全 文 ：总糖量分别为 19 6% ,本研究中纯化的凝集素也是
一种糖蛋白, 总糖的量在 10 7%, 与其他凝集素存
在一定的相似性。该凝集素的生物学活性(如抗菌
及抗肿瘤活性等)仍需进一步研究。
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亚临界水提取槐角中总异黄酮的研究
丛艳波,张永忠* ,刘 潇
(东北农业大学理学院 应用化学系,黑龙江 哈尔滨 150030)
摘 要:目的 考察了亚临界水提取槐角总异黄酮的最佳实验条件。方法 通过单因素和正交试验,以染料木苷
为对照、总异黄酮的得率为指标, 优选出槐角异黄酮的提取工艺参数。结果 当提取时间为 45 min、提取温度为
130 、液固比为 12 5 mL/ g 时槐角总异黄酮的得率为 23 3%。结论 与传统的提取方法相比, 亚临界水提取技
术是新发展起来的一种新型提取技术,具有提取时间短、效率高、环境友好等优点。
关键词:槐角; 总异黄酮;亚临界水提取
中图分类号: R284. 2; R286 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2010) 05-0717-04
Study on total isoflavones from Fructus Sophorae by subcritical water extraction
CONG Yan-bo , ZHANG Yong-zhong , LIU Xiao
( Colleg e of Science, No rtheast Agr icultural Univer sity, Harbin 150030, China)
Abstract: Objective T o opt imize the ext racting condition of to tal iso flavones f rom Fr uctus Sophorae
by subcr it ical w ater ext ract ion Methods T aking isof lav ones yield as index and genist in as control, the
technolo gy parameter of subcrit ical w ater ext raction of Fr uctus Sop horae iso flavones w as opt imized by sin-
g le factor and orthogonal experiment Results The y ield o f Fr uctus S op hor ae total isof lav ones in the ex-
tracts w as 23 3% at 130 fo r 45 min w ith the liquid-solid ratio of 12 5 mL/ g Conclusion Compar ed
w ith t radit ional ext racting methods, subcr it ical w ater ex tr act ion is a new developing technolog y in r ecent
year s Its advantage is fast , g ood-selective
Key words: Fr uctus S ophor ae ; total isof lav ones; subcr it ical w ater ex t ract ion
717中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 2009-09-14 基金项目:国家 863课题( 2008AA10Z331)作者简介:丛艳波( 1985 ) ,女,黑龙江绥化兰西人,在读硕士研究生, 2004 2008年考入东北农业大学食品分析与检验专业, 2008年保送到东北农业大学研究生学院攻读应用化学硕士,主要研究天然活性物质的分离纯化及其应用。
T el : 13624612968 E-mail: cyb happy love@ 126 com
* 通讯作者 张永忠 E-mail: zyz1953@ sohu com
槐角为豆科植物槐 Sophora j aponica L 的果
实,始载于神农本草经, 有清热泻火、凉血止血的
作用[ 1] 。黄酮类和异黄酮类化合物是槐角中的主要
活性成分, 具有降低转氨酶、降血压、抗生育和抗癌
等药理作用 [ 2]。槐角中含有的异黄酮主要是染料木
黄酮( genistein) [ 3, 4]及其衍生物, 如染料木苷( g enis-
t in)、槐属苷( sophorico side)、槐属双苷( sophor abio-
side)、染料木黄酮-7-双葡萄糖苷( genistein-7-diglu-
