全 文 ：的 f 2 值分别为 57、69、34。相似因子法中若 f 2 值
不低于 50 ,则认为两条溶出曲线相似 ;且值越大 ,两
者越相似。因此 ,处方 2 制备包衣片具有与市售产
品最相似的溶出曲线。处方 2 制备的片芯、包衣片
以及市售产品的溶出曲线 (图 2) 亦表明 ,薄膜包衣
对片剂溶出的影响也非常小。
图 2 　处方 2 与市售品溶出曲线
Fig12 　Dissolution prof iles of Formulation 2
and product on market
3 　讨论
表 2、3 的结果可以看出 ,善达与微晶纤维素配
合使用可显著改善银杏叶提取物物理性质 ,通过两
者比例的调整使处方粉体更适合直接压片 ,片芯硬
度和脆碎度均能符合薄膜包衣的要求 ,制备的薄膜
包衣片释放结果符合标准并具有与市售产品最相似
的溶出曲线。
参考文献 :
[ 1 ] 　李红珠1 2008 年美国植物提取物市场逆势而上 ,中国所占的份
额反而下降[J ]1 现代药物与临床 ,2009 ,24 (5) :31023121
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的保护作用[J ]1 中草药 ,2007 ,38 (12) :1864218671
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志 ,2007 , 17 (5) : 312361
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析[J ]1 中国药学杂志 , 2000 , 35 (2) :13021311
大孔吸附树脂分离纯化连翘酯苷 A的工艺研究
胡晨旭1 ,2 ,魏 　峰1 ,郭治昕1 ,周水平1
①
(11 天津天士力集团研究院 , 天津 　300410 ; 21 天津中医药大学 , 天津 　300193)
摘 　要 :目的 　筛选出一种高效实用的分离纯化连翘酯苷 A 的大孔吸附树脂 ,并使分离纯化工艺达到最优化。方
法 　以连翘酯苷 A 质量浓度为指标 ,考察多种型号大孔吸附树脂纯化连翘酯苷 A 的吸附及洗脱条件。结果 　AB2
8 型大孔吸附树脂为分离纯化连翘酯苷 A 的最佳大孔吸附树脂 ,最佳工艺为 :上样质量浓度为生药 013 g/ mL ,最
大上样量为树脂的 2 倍体积 ,洗脱剂为 30 %乙醇 ,洗脱剂的用量为 6 倍量树脂柱体积。结论 　AB28 型大孔吸附树
脂能显著提高连翘酯苷 A 的质量分数 ,具有吸附量较大 ,洗脱率高 ,经济环保等优点 ,适合于规模化生产。
关键词 :连翘酯苷 A ;大孔吸附树脂 ;分离纯化
中图分类号 :R28412 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0520732204
　　连翘及连翘属其他植物中的咖啡酰糖苷类成分
连翘酯苷 A、C、D、E 均有很强的抗菌活性 ,尤其是
所含连翘酯苷 A (forsyt hiaside A)的量最多[ 1 ] ,有很
大的开发价值。本实验通过对不同型号大孔树脂进
行筛选 ,确定了采用 AB28 大孔吸附树脂对连翘酯
苷 A 进行分离纯化的工艺。
1 　仪器、试剂与材料
安捷伦 ( Agilent ) 1100 系列高效液相色谱仪 ;
Buchi R2200 型旋转蒸发仪 (瑞士 Buchi 公司) ;电子
精密天平 (奥豪斯公司) 、梅特勒 XS105DU 电子天平 ;
1092 型恒温水浴摇床 (德国 GFL 公司) ; KQ —100 型
超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) 。
青翘 ,产地山西 ,购于河北永正润生医药有限公
司 ,经天津天士力研究院中药研究所魏峰教授鉴定
为木犀科植物连翘 Forsy t hi a sus pensa ( Thunb1 )
Vahl 的干燥果实 ;连翘酯苷 A 对照品 (天津一方科
技有限公司提供 ,质量分数为 9815 %) ; H PD100、
