全 文 ：药材与资源
丹参脂溶性成分的地域分布特点分析
杨新杰,万德光,林贵兵, 张 琦,王金燕,严铸云*
(成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室,四川 成都 610075)
摘 要:目的 分析全国不同产地丹参中脂溶性成分量的变化情况及其地域分布特点。方法 采用 H PLC 法测定
不同产地丹参脂溶性成分的量,运用 SAS 统计软件分析丹参脂溶性成分相关性及其地域分布特点。结果 回归分
析表明,丹参药材中丹参酮! A 量与二氢丹参酮∀量呈负相关, 与其他两种呈正相关。聚类分析表明, 3 个野生药
材与山东和河南大部分产地、四川中江集凤镇栽培药材脂溶性成分较高聚为一类。建议丹参药材中二氢丹参酮
∀ #0. 02% , 丹参酮∀ #0. 03% ,隐丹参酮#0. 02% , 丹参酮! A #0. 2%。结论 丹参的脂溶性成分呈现地域性差
异,传统道地产区的量较高。丹参药材中二氢丹参酮∀ #0. 045% , 丹参酮∀ # 0. 12% ,隐丹参酮#0. 10% ,丹参酮
!A #0. 35% , 才能符合历史上药用的要求。
关键词:丹参; 脂溶性成分; H PLC;聚类分析
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 05080904
Analysis on geographical distribution of liposoluble constituents in Salvia miltiorrhiza
YANG Xinjie, WAN Deguang, LIN Guibing, ZHANG Qi, WANG Jinyan, YAN Zhuyun
( Key Labor ator y o f St andardization of Chinese Herbal Medicines of M inistry of Education, Colleg e o f Pharmacy ,
Chengdu Univ ersity of T raditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China)
Abstract: Objective T o analyze the content change of liposoluble const ituents and their geogr aphical
dist ribut ion in S alvia mil t iorr hiz a from dif ferent habitats ar ound China Methods Determining the con
tent of liposo luble const ituents in S mil tior r hi z a fr om different habitats by HPLC and using SAS to ana
lyze correlat ion betw een liposoluble constituents in S milt ior rhi z a and their g eographical dist ribut ion
Results Reg ression analysis show ed that content of tanshinone !A and dihydrotanshinone ∀ presented
negat ive cor relat ion and po sit iv e correlat ion w ith the other tw o Cluster analysis show ed that three w ild
medicinal herbs and the cult ivated species in most habitats of Shandong and Henan Prov inces and
Zhong jiang in Sichuan Province are one kind Their contents of liposoluble const ituents are higher, sugges
t ing that dihydrotanshinone I should be # 0. 02%, tanshinone I # 0. 03% , crypto tanshinone # 0. 02%,