coside)和染料木黄酮-7, 4-双葡萄糖苷( g enistein-7,
4-digluco side)等。槐角异黄酮水解可以生成染料木
黄酮,染料木黄酮具有多种生物活性和生理功能,美
国国家癌症研究所于 1996年已将其列入肿瘤化学预
防药物临床发展计划之中,主要预防目标是乳腺癌和
前列腺癌[ 5]。槐角中异黄酮总量约为 29 58 g/ kg,而
大豆中存在的异黄酮总量约为 0 5~ 17 g/ kg[6] 。研
究槐角异黄酮的提取纯化,对于进一步制备生物活性
较高的染料木黄酮具有十分重要的意义。亚临界水
也被称为过热水、高温水、高压热水或热液态水, 是
指在一定压力下,将水加热到 100 以上临界温度
374 以下的高温, 水体仍然保持在液体状态(或指
压力和温度在其临界值之下的附近区域的液态
水) [ 7] 。通过对亚临界水温度和压力的控制可以改
变水的极性、表面张力和黏度[ 8] 。随着温度的升高,
水的极性会降低, 对有机物的溶解能力会增加。在
合适的压力下提高温度也能够降低表面张力和水的
黏度, 增强有机物在水中的溶解度。随着温度的增
加,亚临界水的氢键被打开或减弱[ 9] ,在这样的条件
下,水的介电常数()随温度升高很容易降低。常温
下纯水的 约为 80, 而升温升压至 250 、5 MPa
时,水的降低到 27[ 10] 。这个值和 25 、0 1 MPa
下的乙醇相同, 因此极性足够低,可以溶解许多中等
和低极性化合物。本实验采用单因素和正交试验方
法研究亚临界水对槐角中总异黄酮提取效率的影
响,以期对槐角异黄酮的生产提供参考。该方法是
一种快速高效的新方法, 这一方法在中药有效成分
的提取分离中将具有很好的应用前景。
1 材料和仪器
槐角购至安国市京兴药业有限责任公司, 经本
校胡宝忠教授鉴定。染料木苷对照品( Sigma 公司,
质量分数为 99 0%)。
Mett ler To ledo A G135型电子天平梅特勒-托
利多仪器有限公司(上海); FW 型高速万能粉碎机
(天津市泰斯特仪器有限公司) ; KCFD05 10 高压
磁力搅拌反应釜(烟台高新区科立自控设备研究所,
容积: 0 5 L, 设计压力< 12 MPa, 设计温度< 350
) ; T U 1901双光束紫外可见分光光度计(北京
普析通用仪器有限责任公司)。
2 方法和结果
2 1 槐角总异黄酮的测定方法
2 1 1 最大吸收波长的确定:槐角中含有的异黄酮
主要是染料木黄酮及其衍生物槐属苷和槐属双苷
等,它们的化学结构与染料木苷(染料木黄酮 7位上
的羟基与葡萄糖的苷羟基形成的糖苷)相近,最大吸
收波长也与染料木苷相同都是 262 nm。
2 1 2 标准曲线的制备:准确称取染料木苷对照品
1 0 mg,溶解于 95%乙醇中,并定容至 100 mL。分
别取 3、6、9、12、15 mL 溶液于 25 mL 量瓶中至刻
度,测定吸光度。以染料木苷的质量浓度为横坐标,
吸光度为纵坐标, 用 Excel软件处理, 得回归标准曲
线方程 Y= 0 066 X - 0 043[ 11] 。
2 1 3 测定方法和槐角总异黄酮的得率的计算:提
取液减压滤过,将滤液定容至 250 mL 量瓶中,然后
从中准确吸取 0 100 mL, 定容至 50 00 mL 量瓶
中。以水为对照,进行槐角总异黄酮的测定。利用
上述标准曲线回归方程计算得到槐角提取液中总异
黄酮的浓度,计算槐角总异黄酮的得率[得率= 提取
液中总异黄酮质量/槐角质量 100% ]。
2 2 槐角总异黄酮的提取:将槐角洗净、烘干,粉碎,
过 100目筛。准确取槐角粉 7 000 0 g 于高压反应釜
中,加入不同体积的蒸馏水,磁力搅拌速度为 120 r/
min,然后在不同温度及时间条件下进行提取。
2 3 单因素试验结果与分析
2 3 1 提取时间对槐角总异黄酮提取效果的影响:
在固液比10 mL/ g,提取温度为 120 条件下, 选取
提取时间 30、45、60、75、90 m in进行提取试验, 结果
见图 1。可以看出,当提取时间为 30~ 45 m in, 异黄
酮得率明显升高, 当时间再延长时, 异黄酮增加缓
慢。在 60 min以后异黄酮得率明显下降,因此选择
60 m in为最佳提取时间。
图 1 提取时间对异黄酮提取效果的影响
Fig 1 Inf luence of time on isoflavone extract
718 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
2 3 2 提取温度对槐角总异黄酮提取效果的影响:
在提取时间为 60 min, 固液比为 10 mL/ g 的条件
下,选择提取温度为 100、110、120、130、140 进行
提取实验, 结果见图 2。可以看出当提取温度为
130 时, 异黄酮的得率最大, 因此选择 130 为单
