全 文 ：人参三七川芎提取物延缓内皮细胞复制性衰老
的机制研究
杨静１，雷燕１，崔巍２，方素萍３，陈可冀１
（１．中国中医科学院 西苑医院，北京 １０００９１；
２．北京中医药大学 东直门医院，北京 １００７００；
３．中国中医科学院 广安门医院，北京 １０００５３）
［摘要］ 目的：探讨人参三七川芎提取物对内皮细胞复制性衰老（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ，ＨＵＶＥＣｓ）的影
响。方法：体外培养的ＨＵＶＥＣ２Ｃ传代至第８代，造成内皮细胞复制性衰老模型。细胞分为４组，８代衰老模型组、维生素 Ｅ
（ＶｉｔＥ）组（５０ｍｇ·Ｌ－１）、中药高、低 （５０，２０ｍｇ·Ｌ－１）剂量组，采用衰老相关β半乳糖苷酶（ＳＡβｇａｌ）染色法观察细胞衰老
改变，流式细胞仪分析细胞周期，激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧（ＲＯＳ）含量，硝酸还原酶法检测培养液一氧化氮（ＮＯ）
和抗超氧阴离子水平，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测各组细胞ＡｎｇⅡ １型和２型受体（ＡＴ１Ｒ和ＡＴ２Ｒ），ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶ｐ４７ｐｈｏｘ的
蛋白表达。结果：８代衰老模型组βｇａｌ染色阳性细胞数明显增多，细胞停滞在Ｇ０／Ｇ１期，激光共聚焦显微镜下ＲＯＳ荧光强度
明显增强，培养液中抗超氧阴离子、ＮＯ含量减少，ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ蛋白表达上调。给予高、低剂量中药处理后，可明显改
善细胞的衰老状态，βｇａｌ染色阳性细胞数减少，Ｇ０／Ｇ１期细胞减少，Ｇ２／Ｍ期细胞增加，ＲＯＳ荧光强度减弱，抗超氧阴离子、ＮＯ
含量较８代衰老模型组增加，ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ蛋白表达下调，差异均有统计学意义（均Ｐ＜００５）。结论：人参三七川芎提
取物能够延缓内皮细胞复制性衰老，通过活性氧途径下调 ＮＡＤＰＨ氧化酶 ｐ４７ｐｈｏｘ的表达，最终使 ＲＯＳ产生减少；同时，中药
提取物还能降低衰老内皮细胞ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ的表达，改善内皮功能，这可能是益气活血中药延缓内皮细胞衰老的主要原因之一。
［关键词］ 人参三七川芎提取物；ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶；细胞复制性衰老；ＲＯＳ
［收稿日期］ ２００８１１２８
［基金项目］ 国家重点基础研究发展计划（９７３）项目（２００７ＣＢ５０７４
０６）
［通信作者］ 雷燕，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１３９４８，Ｅｍａｉｌ：ｌｅｉｙ９９９＠１６３．ｃｏｍ
我国已进入老龄化社会，因而研究和防治与增
龄有关的疾病，有效延缓衰老的进程已成为社会需
求。研究发现，衰老是造成心血管疾病相关发病率
和死亡率增高的主要独立危险因素之一［１］，并且
心血管疾病中存在明显的血管老化表现，如内皮细
胞功能的紊乱和衰老。人参三七川芎属于中药益气
活血药范畴，中医学认为其有 “延年不老”的功
效。现代药理学研究显示，３种药物的有效成分与
抗衰老作用密切相关［２４］。因此，本实验以内皮细
胞复制性衰老为衰老模型，观察人参三七川芎提取
物能否延缓内皮细胞的复制性衰老，为研究益气活
血中药延缓血管老化作用做初步探讨。
１ 材料
１．１ 药物制备 人参Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ，产自吉林抚松
镇；三七Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ，产自云南；川芎 Ｌｉｇｕｓｔｉｃ
ｕｍｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ，产自四川，经中国中医科学院中药研
究所黄璐琦研究员鉴定均符合《中国药典》２００５年
版标准。人参三七川芎提取物为醇提物，由中国中