and tanshinone !A # 0. 02%Conclusion T here are dif ferences in liposoluble const ituents in S milt ior
r hiz a betw een different habitats The contents are espesially higher in t raditional and orig inal locat ion
Dihydrotanshinone ∀ should be # 0. 045% , tanshinone ∀ # 0. 12%, cryptotanshinone #0. 10% , and
tanshinone !A # 0. 35% , w hich is consistent w ith the historical medical requirements
Key words: Solvia mi tt iorr hiz a Bunge; lipo soluble constituents; HPLC; cluster analysis
丹参为唇形科植物丹参 Salvia mi l tior rhi z a
Bunge的干燥根及根茎,具有祛瘀止痛、活血通经、
清心除烦等功效 [ 1]。其活性成分包括脂溶性和水溶
性两部分,活性脂溶性成分主要是丹参酮类, 具有抗
氧化和免疫调节作用, 也是治疗冠心病等心血管疾
病的主要有效成分[ 2, 3]。但丹参的产地较多, 在现
有的报道[ 4~ 11] 中不同学者对各地丹参化学成分分
析的结果和结论相去甚远。本实验采用平行采样和
平行分析方法, 对四川、山东、河南、河北、陕西、山
西、江苏等 7省 28个主产地的丹参药材, 进行了二
809中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
收稿日期: 20090727 基金项目:国家∃ 十一五%科技支撑计划项目( 2006BAI09B034)作者简介:杨新杰( 1981 & ) ,男,汉族,陕西蒲城人,成都中医药大学在读博士,主要从事中药品种、质量与资源开发研究。
T el : 13541048702 Email: xxx 211xxx@ 126. com
* 通讯作者 严铸云 T el: 13981964354 Email: cdtcm yan@ 126. com
氢丹参酮 ∀ ( dihydrotanshinone ∀ )、丹参酮 ∀
( tanshinone ∀ )、隐丹参酮( cr yptotanshinone)、丹
参酮!A ( tanshinone !A ) 4种脂溶性成分的 HPLC
分析,为广大药检、药材生产、加工、购销及使用人员
提供参考。
1 材料
1. 1 样品: 2007年 11月在丹参各主产区采集栽培
或野生丹参的根(产地情况见样品测定项)。采用平
行采样,每份样品为 20~ 25点采集,样品采集后快
速运回实验室, 经常规加工处理。样品经成都中医
药大学严铸云教授鉴定为丹参 S alvia mi l tior rhi z a
Bunge的根。
1. 2 仪器: Var ian Pr ostar 系列高效液相色谱仪:
包括 Prostar 210 泵、Prostar 325 二级管阵列检测
器和 Prostar 色谱工作站(美国 Varian公司) ; 电子
天平 ( M ade by Sartorius BP121S ) ; BRAN SON
SB & 2200型超声仪。
1. 3 药品与试剂: 丹参酮 !A (批号 110766
200417)、隐丹参酮(批号 08529902)购自中国药品
生物制品检定所; 丹参酮 ∀ (批号 071106)、二氢丹
参酮 ∀(批号 080319)购自上海融禾医药科技有限
公司。甲醇(色谱纯, F isher Scient if ic) , 甲醇(分析
纯, 批号 20071205, 成都市联合化工试剂研究所) ,
水为去离子重蒸水。
2 方法与结果
2. 1 色谱 条 件: 色 谱 柱为 WelchromT M C18
( 250 mm ∋ 4. 6 mm, 5 m,美国 Welch 公司)。流
动相: A 相为甲醇, B 相为水, 梯度洗脱 A: 0~ 25
min 67% ~ 67%, 25~ 45 min 67% ~ 90% ; B: 0~ 25
min 33% ~ 33%, 25~ 45 m in 33% ~ 10%。体积流
量: 1. 0 mL/ min;进样量: 20 L; 柱温: 室温;检测波
长: 270 nm。色谱图见图 1。
1二氢丹参酮∀ 2隐丹参酮 3丹参酮∀ 4丹参酮!A
