全 文 ：黄山栝楼挥发油的成分分析及其生物活性的初步研究
徐礼英１，张小平２，蒋继宏３
（１．芜湖职业技术学院 园林园艺系，安徽 芜湖 ２４１０００；
２．安徽师范大学 生命科学学院，安徽 芜湖 ２４１０００；
３．徐州师范大学 江苏省药用植物生物技术重点实验室，江苏 徐州 ２２１１１６）
［收稿日期］　２００８０９１６
［通信作者］　蒋继宏，教授，Ｔｅｌ：（０５１６）８３４０３５１５，Ｅｍａｉｌ：ｊｈ６６９＠
１２６．ｃｏｍ
［作者简介］　徐礼英，芜湖职业技术学院讲师，主要从事植物生长
与环境、野生植物资源开发利用等方面的研究。Ｔｅｌ：（０５５３）
５７７７１５４，Ｅｍａｉｌ：ｗｈ＿ｘｕｌｙ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
　　黄山栝楼 ＴｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓｒｏｓｔｈｏｒｎｉＨａｒｍｓｖａｒ．
ｈｕａｎｇｓｈａｎｅｎｓｉｓＳ．Ｋ．Ｃｈｅｎ属葫芦科多年生草质藤
本，产于黄山、歙县（清凉峰），生于海拔６００～８００ｍ
的山坡灌丛和乱石堆中，是安徽特有的药用植
物［１］。其根有清热解毒、生津和止渴的功效，根中
的天花粉蛋白有抗病毒、抗肿瘤的作用［２］；其果实、
果皮和种子有宽胸散结、清热化痰、润肺止咳等功
效；其籽粒营养丰富，经过炒制加工，清香可口。因
此，它是重要的野生药用植物与天然保健食用植物。
目前，有关栝楼属植物挥发油化学成分方面的
研究有一些报道，但在抑菌作用及其抗肿瘤活性方
面的研究尚未见报道。笔者首次分离和鉴定了黄山
栝楼籽挥发油化学成分及相对含量，并在此基础上，
探讨了该挥发油的抑菌作用及其细胞毒活性，为以
后进一步开发利用此植物资源提供科学依据。
１　材料和方法
１．１　仪器和试药
美国安捷伦公司６８９０／５９７３ＮＧＣＭＳ联用仪，日
本三洋公司ＳＩＦＵ３３２Ｅ恒温震荡器，酶标仪，挥发油
提取器。无水硫酸钠、乙醚，所用试剂均为分析纯。
金黄色葡萄球菌 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，大肠杆
菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，红酵母Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｓｐ．，枯草杆菌
Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ均由江苏省药用植物生物技术重点
实验室提供。胃癌细胞株 ＳＧＣ７９０１由江苏省药用
植物生物技术重点实验室提供。
黄山栝楼采自安徽黄山，并经安徽师范大学张小
平教授鉴定为Ｔ．ｒｏｓｔｈｏｒｎｉｖａｒ．ｈｕａｎｇｓｈａｎｅｎｓｉｓ的籽。
１．２　挥发油的制备　水蒸气蒸馏法［３］：称取干燥、
粉碎的黄山栝楼籽１０ｇ，用水蒸气常压蒸馏８ｈ，馏
出液用乙醚萃取３次，旋转蒸发仪常压浓缩后合并，
无水硫酸钠干燥，得到具有特殊香味、淡黄色透明挥
发油０１８３９ｇ，得油率为 １８４％。挥发油低温保
存，备用。
１．３　气相色谱、质谱条件［４］　ＨＰ５ＭＳ弹性石英毛
细管色谱柱（０２５ｍｍ×３０ｍ，０２５μｍ）。载气为
高纯氦气，流量６０ｍＬ·ｍｉｎ－１；气化室温度２８０℃；
柱程序升温从７０℃开始，保持２ｍｉｎ，然后以１０℃
·ｍｉｎ－１的速度升至２５５℃并保持２５ｍｉｎ，再以１０
℃·ｍｉｎ－１的速度升至２７０℃并保持５ｍｉｎ。
电子轰击（ＥＩ）离子源，电离电压为７０ｅＶ，离子
源温度为２３０℃；相对分子质量扫描范围 ｍ／ｚ３０～
５５０；进样量１０μＬ，分流比５０∶１，扫瞄周期１ｓ。
峰面积归一化法计算挥发油中各成分的相对含
量，相应的质谱图经计算机检索并结合文献资料［５］
进行成分鉴定。
１．４　抗菌活性测定　挥发油稀释液的配制：挥发油
用ＤＭＦ稀释，采用二倍倍比浓度稀释法，使其系列
质量浓度为８０，４０，２０，１０，５ｇ·Ｌ－１。
菌液的配制［６］：将供试菌株分别接种到牛肉膏
