全 文 ：柳茶多糖对小鼠免疫功能的影响
段博文! 李运! 刘昕*! 杨永建!
,兰州大学 药学院! 甘肃 兰州 %)$$$$%*,兰州大学 基础医学院! 甘肃 兰州 %)$$$$#
$摘要%!目的&研究柳茶多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响) 方法&取正常昆明种小鼠 *$$ 只$雌雄各半$随机分为
组#空白对照组&模型组&柳茶多糖低剂量组!$ /D.ZDe&中剂量组!**$ /D.ZDe和高剂量组!&&$ /D.ZDe) 腹腔注
射环磷酰胺制备免疫低下的小鼠模型$测定柳茶多糖对小鼠免疫器官质量&小鼠迟发型变态反应!IRY的影响*血清溶血素
法测定体液免疫功能*碳粒廓清法测定非特异性免疫功能*脾淋巴细胞增殖试验测定细胞免疫功能) 结果&$ k&&$ /D.
ZD
e的柳茶多糖能显著提高免疫器官质量$提高IRY和促进其血清溶血素 SDF$SD9的含量$增强小鼠的碳粒廓清率$明显改
善免疫低下小鼠的脾淋巴细胞增殖反应) 结论&柳茶多糖能增加免疫低下小鼠的免疫器官质量$对非特异性免疫&迟发型变
态反应&体液免疫以及细胞免疫功能均有明显的促进作用)
$关键词%!柳茶*柳茶多糖*免疫功能
$稿件编号%!*$$7$7&$#
$基金项目 % ! 甘肃省科技支撑计划4社 会发展计划项目
!$($&;J<3*$
$通信作者%!!杨永建$教授$研究方向为药用植物资源开发与利
用$RMS#)77)&*(7$U4/BNS#5502SWT,MQT,-1
$作者简介%!段博文$硕士研究生$研究方向为药用植物资源开发
与利用$RMS#)77()77%$U4/BNS#QTB1\+2*#,-./
!!柳茶为藏族民间常用药$为蔷薇科鲜卑花属植
物窄叶鲜卑花 5%P%0.*. .)16&!.!. !>M?Q, YB1Q4
9BWW,及鲜卑花 5;-.*%1.!. ! `9B6N/,的枝叶及果
序!带果实的果枝$主要用于消食导滞&疏散风热*
藏药文献收载$主治热病和疫病+4*, ) 柳茶多糖免疫
调节作用的研究报道较少) 本研究从炮制后的柳茶
中提取水溶性多糖$并观察其对环磷酰胺免疫抑制
模型小鼠免疫功能的影响)
!材料和方法
U!药品&试剂与动物!柳茶采于甘肃省甘南藏族
自治州合作市郊当州草原$海拔 ) *$$ /) 经兰州大
学药学院生药学研究所杨永建教授鉴定) 柳茶多糖
由本实验室从炮制后的柳茶中依次用石油醚&乙醚
除去脂溶性杂质) 加 $ 倍量的水 7$ k$$ h提取
) 次$每次 ) ?$合并水提液$过滤) %$ h水浴减压浓
缩至适量$加入 倍量 7j乙醇纯析$静置过夜$离
心过滤$置真空冷冻干燥得柳茶多糖$按 8MdBD法脱
蛋白$减压浓缩$加 倍量的无水乙醇静止过夜$离
心收集沉淀$将沉淀依次用无水乙醇&丙酮&乙醚漂
洗 * 次$冷冻干燥得去蛋白多糖纯品+), ) F<498 分
析表明$柳茶多糖由核糖&甘露糖&葡萄糖&半乳糖等
组成+), ) 其中高剂量组每天灌胃 &&$ /D.ZDe$相
当于原药材 $ D.ZDe$低于最大耐受量!9RI和
半数致死量! I`
$
+&,
) 中&柳茶多糖低剂量组依次
减半$用时无菌生理盐水溶解)
环磷酰胺!山西德普药业有限公司$国药准字
Y&$*)#(#*刀豆蛋白!<.13$ 9RR$8ND/B公司*
小牛血清!杭州四季青生物工程公司*I98L!天津
化学试剂一厂*>E9:4#&$ 细胞培养基!F:G
.`
e
&链霉素 $$ /D.`e$加入 j灭活新生小牛
血清) 羊抗小鼠SDF!天津九鼎鑫试剂公司)
昆明种小鼠!*$ p* D$雌雄各半$兰州大学医
学动物实验中心提供*豚鼠由兰州大学医学动物实
验中心提供$取新鲜豚鼠血清$生理盐水 i$ 稀释$
作补体用*鸡红细胞!<>G<$抽取静脉血$按常规
方法制备+, *绵羊红细胞!8>G<均由本校实验动
物中心提供)
U!动物分组和给药方法!每个实验均取正常昆
明种小鼠 $ 只$先适应饲养 ) Q$然后随机分为
组#对照组&模型组&柳茶多糖低剂量组!$ /D.
