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Vol. 34，Issue 1
January，2009
第 34卷第 1期
2009年 1月
二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及
血清 VEGF，endostatin表达的影响
王淑美 1*，徐晓玉 2，张文亮 3，李 傲 4，董 伟 4
（1.重庆医科大学 中医药学院，重庆 401331；2.西南大学 药学与中医药学院，重庆 400715；
3.重庆医科大学 附属第一医院，重庆 400016；4.重庆医科大学 药学院，重庆 400016）
[摘要] 目的：探讨二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及血清血管内皮生长因子（VEGF）、内皮抑素（Endostatin）
表达的影响，从抗血管生成角度探讨二鳖散的抗癌作用。方法：采用Walker-256 癌肉瘤腹水接种Wistar大鼠制作肝癌模型，
随机分为二鳖散低、中、高剂量（1.25，2.5，5 g·kg-1·d-1）组、5-氟脲嘧啶 75 mg·kg-1组及模型组。于造模的第 9天开始灌胃，
每日 1 次，共 21 d。检测各组大鼠瘤重、肿瘤抑制率，ELISA法检测各组大鼠血清 VEGF，endostatin的表达，计算比较各
组 VEGF/endostatin的比值。结果：二鳖散中、高剂量组和 5-氟脲嘧啶组大鼠瘤重减轻，其血清 VEGF表达量降低，Endostatin
表达量升高，VEGF/endostatin比值降低，与模型组比较，差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论：二鳖散能抑制大鼠Walker-256
肝癌的生长，其机制可能与调控 VEGF/endostatin的失衡而抑制肿瘤血管生成有关。
[关键词] 二鳖散；Walker-256肝癌；血管内皮生长因子；内皮抑素
13二鳖散由鳖甲和土鳖虫两药组成。鳖甲滋育真
阴、柔肝散结，土鳖虫攻窜通络、破瘀散结，两药
从不同的角度发挥散结软肝之效。目前尚无对二鳖
配伍的实验研究。肿瘤的发生发展与血管生成有密
切关系。肝癌具有生长快、转移早和高死亡率的特
性，也是一种强的血管依赖性肿瘤。作为作用最强
的促进血管内皮生长因子（vascular endothelial
growth factor，VEGF）和抑制血管生成因子内皮抑
素（endostatin），二者的平衡在肝癌发病过程中起
重要作用
[1]
。本实验研究二鳖散对Walker-256 肝癌
大鼠肿瘤生长及其血清 VEGF，endostatin表达的影
响，以阐明二鳖散是否可以通过调节血管生成而发
挥对肝癌的治疗作用。
1 材料和方法
1.1 细胞株及动物 Walker-256 癌肉瘤细胞株，
购自南京中医药大学。清洁级 Wistar 大鼠，体重
200~250 g，50 只，雄性，由第三军医大学大坪医
院实验动物中心提供，动物合格证号 SCXK（渝）
20020003。

[收稿日期] 2008-05-10
[基金项目] 重庆市卫生局项目（200730）
[通信作者] *王淑美，Tel：（023）63684137，E-mail：Wangshumei968@
yahoo.com.cn
1.2 药物 二鳖散由醋鳖甲与土鳖虫配方颗粒剂
组成，三九医药股份有限公司生产，批号分别为
0504011，0507011。药物及其用量比例依据《金匮
要略·疟病脉证并治第四》所载鳖甲煎丸中二药的用
量分别为鳖甲十二分（炙）、 土鳖虫五分，而《中
国药典》2005年版规定临床用量鳖甲 9~24 g，土鳖
虫 3~9 g[2]，故鳖甲与土鳖虫的配伍比例定为 3∶1
制备成混悬液。5-氟脲嘧啶注射液(5-Fluorouracil，
5-FU )为天津市河北制药厂生产，批号 970277。
1.3 试剂及仪器 VEGF ELISA试剂盒（深圳晶美
生物工程有限公司，批号 190311）。Endostatin
ELISA试剂盒（美国 Rapidbio Lab. Calabasas，批
号 16030511。TECAN SPECTRA Ⅲ 自动酶标仪
（澳大利亚 TECAN公司）。
1.4 造模 参照文献[3]将传代生成癌性腹水大鼠的
腹水抽出，离心浓缩后，弃去上清液，制备癌细胞悬
液 (含瘤细胞 2×107 个/mL，存活率 99 %)。Wistar
大鼠以水合氯醛麻醉，仰卧位，固定于手术台上，常
规备皮，消毒，取上腹正中切口，暴露肝脏，注射癌
细胞悬液 0.1 mL于肝左叶被膜下，拔针后压迫穿刺
点，检查无渗血后关腹。术前术后各禁食 1 d。接种
第 8 天沿原切口切开观测肿瘤的生长情况，并取少许