蛋白胨培养基斜面上进行活化，３７℃培养２４ｈ后移
入液体ＮＢ培养基中。于３７℃，２５０ｒ·ｍｉｎ－１震荡
培养１２ｈ后，将菌液梯度稀释成适宜浓度的菌悬液
（细胞密度１０６个／ｍＬ），备用。
采用肉汤稀释法［７］，在５ｍＬ培养小瓶中加入３
ｍＬ培养基（抑制红酵母实验用 ＰＤ培养基，其余均
用肉汤ＮＢ培养基），灭菌后在超净工作台上分别取
上述系列梯度挥发油稀释液３０μＬ加入到培养瓶
中，再加入３０μＬ菌液，使培养瓶中挥发油的系列浓
度为８００，４００，２００，１００，５０ｍｇ·Ｌ－１。将各培养瓶
置于恒温振动器进行培养，３７℃（红酵母２８℃），
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第３４卷第８期
２００９年４月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
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１２０ｒ·ｍｉｎ－１，并以加菌液不加挥发油做对照。培
养４８ｈ后在酶标仪６６０ｎｍ下测吸光度 Ａ值。设３
个重复，结果取平均值。根据测得的吸光度值按下
式计算抑制率：
抑制率＝（１－Ａ实验组／Ａ对照组）×１００％
１．５　细胞毒活性测定［８］　胃癌细胞株 ＳＧＣ７９０１
细胞培养用 ＲＰＭＩ１６４０培养基，含１００Ｕ·ｍＬ－１青
霉素和１００Ｕ·ｍＬ－１链霉素及１０％已灭活的胎牛
血清，用１ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ溶液调定 ｐＨ７２，在５％
ＣＯ２，３７℃培养箱中培养，实验用细胞均处于对数生
长期。
细胞以８×１０４个／孔接种于９６孔培养板中，在
５％ＣＯ２、３７℃培养箱中培养 ２４ｈ，加入 １００ｍｇ·
Ｌ－１挥发油，继续培养４８ｈ，弃去溶液，用２００μＬ基
本培养基洗１次，每孔加入５０μＬ３７℃的ＭＴＴ（２ｇ
·Ｌ－１）预热４ｈ，弃去培养基，用 ＰＢＳ洗１次，每孔
加２００μＬＤＭＳＯ，加入不含细胞的培养基的孔做空
白值，加细胞液不加药的孔做对照值，在平板摇床上
摇动３０ｍｉｎ，在酶标仪４９０ｎｍ下读板。设 ３个重
复，结果取平均值。
２　结果与分析
２．１　挥发油成分及相对含量　对黄山栝楼籽
挥发油ＧＣＭＳ分析，得总离子色谱图，化学成分分
析结果见表１。
表１　黄山栝楼籽挥发油ＧＣＭＳ分析
Ｎｏ．
ｔＲ
／ｍｉｎ
化学成分 分子式
相对
含量／％
１ ９１３ ２甲基２丁基１，３二氧戊烷 ２ｂｕｔｙｌ２ｅｔｈｙｌ１，３ｄｉｏｘｏｌａｎｅ Ｃ９Ｈ１８Ｏ２ ３１０２
２ ９６８ 戊二酸二乙酯 ｇｌｕｔａｒｉｃａｃｉｄｄｉｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ Ｃ９Ｈ１６Ｏ４ ３８５９
３ １０２９ 丙二酸甲基二丁酯 ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｙｌｄｉｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ Ｃ１２Ｈ２２Ｏ４ １０１３
４ １０５４ ２，３脱水ｄ半乳聚糖２，３ａｎｈｙｄｒｏｄｇａｌａｃｔｏｓａｎ Ｃ６Ｈ８Ｏ４ ０３６１
５ １０８８ 环十二酮 ｃｙｃｌｏｄｏｄｅｃａｎｏｎｅ Ｃ１２Ｈ２２Ｏ １２０３
６ １０９９ 己二酸二乙酯 ｈｅｘａｎｅｄｉｏｉｃａｃｉｄｄｉｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ Ｃ１０Ｈ１８Ｏ４ ９１３２
７ １１０７ （４Ｅ）４十二烯６，８，１０三炔３酮 （４Ｅ）４ｄｏｄｅｃｅｎｅ６，８，１０ｔｒｉｙｎ３ｏｎｅ Ｃ１２Ｈ１０Ｏ ０６３５
８ １１３１ ２（４，８二甲基３，７二烯环十烷基）２丙醇２（４，８ｄｉｍｅｔｈｙｌ３，７ｃｙｃｌｏｄｅｃａｄｉｅｎ１ｙｌ）２ｐｒｏｐａｎｏｌ Ｃ１５Ｈ２６Ｏ ４２０９