1dihyd rotansh inone 2cryptotan shinon e 3t ansh inone
4t anshin on e !A
图 1 混合对照品(A)和样品( B)HPLC图谱
Fig. 1 HPLCChromatograms of mixed reference
substance ( A) and sample ( B)
2. 2 对照品溶液的制备:分别精密称取对照品置棕
色量瓶中,以甲醇为溶剂, 配制成单组分对照品溶
液,再配制混合对照品溶液, 其中含二氢丹参酮 ∀
43. 50 g / mL、隐丹参酮 50. 00 g/ mL、丹参酮 ∀
120. 00 g/ mL、丹参酮!A 114. 00 g/ mL。
2. 3 样品溶液的制备:取丹参药材粉末(过 3号筛)
0. 2 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10
mL,密塞, 称定质量, 过夜, 超声提取 45 m in, 冷却
后再称定质量, 加甲醇补足减失质量, 摇匀, 0. 45
m 微孔滤膜滤过,备用。
2. 4 标准曲线的绘制: 取上述混合对照品溶液 1、
2. 5、5、10、15、20 L,按确定色谱条件进样,测定峰
面积,进行线性回归。结果见表 1。
表 1 4 种脂溶性成分线性关系
Table 1 Linearing of four liposoluble constituents
化合物 方程式 r 线性范围/ g
二氢丹参酮∀ y= 3∋ 107 x+ 155 996 0. 999 8 0. 044~ 0. 87
隐丹参酮 y= 1∋ 108 x- 451 774 0. 999 7 0. 05~ 1. 00
丹参酮∀ y = 3∋ 107 x + 4∋ 106 0. 999 7 0. 12~ 2. 40
丹参酮!A y = 7∋ 107 x - 7∋ 106 0. 999 6 0. 114~ 2. 28
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 精密度试验:取 2. 2项下混合对照品溶液连
续进样 5次, 所测二氢丹参酮 ∀、隐丹参酮、丹参酮
∀和丹参酮 !A 4 个组分的峰面积的 RSD 分别为
1. 40%、0. 97%、1. 13%、1. 27%。
2. 5. 2 重现性试验: 取同一丹参药材, 精密称取 5
份,按 2. 3项下制备方法处理, 进样分析, 测得样品
中二氢丹参酮 ∀、隐丹参酮、丹参酮 ∀和丹参酮
!A 质量分数的 RSD 分别为 1. 56%、0. 92%、
1. 82%、1. 43%。
2. 5. 3 稳定性试验:取同一供试品溶液在 0、2、4、8、
12、24 h进样,测得样品中二氢丹参酮∀、隐丹参酮、丹
参酮 ∀和丹参酮 !A 的 RSD分别为 1. 84%、1. 54%、
1. 43%、1. 88%,表明供试品在 24 h内稳定。
2. 5. 4 加样回收率试验:精密称取已测定的丹参样
品适量共 9份, 3份为一组,分别加入 3种不同浓度
(样品量的 80%、100%、120% )的混合对照品溶液,
按 2. 3项制备方法处理, 进样后计算回收率。二氢
丹参酮 ∀、隐丹参酮、丹参酮 ∀和丹参酮 !A 的平均
回收率分别为 99. 59%、100. 98%、100. 87%、
97. 95% ; RSD 分别为 1. 89%、1. 55%、2. 58%、
1. 94%。
2. 6 样品测定:取不同产地丹参药材,按 2. 3供试
品制备方法处理, 进样 20 L 分析,结果见表 2。
2. 7 脂溶性成分的相关性分析: 采用 SAS 统计软
件对 4种丹参脂溶性成分进行回归分析, 分别得到
4种脂溶性成分之间的回归模型,其预测值为:丹参
810 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
表 2 样品测定结果( n= 4)
Table 2 Determination of samples ( n= 4)
序号 产 地 二氢丹参酮∀ / % RSD/% 隐丹参酮/ % RSD/% 丹参酮∀ / % RSD/% 丹参酮!A /% RSD/%
1 安徽亳州十八里镇(栽培) 0. 012 1. 45 0. 034 2. 23 0. 033 2. 80 0. 186 0. 42
2 安徽亳州五马镇(栽培) 0. 025 1. 80 0. 035 0. 52 0. 073 0. 71 0. 229 0. 52