因素提取的最佳条件。
图 2 提取温度对异黄酮提取效果的影响
Fig 2 Influence of temperature on isoflavone extract
2 3 3 液固比对槐角总异黄酮提取效果的影响: 在
提取时间、提取温度分别为 60 m in、130 的条件
下,选择水与槐角粉的液固比为 7 5、10、12 5、15、
17 5 mL/ g,结果见图 3。当液固比为 10 mL/ g 时,
槐角异黄酮的得率最大。但是当液固比小于 10
mL/ g 时, 会发生糊底的现象, 使得槐角异黄酮损
失。而在液固比为 10~ 15 mL/ g ,槐角异黄酮的得
率变化很小,由于液固比较大时,后续脱溶处理比较
困难。因此选择液固比为 12 5 mL/ g。
图 3 液固比对异黄酮提取效果的影响
Fig 3 Influence of liquid to solid ratio
on isoflavone extract
2 4 亚临界水提取槐角总异黄酮的正交试验:以单
因素试验为基础,对提取时间、提取温度、液固比等影
响槐角总异黄酮得率的因素进行 L9 ( 34 )正交试验设
计,并对试验结果进行统计分析,确定最佳的工艺参
数。因素与水平见表 1,试验设计与结果见表 2。
表 1 因素与水平
Table 1 Factors and levels
水平 因 素
A 提取时间/ min B提取温度/ C液固比/ ( mL g- 1 )
1 60 130 10 0
2 45 140 12 5
3 75 120 15 0
表 2 L9 ( 34 )正交试验设计与结果
Table 2 Design and results of L9 ( 34 ) orthogonal test
试验号 A B C 得率/ %
1 1 1 1 23 141
2 1 2 2 20 490
3 1 3 3 18 650
4 2 1 2 23 277
5 2 2 3 20 733
6 2 3 1 20 463
7 3 1 3 20 544
8 3 2 1 19 651
9 3 3 2 19 516
K 1 62 281 66 962 63 255
K 2 64 473 60 874 63 283
K 3 59 711 58 629 59 927
k1 20 760 22 321 21 085
k2 21 491 20 291 21 094
k3 19 904 19 543 19 976
R 1 587 2 778 1 118
从极差分析结果得出影响槐角总异黄酮提取效
率的因素主次顺序为 B> A> C, 即提取温度、提取时
间和液固比。液固比影响不显著。最佳组合为
A 2B1C2 ,即提取温度为 130 、液固比为 12 5 mL/ g、
提取时间45 min时提取效果最好。最佳组合在实验
组,且与试验结果相符。
3 讨论
槐角异黄酮的提取纯化方法近年来已有报道。
但采用亚临界水提取的方法尚未见文献报道。常规
的提取方法存在有机溶剂残留等不安全因素,对人
体健康有潜在威胁。水是一种绿色环保、资源丰富
的溶剂,通过高温高压制得的亚临界水由于其极性
足够低,可以溶解许多中等和低极性化合物,是一种
无毒环保的绿色提取剂, 具有提取时间短、提取率
高、环境友好等优点。将亚临界水提取技术开发成
一种工程化中药提取技术,将更接近于中国传统水
煎煮中药的模式,避免有机溶剂的应用和污染。将
亚临界水提取用于槐角异黄酮的提取上, 是槐角异
黄酮提取手段的一种新的探索, 不仅可以避免有机
溶剂对异黄酮的污染, 而且成本低,这对槐角异黄酮
的生产利用具有十分重要的意义。
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硝酸毛果芸香碱眼用原位凝胶的制备和评价
朱 静1, 2 ,姜 锋2 ,阎 卉2 ,王成港2 ,王春龙2 *
( 1 天津医科大学, 天津 300070; 2 天津药物研究院, 天津 300193)
摘 要:目的 以硝酸毛果芸香碱为模型药, 研究温度敏感型原位凝胶对药物眼部滞留和体外释放的影响。方法
以泊洛沙姆 407、188 为凝胶剂, 以卡波姆 974P 为增黏剂, 制备眼用温敏型原位凝胶。考察原位凝胶的流变学性
质;采用改良 F ranz 扩散池法研究凝胶的体外释药行为。结果 流变学测定结果显示原位凝胶在室温状态下为物
理缠结的聚合物溶液,在眼表温度下转变为次级键网状结构。泊洛沙姆 188、卡波姆 974P 的加入均可延缓药物的
释放,二者对凝胶的黏性模量 G的影响不同。原位凝胶在 4 h 内缓慢释放药物,释放曲线符合 Higuchi方程( r=
0 992 3)。结论 通过调节泊洛沙姆 407 和 188 的比例,可得到具有适宜溶液-凝胶转变温度和良好释药特性的原
位凝胶。流变学结果提示原位凝胶的眼部滞留能力强于普通滴眼液, 是一种具有研究前景的给药系统。