HPD400、H PD600 树脂 (河北沧州宝恩吸附材料科
技有限公司) ;N KA29、X25、AB28 树脂 (天津兴南允
能高分子技术有限公司) ;DA201、D2101 树脂 (天津
市海光化工有限公司) ;高效液相用乙腈为色谱纯
(默克公司) ;高纯水 ;其他试剂均为分析纯。
·237· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
①收稿日期 :2009208222　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :胡晨旭 (1979 —) ,男 ,辽宁凌源人 ,工程师 ,天津中医药大学硕士研究生 ,主要从事中药新药研究及天然产物开发工作。
Tel : (022) 26736553 　E2mail : huchenxu1999 @1261com
2 　方法与结果
211 　提取液的制备 :取青翘药材 ,分别用水、酸水、乙
醇、70 %乙醇和甲醇 5 种溶剂采取浸泡、回流和超声 3
种方式提取 ,结果以甲醇回流提取的提取率最高 ,
70 %乙醇回流提取稍差 ,超声提取率最低 ,考虑到利
于工业化进行 ,选用 70 %乙醇回流作为提取方式。
称取 500 g 青翘药材 ,用 70 %乙醇溶液回流提
取 3 次 ,每次 2 h ,合并滤过 ,浓缩至无醇味 ,离心 ,调
p H 值 1～2 后 ,加水定容至 500 mL , 配制成含生药
1 g/ mL 的提取液 ,备用。
212 　连翘酯苷 A 的 HPL C 法测定[1 ]
21211 　对照品溶液的配制 :精密称取连翘酯苷 A 对
照品 1010 mg ,置 25 mL 量瓶中 ,加 50 % 乙醇至刻
度 ,配制成质量浓度为 014 mg/ mL 的对照品溶液。
21212 　供试品溶液的制备 :精密称取样品干燥物
1010 mg ,置 25 mL 量瓶中 ,加 50 %乙醇至刻度 ,配
制成供试品溶液。
21213 　样品测定 :取待测供试品溶液和对照品溶液
各 10μL ,用微孔滤膜滤过 ,进样测定连翘酯苷 A 的
质量浓度 ,并根据结果计算连翘酯苷 A 的质量分数。
213 　静态吸附试验[2 ,3] :准确称取经预处理的 8 种干树
脂 1010 g ,分别放于 250 mL 具塞磨口三角瓶中 ,精密加
入提取液 200 mL ,室温下振荡(200 r/ min) 24 h ,至吸附
平衡 ,吸取上层液体 ,测定连翘酯苷 A 质量浓度。
将三角瓶中树脂和提取液一起放在滤纸上滤
过 ,用适量的蒸馏水洗去树脂上残留的药液 ,用 200
mL 乙醇溶液将树脂全部转移至锥形瓶中 ,室温下
振荡 (200 r/ min) 12 h ,至解吸平衡 ,吸取上层液体 ,
测定连翘酯苷 A 质量浓度 ,同时计算连翘酯苷 A 的
解吸率。结果见表 1。可见综合考虑吸附量与解吸
率 ,AB28 型大孔树脂对连翘酯苷 A 吸附较好 ,其静
态吸附连翘酯苷 A 的量为 38 mg/ g 树脂。
表 1 　8 种型号大孔树脂对连翘酯苷 A的静态吸附的测定
Table 1 　State absorption of forsythiaside A with eight
types of macroporous resins
树　脂　 吸附量/ mg 解吸量/ mg 解吸率/ %
DA201 234 193 82149
AB28 384 360 93175
D2101 367 325 88156
X25 220 194 88118
HPD100 363 290 79189
HPD400 330 253 76167
HPD600 194 139 71165
N KA29 200 133 66150
214 　动态吸附法
21411 　动态吸附曲线的考察 :将提取液以 1 BV/ h
通过 AB28 树脂 (100 g)至吸附饱和 ,流出的连翘酯苷
A 残液用部分收集器收集 ,测定各部分连翘酯苷 A
的质量浓度 ,结果见图 1。从动态吸附曲线可以看