3 山东平邑流峪镇(栽培) 0. 052 2. 60 0. 126 0. 97 0. 124 0. 49 0. 362 0. 80
4 山东沂南砧埠乡(栽培) 0. 044 2. 33 0. 081 1. 66 0. 151 0. 61 0. 418 0. 91
5 山东日照三庄镇(栽培) 0. 067 1. 02 0. 160 2. 08 0. 171 1. 22 0. 433 0. 73
6 山东日照三庄镇(野生) 0. 111 0. 62 0. 194 0. 83 0. 206 0. 79 0. 514 0. 27
7 山东临朐吕匣镇(栽培) 0. 076 2. 88 0. 104 1. 36 0. 200 0. 42 0. 374 0. 65
8 山东莱芜苗山镇(栽培) 0. 053 2. 06 0. 154 0. 90 0. 190 1. 57 0. 528 0. 48
9 河南邓州十林镇(栽培) 0. 045 1. 99 0. 071 0. 81 0. 059 2. 32 0. 205 0. 97
10 河南栾川合峪镇(野生) 0. 079 1. 94 0. 114 0. 70 0. 218 0. 68 0. 549 0. 86
11 河南栾川合峪镇(栽培) 0. 041 1. 98 0. 084 0. 88 0. 097 1. 49 0. 261 0. 88
12 河南方城拐河镇(栽培) 0. 114 1. 33 0. 159 1. 43 0. 217 1. 33 0. 442 1. 71
13 河南卢氏朱阳关镇(野生) 0. 152 2. 32 0. 184 0. 54 0. 289 1. 18 0. 486 0. 41
14 河南灵宝阳平镇(栽培) 0. 048 2. 41 0. 050 1. 50 0. 107 2. 53 0. 259 0. 64
15 河南民权程庄镇(栽培) 0. 013 1. 96 0. 016 0. 83 0. 028 1. 56 0. 226 0. 34
16 四川中江古店乡(栽培) & & 0. 038 0. 66 0. 069 1. 05 0. 199 0. 68
17 四川中江集凤乡(栽培) 0. 055 2. 78 0. 234 0. 19 0. 147 0. 72 0. 440 0. 93
18 四川中江石泉乡(栽培) 0. 018 2. 48 0. 056 1. 31 0. 023 1. 81 0. 208 0. 92
19 四川中江石垭乡(栽培) & & 0. 031 1. 89 0. 017 1. 45 0. 197 0. 36
20 河北安国明官店乡(栽培) 0. 028 2. 49 0. 037 2. 02 0. 083 2. 02 0. 208 0. 34
21 河北行唐安香乡(栽培) 0. 074 2. 16 0. 080 1. 96 0. 046 2. 38 0. 212 0. 73
22 山西芮城东垆乡(栽培) 0. 058 2. 03 0. 083 0. 86 0. 039 2. 90 0. 200 0. 86
23 山西曲沃北董乡(栽培) 0. 024 2. 42 0. 041 1. 34 0. 097 1. 07 0. 215 1. 35
24 山西襄汾汾城镇(栽培) 0. 014 2. 48 0. 020 1. 71 0. 009 2. 07 0. 215 0. 87
25 陕西商洛元明村(栽培) 0. 027 1. 34 0. 057 1. 71 0. 071 1. 73 0. 199 0. 84
26 陕西蓝田玉山镇(栽培) 0. 091 1. 23 0. 118 1. 96 0. 170 0. 48 0. 355 0. 50
27 江苏射阳洋马镇(栽培) & & 0. 007 0. 52 0. 008 2. 57 0. 183 0. 57
28 江苏赣榆门河镇(栽培) 0. 057 2. 12 0. 087 1. 59 0. 090 1. 18 0. 216 0. 94
x ( s 0. 055 1 ( 0. 035 0. 087 7 ( 0. 059 67 0. 108 3( 0. 076 2 0. 304 2( 0. 102 4
& 表示未检出
& represent s not be det ected
酮 !A = 0. 132 80 + 1. 367 96 ∋ 丹参酮 ∀ +
0. 843 14 ∋隐丹参酮- 1. 028 35 ∋ 二氢丹参酮 ∀ ;
丹参酮 ∀ = - 0. 050 43- 0. 156 57 ∋ 隐丹参酮+
0. 416 28 ∋丹参酮 !A + 0. 930 46 ∋ 二氢丹参酮∀ ;