医科学院中药研究所提供（实验用药加入３倍７０％
乙醇提取３次，每次２ｈ，滤过，弃药渣，将醇提取液
进行乙醇回收，浓缩至无醇味，制成中药浸膏），生
药含量３１６４ｇ·ｇ－１浸膏；ＶｉｔＥ购自Ｓｉｇｍａ公司，批
号０８５Ｋ１５８４。
１．２ 细胞及试剂 脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ２Ｃ，
美国 ＣａｓｃａｄｅＢｉｏｌｏｇｉｃｓ公司，ｃａｔＮｏ：Ｃ０２３５Ｃ，Ｌｏｔ
Ｎｏ：４Ｃ０２１８）；培养基Ｍｅｄｉｕｍ２００（美国ＣａｓｃａｄｅＢｉ
ｏｌｏｇｉｃｓ公司，ｃａｔＭ２００ＰＲＦ５００；Ｌｏｔ０６１１１５９０２）；低
血清生长因子补充物（美国 ＣａｓｃａｄｅＢｉｏｌｏｇｉｃｓ公司，
ｃａｔＳ００３１０，Ｌｏｔ０６１１２１９０１）；荧光探针 ７′Ｄｉｃｈｌｏ
ｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅＤＣＦＤＡ（美国 Ｓｉｇｍａ公司，批号
０７７Ｋ４０３７）；细胞衰老测定试剂盒（上海杰美基因医
药科技有限公司，ｃａｔＮｏ：ＧＭＳ１００１２１，ＬｏｔＮｏ：１１
５２８１８１２）；二甲基亚砜（ＤＭＳＯ，批号Ｔ２００８０８１４，上
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海诺泰化工有限公司）；ＮＯ试剂盒（南京建成生物
工程研究所，批号２００７１１１７）、抗超氧阴离子自由基
及产生超氧阴离子自由基测试盒（南京建成生物工
程研究所，批号２００７１２１８）；ＡＴ１Ｒ多克隆抗体（武汉
博士德公司，货号 ＢＡ０５８２）、ＡＴ２Ｒ多克隆抗体（武
汉博士德公司，货号 ＢＡ０５８３）；ｐ４７ｐｈｏｘ多克隆抗体
（美国Ｓａｎｔａｃｒｕｚ公司，货号ｓｃ１７８４４）。
１．３ 器材 ＴＣＳＳＰ２激光扫描共聚焦显微镜（Ｌｅｉ
ｃａ，德国）；ＭＣＯ２０ＡＩＣ型恒温ＣＯ２培养箱（Ｓａｎｙｏ，日
本）；ＣＫ２型倒置相差显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳ，日本）；
ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ型流式细胞仪，（ＢＤ，美国）；ＳＩＡＦＲＴ
ＳＹＮＥＲＧＹＨＴ型酶标仪（ＢＩＯＴＥＫ，美国）。
２ 方法
２．１ 分组 细胞分为４组：８代衰老模型组（完全
培养基Ｍ２００＋ＬＳＧＳ）；人参三七川芎高、低剂量组
（５０，２０ｍｇ·Ｌ－１）；ＶｉｔＥ组（５０ｍｇ·Ｌ－１）。人参三
七川芎提取物所采用的剂量是根据噻唑蓝（ＭＴＴ）
法实验筛选出的最佳有效作用浓度；ＶｉｔＥ组 ＶｉｔＥ
中加入体积分数为 ２‰ＤＭＳＯ助溶，其余各组加入
相同剂量ＤＭＳＯ，达到同期对照的目的。
２．２ 细胞培养 参照内皮细胞培养方法［５］进行细
胞传代，５代始细胞贴壁后，各用药组随每次换液
加入相应药物浓度，２ｄ换液１次，持续刺激，传
至第８代，待各组细胞铺满瓶底８０％左右，用质
量分数０２５％的胰酶消化，４℃，１５００ｒ·ｍｉｎ－１
离心收集。
２．３ ８代复制性衰老内皮细胞的判定 将 ２代
ＨＵＶＥＣ２Ｃ和８代ＨＵＶＥＣ２Ｃ从细胞形态学、ＳＡβ
ｇａｌ染色和细胞周期三方面进行比较，判断８代内皮
细胞衰老状况。
２．４ 衰老细胞鉴定 衰老相关 β半乳糖苷酶（ＳＡ
βｇａｌ）是１种可鉴定衰老细胞的生物学标志物［６］，
按照细胞衰老测定试剂盒说明检测，观察并计数显
微镜下胞浆内有蓝色细胞的百分数，判断细胞衰老
的情况。
２．５ 细胞周期分析 每组细胞以０２５％胰蛋白酶
消化、收集细胞，用预冷的 ＰＢＳ洗涤２次，调整细
胞数至１×１０６个／ｍＬ，逐滴加入预冷的７０％乙醇固
定，４℃过夜。次日，离心，ＰＢＳ洗涤，用含有２０ｇ·
Ｌ－１ＲＮａｓｅＡ酶的５０ｍｇ·Ｌ－１的碘化丙啶（ＰＩ）染液
避光染３０ｍｉｎ，３００目筛网过滤细胞后，流式细胞
仪检测。应用ＣｅｌＱｕｅｓｔＰｒｏ软件获取至少２万个细
胞的荧光２（ＦＬ２Ａ）直方图，通过 ＭｏｄｉＦｉｔ软件分
析细胞周期分布。
２．６ 细胞内 ＲＯＳ含量 以５×１０４个／孔细胞接种
于６孔培养板，加入１ｍＬ预温至３７℃的１０μｍｏｌ·
Ｌ－１ＤＣＦＤＡ工作液，轻轻混匀。３７℃孵育３０ｍｉｎ，
无血清培养基清洗２次，激光共聚焦显微镜观察结
果。ＲＯＳ特异性荧光探针 ＤＣＦＤＡ临用前用无血清
培养基稀释成１０μｍｏｌ·Ｌ－１的溶液。蓝光激发，激