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肿瘤组织作病理学检查。成模率 100%。
1.5 分组与给药 造模第 9天，大鼠随机分为模型
组、阳性药对照组及二鳖散低、中、高剂量 5组，
每组 10 只。分别给予二鳖散混悬液 1.25，2.5，5
g·kg-1·d-1灌胃，模型组予生理盐水每只 2 mL，均每
日 1次，连续 14 d。阳性对照组以 5-FU注射液按
75 mg·kg-1腹腔注射，每 3 d注射 1次，共给药 4次。
1.6 肿瘤生长的一般检测 给药 14 d 后，股动脉
取血，离心，取上清，-80 ℃保存备用。处死大鼠，
完整剥离肿瘤，称瘤重，计算肿瘤抑制率。
肿瘤抑制率（%）=（模型组瘤重-治疗组瘤重）/模型组
瘤重×100%。
1.7 血清 VEGF，endostatin 蛋白的表达 ELISA
双抗体夹心法测定血清 VEGF及 Endostatin浓度，
检测方法严格按试剂盒说明书进行。全自动酶标仪
测定吸光度值，VEGF 检测波长为 450 nm，
endostatin检测波长为 490 nm。绘制标准曲线，通
过标本的吸光度值在标准曲线上查出其对应浓度。
计算各组 VEGF/endostatin。
1.8 统计分析 采用统计软件 SPSS12.0 进行数据
分析。实验数据以 ±x s表示，计量资料采用单因素
方差分析，组间比较采用 Dunnett’s 检验。P＜0.05
为差异有显著性。
2 结果
2.1 二鳖散对大鼠 Walker-256 肝癌肿瘤生长的影
响 所有大鼠均生成肿瘤，实验过程中无死亡。试
验结果显示，用药 14 d后，二鳖散 2.5，5 g·kg-1·d-1
组及 5-FU组，瘤重较模型组显著降低（P＜0.05或
P<0.01)，见表 1。
表1 二鳖散对大鼠Walker-256肝癌移植瘤的
抑制作用（ ±x s，n=10）
组别 剂量/g·kg-1 瘤重/mg 抑制率/%
模型 - 2.15±0.45 -
5-FU 0.075 1.18±0.282) 45.20
二鳖散 1.25 2.03±0.57 5.47
2.5 1.72±0.401) 20.09
5 1.12±0.272) 47.95
注：①与模型组比较1)P＜0.05，2)P＜0.01；②5-FU为3 d给药1次（表
2同）。

2.2 二鳖散对大鼠血清 VEGF，endostatin 及其比
值的影响 二鳖散 2.5，5 g·kg-1·d-1组和 5-FU组治
疗后大鼠血清 VEGF 低于模型组，Endostatin 水平
高于模型组，VEGF/endostatin比值低于模型组(P＜
0.05或 P<0.01)。见表 2。
表 2 二鳖散对大鼠Walker-256肝癌移植瘤血清 VEGF,
Endostatin及其比值的影响（ ±x s，n=10）
组别
剂量
/g·kg-1
VEGF
/ng·L-1
endostatin
/ng·L-1
VEGF
/endostatin
模型 - 331.25±67.31 21.89±4.76 15.06±5.17
5-FU 0.075 171.16±43.952) 42.48±6.252) 4.03±0.952)
二鳖散 1.25 294.72±60.28 22.77±5.11 12.92±4.79
2.5 241.62±51.781) 29.23±6.101) 8.19±2.552)
5 185.21±39.402) 40.63±5.682) 4.45±1.132)