９ １１５０ 戊二酸二丁酯 ｇｌｕｔａｒｉｃａｃｉｄｄｉｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ Ｃ１３Ｈ２４Ｏ４ ４５７４
１０ １２１３ ４ａ，５二甲基４异丙基顺八氢１（２Ｈ）萘酮４ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ４ａ，５ｄｉｍｅｔｈｙｌｏｃｔａｈｙｄｒｏ１（２Ｈ）ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｏｎｅ Ｃ１５Ｈ２６Ｏ ０２６８
１１ １２３２ １甲基９，１０二氢菲１ｍｅｔｈｙｌ９，１０ｄｉｈｙｄｒｏｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎｅ Ｃ１５Ｈ１４ １１２２
１２ １２５７ 二氢反α古巴烯８醇 ｄｉｈｙｄｒｏｃｉｓαｃｏｐａｅｎｅ８ｏｌ Ｃ１５Ｈ２６Ｏ ２４６４
１３ １２７３ 己二酸二异丁酯 ｈｅｘａｎｅｄｉｏｉｃａｃｉｄｄｉｓｏｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ Ｃ１４Ｈ２６Ｏ４ ６０７５
１４ １２９４ ５，５二丁基壬烷５，５ｄｉｂｕｔｙｌｎｏｎａｎｅ Ｃ１７Ｈ３６ ０８０２
１５ １３３４ ４（１苯乙基）苯酚４（１ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｏｌ Ｃ１４Ｈ１４Ｏ １４３８
１６ １３８８ 三环［４．３．１．１（３，８）］十一烷１羧酸 ｔｒｉｃｙｃｌｏ［４．３．１．１（３，８）］ｕｎｄｅｃａｎｅ１ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ Ｃ１２Ｈ１８Ｏ２ ０４０５
１７ １３９５ ３，５，２４三甲基四十烷３，５，２４ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｔｅｔｒａｃｏｎｔａｎｅ Ｃ４３Ｈ８８ １４０７
１８ １４０１ 白颤油烯醇（檀香脑）ｓａｎｔａｌｏｌ Ｃ１５Ｈ２４Ｏ ２５８９
１９ １４０６ ２，６，１０三甲基十二烷２，６，１０ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｄｏｄｅｃａｎｅ Ｃ１５Ｈ３２ ０９７６
２０ １４３９ 　４ａ，８ａ二甲基４乙丙基１，３（２Ｈ，４Ｈ）六氢萘醌４Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ４ａ，８ａｄｉｍｅｔｈｙｌｈｅｘａｈｙｄｒｏ１，３（２Ｈ，４Ｈ） Ｃ１５Ｈ２４Ｏ２ ０４１７
　 　 ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｏｎｅ 　 　
２１ １４５２ 　１，１，３ａ，７四甲基１ａ，２，３，３ａ，４，５，６，７ｂ顺八氢１Ｈ环丙［ａ］萘１ａ，２，３，３ａ，４，５，６，７ｂｏｃｔａｈｙｄｒｏ１，１，３ａ， Ｃ１５Ｈ２４ ０４４７
　 　 ７ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ１Ｈｃｙｃｌｏｐｒｏｐａ［ａ］ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ 　 　
２２ １４６２ ２乙基５乙基顺八氢１Ｈ茚２ｂｕｔｙｌ５ｈｅｘｙｌｏｃｔａｈｙｄｒｏ１Ｈｉｎｄｅｎｅ Ｃ１９Ｈ３６ ０３８２
２３ １４７７ ３，５二叔丁基４羟基２，４环己二烯１酮３，５ｄｉｔｅｒｔｂｕｔｙｌ４ｈｙｄｒｏｘｙ２，４ｃｙｃｌｏ１ｏｎｅ Ｃ１４Ｈ２２Ｏ２ １７４３
２４ １５２５ １（１，５二甲基己基）４（４甲基戊基）环己烷１（１，５ｄｉｍｅｔｈｙｌｈｅｘｙｌ）４（４ｍｅｔｈｙｌｐｅｎｔｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ Ｃ２０Ｈ４０ ０９４２
２５ １５３４ （１Ｓ，１５Ｓ）二环［１３．１．０］十六烷２酮 （１Ｓ，１５Ｓ）ｂｉｃｙｃｌｏ［１３．１．０］ｈｅｘａｄｅｃａｎ２ｏｎｅ Ｃ１６Ｈ２８Ｏ ０８５３