出 ,连翘酯苷 A 从 3 BV 起有少量泄露 ,在 5 BV 处有
明显的拐点 ,达到吸附饱和需要 10 BV 上柱液。
图 1 　连翘酯苷 A动态吸附曲线
Fig11 　Dynamic adsorption curve of forsythiaside A
21412 　体积流量对 AB28 树脂吸附效果的影响 :取
一定量 211 中的连翘酯苷 A 上柱液分别用不同体积
流量通过 AB28 树脂柱 ,并测定连翘酯苷 A 的质量浓
度 ,结果见表 2。可见体积流量在 015～2 BV/ h 时
吸附量和吸附率随体积流量的增大而下降 ,而以 2
BV/ h 上样时 ,在上样过程中已经出现少量泄露现
象 ,考虑到工作效率和吸附效果 ,上样体积流量采用
1 BV/ h 较为适合。
表 2 　不同体积流量对吸附率的影响
Table 2 　Effects of eluting speed on absorption rate
体积流量/ (BV ·h - 1) 吸附量/ (mg ·g - 1) 吸附率/ %
01 5 211 65 961 6
11 0 211 31 951 1
21 0 211 13 941 3
21413 p H 值对 AB28 树脂吸附效果的影响 :不同
p H 值的连翘酯苷 A 提取液通过树脂柱 ,测定连翘
酯苷 A 的质量浓度 ,结果见表 3。上柱液的 p H 值
越大 ,吸附率就越低 ,而上柱液 p H 值为 015 和 1
时 ,吸附率很接近 ,考虑到生产成本及操作方便 ,上
柱液的 p H 值调到 p H 1 较为合适。
表 3 　不同 pH值对吸附率的影响
Table 3 　Effects of pH values on absorption rate
p H 值 吸附量/ (mg ·g - 1) 吸附率/ %
015 22141 961 3
110 22136 961 1
210 18105 841 3
310 17156 801 6
21414 　提取液质量浓度对 AB28 树脂吸附效果的
影响 :不同质量浓度的提取液通过树脂柱 ,测定连翘
酯苷 A 的质量浓度 ,结果见表 4。低质量浓度不利
于连翘酯苷 A 的吸附 ,随上柱液质量浓度的增大 ,
吸附量也随着增大 ,但是当上柱液质量浓度大于
·337·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
013 g/ mL 时 ,吸附率反而降低 ,说明较高的上柱液
质量浓度虽然能够提高上样量 ,但过高时 ,反而降低
了树脂柱的吸附效率。因此 ,连翘酯苷 A 上柱液的
最佳质量浓度应该为含生药量 013 g/ mL 。
表 4 　不同质量浓度对吸附率的影响
Table 4 　Effects of various concentration on absorption rate
含生药量/ (g ·mL - 1) 吸附量/ (mg ·g - 1) 吸附率/ %
01 1 231 28 941 5
01 2 271 23 961 3
01 3 291 99 981 5
01 4 331 48 951 4
01 5 361 18 941 3
215 　AB28 树脂的洗脱性能
21511 　洗脱剂的选择 :树脂吸附连翘酯苷 A 后 ,用
蒸馏水洗涤至流出液澄清状态 ,然后用 10 BV 不同体
积分数的乙醇溶液以 2 BV/ h 体积流量洗脱 ,测定连
翘酯苷 A 的质量浓度 ,计算各指标 ,结果见表 5。
表 5 　不同体积分数乙醇的洗脱效果的考察
Table 5 　Effects of various ethanol concentration
on elution
洗脱剂 洗脱率/ % 质量分数/ %
10 %乙醇 46102 35106
30 %乙醇 98131 50194
50 %乙醇 98158 43115
21512 　动态解吸曲线 :3 种乙醇的洗脱过程可见图
2。可见 10 %乙醇的洗脱效率太低 , 30 %乙醇和
50 %乙醇的洗脱效率都很高 ,都能在 6 倍柱体积以
内将连翘酯苷 A 全部洗脱 ,由表 5 可见 30 %乙醇洗