ZD
e
&中剂量组!**$ /D.ZDe和高剂量组!&&$
/D.ZD
e
$每组 $ 只) 每天灌胃给药 次$对照
组和模型组用等体积的 $g7j生理盐水灌胃$连续
$ Q*第 天观察各项指标) 其中除对照组外其余
& 组分别于给药第 * 天后腹腔注射 % /D.ZDe新
配制的环磷酰胺$连续 ) Q$制备免疫功能低下的小
.##&.
第 ) 卷第 期
*$$ 年 # 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
[.Sg)$ :OOTM!
VT1M$ *$$
鼠模型+4#, )
U&!碳粒廓清法测定非特异性免疫功能!第 天
末次给药 )$ /N1 后$ 尾静脉注射印度墨汁
$g$$ k$g$ /`.D
e
!墨汁先用生理盐水稀释 $
倍$注射后于 $ /N1 分别眼眶取血 *$
$`溶于
$gj ;B
*
* /` 试管中摇匀$于 #$$ 1/处测其
吸光度4$计算碳粒廓清指数R和吞噬指数
&
+,
)
U_!免疫器官质量的测定!末次给药后的次日$眼
眶放血处死$用电子天平精确称取小鼠体质量&胸腺
质量&脾脏质量) 按文献方法计算小鼠的胸腺指数
和脾脏指数+, )
U$!对免疫力低下小鼠脾细胞免疫功能的影响!
上述各组小鼠的脾脏在称取质量后$按常规方法制
成脾细胞悬液! m$%个=/` +#, ) 混匀后取 $$
加`到 7# 孔培养板中! m$#个=孔$加入终浓度
为 D.`e的<.13$于 )% h$j
培养箱中培养
&( ?后) 轻轻吸弃上清$每孔加入 $
`9RR溶液
! D.`
e
$再继续培养 * ?) 取出培养板$
* $$$ C./N1
e离心 /N1$弃上清液$每孔加入
I98L$$
$`振荡 )$ O$在 %$ 1/处用酶标仪进
行比色分析+#, )
U)!血清溶血素法测定免疫低下小鼠体液免疫功
能!分组给药同 U$每只小鼠腹腔注射 *$j 8>G<
$g* /` ) 检测 :DF时$需于致敏后 % Q 用同样的
8>G<再次免疫动物) 末次给药 ? 后眼眶取血制
备血清$按文献方法测定血清溶血素含量+#, )
U%!免疫功能低下小鼠迟发型变态反应!IRY!
分组给药同 U$用 j<>G<悬液致敏小鼠$致敏
后 ) Q$对每只小鼠左足趾部皮下注射 *$j<>G<悬
液 )$
*`分别于 )$*& ? 后$用千分尺测量左&右垫
厚度$之差为肿胀程度)
U`!统计方法!所有数据均采用 8E88g$ 软件进
行统计分析$计量资料采用
#
?p&表示$组间比较采
用!检验)
!结果
U!碳粒廓清法测定非特异性免疫功能!模型组
小鼠廓清指数 R和吞噬指数
&
比对照组明显降低
!>o$g$$柳茶多糖组明显升高!>o$g$$柳茶
多糖组 R随剂量的增加而升高***$$&&$ /D.ZDe
治疗组能够完全对抗环磷酰胺引起的 R降低的影
响!>o$g$) 说明柳茶多糖能够促进非特异性免
疫功能$见表 )
表 !柳茶多糖对小鼠廓清指数和吞噬指数的
影响!
