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Effects of Tangweian granule on 5-HT2AR in rat model with diabetic gastroparesis

糖胃安对四氧嘧啶糖尿病胃轻瘫模型大鼠5-羟色胺2A受体的影响



全 文 :糖胃安对四氧嘧啶糖尿病胃轻瘫模型大鼠
5羟色胺2A受体的影响
钱秋海1,王志程2,赵 懿3,刘大文3,钱卫斌3
(1.青岛大学,山东 青岛 266071;2.北京中医药大学 东方医院,北京 100029;
3.山东中医药大学 临床学院,山东 济南 250014)
[摘要] 目的:观察糖胃安对四氧嘧啶糖尿病胃轻瘫模型大鼠5羟色胺2A(5HT2A)受体的影响并探讨其作用
机制。方法:以四氧嘧啶加200%熟地黄浓煎液造成四氧嘧啶糖尿病胃轻瘫模型大鼠,将40只该模型大鼠随机分
为4组:糖胃安高剂量组在用格列齐特片20mg·kg-1的基础上,给予糖胃安3175g·kg-1灌胃;糖胃安低剂量组
在用格列齐特片20mg·kg-1的基础上,给予糖胃安1588g·kg-1灌胃;阳性对照药吗叮啉组在用格列齐特20mg
·kg-1的基础上,联合吗丁啉375mg·kg-1配合灌胃;模型对照组给予等量蒸馏水。另取10只正常大鼠作为正常
对照组。本实验采用免疫组化方法观察中药糖胃安对该模型大鼠受体的影响。结果:糖胃安不仅能降低糖尿病胃
轻瘫模型大鼠血糖,还可以明显改善大鼠胃肠5羟色胺2A受体水平。与用药前相比,有显著性差异(P<001),与
对照组相比,也有显著性差异(P<005)。结论:5HT2A受体含量的增高是糖尿病胃轻瘫的重要原因之一,糖胃安
能够明显改善5HT2A受体水平,有显著的降低血糖、改善患者症状的作用。
[关键词] 糖胃安;糖尿病胃轻瘫;5羟色胺2A受体
[中图分类号]R285.5 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)05054104
[收稿日期] 20070410
[基金项目] 山东省中医药卫生科研计划(2005181)
[通讯作者] 钱秋海,Tel:(0531)829504146675,Email:qianqi
uhai@126.com
  糖尿病胃轻瘫(diabeticgastroparesis,DGP)是由
于糖尿病引起的胃肠植物神经功能紊乱导致的以胃
动力障碍、排空延迟为特点的一组症候群,临床多表
现为胃脘胀满,食欲不振,食后饱胀,消化不良,甚至
恶心呕吐等胃潴留的症状,多伴有严重的血糖控制
不良、胰岛素抵抗、血脂代谢紊乱和其他严重并发
症。本病发病机制十分复杂,目前现代医学对其尚
无特效疗法,大多选用促胃肠动力药,但不能从根本
上缓解DGP的病情。根据其临床表现,本病当属于
中医“消渴”、“胃缓”、“胃痞”、“呕吐”、“腹胀”、“反
胃”、“痞满”等范畴。作者结合多年临床经验,认为
糖尿病胃轻瘫中医发病机制为脾气亏虚,清浊相干,
脾胃升降失常。属本虚表实、虚实夹杂之证。以此
理论为指导,拟定健脾益气、升清降浊的治疗方法,
据此在中医基本理论指导下,立足于整体调节,辨证
施治,研制出糖胃安颗粒,取得了良好的临床疗效。
为进一步深化研究其治疗作用并探讨其作用机制,
本研究观察了糖胃安对糖尿病胃轻瘫模型大鼠5
羟色胺2A受体的影响。
1 材料
1.1 动物 健康雄性 Wistar大鼠,体重(250±10)
g,由山东省实验动物中心提供,动物合格证号
SCXR(鲁)20030004。普通饲料:由山东大学医学院
动物实验室提供。
1.2 药品 糖胃安颗粒冲剂由山东中医药大学附
属医院药剂科加工而成,由生黄芪、白术、葛根、黄
连、姜半夏、鸡内金、大黄、荷叶等组成,试验时制成
糖胃安灌胃合剂,质量浓度为159g·mL-1;吗丁
啉(motilium):由西安杨森制药有限公司生产,批号
040818418。格列齐特(gliclazide):由南京瑞尔医药
有限公司生产,批号040504。
1.3 试剂 200%熟地黄浓煎液,由山东重汽公司
