全 文 ：桂附地黄丸中痕量毒性成分
乌头碱的限量检测
李臖癎，蒋 晔
（河北医科大学 药学院，河北 石家庄 ０５００１７）
［摘要］ 目的：建立毛细管电泳场放大富集技术检测桂附地黄丸中痕量毒性成分乌头碱的方法。方法：采用
未涂层熔融石英毛细管柱（５０μｍ ×４３ｃｍ，有效长度３５ｃｍ）为分离通道，５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钠（ｐＨ４６）甲醇
（８∶２）为运行缓冲溶液；运行电压１０ｋＶ；进样电压１０ｋＶ，进样时间４０ｓ；在进样之前设定用甲醇冲洗，压力３５
ｋＰａ，冲洗时间５ｓ；检测波长２３５ｎｍ。结果：该法使乌头碱的检测灵敏度提高了５００倍。乌头碱在３１３～２×１０３μｇ
·Ｌ－１呈良好的线性关系（ｒ＝０９９９６），最低检测限为９４μｇ·Ｌ－１，平均回收率为９８０％，ＲＳＤ２６％。结论：本方
法简便、快速、专属性强、富集效率高，为桂附地黄丸的生产及质量控制提供了一种新的、可靠的分析手段。
［关键词］ 毛细管电泳场放大富集技术；附桂地黄丸；乌头碱；限量检测
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１４１６８４０４
［收稿日期］ ２００７１０２４
［通讯作者］ 蒋晔，Ｔｅｌ：（０３１１）８６２６６０６９，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｅ＠
ｈｅｂｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
桂附地黄丸为传统中药制剂，由肉桂、附子、熟
地黄、山茱萸等 ８味中药组成，具有温补肾阳的作
用，临床上主要用于治疗腰膝酸软，肢冷尿频。方中
附子含有痕量成分乌头碱，现代药理研究证实其具
有抗炎、免疫抑制、麻醉止痛、抗肿瘤、降血压等作
用。但乌头碱的毒性很强，人口服乌头碱０２ｍｇ即
可出现恶心、呕吐、头晕、眼花、脉缓、呼吸困难、神志
不清、心律紊乱等中毒现象［１］。然而，由于目前附
子没有统一的炮制方法，因此，为控制药品质量，保
证用药安全，有必要对桂附地黄丸中痕量毒性成分
乌头碱进行质量控制。
目前乌头碱的限量检查主要采用分光光度
法［２］、薄层色谱法［３４］和高效液相色谱法［５７］等。分
光光度法测定的是药材或制剂中总生物碱的含量，
选择性差，达不到对乌头碱限量控制的要求。薄层
色谱法样品预处理繁琐费时，并且由于乌头碱的含
量较低，共存组分干扰较大而导致特异性差，误差
大，定量分析不够准确。由于中药制剂成分复杂，高
效液相色谱法对于结构相近的碱性物质的分离难度
较大［７］，因此对样品的预处理及柱效要求较高。作
者建立毛细管电泳（ＣＥ）场放大富集技术检测桂附
地黄丸中的痕量乌头碱。该方法将 ＣＥ分离度高、
选择性好、样品用量少等优点与场放大富集技术适
应痕量分析的要求相结合，大大提高了定量分析中
的专属性和灵敏度，为桂附地黄丸生产过程中的质
量控制及防止药物中毒提供了一种新的、可靠的、方
便实用的分析手段。
１ 仪器与试药
高效毛细管电泳仪（北京彩陆科学仪器有限公
司，中国科学院研究生院应用化学所），高压电源
（北京彩陆科学仪器有限公司，中国科学院研究生
院应用化学所），紫外检测器（北京彩陆科学仪器有
限公司，中科院研究生院应用化学所），未涂层熔融
石英毛细管柱（５０μｍ×４３ｃｍ，３５ｃｍ）（河北永年
光导纤维厂）。乌头碱对照品由中国药品生物制品
检定所提供（批号０７２０９８０７）；盐酸丁卡因由北京
制药厂生产；桂附地黄丸由河南省宛西制药有限公
司生产（批号０３０６０２，０３０６０３，０５０８０１）。甲醇为色
谱纯，所有其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。
２ 方法与结果
２．１ 电泳条件
运行缓冲溶液为５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钠（ｐＨ
４６）甲醇（８∶２）；运行电压１０ｋＶ；进样电压１０ｋＶ，
进样时间４０ｓ；在进样之前设定用甲醇冲洗，压力为
３５ｋＰａ，冲洗时间 ５ｓ；温度 ２５℃；紫外检测波长
２３５ｎｍ。开机后毛细管柱用０１ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠
溶液冲洗１０ｍｉｎ，水冲洗１０ｍｉｎ，运行缓冲溶液冲洗
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１０ｍｉｎ，每次进样后用０１ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠溶液、
水和运行缓冲溶液分别冲洗３ｍｉｎ。所有溶液在使
用前均用０４５μｍ纤维树脂膜滤过。
２．２ 溶液制备
