全 文 ：≈z 国际种子检验协会 k≥× lqt||y国际种子检验规程 ≈ q颜 启传译 1北京 }中国农业出版社 ot||yq
Στυδψ ον σεεδ θυαλιτψ τεστ ανδ θυαλιτψ στανδαρδ οφΧηανγιυµ σµ ψρνιοιδεσ
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(Ινστιτυτε οφ Χηινεσε ΜεδιχιναλΜατεριαλσ, Νανϕινγ ΑγριχυλτυραλΥνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utss|x, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ¶¨ §¨ ∏´¤¯¬·¼ ·¨¶·° ·¨«²§¶o¤±§³µ²√¬§¨ ¥¤¶¬¶©²µ¨ ¶·¤¥¯¬¶«¬±ª¶¨ §¨ ∏´¤¯¬·¼ ¶·¤±§¤µ§²©Χηανγιυµ
σµ ψρνιοιδεσq Μετηοδ : ¦¦²µ§¬±ª·²·«¨ ¶¨ §¨·¨¶·¬±ªµ¨ª∏¯¤·¬²±¶o ·«¨ ¶¨ §¨ ∏´¤¯¬·¼ ²©Χ. σµ ψρνιοιδεσ©µ²° §¬©©¨µ¨±·³µ²§∏¦¬±ª¤µ¨¤¤±§¬±
§¬©©¨µ¨±·ªµ²º¬±ª¼¨ ¤µ¶º¤¶° ¤¨¶∏µ¨§q Ρ εσυλτ ανδ χονχλυσιον: ׫¨ µ¤±ª¨ ²©¶¨ §¨³∏µ¬·¼o º ¬¨ª«·³¨ µt sss ¶¨ §¨¶o ¶¨ §¨°²¬¶·∏µ¨ ¦²±2
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[ Κεψ ωορδσ] Χηανγιυµ σµ ψρνιοιδεσ~ ¶¨ §¨~ ∏´¤¯¬·¼ ·¨¶·~ ∏´¤¯¬·¼ ¶·¤±§¤µ§
≈责任编辑 张宁宁
三七叶器官获得胚状体和再生植株的研究
许鸿源 t3 o蒙爱东 u o何 冰 t o周凤珏 t o蓝桃菊 t o沙 坡 t o许鸿章 v
ktq广西大学 农学院 o广西 南宁 xvsssx~ uq广西药用植物园 o广西 南宁 xvssst~
vq中国医学科学院 医用生物技术研究所 o北京 tsss{tl
≈摘要 目的 }研究和改进三七组培技术 ∀方法 }以三七叶片和叶柄的愈伤组织为外植体 o以 ≥ n uow2⁄ t1x
°ª# pt为基本培养基 o再分别添加 ƒ≥o
o×或 ×各 s1x °ª# pt o于暗处培养 o诱导胚状体发生 o再在光下培
养 o诱导胚状体萌发成苗 ∀结果与结论 }只有添加 ƒ≥的培养基能诱导胚状体发生 owx ∗ ys §是高峰期 o最终发生
率达 {xh左右 o叶片愈伤组织优于叶柄愈伤组织 ∀胚状体在光下培养 o多数可以转绿萌发 ovsh可以发育成健壮的
再生植株 ∀
≈关键词 灵发素 ~三七叶器官 ~胚状体 ~再生植株
≈中图分类号 ≥ xyz ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlsy2sw{t2sv
≈收稿日期 ussx2s|2s{
≈基金项目 广西教育厅专利专项基金 k tysss|l~植物学硕
士点重点建设基金 k⁄2tss{l
≈通讯作者 3 许鸿源 oר¯ rƒ¤¬}kszztlvuv{wywo∞2°¤¬¯}¬∏2
«¼s{ tuyq¦²°
三七 Παναξ νοτογινσενγ ƒq q ≤«¨ ±为五加科人
参属植物 o主产广西 !云南等地 ≈tou ∀性温 o味甘 !苦 o
具有止血镇痛 !活血化瘀 !滋补强壮和消除疲劳增强
体力之功效 o传统上常用于治疗咳血 !吐血 !月经过
多 !皮下出血及跌打和刀枪损伤等症 ≈u ∀随着三七产
业的迅速发展 o人们一直试图应用现代生物技术扩大
其资源和种源 o先后以种胚 ≈v !花序 ≈w !茎切段 ≈x 为外
植体获得过三七胚状体 ∀作者用叶器官获得三七胚
状体 o进而获得再生植株 o相关研究尚未见有报道 ∀
1 材料
采自广西药用植物园一年生三七植株的叶器
官 ∀灵发素 k ¬¯±ª©¤¶∏oƒ≥lo即 ° 2s{≈y o亦称狭霉
素或 ¤±·¬¥¬²·¬¦{≈zo{ o自制 o纯度 ∴ |{h ∀ uow2⁄kuo
w2二氯苯氧乙酸 lo激动素 k×loy2苄基腺嘌呤 ky2
lo玉米素 k×l均购自广西医药站 o进口分装 ∀
2 方法