发波长４８８ｎｍ、发射波长５２５ｎｍ。
２．７ 抗超氧阴离子自由基含量测定 检测细胞培
养液内抗超氧阴离子自由基活力的含量，间接反映
细胞内Ｏ２－的情况，操作依据试剂盒说明进行。
２．８ ＮＯ含量测定 内皮损伤时ＮＯ合成减少或生
物活性降低［７］，通过检测细胞培养液中ＮＯ含量，可
间接反映内皮细胞的衰老情况。采用硝酸还原酶
法，按照ＮＯ试剂盒说明操作。
２．９ 细胞 ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶 ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２
Ｒ蛋白表达 采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测方法。ＲＩＰＡｂｕｆ
ｅｒ裂解液提取总蛋白，考马斯亮蓝法测蛋白含量，
调整蛋白浓度，煮沸变性５ｍｉｎ，１２５％ＳＤＳＰＡＧＥ
电泳后半干转印仪转膜，５％脱脂奶粉的 ＴＢＳＴ
（００５％的聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯）封闭 １
ｈ，１∶３００稀释的一抗４℃孵育过夜，辣根过氧化物
酶标记的二抗孵育１５ｈ，Ｏｄｙｓｓｅｙ荧光扫描，βａｃｔｉｎ
为内对照。
２．１０ 统计学方法 采用ＳＰＳＳ１３０软件进行统计
处理，观察指标以 珋ｘ±ｓ表示，采用单因素方差分
析，Ｐ＜００５为差异有显著性。
３ 结果
３．１ ８代复制性衰老内皮细胞的判定 预实验中
通过细胞形态学观察到，２代内皮细胞胞体呈多角
形，相互嵌合，胞浆清澈透明，细胞轮廓不清晰，呈
单层铺路石状排列；８代内皮细胞大小不均，形状混
浊，胞体轮廓变清晰，体积增大，生长缓慢，排列稀
疏，难于形成单层细胞。ＳＡβｇａｌ染色显示，２代内
皮细胞基本不表达蓝染细胞，８代内皮细胞组表达
βｇａｌ蓝染细胞较多（Ｐ＜００５），约７８３３％。细胞
周期研究显示，２代内皮细胞 Ｓ期细胞比例较高，
Ｇ０／Ｇ１期细胞比例较低，Ｇ２／Ｍ期细胞活跃；８代内皮
细胞与２代细胞相比，Ｇ１期进入 Ｓ期的细胞比例明
显降低，Ｇ２／Ｍ期细胞明显减少，差异有统计学意义
（Ｐ＜００５）。表明８代内皮细胞已属于复制性衰老
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细胞，可用于细胞衰老的相关实验研究。
３．２ ＳＡβｇａｌ细胞衰老测定 βｇａｌ染色显示，Ｖｉｔ
Ｅ组蓝染阳性细胞数约３９００％ ；８代衰老模型组
表达βｇａｌ蓝染细胞较多（Ｐ＜００５），约７８３３％；中
药高、低剂量组阳性细胞数分别为 ４９３３％，
４４６７％，较８代衰老模型组明显减少，差异有统计
学意义（均Ｐ＜００５）。
３．３ 细胞周期分析 流式细胞仪分析表明，与ＶｉｔＥ
组比较，８代衰老模型组细胞周期向Ｇ０／Ｇ１期明显停
顿，Ｇ２／Ｍ期细胞明显减少；与８代衰老模型组比较，
中药高、低剂量组及ＶｉｔＥ组Ｇ０／Ｇ１期细胞明显减少，
处于Ｇ２／Ｍ期的细胞明显增多，差异有统计学意义
（Ｐ＜００５）；但与ＶｉｔＥ组比较，中药高、低剂量组Ｇ０／
Ｇ１期细胞增多，Ｇ２／Ｍ期细胞减少（Ｐ＜００５）；这表明
随传代进行，人参三七川芎提取物高、低剂量组在一
定程度上能够延缓细胞的衰老（表１）。
表１ 人参三七川芎提取物对各组细胞周期影响分析（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
分组 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ｇ０／Ｇ１／％ Ｇ２／Ｍ／％ Ｓ／％
衰老模型 － ５４１６±０２３１） ３５９７±１１８１） ９８６±０９６
中药提取物 ５０ ３３９７±０１３１，２） ５９８３±０８２１，２） ６１９±０７０
２０ ２９６４±１０４１，２） ６４２５±０２２１，２） ６１１±０８６
ＶｉｔＥ ５０ １６６２±０３４２） ７８８８±０１２２） ４５０±０３４
注：与ＶｉｔＥ组相比１）Ｐ＜００５；与衰老模型组相比２）Ｐ＜００５（表２，３同）。
３．４ 细胞内 ＲＯＳ含量测定 ＤＣＦＤＡ是 ＲＯＳ特异
性荧光探针，通过激光共聚焦显微镜发射发射光和
激发光，使细胞内活性氧呈现绿色荧光。８代衰老
模型组细胞所发荧光强度强，与８代衰老模型组比
较，中药高、低剂量组和 ＶｉｔＥ组的荧光强度明显减