二氢丹参酮∀= 0. 021 20+ 0. 464 42 ∋丹参酮 ∀+
0. 287 99 ∋隐丹参酮- 0. 156 19 ∋ 丹参酮!A ; 隐丹
参酮 = - 0. 034 68 - 0. 214 05 ∋ 丹参酮 ∀ +
0. 350 75 ∋丹参酮 !A + 0. 788 78 ∋ 二氢丹参酮∀。
上式表明, 药材中丹参酮 !A 量与二氢丹参酮
∀量呈负相关, 丹参酮 ∀量与隐丹参酮呈负相关。
说明所测的 4种脂溶性成分在植物体内存在明显底
物和产物的转化关系。
2. 8 脂溶性成分与地理相关性:聚类分析是一种常
见的数据分析和探索方法, 用其可以判断样品或者
变量间的亲疏远近。因此, 本实验按产地进行了丹
参脂溶性成分的聚类分析, 具体分析方式如下: 用
SA S 统计软件中的 H ierarchical Cluster Analy sis
对上述 28个产地的丹参以 4 个脂溶性成分量之和
及丹参酮 !A 的量为变量进行聚类分析,所用聚类
方法为 Average linkage,结果见图 2。
图 2 不同产地丹参脂溶性成分的聚类分析
Fig. 2 Cluster analysis of liposoluble constituents in S
miltiorrhiza f rom diff erent habitats
由图 2可见, 根据脂溶性成分的量,可把样品分
为 2 组, 第 1 组包括 1、2、9、11、14、15、18、19、24、
27、16、20、23、25、21、22、28, 4个脂溶性成分质量分
数之和为 0. 198% ~ 0. 483% ,丹参酮 !A 质量分数
811中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月
为 0. 183% ~ 0. 226%; 主要包括河北、陕西、山西、
江苏、四川、河南。第 2 组包括 3、4、5、6、7、8、10、
12、13、26、17, 4 个脂溶性成分质量分数之和为
0. 664% ~ 1. 111%, 丹 参酮 !A 质量 分数 为
0. 355%~ 0. 549%; 主要包括山东和河南大部分产
地、四川中江集凤镇栽培药材和 3个野生药材,这与
山东、河南、四川中江被认为其道地产区一致, 但山
东、河南和四川中江的质量也存在差别。可见丹参
酮!A 质量分数与丹参中脂溶性成分量之和成正
比,所得结论与文献报道 [ 4]一致。
3 讨论
3. 1 文献报道 [ 12]丹参酮 !A 等脂溶性成分用甲醇
回流提取效果最佳。比较了 50%甲醇、75%甲醇、
100%甲醇回流提取,结果表明 100%甲醇回流提取
较好。还以 100%甲醇为提取溶剂, 比较了过夜超
声提取 45 min, 回流提取 1 h,索氏提取 5 h,结果表
明超声提取、回流提取和索氏提取无显著差异,由于
丹参酮!A 对热的不稳定性 [ 13] , 为了尽量避免加热
回流导致的成分破坏,故选用超声提取法。
3. 2 四川、河南、河北、山西、陕西、山东等地的家种
及野生丹参脂溶性成分测定结果,表明不同产地的
丹参药材的脂溶性成分量存在差异,山东各个产地
的药材比较接近,比其他省区的药材量要高; 而且同
一产地所产丹参药材、野生丹参药材中所测得成分
量比家种的要高。4种成分中丹参酮 ∀在各样品中
量差异较大,最大可达 30倍。根据本次测定全国各
产地样品结果, 建议二氢丹参酮∀ #0. 02%, 丹参酮
∀ #0. 03% , 隐丹参酮 #0. 02% , 丹参酮 !A #
0. 2% ;依据道地产区推断古代优质丹参的质量: 二
氢丹参酮 ∀ #0. 045% ,丹参酮 ∀ #0. 12%, 隐丹参
酮#0. 10%,丹参酮 !A #0. 35%。
3. 3 采用 SAS 统计软件统计分析, 可知药材中丹
参酮 !A 量与二氢丹参酮 ∀量呈负相关, 与隐丹参
酮、丹参酮 ∀量呈正相关。聚类分析结果表明 3 个
野生药材与山东和河南大部分产地、四川中江集凤
镇栽培药材聚为一类, 与历史上出现以河南、山东、
四川为道地产区相吻合, 这些产地的脂溶性成分较
高。不同产地的丹参药材质量存在明显差别,故在
临床用药时从药材的来源进行控制。
3. 4 本研究中采用平行采样和平行分析方法, 有效
降低了采样误差和测试分析误差, 保证了数据的质
量,有关研究将后续报道。
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812 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月