2q1 愈伤组织的获得 参考郑光植的方法 ≈| 对采
集到的叶器官用 s1th ª≤ u¯灭菌消毒 ∀然后按常
规在净化工作台上切开分为 u组 o分别记作 ≠
k叶
#t{w#
第 vu卷第 y期
ussz年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ y
¤µ¦«o ussz
柄组 l和 ≠°k叶片组 lo再将叶柄切成长 t ¦°左右
的切段 ~叶片切成 t ¦°u左右的方片 ∀按许鸿源的
方法 ≈x o将 ≠
和 ≠°分别接入培养基 } ≥ n
uow2⁄ t1xk单位 °ª# pt o下同 l n ƒ≥ u1s∀该培
养基添加蔗糖 v1sh o琼脂 s1wxh o调 ³ x1{o每组
ts瓶 o每瓶 x个切段或方片 ∀在 ux ∗ u{ ε 进行暗
培养 o诱导愈伤组织的发生 ∀
2q2 胚状体的诱导 将由 ≠
和 ≠ °得到的愈伤组
织再分别转接到下列培养基 }≠ ≥ n uow2⁄ t1x
k≤l~ ≥ n uow2⁄ t1x n y2
s1x~≈ ≥ n uow2⁄
t1x n× s1x~… ≥ n uow2⁄ t1x n × s1x~ ≥ n
uow2⁄ t1x n ƒ≥ s1x∀各培养基均添加蔗糖 v1sh o
琼脂 s1wxh o³ x1{o暗培养 ∀接每组 ts瓶 o每瓶 x
个组织块 ∀ ux ∗ u{ ε 种后 vsowxoysozxo|s §观察
记录胚状体发生率 k包括污染者 l及其生长情况 ∀
2q3 胚状体萌发成苗 培养 ys §后 o选取肉眼可
辨 o体积较大的胚状体 k带部分愈伤组织 l仍然转入
培养基 o并在光照 u sss ¬¯ots ∗ tu «# §pt条件下
培养 ∀待部分胚状体转绿或展开 t子叶时 o及时将
其分离 k仍带有少量愈伤组织 l∀继续转入培养基
o于光下培养 ∀
3 结果与分析
3q1 不同培养基对胚状体诱导的影响 在 x种培
养基中 o唯有添加 ƒ≥的培养基 能诱导三七叶器官
的愈伤组织发生形态各异的胚状体 k图 toul∀ ≠
组
在 vsowxoysozxo|s §的胚状体发生率分别为 u1xh o
wx1yh oz{1yh o{y1{h o{{1zh ~≠
组为 sou{1vh o
yx1{h ozu1yh o{u1xh ∀ wx ∗ ys §达到发生高峰 ∀
叶片比叶柄效果更好 o胚状体发生得早且多 ∀综合本
结果与前面用茎段所做的结果 ≈x 表明 oƒ≥在诱导三
七胚状体发生方面确实比 y2
o×和 ×都有更好
的效果 ~来自叶器官的愈伤组织比来自茎器官的愈伤
组织发生胚状体更快 o尤其是叶片最佳 ∀
图 t ƒ≥诱导三七愈伤组织发生大量胚状体
图 u ƒ≥诱导出的不同形状的三七胚状体
3q2 胚状体萌发成苗 ≠ °胚状体光下培养至 zs §
左右 o≠
胚状体 {s §左右 o部分强壮者陆续成熟萌
发 o开始展现绿色子叶 k图 vl∀将萌发的胚状体分
离 k仍带有少量愈伤组织 lo转入新的培养基 中
k≠°o≠
各 ts瓶 lo继续在光下培养 ∀结果 owx §
后 o约有 vsh左右的胚状体可以正常生长发育成健
壮的再生植株 k图 wlo≠ °o≠
间无明显差别 ∀而另
一些 o多数生长困难 o少数甚至会再次脱分化 o在已
经展现的绿色子叶上又出现白色愈伤组织 ∀这说
明 o培养基 虽然很适合诱导三七胚状体的发生 o但
是对胚状体的生长成再生植株未必是最合适的 ∀因
此 o还有待继续改进 o以提高成苗率 ∀同时 o本结果
也提醒人们 o在植物组培中脱分化与再分化似乎是
一个可逆过程 o影响其活动方向的内外因素可能十
分复杂 o在研究植物形态发生时应予重视 ∀
图 v 三七胚状体展现绿色子叶
图 w 三七胚状体发育成苗
#u{w#
第 vu卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ y
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4 讨论
陈伟荣等曾以三七花序的愈伤组织为材料 o用
y2
和 × u种细胞分裂素诱导获得胚状体 ≈w ∀但
其同时将 y2
o×和 v混合使用 o且没有相应的
排除性对照组 o致使无法确认 y2
o×在诱导三七
胚状体发生中的具体贡献 ∀甘烦远等曾报道 y2
有促进三七愈伤组织芽分化的作用 o但分化率不高 o
且未出现胚状体 ≈ts ∀在笔者的研究中 o无论是对茎
器官的愈伤组织 ≈x o还是叶器官的愈伤组织 o单独