#
?p&$)f$
组别
剂量=
/D.ZD
e
R
&
对照!! e $g$*# ( p$g$$7 % &g%)( 7 p$g(
模型!! e
$g$) #) p$g$$& &
&g*$* % p$g&$ 7
柳茶多糖 &&$
$g$&7 *& p$g$
&
#g%) $ p$g*) &
&
**$
$g$)( #( p$g$)
&
g& #) p$g&7& %
&
$
$g$( 7 p$g$$% )
)
g$$7 * p$g&%(
)
!!注#与对照组比较>o$g$$*>o$g$*与模型组比较)>o
$g$$
&
>o$g$!表 * k 同)
U!免疫器官质量的测定!模型组胸腺指数和脾
脏指数均比对照组低!>o$g$) 与模型组比较$
柳茶多糖中&高剂量组均能明显增加小鼠胸腺指数
和脾脏指数!>o$g$$见表 *)
表 *!柳茶多糖对小鼠免疫器官指数的
影响!
#
?p&$)f$
组别
剂量
=/D.ZD
e
胸腺指数
=/D.D
e
脾脏指数
=/D.D
e
对照!! e )g**# $ p$g#7 %$ #g)* $ p$g#7 (
模型!! e
g$$7 $ p$g)7 *
*
)g() $ p$g %
*
柳茶多糖 &&$
)g& $ p$g#$ ($
&
g77 $ p$g#(% %*
&
**$
*g#&7 $ p$g#&* #*
&
g))) $ p$g#) #
&
$ *g&$ $ p$g#*$ % &g$%& $ p$g#$ (*
U&!对免疫力低下小鼠细胞免疫功能的影响!模
型组脾淋巴细胞增殖明显低于对照组!>o$g$$
柳茶多糖组脾细胞增殖明显高于模型组 !>o
$g$$&&$ /D.ZD
e治疗组能完全对抗环磷酰胺引
起的免疫功能低下!>o$g$$并且与对照组相比
高剂量组能显著提高脾淋巴细胞增殖反应) 说明炮
制后的柳茶$其多糖对免疫低下小鼠细胞免疫功能
的影响显著增强$见表 ))
表 )!柳茶多糖对免疫力低下小鼠脾细胞增殖的
影响!
#
?p&$)f$
组别 剂量=/D.ZDe 4
%$
对照!! e $g*$7 *$ p$g$% #*&
模型!! e
$g() %$ p$g$$7 **
*
柳茶多糖 &&$
$g)# 7$ p$g$ $&$
)
**$
$g*)* &$ p$g$)% #)7
&
$
$g*$ &$ p$g$* ()&
&
U_!血清溶血素法测定免疫低下小鼠体液免疫功
能!对于 8>G<致敏的小鼠血清溶血素 SD9$SDF含
.%#&.
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VT1M$ *$$
量$模型组明显低于正常组!>o$g$*柳茶多糖在
&&$ /D.ZD
e剂量时$血清溶血素含量略高于模型
组!>o$g$$说明高剂量柳茶多糖对免疫低下小
鼠体液免疫功能有一定的增强作用$见表 &)
表 &!柳茶多糖对免疫力低下小鼠体液免疫功能
的影响!
#
?p&$)f$
组别
剂量=
/D.ZD
e
SD9 SDF
对照!! e &g7 p&%g# $&g( p7g
模型!! e
*$)g% p&(g*
*
#)g) p(g#
柳茶多糖 &&$
*g# p&g#
)
77g7 p)g
)
**$ 7)g# p&)g7 #$g& p#g7
$ #%g p&g7 &g# p$g
U$!免疫功能低下小鼠迟发型变态反应!IRY!