医院提供。四氧嘧啶(aloxon):美国Sigma公司,批
号020106。兔ABC试剂盒:武汉博士德公司。
1.4 仪器 LXJ-Ⅱ型离心机,上海第二分析仪器
厂生产;LEICAASP300全自动生物脱水机;LEICA
ASP2135病理切片机;Galan2微波炉;OLYMPUS
CX41显微镜;医学图像分析系统,型号HPIAS1000,
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ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
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March,2008
同济医科大学千屏影像工程公司;美国强生血糖分
析仪,武汉绿森林科技发展有限公司;电子天平,上
海天平仪器厂。
2 方法
2.1 模型建立 取大鼠70只,普通动物饲料喂养,
适应性喂养3d后禁食 l2h,断尾取血用美国强生
血糖仪测空腹血糖。然后,取60只大鼠按50mg·
kg-1舌下静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液,72h后
断尾取血(取血前禁食8h),测空腹血糖。选血糖
值≥11lmmol·L-1的动物作为四氧嘧啶糖尿病大
鼠模型,称重,灌服200%熟地黄浓煎液,每日1次,
并记录大鼠每日摄食量及症状。2周后测大鼠空腹
血糖,选取符合糖尿病胃轻瘫模型标准即空腹血
糖≥111mmol·L-1同时伴有腹部胀大、体重减轻
等胃轻瘫症状的大鼠40只,进行实验。其余10只
正常大鼠不给熟地黄灌胃,只给普通饲料喂养。
2.2 分组与给药 将上述40只四氧嘧啶糖尿病胃
轻瘫模型大鼠随机分为以下4组:模型组,不给任何
药物,只给等容量蒸馏水灌胃,每日1次;糖胃安高
剂量组在用格列齐特(20mg·kg-1)的基础上,同
时给予糖胃安合剂3175g·kg-1;糖胃安低剂量组
在用格列齐特(20mg·kg-1)的基础上,同时给予
小剂量糖胃安合剂1588g·kg-1;阳性对照药吗叮
啉组,在用格列齐特(20mg·kg-1)的基础上,同时
给予吗丁啉375mg·kg-1,以上均灌胃给药,每日
1次。
并将上述不给熟地黄灌胃,只给普通饲料喂养
的10只正常大鼠作为正常组,为第5组,不给任何
药物,只给予正常饮食饮水。
上述5组均连续给药观察2周。
2.3 标本采集 2周末,断尾取血测试各组动物空
腹血糖的情况(取血前禁食 8h)。用戊巴比妥钠
(30mg·kg-1)腹腔注射麻醉,右心房放血处死,取
出胃体,用生理盐水冲洗腔面内容物后,入中性福尔
马林液固定24h,以备观察检测。
2.4 免疫组化与图像分析 脱水后常规石蜡包埋,
制成蜡块,切成4μm厚的连续切片,贴于预先涂有
铬钒明胶的载玻片上。采用 SABC免疫组化染色,
染色步骤参照免疫组化ABC试剂盒说明书,阴性对
照用 PBS液代替一抗。取免疫组化标记的含有
5HT2AR免疫反应阳性细胞的每张切片在高倍镜
(10×40)下,随机将5个视野的图像由电视摄像系
统输入图像分析系统(MIPS)的主计算机,由主计算
机系统进行图像处理,检测5HT2AR的数目、面积。
2.5 5羟色胺受体水平结果判定 光镜半定量分
析:A(按切片中阳性细胞显色有无及深浅评分):细
胞无色(0分);浅黄色(1分);黄色(2分);棕黄色
棕褐色(3分)。B(按切片中阳性细胞占切片中总
细胞数的比例评分):0%~25%(1分);25%~50%
(2分);50%~75%(3分);>75%(4分)。每例积
分=A×B,按积分高低分为:积分 0~2分:阴性
(-);积分>2分:阳性(+)。
2.6 统计方法 数据经SPSS110统计软件处理,
采用t检验,所有计量资料均用 珋x±s表示。受体积
分的比较用χ2检验。
3 结果
研究结果显示,经舌下静脉注射四氧嘧啶3d、灌
服200%熟地黄浓煎液2周后,各模型组大鼠大部分
出现腹部胀大、脱毛明显、体重明显减轻等症状,测量
大鼠血糖显著升高,于造模前相比,有显著差异(P<