脱液中连翘酯苷 A 的质量分数较高 ,因此 ,取 30 %
乙醇作为洗脱剂为最佳。
图 2 　不同体积分数乙醇的动态解吸曲线
Fig12 　Dynamic desorption curve of various
ethanol concentration
21513 　解吸液的高效液相图谱分析 :将 30 %乙醇
洗下的柱下液在 60 ℃的真空环境中浓缩至干 ,精密
称取 1010 mg ,用 50 %乙醇定容于 25 mL 量瓶中 ,
同样方法处理连翘酯苷 A 对照品 ,将配制好样品和
对照品溶液进样 ,利用高效液相图谱分析。由图 3
可见 ,连翘酯苷 A 提取物中杂质已经很少 ,并分布
成几个相互分开的主要杂质峰 ,非常利于进一步分
离和纯化。
图 3 　30 %乙醇洗脱液的高效液相色谱图
Fig13 　HPLC Chromatogram of 30 %ethanol concentration
216 　验证试验 :通过对 AB28 等 8 种不同极性的大
孔吸附树脂的比较 ,最后确定 AB28 型大孔吸附树
脂为分离纯化连翘酯苷 A 的最佳大孔吸附树脂 ,最
佳工艺为 :上样质量浓度为生药 013 g/ mL ,最大上
样量为树脂的 2 倍体积 ,洗脱剂为 30 %乙醇 ,洗脱
剂的用量为 6 倍量树脂柱体积。在最佳的吸附和解
吸条件下 ,重复试验 3 次 ,结果见表 6。可以看出 ,
在最佳实验条件下 ,连翘酯苷 A 在 AB28 树脂上的
吸附和解吸可重复性非常好 ,说明此实验条件稳定 ,
结果可靠。
表 6 　最佳工艺验证试验
Table 6 　Experimental validation of optimum technology
试验次数
吸附量/
(mg ·g - 1)
吸附率/
%
洗脱率/
%
质量分数/
%
得率/
(mg ·g - 1)
1 30115 98174 981 55 51113 28132
2 29198 98197 981 33 50101 28115
3 30101 99101 981 31 50156 28112
均值 30105 98191 981 40 50157 28120
3 　讨论
连翘提取液经过 AB28 树脂处理一次 ,即可以
把上柱前连翘酯苷 A 为 1102 %纯化到 50 %以上 ,
除去了大部分杂质 ,纯化效果显著。
在图 3 中可以看到纯化后提取物只有 4 个主要
的峰 ,其他杂质基本都除去了 ,而除了连翘酯苷 A
的色谱峰外 (第 4 号峰) ,另外 3 个杂质峰中第 1 号
峰和第 3 号峰 ,可以用树脂 A 完全除去 ,而剩余的 2
号杂质峰也可以用树脂 B 完全除去 ,最后可以得到
质量分数在 95 %以上的单体成分。该单体成分
FAB2MS 显示准分子离子峰 625 [ M + H ] + , 推测
分子式为 C29 H36 O15 , 经过碳氢信号的归属 ,认定为
连翘酯苷 A。纵观整个分离纯化过程 ,AB28 大孔吸
附树脂的分离纯化过程是最为关键的一环 ,正是这
·437· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
一极为显著的除杂质过程 ,才确保了树脂更好地发
挥作用。
AB28 树脂对连翘酯苷 A 的分离纯化 ,是一个
简单、环保且高效的纯化过程 ,非常适合于大生产操
作 ,再加上树脂 A 和 B 后续除杂 ,形成了一条很好
的连翘酯苷 A 的工艺开发路线 ,具有广阔的工业生
产应用前景。
参考文献 :
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的研究[J ]1 中成药 , 2006 ,28 (6) : 79427961
克感利咽口服液的超声提取工艺研究
秦春梅 ,廖晓嘉
①
(广州王老吉药业股份有限公司 ,广东 广州 　510450)
摘　要 :目的 　研究克感利咽口服液处方药材的超声提取方法。方法 　分别以黄芩苷、栀子苷、色谱图相似度、总
固体得率作为指标 ,采用均匀设计试验 ,结合药理学指标 ,研究克感利咽口服液超声提取工艺。结果 　优选最佳超