关键词:硝酸毛果芸香碱; 眼用原位凝胶;温敏型; 流变学;溶液-凝胶转变温度;体外释放
中图分类号: R286 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2010) 05-0720-05
Preparation and evaluation of pilocarpine nitrate in situ gel for ophthalmic use
ZHU Jing, JIANG Feng , YAN Hui, WANG Cheng-gang, WANG Chun-long
( T ianjin Medical Univ ersity , T ianjin, 300070; T ianjin Institute o f Pharmaceut ical Research, T ianjin, 300193) )
Abstract: Objective To develop and charaterize a ser ies of Polox amer- and Car bopo-l based in situ gel
fo r ophthalmic use as to enhance the ability of dr ug to retain in eyes and delay dr ug release Methods The
gel w as prepar ed using Polo xamer 407/ 188 and Carbopol 974P as gelling agent and viscosity enhancer,
respectively Rheolo gical character ist ics w er e evaluated and behaviour of drug release in vi tr o was invest-i
g ated by modif ied Franz dif fusion cells Results T he rheolog ical study indicated that the gel w as physica-l
ly entangled po lymer so lut ions at 20 and then converted into a netw ork str ucture w ith secondar y bonds
at 35 T he gel released the drug molecules slow ly in 4 h The best fit model w as H iguchi matrix model
( r= 0 992 3) Fo rmulations consist ing of Polox amer 188 and Carbopol 974P w ere proved to be able to
decrease the drug release speed ef ficient ly T he impact on elast ic modulus G o f the gel caused by tho se
tw o w ere dif ferent Conclusion An in si tu gel w ith suitable so-l g el t ransit ion temperature and sat isfactory
release pat tern could be achieved by adjusting the r at io of Po lox amer 407 to Polox amer 188 The developed
fo rmulations have the ability to prolong the ocular residence t ime, w hich suggests it may be a new durg
delivery system w ith br ight future
Key words: pilocarpine nit rate; ophthalmic in situ gel; thermosensit iv e; rheo logy, so-l g el tr ansit ion
temperature; in v it ro release
720 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 2009-11-03 作者简介:朱 静,女,天津人,硕士研究生,主要从事眼部缓释给药系统的研究。
T el : ( 022) 23006879 E- mai l: catherine zh u @ hotm ail com
* 通讯作者 王春龙 T el: ( 022) 23006880 E-m ail : dds-w cl@ vip s ina com