全 文 ：马钱子碱聚乳酸载药纳米粒的制备和体外评价
赵继会，刘召林，许洁，于燕燕，冯年平
（上海中医药大学 药剂教研室，上海 ２０１２０３）
［摘要］　目的：制备和评价马钱子碱聚乳酸载药纳米粒（ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ）。方法：采用溶剂扩散法制备 ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ，并对
其进行表征和体外释药评价。结果：制得的ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ的平均粒径为９５ｎｍ，多分散指数为０３６２，Ｚｅｔａ电位为－１５６８ｍＶ。
Ｂｒｕ的平均载药量和包封率分别为７％，３７％。体外释药试验表明，与 Ｂｒｕ溶液相比 ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ具有明显的缓释作用。结
论：采用溶剂扩散法制备的ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ粒径小，载药量高，具有明显的缓释作用。
［关键词］　马钱子碱；聚乳酸纳米粒；体外释放
［收稿日期］　２００９０１１６
［基金项目］　上海市博士点基金（２００６Ｂ０２）；上海市教委项目
（０７ＺＺ５３）；上海市教委重点学科项目（Ｊ５０３０２）
［通信作者］　冯年平，Ｔｅｌ：（０２１）５１３２２１９７，Ｅｍａｉｌ：ｎｐｆｅｎｇ＠ｈｏｔ
ｍａｉｌ．ｃｏｍ
［作者简介］　赵继会，讲师，专业方向为中药新型给药系统研究
　　马钱子碱（ｂｒｕｃｉｎｅ，Ｂｒｕ）是马钱科植物马钱
ＳｔｒｙｃｈｎｏｓｎｕｘｖｏｍｉｃａＬ．的主要有效成分之一，可用于
胃癌、肠癌、肺癌、肝癌、白血病等疾病的治疗［１］。
虽然Ｂｒｕ在抗肿瘤方面表现出不错的效果，但是其
毒性大、治疗窗窄，半衰期短，因而应用受到了限
制［２３］。纳米给药系统的主要优点是改善难溶性药
物的吸收、靶向和定位释药、可作为生物大分子的特
殊载体等。聚乳酸（ＰＬＡ）生物相容性好，近年来以
其为材料制备的纳米给药系统的研究已成为药剂学
领域研究的热点［４６］。本研究制备了马钱子纳米粒
并对其进行表征和外释放药评价，为研究可增效、减
毒的马钱子碱纳米粒提供基础。
１　材料
Ａｇｉｌｅｎｔ１２００高效液相色谱仪（Ａｇｉｌｅｎｔ公司，美
国），３８０／ＺＬＳ激光粒度散射仪（Ｎｉｃｏｍｐ公司，美
国），ＰＨＬＩＰＳＴＥＣＮＩ１２透射电镜（Ｐｈｉｌｉｐｓ公司，荷
兰），ＣＰ２２５Ｄ微量电子分析天平（Ｓａｒｔｏｔｉｕｓ公司，德
国），ＲＣＴｂａｓｉｃ磁力搅拌器（广州仪科实验室技术
有限公司），２１６ｋ型超速冷冻离心机（ＳＩＧＭＡ公司，
德国）。
Ｂｒｕ原料药（ｆｌｕｋａ公司，批号４３４７５８１１３８０２），
Ｂｒｕ对照品（中国药品生物制品检定所，批号
１１０７０６２００５０５），庚烷磺酸钠（ＴＥＤＩＡ公司，批号
５１１００６），ＰＬＡ（山东省医疗器械研究所），聚乙烯醇
（ＰＶＡ０５８８）（河南安阳强生医药技术研究所），乙腈
（Ｍｅｒｃｋ公司，色谱纯），甲醇、丙酮、正辛醇等为分析
纯，均购于国药集团上海化学试剂公司。
２　方法
２．１　溶剂扩散法制备纳米粒
取１０ｍｇＢｒｕ，５０ｍｇＰＬＡ（平均分子质量１５０００），
用１０ｍＬ丙酮超声溶解，作为有机相。将５０ｍＬ浓
度为１％的ＰＶＡ纯水溶液调 ｐＨ到１０，作为水相。
将有机相快速倒入磁力搅拌的水相中，持续搅拌２
ｈ，６０℃加热挥去有机相，并浓缩至３０ｍＬ，过０４５
μｍ微孔滤膜，４℃冷藏。
２．２　Ｂｒｕ的含量测定
ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动
相 乙腈水（２３∶７７），每升水含庚烷磺酸钠１０１ｇ，
磷酸二氢钾１３６ｇ，加磷酸调节 ｐＨ至２８；流速１
ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长 ２６５ｎｍ；柱温 ２５℃；进样量
２０μＬ。
２．３　纳米粒的体外评价
２．３．１　形态　取样品溶液少许，用水稀释后，滴加
到牙科蜡板上，取一铜丝网置液滴上，稳定１０ｍｉｎ，
用２０％磷钨酸负染，干燥１５ｍｉｎ，于透射电镜下观
察，拍照。
２．３．２　粒径分布和Ｚｅｔａ电位　取一定量的样品溶
液，用３８０／ＺＬＳ激光粒度散射仪测定粒径、粒径分
布Ｚａｔａ电位。
２．３．３　包封率和载药量　游离药物浓度的测定：取
ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ溶液２ｍＬ，置离心管中，４℃，１５０００ｒ
·ｍｉｎ－１离心２ｈ，取上清液０２ｍＬ到２ｍＬ量瓶中，
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用蒸馏水定容。取２０μＬ测定Ｂｒｕ含量。
总药物浓度的测定：取 ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ溶液 ０２