２．２．１ 内标溶液制备 精密称取盐酸丁卡因２００
ｍｇ置１００ｍＬ量瓶中，加甲醇使其溶解并稀释至刻
度，摇匀，作为内标储备液，再以甲醇稀释得浓度为
２００μｇ·Ｌ－１的内标溶液。
２．２．２ 对照品溶液制备 精密称取乌头碱对照品
２００ｍｇ置１００ｍＬ量瓶中，加内标溶液使其溶解并
稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。
２．２．３ 供试品溶液制备 取本品，研细，取粉末
０１ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，加１ｍｏｌ·Ｌ－１盐
酸１０ｍＬ，冰浴超声处理４０ｍｉｎ，滤过，取续滤液５
ｍＬ，置分液漏斗中，用乙醚洗涤３次，每次１０ｍＬ，弃
去乙醚液，将酸水层用氨水调 ｐＨ９～１０，再用乙醚
提取３次，每次１０ｍＬ，收集乙醚层，挥干，残渣用内
标溶液溶解，置１０ｍＬ量瓶中，用内标溶液稀释至刻
度，摇匀，作为供试品溶液。
２．３ 分离方法考察
２．３．１ 系统适用性试验 在２．１项电泳条件下，乌
头碱对照品和供试品溶液色谱图分别见图１。由图
可见，内标及桂附地黄丸中其他药材对乌头碱的测定
不产生干扰，理论塔板数以乌头碱计不低于１万。
Ａ．对照品；Ｂ．供试品；１．内标；２．乌头碱
图１ 乌头碱ＣＥ图
２．３．２ 线性关系考察 精密吸取乌头碱对照品储
备液１ｍＬ置１００ｍＬ量瓶中，加内标溶液稀释至刻
度，摇匀，作为１号工作液，再从１号工作液中吸取
５ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中，加内标溶液稀释至刻度，摇
匀，得２号工作液，依此法对倍稀释得３，４，５，６，７号
系列标准溶液，质量浓度分别为 ２×１０３，１×１０３，
５００，２５０，１２５，６２５，３１３μｇ·Ｌ－１。按２．１项下电
泳条件进样，记录色谱峰面积，以对照品与内标物峰
面积比值Ｙ对质量浓度 Ｘ（μｇ·Ｌ－１）进行线性回
归，得线性方程 Ｙ＝４７×１０－３Ｘ＋０１，ｒ＝０９９９６。
结果表明乌头碱在３１３～２×１０３μｇ·Ｌ－１线性关系
良好。
２．３．３ 最低检出限测定 取乌头碱线性标准溶液
稀释，进样并记录电泳图，按 Ｓ／Ｎ＝３计，乌头碱最
低检测限为９４μｇ·Ｌ－１。
２．３．４ 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样
分析５次，记录峰面积，结果乌头碱与内标物峰面积
比值ＲＳＤ２３％。
２．３．５ 稳定性试验 取同一供试品溶液在相同电
泳条件下分别于０，２，４，８，１２，２４ｈ进样测定，记录
色谱峰面积，乌头碱与内标物峰面积比值 ＲＳＤ
３６％，结果表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。
２．３．６ 重复性试验 取同一批（批号０３０６０２）样品
５份，按 ２．２．３项下方法制备供试品溶液，进样测
定，记录色谱峰面积，结果乌头碱与内标物峰面积比
值ＲＳＤ２３％。
２．３．７ 加样回收试验 取同一批（批号０３０６０２）桂
附地黄丸粉末，加入乌头碱对照品的甲醇溶液适量，
挥干，按供试品溶液制备项下方法操作，并按２．１项
下电泳条件进样，测定乌头碱的含量，计算加样回收
率及ＲＳＤ，测定结果见表１。
表１ 乌头碱加样回收率（ｎ＝３）
样品中量
／ｎｇ
加入量
／ｎｇ
测得量
／ｎｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
２３８８ ３０００ ５４１８ １０１０ ９８９ ３１
２４０２ ３０００ ５４４１ １０１３
２４０４ ３０００ ５２６３ ９５３
２４０１ ２５００ ４８０１ ９６０ ９８０ ２３
２３９３ ２５００ ４８３３ ９７６
２４０５ ２５００ ４９１５ １００４
２４０１ ２０００ ４３９１ ９９５ ９７２ ２３
２４００ ２０００ ４３４０ ９７０
２３９０ ２０００ ４２９０ ９５０
２．３．８ 样品含量测定 取３批供试品溶液，按２．１
项下电泳条件进样，计算乌头碱的含量，结果批号
０３０６０２，０３０６０３，０５０８０１的３批桂附地黄丸中乌头碱
的质量分数分别为０００８０％，０００８５％，０００５４％。
３ 讨论
３．１ ＣＥ条件的优化
３．１．１ 缓冲溶液ｐＨ的影响 ｐＨ对分离度和迁移
时间具有显著影响。本试验对ｐＨ４０～６０进行了
考察。结果表明：随着 ｐＨ增加，电渗流增强，保留
时间继而缩短，而分离度随着 ｐＨ增加逐渐变小。
因此综合以上两方面因素，选择ｐＨ４６。
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３．１．２ 缓冲溶液浓度的影响 离子强度（浓度）主
要影响双电层厚度，离子强度越大双电层越薄，电渗
