三物汤各剂量组小肠推进率显著增加,差异显
著( P< 0
05、0
01) , 表明厚朴三物汤和幼朴三物汤
可明显增加小鼠小肠推进速度, 其中以幼朴三物汤
中剂量组的小肠推进速度最快, 但厚朴三物汤和幼
朴三物汤各剂量组以及幼朴三物汤各剂量组之间比
较,差异不显著( P> 0
05)。结果见表 6。( 2)对正
常小鼠排便时间和数量的影响: 与对照组比较, 厚朴
三物汤组和幼朴三物汤中、低剂量组首次排黑便所
需时间、5 h内排便粒数差异非常显著( P< 0
01)。
与厚朴三物汤组相比, 幼朴三物汤低、高剂量组小鼠
的粪便粒数差异显著( P< 0
01) ,幼朴三物汤低、高
剂量组小鼠的首次排黑便所需时间减少 ( P <
0
05) ; 厚朴三物汤组与幼朴三物汤中剂量组之间比
较,差异不显著( P> 0
05)。结果见表 6。实验结果
表明,厚朴三物汤和幼朴三物汤均能促进正常小鼠
的小肠推进率,能减短小鼠排便时间,增加小鼠的排
便数量。其中幼朴三物汤在中剂量和厚朴三物汤的
作用相当,且量效关系最佳,表明幼朴与传统厚朴的

678
中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
表 6  厚朴三物汤对正常小鼠肠道功能的影响( x& s, n= 5)
Table 6  Effects of Houpo Sanwu Decoction on intestinal function of nornal mice ( x & s, n= 5)
组  别 剂量/ ( g
kg- 1) 推进率/ %   首次排便时间/ min   5 h内粪粒数  
对照    % 46
51& 3
28 102
60 & 8
62 8
8 & 0
84
厚朴三物汤 1. 5 56
00& 6
03* * 72
40 & 5
46* * 14
4 & 1
67* *
幼朴三物汤 3. 0 52
62& 3
62 95
80 & 11
65 . . 10
6 & 1
14 .
1. 5 56
52& 7
17* * 70
80 & 8
29* * 16
0 & 1
87* *
0. 75 54
33& 3
38* 82
40 & 5
73* * . . 11
6 & 1
67* * .
    与对照组比较: * P < 0
05  * * P < 0
01;与厚朴三物汤组比较: .P < 0
05  . .P < 0
01
    * P< 0
05  * * P < 0
01 v s cont rol group; .P< 0
05  . . P< 0
01 v s H oupo Sanwu Decoction group
药效作用相当。
3
5
2  对便秘型小鼠肠道功能的影响: ( 1)对便秘小
鼠小肠推进的影响:与对照组比较,小鼠长期 ig 冰水可
明显抑制胃肠运动,其小肠推进率降低( P< 0
01) ;给
予厚朴三物汤和幼朴三物汤后对胃肠道抑制有促进作
用,可促进其恢复正常( P< 0
05) ,与模型组比较差异
显著( P< 0
01)。结果见表 7。(2)对便秘小鼠排便时
间和数量的影响:与对照组比较,模型组小鼠首次排黑
便所需时间、5 h内排便粒数有显著差异,表明小鼠便
秘模型建立成功( P< 0
01)。模型小鼠给厚朴三物汤、
幼朴三物汤之后,小鼠的首次排便时间和粪便粒数与
模型组差异显著( P< 0
01) ,和对照组比较差异不显著
( P> 0
05) ,厚朴三物汤组、幼朴三物汤组之间比较差
异不显著(P> 0
05)。结果见表 7。( 3)对便秘小鼠回
肠5HT 受体1、DA受体1表达的影响: CIBS小鼠回
肠 5HT 受体 1、DA受体 1表达上升(P< 0
05) ,厚朴
三物汤、幼朴三物汤均可不同程度调整上述蛋白表达,
与模型组比较差异显著( P< 0
05) ,两药物间比较差异
不显著( P> 0
05)。结果见表 7、图 4。( 4)对便秘小鼠
结肠 5HT 受体 1、DA受体 1 mRNA表达的影响:小
鼠结肠5HT 受体 1、DA受体 1的 mRNA 表达与阳
性细胞表达有类似规律,厚朴三物汤、幼朴三物汤可不
同程度调整上述 mRNA表达,两药物比较差异不显著
( P> 0
05)。结果见表 7,图 5。
表 7  厚朴三物汤对便秘小鼠肠道功能和 5HT受体 1、DA受体 1表达的影响( x & s, n= 5)
Table 7 Effect of Houpo Sanwu Decoction on intestinal function and expression of 5HT receptor 1
and DA receptor 1 of constipated mice ( x & s, n= 5)
组  别 剂量/
( g
kg- 1) 推进率/ %
首次排便时
间/ min
5 h 内粪粒数
阳性表达率/ %
5HT 受体 1 DA 受体 1
mRNA 相对表达水平
5HT 受体 1 DA 受体 1
对照    % 52
58 & 3
83 100
6 & 9
07 9
2 & 1
10 27
20 & 5
40 35
20 & 8
41 0
57 & 0
05 0
44 & 0
04
模型    % 29
68 & 5
97 197
6 & 21
73* * 4
2 & 0
84 * 40
60 & 6
80* * 50
80 & 9
01* * 0
72 & 0
05* * 0
59 & 0
05* *
厚朴三物汤 1. 5 47
25 & 5
03. . 128
8 & 9
81. . 7
2 & 0
45 . . 29
80 & 3
42. . 43
00 & 6
28. . 0
61 & 0
05. . 0
48 & 0
05. .