ｍＬ，置５ｍＬ量瓶中，加入２滴ＤＭＳＯ，超声１ｍｉｎ，用
蒸馏水定容，过 ０４５μｍ微孔滤膜。取续滤液 ２０
μＬ测定Ｂｒｕ含量。
按下列公式计算包封率和载药量：
包封率＝纳米粒中药物量加入的药物量 ×１００％
载药量＝纳米粒中药物量纳米粒量 ×１００％
２．３．４　体外释药试验　Ｂｒｕ在释放介质中的稳定
性：精密称取一定量的 Ｂｒｕ原料药，用０５％聚氧乙
烯脱水山梨醇单油酸酯（Ｔｗｅｅｎ８０）的 ＰＢＳ水溶液
稀释至一定浓度。置恒温水浴振荡器内，（３７±
０５）℃避光振荡，分别于 ０，０５，１，２，４，８，
１２，２４，３６，４８，６０ｈ取样１０ｍＬ，从中取２０μＬ
测定Ｂｒｕ含量。以０ｈ含量为１００％，分析 Ｂｒｕ含
量变化。
ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ体外释药试验：将透析袋置于蒸
馏水中浸泡２４ｈ，移取ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ溶液８ｍＬ置透
析袋中。透析袋两端用夹子夹紧，放置释放介质中，
磁力搅拌，转速２００ｒ·ｍｉｎ－１。分别于０，０５，１，２，
４，８，１２，２４，３６，４８，６０ｈ取样１０ｍＬ，过０４５μｍ微
孔滤膜，取续滤液２０μＬ测定 Ｂｒｕ含量。按照原料
药在释放介质中的降解曲线加以校正，计算不同时
刻取样液中药物的浓度，计算累积释药百分数Ｑ，作
累计释药曲线［７１０］。
Ｂｒｕ溶液体外释药试验：取一定量 Ｂｒｕ溶液，同
上法进行体外释药试验。
３　结果
３．１　纳米粒的外观
由透射电镜拍摄的照片可看出制得的纳米粒外
观圆整，大小比较均一，初步观察粒径在１００ｎｍ
以下。
图１　马钱子碱纳米溶液透射电镜下照片（×４３００００）
３．２　粒径分布和Ｚｅｔａ电位
ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ的平均粒径为（９５±３）ｎｍ，多分
散指数为 ０３６２±００２１，Ｚｅｔａ电位为（－１５６８±
０５８）ｍＶ。
３．３　包封率和载药量
３批 ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ的平均包封率为（３７０±
２０）％，平均载药量为（６９±０３）％。
３．４　体外释药试验
３．４．１　Ｂｒｕ在释药介质中稳定性　结果表明，在整
个体外释放试验过程中，Ｂｒｕ在释放介质中稳定。
表１　Ｂｒｕ在体外释药介质中的稳定性考察结果（ｎ＝３）
ｔ（ｈ） ０ １ ２ ４ ８ １２ ２４ ３６ ４８ ６０
％（Ｍｅａｎ±ＳＤ） １００ ９９６±３１ ９９２±２７ ９８５±３５ ９７６±２６ ９７２±１９ ９６５±２４ ９５９±３２ ９５８±２８ ９５２±２６
３．４．２　Ｂｒｕ溶液和 ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ的体外释药试验
　结果表明，与 Ｂｒｕ溶液相比，ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ具有一
定的缓释作用，但突释现象依然比较明显。
分别用一级动力学方程、Ｈｉｇｕｃｈｉ方程、Ｎｉｅｂｅｒ
ｇｕｌ平方根定律、Ｈｉｘｃｏｎｃｒｏｗｅｌ里方根定律和
Ｗｅｉｂｕｌ方程对 Ｂｒｕ原料药、ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ体外释药
曲线进行方程拟和，结果见表２。
结果表明，Ｂｒｕ溶液和 ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ体外释药
用Ｗｅｉｂｕｌ方程拟和最好。
４　讨论
图２　Ｂｒｕ溶液和ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ体外累积释药量－时间
曲线（ｎ＝３）
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表２　释药曲线方程拟合
　 模型 方程 ｒ
Ｂｒｕ ｍｏｎｏｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｎ （１－Ｑ）＝－０１１３８ｔ－０２２７９ ０９２
　 Ｈｉｇｕｃｈｉ Ｑ＝０１２１１ｔ１／２＋０２３９１ ０８８
　 Ｎｉｅｂｅｒｇｕｌ （１－Ｑ）１／２＝－００１４ｔ＋０７４８４ ０８８
　 Ｈｉｘｃｏｎｃｒｏｗｅｌ （１－Ｑ）１／３＝－００１３４＋０８２９７ ０９３
　 Ｗｅｉｂｕｌ Ｌｎｌｎ（１／１－Ｑ）＝０５７６ｌｎｔ－０８０４９ ０９８
ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ ｍｏｎｏｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｌｎ（１－Ｑ）＝－００３３１ｔ－０５１２７ ０８８
　 Ｈｉｇｕｃｈｉ Ｑ＝０１０８８ｔ１／２＋０１９５６ ０９０
　 Ｎｉｅｂｅｒｇｕｌ （１－Ｑ）１／２＝－０００９５ｔ＋０７８８３ ０８２