降低；同时浓度越大电流越大，其产生的焦耳热也越
大，基线噪声提高。本试验考察了缓冲溶液在４０～
７０ｍｍｏｌ·Ｌ－１对乌头碱迁移行为及峰形的影响。结
果表明：随着缓冲溶液浓度的增大，乌头碱的迁移时
间变化不大，但电流随之增大，基线不平，噪音增加，
峰形变差，故选择５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的磷酸二氢钠作为
缓冲溶液。
３．１．３ 有机添加剂的影响 有机添加剂主要影响
组分的分离选择性和柱效，同时有机添加剂比例增
加，迁移时间随之增加。本试验考察了甲醇比例在
１０％～４０％对乌头碱分离度及迁移行为的影响。结
果表明：随着甲醇比例的增加，乌头碱的分离选择性
增加，当甲醇比例为２０％时，乌头碱与内标及样品
中其他组分达到良好分离。继续增加甲醇比例，分
离度提高不明显而迁移时间显著增加，故选择甲醇
比例为２０％。
３．２ 富集条件的优化
３．２．１ 预进溶液对富集效果的影响 在样品电动
进样之前注入一段低电导的溶液塞可以提高富集效
果。这是因为施加电压后，低电导的溶液塞所在区
带的电场很强，在电动进样时，被分析离子会快速迁
移通过低电导的溶液塞，达到分离电解质的界面时
因电场强度的显著降低而快速地降低迁移速率，从
而使分析物离子在分离前得到有效富集。本试验分
别考察了预进水、乙腈和甲醇对富集效果的影响。
结果表明在２．１项电泳条件下，预进水、乙腈和甲醇
时，与常规电迁移进样相比，检测灵敏度分别提高
１００，８０和５００倍。故选择甲醇为预进溶液。
３．２．２ 进样时间对富集效果的影响 进样时间的
长短主要影响进样量的大小，从而影响富集效果。
本试验考察了进样时间在２０～６０ｓ对富集效果的
影响。结果表明：随着进样时间的增加，峰高明显增
加，在 ４０ｓ之前无减缓趋势，乌头碱与内标及桂附
地黄丸中其他组分分离良好，继续增加进样时间，峰
高不再增加，峰展宽明显，柱效降低，而不利于定量
测定，故选择进样时间为４０ｓ。
３．２．３ 运行电压对富集效果的影响 在其他试验
条件不变的情况下，本试验考察了运行电压在８～
１２ｋＶ对富集效果的影响。结果表明：峰高随运行
电压的增加而增高，但是随着运行电压的增大，组分
保留时间减小且乌头碱峰与内标和样品中其他组分
峰分离度减小，不利于分离测定。当运行电压为１０
ｋＶ时，乌头碱峰峰形良好，各组分均完全分开，故选
择最佳运行电压为１０ｋＶ。
３．３ 提取条件的选择
乌头碱的提取常采用冷浸法［７］和超声提取
法［５］，但提取的效果不尽相同。由于乌头碱为亲脂
性生物碱，并且对热很不稳定，因此作者利用生物碱
的碱性，加酸冰浴超声提取 ４０ｍｉｎ使生成盐溶于
水，加乙醚萃取去除脂溶性杂质，再碱化，用乙醚萃
取，去除水溶性杂质。该法效果良好，使待测组分处
无干扰。同时采用冰浴超声提取既防止成分遇热分
解又大大提高了提取效率。
提取过程中加氨水碱化时ｐＨ应控制在９～１０，
ｐＨ＜９，则生物碱游离不完全，ｐＨ＞１０，用乙醚萃取
时易产生乳化，乌头碱易被破坏。
样品提取过程中，应注意操作要迅速，如果提取
时间过长，则乌头碱水解，将影响测定结果。
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Ｌｉｍｉｔｅｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｒａｃｅｔｏｘｉｃａｌａｃｏｎｉｔｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄｉｎ
Ｇｕｉｆｕｄｉｈｕａｎｇｐｉｌｓ
ＬＩＪｕｎｍｅｉ，ＪＩＡＮＧＹｅ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１７，Ｃｈｉｎａ）
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ａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｃｏｎｉｔｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄｉｎＧｕｉｆｕｄｉｈｕａｎｇｐｉｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｎｕｎｃｏａｔｅｄｆｕｓｅｄｓｉｌｉｃａｃａｐｉｌａｒｙｃｏｌｕｍｎ（５０μｍ×４３ｃｍ，
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Ｔｈｅｒｕｕｎｉｎｇｖｏｌｔａｇｅｗａｓ１０ｋＶａｎｄｔｈｅｃａｐｉｌａｒｙｉｎｌｅｔｗａｓｄｉｐｐｅｄｉｎｍｅｔｈａｎｏｌｆｏｒ５ｓｐｒｉｏｒｔｏｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（１０ｋＶ，４０ｓ）．
Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２３５ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄａｌｏｗｅｄ５００ｆｏｌｄｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｏｆａｃｏｎｉｔｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄ．Ａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ３１３２×１０３μｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９６），ｗｉｔｈｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆ９４μｇ·Ｌ－１．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ
９８０％ ｗｉｔｈｔｈｅＲＳＤｏｆ２６％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｗｉｔｈｈｉｇｈｓｔａｃｋｉｎｇｅｆｉｃｉｅｎｃｙ；ｉｔｐｒｏｖｉｄｅｓａｎｅｗ
ｒｅｌｉａｂｌｅｍｅａｎｓｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＧｕｉｆｕｄｉｈｕａｎｇｐｉｌｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｆｉｅｌｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｓａｍｐｌｅｓｔａｃｋｉｎｇｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；Ｇｕｉｆｕｄｉｈｕａｎｇｐｉｌｓ；ａｃｏｎｉｔｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄ；ｌｉｍｉｔｅｄｄｅｔｅｒ
ｍｉｎａｔｉｏｎ ［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００８０３１４
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０６７２６０５）
［通讯作者］ 王地，Ｔｅｌ：（０１０）８３９１１６２８，Ｆａｘ：（０１０）８３９１１６２７，
Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｄｉ２００２２００８＠ｔｏｍｃｏｍ
利用流体动力式超声提取中药的实验研究
王 地１，关 怀１，邹海艳１，于 萍１，徐 扬２，张红月１
（１．首都医科大学 中医药学院，北京１０００６９；
２．北京光慧晓明声能技术研究所，北京１０００８３）
［摘要］ 目的： 研究利用流体动力式超声提取中药的方法。方法：以黄芩苷含量为指标，利用高效液相色谱
法测定黄芩苷含量，以煎煮、回流、槽式超声等方法作对照，研究利用流体动力式超声提取黄芩苷的方法；以总黄酮
含量为指标，利用高效液相色谱法测定黄酮含量，槽式超声和回流等方法作对照，研究用流体动力式超声提取银杏
叶的方法，以浸出物含量为指标，煎煮法作对比，用流体声能提取中药复方。结果：利用流体动力式超声提取黄芩
苷含量显著高于其他方法，流体动力式超声提取银杏叶总黄酮含量与槽式超声无显著差异。用流体动力式超声提
取中药复方的浸出物含量显著高于煎煮法。结论：流体动力式超声可提高黄芩苷的提取效率，提取银杏叶总黄酮
含量与槽式超声相当并有利于中药复方中水溶性成份的溶出。
［关键词］ 流体动力式超声；提取工艺；高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ２８３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１４１６８７０４
近年来，在中药提取中，超声波以其节能、快速、
温度低等优点受到重视。超声波作用于液体时所产
生的空化效应以及热效应和机械效应，使其可缩短
植物药提取时间，提高提取率［１］。流体动力式超声
是由流体动力式超声发生器产生的混合频率的声
能。流体动力式超声发生器与目前常用的压电式超
声发生器一样，是功率超声的一种，其特点是以高速
流动的气体或液体为振动能量的来源而产生超声，
根据动力来源分为气哨和液哨 ２种，频率通常在
２０～３０ｋＨｚ。该设备具有节能、温度低、处理量大、
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