弱，差异有统计学意义（Ｐ＜００５），但中药２个剂量
组荧光强度比ＶｉｔＥ组稍强（图１）。
３．５ 抗超氧阴离子与ＮＯ含量测定 与各用药组
Ｍ．８代衰老模型组；Ｅ．ＶｉｔＥ５０ｍｇ·Ｌ－１组；Ｈ．中药５０ｍｇ·Ｌ－１组；Ｌ．中药２０ｍｇ·Ｌ－１组。
图１ 人参三七川芎提取物对细胞内ＲＯＳ含量影响（×１００）
比较，８代衰老模型组培养液内的抗超氧阴离子和
ＮＯ含量明显减少（Ｐ＜００５）；中药高、低剂量组培
养液内的抗超氧阴离子和ＮＯ含量比衰老组明显增
加，但较 ＶｉｔＥ组含量降低，差异有统计学意义（均
Ｐ＜００５）。提示８代衰老内皮细胞产生的超氧阴离
子（Ｏ２－）相对增多，而人参三七川芎提取物高、低剂
量组能在一定程度上改善内皮的功能，增强抗氧化
能力，从而延缓细胞衰老（表２）。
３．６ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果 与８代衰老模型组比较，
中药高、低剂量组与 ＶｉｔＥ组 ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ
表达明显下调，差异有统计学意义（均Ｐ＜００５）；与
ＶｉｔＥ组比较，中药高、低剂量组ｐ４７ｐｈｏｘ和ＡＴ２Ｒ表
达上调（Ｐ＜００５），ＡＴ１Ｒ表达仅有上调趋势，差异
表２ 人参三七川芎提取物对细胞培养液抗超氧阴离子
与ＮＯ含量的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝４）
分组
剂量
／ｍｇ·Ｌ－１
抗超氧阴离子
／Ｕ·Ｌ－１
ＮＯ
／μｍｏｌ·Ｌ－１
衰老模型 － ８０７１±０３１１） ８１４±０４４１）
中药提取物 ５０ ８８７３±０３３１，２） １２１９±０３５１，２）
２０ ９１００±０３７１，２） １３６２±１１７１，２）
ＶｉｔＥ ５０ ９６５３±１０９２） １８１２±０３７２）
无统计学意义（表３）。
４ 讨论
本实验在人参、三七、川芎提取物延缓小鼠血管
老化整体实验进行的基础上，通过观察人参、三七、
川芎提取物对内皮细胞衰老的影响，进一步研究益
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表３ 人参三七川芎提取物对细胞ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ蛋白表达的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
分组 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ｐ４７ｐｈｏｘ ＡＴ１Ｒ ＡＴ２Ｒ
衰老模型 － ０４９８±０００６１） ０４６１±０００７１） ０５６６±０００１１）
中药提取物 ５０ ０４８２±０００４１，２） ０３５０±００１６２） ０４６７±０００５１，２）
２０ ０４６２±０００１１，２） ０３２４±０００５２） ０４６０±０００４１，２）
ＶｉｔＥ ５０ ０３８７±０００６２） ０３０３±０００３２） ０３９２±０００２２）
气活血中药是否具有延缓血管老化的作用。
ＲＯＳ学说是目前较公认的衰老假说。随增龄
活性氧产生增加，氧化损伤产物在细胞内积聚，最终
导致细胞功能失调和衰老［８］。研究表明，老年内皮
功能紊乱是由于 ＲＯＳ与内生保护抗氧化剂之间的
失衡造成的，而ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶是血管壁内皮细
胞ＲＯＳ的主要来源［９］，其中ｐ４７ｐｈｏｘ是ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
氧化酶活性必需的亚单位。ＲＯＳ参与血管损伤过
程中许多细胞信号转导，可引起内皮细胞衰老。本
研究在前期预实验的基础上，结合相关文献的研究
方法［１０］，从细胞形态学、β半乳糖染色和细胞周期
三方面进行分析，确定以８代 ＨＵＶＥＣ２Ｃ为复制性
衰老细胞模型，观察中药提取物能否从活性氧途径
延缓内皮细胞衰老。
实验中首先观察到，８代衰老内皮细胞 β半乳
糖染色阳性细胞显著增加，应用高、低剂量中药和
ＶｉｔＥ处理后，阳性细胞数明显减少。观察细胞内活
性氧发现，中药高、低剂量组细胞 ＲＯＳ所发荧光强
度明显低于８代衰老模型组，比 ＶｉｔＥ组稍强，提示
中药提取物能降低衰老内皮细胞 ＲＯＳ的合成。细