模型组与对照组比较$在<>G<攻击后 )$*& ? 后小
鼠出现的肿胀反应减弱!>o$g$$说明制造免疫
功能低下模型成功*柳茶多糖高剂量组能显著的增
强<>G<攻击后 ) ? 小鼠出现的肿胀反应 !>o
$g$$使<5引起的抑制反应趋于恢复正常*柳茶
多糖高&中剂量也能增强<>G<攻击后 *& ? 小鼠出
现的肿胀反应!>o$g$$使<5引起的抑制反应减
弱) 说明柳茶多糖可增强小鼠的体液免疫和细胞免
疫反应能力$见表 )
&!讨论
单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性
表 !柳茶多糖对免疫功能低下小鼠迟发型变态反应!IRY的影响!?p&$)f$
组别 剂量=/D.ZDe *& ?厚度差=// ) ?厚度差=//
对照!! e $g(7 7* p$g** 7%% g#7( ( p$g7$ )%7
模型!! e
$g& * p$g)( )%
*
$g7% )( p$g)$ *&
*
柳茶多糖 &&$
$g%*7 $$ p$g*%( &7
)
g&$( 7$ p$g$ *#)
&
**$
$g(*$ $ p$g%7 *#(
)
$g7($ &$ p$g**7 *)
$ $g&( $7 p$g&$ *%& $g(( $$ p$g*$ (#%
免疫功能的重要指标之一+%, ) 巨噬细胞碳粒廓清
指数R和吞噬指数
&
的大小可以反映内皮网状系
统吞噬功能的强弱$当细菌&异物等抗原性物质进入
机体后$可迅速被单核巨噬系统吞噬和清除) 实验
结果显示柳茶多糖对免疫功能低下小鼠的碳粒廓清
指数R和吞噬指数
&
都有所提高$说明柳茶多糖能
够促进非特异性免疫功能) 免疫器官的脏器系数是
衡量机体免疫功能的初步指标$也是衡量机体非特
异性免疫功能的指标之一$炮制后的柳茶多糖在中&
高剂量时能对抗环磷酰胺引起的脾脏&胸腺萎缩)
血清溶血素Y
存在循环抗体 SD9和 SDF$抗体与 8>G<$在体外补
体的参与下产生溶血反应$用分光光度计测定溶血
程度来反应抗体水平) 实验结果显示高剂量柳茶多
糖对免疫低下小鼠体液免疫功能有一定的增强作
用*脾淋巴细胞增殖反应可以作为机体细胞免疫功
能的指标之一$在实验中$高&中剂量炮制后的柳茶
多糖均能明显提高免疫低下小鼠细胞免疫功能)
一般认为在<>G<诱导的 IRY模型中$攻击 )
?后!是由特异性抗体介导的反应和 *& ? 后!是 R
细胞介导的反应$分别反应了体液免疫和细胞免
疫反应的状况+(, $本实验中$柳茶多糖高&中剂量显
著地增强 <>G<攻击后 )$*& ? 小鼠出现的肿胀反
应$使
力) 本研究结果显示炮制后的柳茶多糖有较好的免
疫增强作用$其研究结果为深层次的开发利用藏药
柳茶资源提供了科学依据)
$参考文献%
+,!甘肃省卫生局,甘肃中草药手册+9,,兰州#甘肃人民出版社$
7%)#&,
+*,!中国科学院植物研究所,中国高等植物图鉴+9,,北京#科学
出版社$7(#(#,
+),!石磊$张冬梅$齐洁$等,柳茶多糖的分离纯化及气相色谱4质谱
分析+V,,时针国医国药$*$$7$*$!7#*7,
+&,!杨永建$张正晶,鲜卑花属植物的用途+E,,<;#$$*%7<$
*$$74(4*,
+,!李仪奎,中药药理实验方法学+9,,上海#上海科学技术出版
社$77#%,
+#,!徐叔云,药理实验方法学+9,,北京#人民卫生出版社$*$$,
+%,!龚非力,医学免疫学+9,,北京#科学出版社医学出版分社$
*$$&#%,
+(,!RN@TO>F$ /TCN1MQMSB5MQ @5AM?5AMCOM1ON@NdN@5@.AC.@MN1OS+V,,V://T1.S
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$责任编辑!张宁宁%
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