２６ １５７２ 邻苯二甲酸二丁酯 ｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄｄｉｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ Ｃ１６Ｈ２２Ｏ４ １２５６３
２７ １７８２ １，３双环己基２甲基丙烷１，３ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ２ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐａｎｅ Ｃ１６Ｈ３０ １９１６
２８ １８７４ １，１，４ａ，６四甲基８ａ乙基十四氢萘 ｄｅｃａｈｙｄｒｏ８ａｅｔｈｙｌ１，１，４ａ，６ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ Ｃ１６Ｈ３０ ３２５０
２９ １９８１ 邻苯二甲酸十二酯 ｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄｄｉｄｏｄｅｃｙｌｅｓｔｅｒ Ｃ３２Ｈ５４Ｏ４ ３２５３
３０ ２１１２ 正二十七烷 ｈｅｐｔａｃｏｓａｎｅ Ｃ２７Ｈ５６ ３９６５
２．２　挥发油的抑菌活性　黄山栝楼籽对红酵母生 长抑制作用较强，在５０，２００，８００ｍｇ·Ｌ－１时的抑制
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率分别达 ４２１３％，８４２５％，９３８９％，当小于 ２００
ｍｇ·Ｌ－１时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌
生长几乎无抑制作用，甚至促进细菌生长；大于４００
ｍｇ·Ｌ－１有明显抑制作用，见表２。
表２　黄山栝楼籽挥发油的抑菌活性
菌株
抑制率／％
５０ｍｇ·Ｌ－１ １００ｍｇ·Ｌ－１－１ ２００ｍｇ·Ｌ－１ ４００ｍｇ·Ｌ－１ ８００ｍｇ·Ｌ－１
枯草杆菌　　　 －１４８４±３５２ －１１２８±１６３ －４８４±２１０ ４９２６±６０１ ８０７４±４２３
金黄色葡萄球菌 －１５９２±２１３ －３２１±０９６ １６４５±７５３ ７３８６±７３５ ７９６５±３９９
大肠杆菌　　　 －６９１±１２５ ２３３±３８９ ７６３±２４５ ７９２５±２６９ ８３７１±７５３
红酵母菌　　　 ４２１３±６３２ ５１５３±６８５ ８４２５±４６２ ８８０９±８３９ ９３８９±５１２
２．３　挥发油的细胞毒活性　黄山栝楼籽挥发油
１２５ｍｇ·Ｌ－１对胃癌细胞株 ＳＧＣ７９０１细胞生长有
显著的细胞毒活性，见表３。其细胞毒活性可能与
挥发油中的邻苯二甲酸二丁酯有关，有报道指出邻
苯二甲酸二丁酯在体外对肺巨细胞癌细胞 ＰＧ和人
早幼粒白血病细胞 ＨＬ６０的增殖有明显的抑制作
用［９］。
表３　黄山栝楼籽挥发油对胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１
细胞增殖的抑制率
挥发油／ｍｇ·Ｌ－１ 抑制率／％
６２５ ５３７５±１７２
１２５ ８７３６±３３７
２５ ９０４５±２５８
５０ ９６５５±７０６
１００ ９８８５±５８６
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瘤细胞凋亡机制的初步研究［Ｊ］．南开大学学报：自然科学版，
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［责任编辑　王亚君］
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第３４卷第８期
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Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　８
　Ａｐｒｉｌ，２００９