胞周期研究中发现，应用中药干预后的细胞，Ｇ０／Ｇ１
期细胞显著降低，Ｇ２／Ｍ期的细胞明显增加，表明中
药能够使处于休眠静止期的细胞重新活跃，进入增
殖期，在一定程度上延缓了细胞的衰老。ＮＯ能抑
制炎细胞的浸润，减少氧自由基生成，加速氧自由
基灭活［７］，对细胞培养液 ＮＯ和抗超氧阴离子的检
测发现，８代衰老模型组 ＮＯ含量、抗超氧阴离子活
力降低，在应用中药培养后 ＮＯ含量和抗超氧阴离
子活力显著上升，间接证明了给予中药后的细胞氧
自由基生成减少，扩血管物质生成增加，减少了内皮
的损伤，延缓细胞的衰老。
进一步观 察 益 气 活 血 中 药 对 衰 老 细 胞
ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ显示，８代衰老内皮细胞
ｐ４７ｐｈｏｘ的蛋白表达上调，中药高、低剂量组降低衰
老细胞ｐ４７ｐｈｏｘ的表达，低剂量组比高剂量组下调
更明显；内皮细胞可释放内皮源性收缩因子如 Ａｎｇ
Ⅱ，当内皮功能受损时，ＡｎｇⅡ合成和释放增加，可
引起血管紧张度增加、血小板聚集、白细胞黏附和血
栓形成等［１１１２］。本实验通过观察 ＡｎｇⅡ受体 ＡＴ１Ｒ
和ＡＴ２Ｒ发现，８代衰老内皮细胞 ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ含量
明显增高，表明衰老内皮细胞ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ表达相对
较多。各用药组与衰老组比较，ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ表达均
显著减少，提示益气活血中药与 ＶｉｔＥ可能影响内
皮源性收缩因子 ＡｎｇⅡ的释放，改善内皮功能。研
究报道，ＡＴ２Ｒ具有促凋亡、抑增殖的作用
［１３］，而外
源性ＡｎｇⅡ可通过 ＡＴ１Ｒ途径经由 ＮＡＤＰＨ氧化酶
刺激活性氧增加，引起内皮细胞衰老［１４］，对于本实
验中用药后内皮细胞释放的 ＡｎｇⅡ引起的 ＡＴ１Ｒ的
改变是否与ＮＡＤＰＨ氧化酶亚单位 ｐ４７ｐｈｏｘ的降低
存在直接关系，还需进一步研究。以上结果分析表
明，中药高、低剂量组干预后，内皮细胞培养液 Ｏ２－
生成减少，细胞ｐ４７ｐｈｏｘ蛋白表达下降，支持中药
提取物通过活性氧途径下调ＮＡＤＰＨ氧化酶亚单位
ｐ４７ｐｈｏｘ表达，减少活性氧生成，延缓内皮细胞
衰老。
综上，益气活血中药人参三七川芎提取物可延
缓内皮细胞复制性衰老，可能经由活性氧途径通过
下调 ＮＡＤＰＨ氧化酶 ｐ４７ｐｈｏｘ的表达，使 ＨＵＶＥＣｓ
产生ＲＯＳ减少，从而延缓细胞的衰老。研究中发
现，中药提取物能降低衰老内皮细胞ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ的
表达，但是否通过细胞产生的 ＡｎｇⅡ引起的相关途
径使ｐ４７ｐｈｏｘ下调，导致内皮细胞的复制性衰老，有
待进一步研究。
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Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ，ＰａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇａｎｄＬｉｇｕｓｔｉｃｕｍｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ
ＹＡＮＧＪｉｎｇ１，ＬＥＩＹａｎ１，ＣＵＩＷｅｉ２，ＦＡＮＧＳｕｐｉｎｇ３，ＣＨＥＮＫｅｊｉ１
（１．ＸｉＹｕａｎＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｏｎｇｚｈｉｍｅｎＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｇｕａｎｇ＇ａｎｍｅｎＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｅｆｅｃｔｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＰａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ，ＰｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇａｎｄＬｉｇｕｓｔｉｃｕｍｃｈｕａｎｘｉｏｎｇｏｎｈｕｍａｎ
ｕｍｂｉｌｉｃａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ（ＨＵＶＥＣｓ）ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＨＵＶＥＣｓｗｅｒｅｉｎｄｕｃｅｄｔｏａｇｉｎｇｂｙｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇｔｏ
ｔｈｅｅｉｇｈｔｈｃｅｌｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｏｄｅｌｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ．ＴｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄＨＵＶＥＣｓｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎ
ｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｅｉｇｈｔｈｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃｅｌｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｕｎｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ，ＶｉｔａｍｉｎＥｇｒｏｕｐ，ｈｅｒｂａｌｔｒｅａｔｅｄｈｉｇｈｄｏｓｅａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓ．
ＣｈａｎｇｅｓｏｆＨＵＶＥＣｓａｇｉｎｇｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｍｅｔｈｏｄｏｆＳＡβｇａｌｓｔａｉｎｅｄＨＵＶＥＣｓａｎｄｃｅｌｓｃｙｃｌｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ．ＣｏｎｔｅｎｔｓｏｆＲＯＳｉｎ
ｃｅｌｓ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆａｎｔｉｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ（Ｏ２－）ａｎｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｉｎｃｅｌｍｅｄｉｕｍｓｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄ．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｓｅ
ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅｐ４７ｐｈｏｘ，ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｔｙｐｅ１ａｎｄ２ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＡＴ１Ｒ，ＡＴ２Ｒ）．Ｒｅｓｕｌｔ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＶｉｔａｍｉｎＥ
ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｎｕｍｂｅｒｓｏｆβｇａｌｓｔａｉｎｅｄＨＵＶＥＣｓｗｅｒｅｅｎｈａｎｃｅｄ，ｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｄｅｐｒｅｓｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎ
ｓｉｔｙｏｆＲＯＳｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｌｅｓｓＮＯａｎｄｍｏｒｅＯ２－ｉｎｃｅｌｓｗｅｒｅｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｈｅｅｉｇｈｔｈｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃｅｌｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｕｎ
ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１ＲａｎｄＡＴ２ＲｉｎｃｅｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＶｉｔＥｇｒｏｕｐ．Ｃｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂｓｏｆｈｉｇｈ
ｄｏｓｅａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｃｏｕｌｄｉｍｐｒｏｖｅｃｏｎｄｕｔｉｏｎｓｏｆＨＵＶＥＣｓａｇｉｎｇ．Ｃｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂｓｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｃｏｕｌｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌ
ｎｕｍｂｅｒｓｏｆβｇａｌｓｔａｉｎｅｄＨＵＶＥＣ，ｉｎｃｒｅａｓｅｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆＲＯＳｉｎｃｅｌｓ，ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，
ｃｅｌｓｓｅｃｒｅｔｉｎｇｍｏｒｅＮＯａｎｄｌｅｓｓＯ２－．Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴ１ＲａｎｄＡＴ２ＲｉｎｃｅｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂｓｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅ
ａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＶｉｔＥｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｓｔｕｄｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＰ．ｇｉｎｓｅｎｇ，Ｐ．ｎｏｔｏｇｉｎ
ｓｅｎｇａｎｄＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇｃｏｕｌｄｄｅｌａｙｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ．ＨｅｒｂａｌｅｘｔｒａｃｔｓｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
ｏｘｉｄａｓｅｓｕｂｕｎｉｔｐ４７ｐｈｏｘｂｙｍｅａｎｓｏｆＲＯＳ，ｈｅｎｃｅｄｅｃｒｅａｓｅＯ２－ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｕｌｔｉｍａｔｅｌｙｄｅｌａｙＨＵＶＥＣｓｉｎｖｉｔｒｏｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＰａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ；ＰａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇａｎｄＬｉｇｕｓｔｉｃｕｍｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ；ＮＡＤ（Ｐ）Ｈｏｘｉｄａｓｅ；ｃｅｌｒｅｐｌｉｃａ
ｔｉｖｅｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ；ＲＯＳ
［责任编辑 古云侠］
·８４５１·
第３４卷第１２期
２００９年６月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １２
Ｊｕｎｅ，２００９