3 讨论
二鳖配伍首见于仲景经方鳖甲煎丸，鳖甲煎丸
治验癥瘕疟母流传千年，目前仍作为治疗肝纤维
化、肝硬化、肝癌的良方。瘀血是癌瘤癥瘕的基本
病机，瘀血久停，既易伤阴，又往往影响新血的生
成，故治癥积，仅仅活血化瘀则坚积难去，配用育
阴软坚方能标本兼顾。唐容川《血证论》对此认为
“不补血而祛瘀，瘀又安能尽去哉……补泻兼行，
瘀既去而正不伤”。鳖甲与土鳖虫一静一动、一柔
一刚，其配伍有相反相成之妙。鳖甲大补肝阴，得
土鳖虫之流动则补而不滞；土鳖虫峻破顽瘀，得鳖
甲之柔润则攻不伤正。
鳖甲性微寒、味咸，入肝、肾经，功能滋阴潜
阳，软坚散结，退热除蒸，故癥瘕、积聚、胁痛等
顽疾常用之。《药性本草》载：鳖甲主治瘕块痞瘕，
治肝积肥气有鳖积丸……以鳖甲为主治肿块，疗效
显著。土鳖虫性寒、味咸，有小毒，入肝经。具有
破瘀血，续筋骨之功效，且虫类药能入络行滞，亦
多用于癥瘕痞块、久病入络的治疗。
现代药理研究表明[4-6]，鳖甲含动物胶、角蛋白、
碘质、维生素 D等成分，具有抗肿瘤，抑制肝脾结
缔组织增生，提高血浆蛋白水平等作用。土鳖虫含
氨基酸、挥发油、脂肪酸、生物碱等化学成分，具
有抗凝血、抗缺氧、调节血脂、抗突变、抗肿瘤和
保护血管内皮细胞等药理作用。二者均有良好的抗
肿瘤药理作用。
新生血管的形成是肿瘤生长的关键，肝癌的血
管生成更是明显增强。血管生成受血管生成促进因
子和血管生成抑制因子的共同调控，VEGF 和
Endostatin 分别是目前已知的作用最强的血管生成
促进因子和抑制因子。两者在肿瘤生长、浸润、转


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移中的作用及手术前后的变化规律对肿瘤早期诊
断和预后判断具有重要的临床意义。肿瘤局部
Endostatin 的表达可抑制内皮细胞的增殖和迁移，
阻断肿瘤组织的血液供应，可有效诱导肿瘤细胞的
凋亡 [7-8] 。
本实验从抗血管生成这一新的角度探讨二鳖
散抗肝癌的作用机制，结果显示二鳖散能抑制大鼠
Walker-256肝癌的生长，使血清 VEGF表达量降低，
Endostatin表达量升高，VEGF/endostatin比值降低。
二 鳖 散 抗 肝 癌 的 机 制 可 能 与 其 调 控
VEGF/endostatin 的失衡而抑制肿瘤血管生成有
关。对二鳖配伍软肝散结的作用和意义值得进一步
深入研究。
[参考文献]
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系的研究进展[J]. 世界华人消化杂志，2007，15(6)：596.
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[3] Li Xin，Feng Gansheng，Zheng Chuansheng，et al. Influence of
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期胶原Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ影响的观察[J]. 中国中药杂志，2001，26
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[5] 陈 明，杨慧芳. 鳖甲煎丸联合大黄蛰虫丸抗肝纤维化的临床研
究[J]. 实用中西医结合临床，2006，6（2）：1.
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联合治疗移植型鼠肝癌的实验研究[J]. 中国肿瘤临床，2005，32
(16)：951.



Effects of Erbie San on Walker-256 liver cancer and adjustment to unbalance of
VEGF/endostatin in rats

WANG Shumei1*，XU Xiaoyu2，ZHANG Wenliang3，LI Ao4 ，DONG Wei4
（1. College of Traditional Chinese Medicine，Chongqing Medical University, Chongqing 401331, China;
2. College of Pharmacy and Traditional Chinese Medicine, Southwest University, Chongqing 400715, China;
3. Graduate Student of the First Affiliated Hospital，Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China;
4. Graduate Student of the College of Pharmacy，Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China）

[Abstract] Objective：To investigate the anticancer effects of erbie San on the rats bearing Walker-256 liver cancer and the
potential mechanism of its angiogenesis effects. Method：Wistar rats bearing Walker-256 liver cancer were used in this study. The
experimental groups were treated with Erbie San 1.25，2.5，5 g·kg-1·d-1， and 5-Fluorouracil injection 75 mg·kg-1, respectively. The
tumor’s weight, the expression of VEGF, Endostatin and the ratio of VEGF / endostatin in serum of each groups were observed.
Result：Compared to the model group , Erbie San 2.5, 5 g·kg-1·d-1 and 5-Fluorouracil injection groups can reduce the tumor’s weight
significantly（P<0.05 or P <0.01）. The expression of VEGF was reduced，while endostatin was increased, and the ratio of VEGF /
endostatin was reduced（P<0.05 or P<0.01）. Conclusion：Erbie San can effectively inhibit the growth of Walker-256 liver cancer of
rats and can inhibit the expression of VEGF but increase the expression of endostatin, which suggest that Erbie San has the inhibition
of angiogenesis which is responsible for its anticancer effects.
[Key words] Erbie San; Walker-256 liver cancer；VEGF；endostatin
[责任编辑 古云侠]