001)。经过给大鼠灌服糖胃安14d后,治疗组大鼠
症状明显减轻,体重增加,血糖值亦显著下降,与模型
组相比,均有显著差异(P<001)。见表1。
表1 糖胃安对四氧嘧啶致糖尿病胃轻瘫模型大鼠
血糖的影响(珋x±s,n=10) mmol·L-1 
分组 剂量/g·kg-1 治疗前 治疗后
正常 - 506±133 511±134
模型 - 1522±232 1463±2441)
糖胃安 1588 1509±237 923±3332)
  3175 1516±281 803±2952)
吗叮啉 000375 1528±273 755±2662)
  注:与正常组比较1)P<001;与模型组比较2)P<001
  此外,研究发现,5HT2A受体主要分布于胃的平
滑肌细胞、肌间神经丛的神经元细胞。阳性反应物
质则分布于该类细胞的胞质内,而胞核呈阴性反应。
染色结果显示:经舌下静脉注射四氧嘧啶2周后,糖
尿病胃轻瘫模型大鼠胃体平滑肌及肌间神经丛的神
经元细胞中5HT2A受体数目显著增多,与正常组形
成对比,有显著差异(P<001,P<001)。经过给
大鼠灌服糖胃安14d后,发现,糖胃安高、低剂量组
大鼠阳性细胞均显著减少,与模型组相比,均有显著
差异(P<001),与西药对照组相比,也有明显差异
(P<005)。
正常组大鼠平滑肌细胞及肌间神经丛的神经元
细胞胞质内5羟色胺2A受体呈阴性;模型组大鼠平
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滑肌及肌间神经丛的神经元细胞胞质内5羟色胺2A
受体呈强阳性;糖尿病胃轻瘫模型大鼠低剂量组平
滑肌细胞及肌间神经丛的神经元细胞胞质内5羟
色胺2A受体呈弱阳性;糖尿病胃轻瘫模型大鼠高剂
量组平滑肌细胞及肌间神经丛的神经元细胞胞质内
5羟色胺2A受体有少量阳性反应物质;阳性对照药
吗叮啉组大鼠平滑肌及肌间神经丛的神经元细胞胞
质内5羟色胺2A受体呈弱阳性。说明糖胃安在使血
糖下降的同时,对胃肠道5羟色胺2A受体有显著的
改善作用。见图1。
图1 各组大鼠胃体平滑肌细胞及肌间神经丛的神经元细胞胞质内5羟色胺2A结果(SABC,×400)
A.正常组;B.模型组;C.糖胃安1588g·kg-1组;D.糖胃安3175g·kg-1组;E.吗叮啉组
4 讨论
糖尿病胃轻瘫与5羟色胺受体关系比较密切。
胃肠道的5羟色胺(5HT)通过分布于胃肠道的5
羟色胺受体(5HTR)调节胃肠道功能。5羟色胺2A
受体具有收缩血管、收缩平滑肌、促血小板聚集、加
快心率、兴奋运动神经元和介导神经内分泌的功能。
糖尿病患者由于血糖和纤维蛋白原水平升高增加了
血液的黏稠度,从而引起剪切力的增加,使血小板活
化和5HT释放。5HT具有很强的收缩血管和促进
血小板聚集功能,可通过激活5HT2A受体引起血管
平滑肌收缩,同时促进血小板聚集,使毛细血管处于
收缩及高凝状态,最终导致循环障碍[1]。而糖尿病
性微血管病变造成局部缺血,可直接影响到胃壁神
经结构和平滑肌细胞,从而影响到平滑肌的舒缩功
能[2]。本研究结果显示,糖尿病胃轻瘫模型大鼠胃
体的5羟色胺2A受体数目明显增多,面积增大,模型
组与正常组比有明显差异(P<001)。经灌服糖胃
安2周后,糖胃安高剂量组和低剂量组的 5羟色
胺2A受体显著减少,与模型组比有显著性差异(P<
001)。且糖胃安高剂量组与吗叮啉对照组相比,
也有明显差异(P<005)。实验表明,5羟色胺2A受
体含量的增高是糖尿病胃轻瘫的原因之一。
糖尿病胃轻瘫的基本病机为脾气亏虚、脾胃升
降失常,故提出健脾益气、升清降浊为基本治疗大
法,立足于整体调节,辨证施治。本研究结果证明,
糖胃安对糖尿病胃轻瘫大鼠有显著降糖作用,且高
剂量组更为明显。与治疗前及对照组相比,具有显
著差异(P<001,P<005)。在血糖下降的同时,
对胃肠道5羟色胺2A受体又有改善作用,从而促进
胃肠道神经系统对肌细胞的调节,改善糖尿病胃轻
瘫的症状。
[参考文献]
[1] 苏 颖,刘晓民.5羟色胺2A受体拮抗剂与糖尿病关系的研究
进展[J].中国煤炭工业医学杂志,2003,12(6):1132.