幼朴三物汤 1. 5 47
56 & 5
59. . 125
6 & 13
07. . 7
8 & 0
45 . . 32
20 & 6
72. . 42
20 & 7
19. . 0
59 & 0
05. . 0
46 & 0
05. .
  与对照组比较: * * P< 0
01;与模型组比较: . . P< 0
01
  * * P< 0
01 v s control group; . . P< 0
01 v s model group
A对照组  B模型组  C厚朴三物汤组  D幼朴三物汤组
Acon tr ol group  Bmodel grou p CH oupo S anw u Decoct ion group  DYoupo Sanw u Decoct ion grou p
图 4  便秘小鼠肠道 5HT受体 1及 DA受体 1 阳性表达
Fig
4  Positive expression of 5HT receptor 1 and DA receptor 1 in intestine of constipated mice

679
中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
MM ark er  1对照组  2厚朴三物汤组  3幼朴三物汤组  4模型组
MMarker  1cont r ol group  2H oupo S anw u Decoct ion group  3Youpo Sanw u Decoct ion group  4m odel group
图 5 便秘小鼠肠道 5HT受体 1和 DA 受体 1 mRNA的表达
Fig
5 Expression of 5HT receptor 1 and DA receptor 1 mRNA in intestine of constipated mice
  经实验证实,厚朴三物汤和幼朴三物汤均能促
进便秘小鼠的小肠推进率,能减短小鼠排例时间, 增
加小鼠的排便数量, 降低小鼠回肠组织中 5HT 受
体 1、DA 受体 1蛋白及 mRNA 的表达, 幼朴三物
汤和厚朴三物汤的作用没有统计学差异。说明幼朴
和厚朴在厚朴三物汤中药理作用相当, 其可能作用
机制是通过调控 5HT 受体 1和 DA 受体 1 的表
达来实现的。
3
6  对老年功能性热结型便秘的治疗作用: 治疗 1
周后,两组临床症状均有显著好转,幼朴三物汤组总
有效率 86
7%,厚朴三物汤组总有效率 86
7%。两
组总有效率比较差异不显著( P> 0
05) ,两组同样
有效,作用相当。在观察的临床症状、体征中, 两组
均有不同程度的改善, 且两组间比较, 每周排便次
数、大便质地、大便带血程度、腹胀、口苦口干、心烦
等症状,幼朴三物汤组与厚朴三物汤组显著不差异
( P> 0
05)。
一般检查项目, 血常规、尿常规、大便常规、潜血
实验、肝肾功能等观察均无异常, 60例患者服药期
间均未发生明显不良反应。
4  结论
以上实验的结果表明, 3年生幼朴与传统厚朴
相比在厚朴总酚化学成分组成和量上没有明显的差
异,且其厚朴总酚的量达到了!中国药典∀关于厚朴
中总酚量的规定,具有化学等效性;急性毒性实验表
明幼朴与传统厚朴在毒性上没有显著差异,在使用
上是安全的;幼朴入药的厚朴三物汤与传统厚朴入
药的厚朴三物汤均能促进正常小鼠和便秘小鼠的小
肠推进率, 缩短小鼠排便时间, 增加小鼠的排便数
量,降低便秘型小鼠肠道组织中 5HT 受体 1、DA
受体1蛋白及 mRNA 的表达,幼朴三物汤在中剂量
和厚朴三物汤的作用相当, 且量效关系最佳,幼朴三
物汤和厚朴三物汤的药效作用没有统计学差异, 表
明 3年生幼朴与传统厚朴具有药效等效性;临床观
察结果表明,幼朴与传统厚朴的临床治疗作用相当。
因此,幼朴可以代替传统厚朴使用。
致谢: 湖南省中医药研究院中药研究所张水寒
教授、湖南中医药大学刘柏炎教授、中国科学院昆明
植物研究所余珍老师对本研究工作所作的贡献。
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680
中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月