　 Ｈｉｘｃｏｎｃｒｏｗｅｌ （１－Ｑ）１／３＝－００３３１－０５１２７ ０８８
　 Ｗｅｉｂｕｌ Ｌｎｌｎ（１／１－Ｑ）＝０４５７３ｌｎｔ－１０３０６ ０９８
　　在预实验中，作者分别采用乳化溶剂挥发法、
溶剂扩散法（ＰＬＡ为载体材料）和乳液聚合法，以 α
氰基丙烯酸正丁酯（ＢＣＡ）为载体材料，制备 Ｂｒｕ
ＰＬＡＮＰｓ。结果表明，采用乳液聚合法，Ｂｒｕ包封
率和载药量低；采用乳化溶剂挥发法、溶剂扩散
法，Ｂｒｕ包封率和载药量较高。考虑到溶剂挥发法
要使用二氯甲烷，且操作复杂，故采用溶剂扩散
法、并经过单因素实验和正交实验确定最佳处方。
考虑到纳米粒可能存在物理、化学稳定性方面的问
题，本研究制备的纳米粒的最终的制剂形式为注射
用冷冻干燥制品。
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ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｂｒｕｃｉｎｅｌｏａｄｅｄＰｏｌｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ＺＨＡＯＪｉＨｕｉ，ＬＩＵＺｈａｏＬｉｎ，ＸＵＪｉｅ，ＹＵＹａｎＹａｎ，ＦＥＮＧＮｉａｎＰｉｎｇ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１２０３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｐｒｅｐａｒｅａｎｄｅｖａｌｕａｔｅＢｒｕｃｉｎｅｌｏａｄｅｄｐｏｌｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＢｒｕＰＬＡＮＰｓ）．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ＢｒｕＰＬＡＮＰｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｓｏｌｖｅｎｔｄｉｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｐｈｙｓｉｃａｌ，ｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｒｅｌｅａｓｅｂｅｈａｖｉｏｒｏｆｔｈｅｐｒｅ
ｐａｒｅｄＢｒｕＰＬＡＮＰｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｍｅａｎｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆｔｈｅｐｒｅｐａｒｅｄＢｒｕＰＬＡＮＰｓｉｓ９５ｎｍｗｉｔｈｐｏｌｙｄｉｓ
ｐｅｒｓｉｔｙｉｎｄｅｘｏｆ０３６２．Ｔｈｅｚｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｓ－１５６８ｍＶ．ＴｈｅｍｅａｎｌｏａｄｉｎｇａｎｄｅｎｔｒａｐｍｅｎｔｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＢｒｕｗｅｒｅ７％ ａｎｄ３７％，
ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＢｒｕｓｏｌｕｔｉｏｎ，ａｎｏｂｖｉｏｕｓｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｂｅｈａｖｉｏｒｏｆＢｒｕｆｒｏｍＢｒｕＰＬＡＮＰｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏ
ｒｅｌｅａｓｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＢｒｕＰＬＡＮＰｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｓｏｌｖｅｎｔｄｉｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄｅｘｈｉｂｉｔｅｄｓｍａｌｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ，ｈｉｇｈＢｒｕｌｏａｄ
ｉｎｇｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，ａｎｄｏｂｖｉｏｕｓｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｉｎｖｉｔｒｏ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｂｒｕｃｉｎｅ；ＰＬＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ；ｉｎｖｉｔｒｏｒｅｌｅａｓｅ
［责任编辑　周　驰］
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