声提取工艺为 :8 mm 药材粒度 ,9 倍量 40 %乙醇 , 超声温度 60 ℃,超声功率 1 200 W ,提取 2 次 ,每次 30 min。结
论 　克感利咽口服液采用超声提取工艺切实可行 ,具有节能、省时、提高提取效率等优势。
关键词 :克感利咽口服液 ;均匀设计 ;超声提取
中图分类号 :R28412 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0520735204
　　克感利咽口服液由黄芩、金银花、栀子等 14 味
药材组成。原工艺中采用乙醇回流提取或水煎煮等
传统提取工艺 ,整个工艺能耗较大 ,工艺流程长、成
本较高。随着现代制剂提取工艺的飞速发展 ,超声
提取技术作为一门药物提取的现代新技术 ,由于其
省时、节能、提取效率高等特点和优势 ,在中药领域
的应用已经受到了广泛关注和研究 ,并且具有广阔
的应用前景和开发价值[1～3 ] 。本实验将在原工艺基
础上 ,采用均匀设计法 ,确立克感利咽口服液超声提
取的最佳工艺参数 ,以化学评价和生物活性评价指
标 ,进行原工艺与超声提取工艺的对比研究 ,力求科
学、客观地评价新工艺的可行性和适用性。
1 　仪器、试剂与材料
Waters 600 高效液相色谱仪 (600 四元梯度泵 ,
2996 DAD 检测器 ,717 自动进样器 ,柱温箱) ; Em2
power 工作站 ;Met tler A E 240 型电子天平 (十万分
之一 ,瑞士梅特勒2托利多公司) 。SCQ —2400 型超
声波提取设备 (25 k Hz、40 k Hz ,2 400 W ,上海声浦
超声波设备厂) 。
栀子苷 (批号 1107492200410) 、黄芩苷 (批号 1107152200514) 、木犀草苷 (批号 1117202200501) 、升麻苷 (批号 5222200203) 、绿原酸 (批号 1107532200413) 、黄芩素 (批号 1115952200402) 、连翘苷 (批号 1108212200406 ) 、甘 草 酸 铵 ( 批 号 1107312200409)对照品由中国药品生物制品检定所提供。黄芩 (批号 0601037) 、金银花 (批号 0601042) 、荆芥(批号 0601040) 、薄荷 (批号 0602002) 、防风 (批号0601039 ) 、栀 子 ( 批 号 0601032 ) 、连 翘 ( 批 号0601003 ) 、甘 草 ( 批 号 0601031 ) 、僵 蚕 ( 批 号0601034 ) 、桔 梗 ( 批 号 0601015 ) 、蝉 蜕 ( 批 号0602009 ) 、射 干 ( 批 号 051102 ) 、地 黄 ( 批 号0601038) 、玄参 (批号 051101) 药材均由广州王老吉药业股份有限公司提供 ,经中心检验室药材组鉴定 ,符合《中国药典》2005 年版各药材项下的相关要求。大耳白家兔 ,雌雄各半 ,体质量为 (115 ±0125)kg ,由北京市海淀天旺实验动物养殖场提供 ,许可证编号 :SCXK(京) 20062006。昆明种小鼠 ,清洁级 ,体质量 21～23 g ,雌雄各半 ,由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供 ,合格证号 SCX2(军)20022001。
·537·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
①收稿日期 :2009208206　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :广东省关键领域重点突破项目 (2003A30907)
作者简介 :秦春梅 (1979 —) ,女 ,湖南娄底人 ,工程师 ,硕士 ,主要从事中药新药研究。
Tel : (020) 86200716 　Fax : (020) 86601051 　E2mail : chunmeiqin @hot mail1com