使用 y2
或 ×都未能诱导胚状体的发生及再生
植株的建成 ∀然而单独使用 ƒ≥o却被反复证明 o能
诱导三七茎段 !叶柄及叶片等不同器官胚状体的发
生 o并促进胚状体萌发生长成再生植株 ∀特别是对
胚状体的诱导率高达 {sh 以上 o这一结果对进一步
研究三七器官发生的机理 o三七人工种子的制备 o三
七种源的优化等都具有积极意义 ∀
ƒ≥对茎器官胚状体的诱导质量浓度是 u °ª#
pt o而对叶器官则只需 s1x °ª# pt o说明叶器官
对 ƒ≥更敏感 ≈x ∀尤其叶片是诱导胚状体最佳的
材料 o同等条件下 o胚状体发生速度快 o诱导率亦最
高 ∀
综合现有对三七胚状体诱导与植株再生的研究
工作 ≈v2x 表明 oƒ≥与 ×o
o×等相比 o是目前唯
一能够被确认 o可以诱导三七多种器官愈伤组织再
分化出胚状体 o并使其发育成再生植株的植物细胞
分裂素 ∀
≈致谢 广西药用植物园邓锡青和李春霞等参加部分
工作 ~广西大学农学院郭标协助拍照 ∀
≈参考文献
≈t 江苏新医学院 q中药大辞典 ≈ q上册 q上海 }上海人民出版
社 ot||z}xwq
≈u 崔树德 q中药大全 ≈ q哈尔滨 }黑龙江科学技术出版社 o
t|{|}wxxq
≈v 张 琪 o佟曦然 o张 昭 o等 q三七胚培养中的胚胎发生 ≈ q
植物学通报 ot|{|oykwl}uvyq
≈w 陈伟荣 o简玉瑜 q三七试管苗繁殖技术的研究 ≈ q华南农业
大学学报 ot||uotvkvl}y|q
≈x 许鸿源 o蒙爱东 o李春霞 o等 q灵发素对三七胚状体发生及其
成苗的影响 ≈ q中药材 ousswouzktsl}zttq
≈y 许鸿源 o许鸿章 o杨美纯 o等 q° 2s{理化性质及生物活性的
研究 ≈ q广西植物 oussvouvkwl}wytq
≈z 许鸿源 q狭霉素在植物学和农学上的应用 ≈ q发明专利公
报 oussvot|kvwl}yq
≈{ 抗菌素生物理化特性编写组 q抗菌素生物理化特性 ≈ q第 t
分册 q北京 }人民卫生出版社 ot|zz}tsuq
≈| 郑光植 o梁 峥 q三七的组织培养 ≈ q植物学报 ot|z{ous
kwl}vzvq
≈ts 甘烦远 o周立刚 o郑光植 o等 q三七愈伤组织分化的研究 ≈ q
云南植物研究 ot||votxktl}ytq
Ιν ϖιτρο στυδιεσ ον ασεξυαλεµ βρψοσανδ ρεγενερατεδ πλαντλετσ οβταινεδ
φροµ λεαφ οργαν οφΠαναξ νοτογινσενγ
÷ ²±ª2¼∏¤±t o ∞ ¬2§²±ªu o ∞
¬±ªt o ƒ ±¨ª2∏¨t o פ²2∏t o ≥
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(t1ΑγριχυλτυραλΧολλεγε οφ Γυανγξι Υνιϖερσιτψ, Ναννινγ xvsssx, Χηινα;
u. Γαρδεν οφΜεδιχιναλΠλαντ ∆εϖελοπµ εντ οφ Γυανγξι, Ναννινγ xvssst, Χηινα;
v. Ινστιτυτε οφΜεδιχιναλΒιοτεχηνολογψ οφΧηινεσε Αχαδεµ ψ οφΜεδιχαλΣχιενχεσ, Βειϕινγ tsssxs, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ¤±§¬°³µ²√¨·«¨ ·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ·¨¦«±²¯²ª¼ ²©Παναξ νοτογινσενγq Μετηοδ : ¶¬±ª·«¨ ¦¤¯ ∏¯¶²©
¯¨ ¤©¥¯¤§¨ ¤±§¯¨ ¤©¶·¤¯® ²©Π. νοτογινγσενγ ¤¶ ¬¨³¯¤±·¶o ≥ n uo w2⁄ tqx °ª# pt ¤¶¥¤¶¤¯ ° §¨¬∏°o ·«¨ ©²µ°¤·¬²± ²©¤¶¨¬∏¤¯ °¨¥µ¼²¶
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≈责任编辑 张宁宁
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中 国 中 药 杂 志
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