[2] 温绍军,罗 毅.5羟色胺2A受体拮抗剂对血管系统的作用研
究进展[J].中华内科杂志,2004,43(4):314.
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EfectsofTangweiangranuleon5HT2ARinratmodelwith
diabeticgastroparesis
QIANQiuhai1,WANGZhicheng2,ZHAOYi3,LIUDawen3,QIANWeibin3
(1.QingdaoUniversity,Qingdao266071,China;
2.OrientHospitalofBeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Beijing100029,China;
3.ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250014,China)
[Abstract] Objective:ToobservetheefectsofTangweiangranuleon5HT2ARinratmodelwithdiabeticgastroparesis
(DGP).Method:Theratswithdiabeticgastroparesisinducedbyinjectingaloxanandgiving200% RadixRehmanniaepreparata
weredividedintofourgroupsrandomly:Tangweianhighdosagegroup,Tangweianlowdosagegroup,motiliumcontrolgroupandthe
modelcontrolgroup,10ratseachgroup.Eachgroupwasirigatedwithdrugsduringestablishingthemodel.Additionaly,wechose10
ratsbywayofnormalcontrolgroup.Furthermore,Tangweianhighdosagegroupwereirigatedstomachwithgliclazide20mg·kg-1
andTangweiangranule3175g·kg-1;Tangweianlowdosagegroupwereirigatedstomachwithgliclazide20mg·kg-1andTangwe
iangranule1588g·kg-1;motiliumcontrolgroupwereirigatedstomachwithgliclazide20mg·kg-1andmotilium375mg·kg-1
andthemodelcontrolgroupwereirigatedstomachwithdistiledwater.ThentheefectsofTangweiangranuleon5HT2ARwereob
served.Result:Thecurativegrouphadbeterefectsthanthecontrolgroupinloweringthebloodsugarandthelevelof5HT2ARcon
tent(P<001).Andtherewassignificantdiferencebetweenthecurativegroupandcontrolgroup(P<005).Conclusion:Itis
verifiedthatTangweiangranulehasobviousefectsonloweringthebloodsugarandimprovingthelevelof5HT2AR.
[Keywords] Tangweiangranule;diabeticgastroparesis;serotonintype2Areceptor
[责任编辑 古云侠]
[收稿日期] 20070405
[通讯作者] 李继武,Tel:13175665066,Email:lijiwu@medmail.com.cn
葛根素抑制慢性低 O2高 CO2大鼠肺动脉
高压形成机制研究
李继武,陈 鹏,官学强,龚永生,杨鹏麟
(温州医学院 附属第二医院 心内科 肺心病研究室,浙江 温州 325027)
[摘要] 目的:探讨葛根素对慢性低O2高CO2大鼠肺血管重建的作用。方法:雄性SD大鼠40只,随机分成5
组,正常(NC)组、低O2高CO21周(LH1)组、2周(LH2)组与3周(LH3)组,低O2高CO23周+葛根素(puerarin)
用药(LHP3)组,每组8只。将后4组动物放入常压低O2高CO2舱内,舱内吸入气O2浓度为9%~11%,CO2浓度为
5%~6%,每天9h,每周6d,连续3周。葛根素用药组于每天低 O2前半小时腹腔注射葛根素注射液(20mg·
kg-1)。采用比色法测定肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量,图像分析、氯胺T法、免疫组化、
组织原位杂交技术等方法观察葛根素对慢性低O2高CO2大鼠肺组织羟脯氨酸含量、肺小血管显微结构、肺动脉管
壁I,II型胶原和I,II型前胶原基因的影响。结果:①光镜下葛根素组内弹力板扭曲、中膜平滑肌细胞增生及管
腔狭窄程度均明显轻于低O2高CO2组。②血浆ET含量低O2高CO2组高于正常组(P<001),葛根素组低于低O2
高CO2组(P<001)。血浆 NO含量低 O2高 CO2组低于正常组(P<001),葛根素组高于低 O2高 CO2组(P<
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第33卷第5期
2008年3月
         
    中 国 中 药 杂 志
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Vol33,Issue 5
March,2008