全 文 ：Ｎ／ＮＯ３Ｎｒａｔｉｏｗａｓ２５∶７５，ＣＰＴａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓｄｉｓｐｌａｙｅｄｔｈｅｂｅｓｔａｄｖａｎｔａｇｅｓ（ｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｖａｌｕｅｉｓ５．６９‰）ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎ
ｔｈｅｅａｒｌｙ３０ｄａｙｓｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｔｈｅｎｄｅｃｌｉｎｅｄ．ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｏｂｖｉｏｕｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＴＳＢａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｅｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎ
ｆｏｒｍｓ．ＴＤＣａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｅｓｔｅｍｂａｒｋｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｗｈｅｎＮＨ＋４Ｎ／ＮＯ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ；ｎｉｔｒｏｇｅｎｆｏｒｍｓ；ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ
［责任编辑 吕冬梅］
［收稿日期］ ２００７０５１１
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０３７０２９２）；江苏省科技基础
设施建设计划项目（ＢＭ２００６１０４）
［通讯作者］ 夏冰，Ｔｅｌ：（０２５）８４３４７０２２，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｎｇｘｉａ＠ｍａｉｌ．ｃｎ
ｂｇ．ｎｅｔ
石蒜属叶绿体 ｔｒｎＬＦ序列的变异与
系统聚类分析
袁菊红１，２，孙 视１，彭 峰１，冯 煦１，郑玉红１，夏 冰１
（１．中国科学院 植物研究所 南京中山植物园，江苏 南京 ２１００１４；
２．江西财经大学 资源与环境管理学院，江西 南昌 ３３００３２）
［摘要］ 目的：分析比较石蒜属和近缘属植物中国水仙ｔｒｎＬ基因的部分序列和ｔｒｎＬｔｒｎＦ间隔区的完整序列，
为石蒜属物种鉴别和种间亲缘关系分析提供分子佐证。方法：采用 ＰＣＲ产物直接双向测序法，用 ＣｌｕｓｔａｌＸ１８１，
ＭＥＧＡ２０软件进行序列分析，采用最大简约法（ｍａｘｉｍｕｍｐａｒｓｉｍｏｎｙ，ＭＰ）构建系统发育树。结果：所测物种的序列
全长在９０５～１０３６ｂｐ，经排序后，两端切平，得到８８６ｂｐ的整齐序列，所测物种的核苷酸变异位点１４个，信息位点
１０个，主要在ｔｒｎＬ内含子区，这些位点可用于区分石蒜属物种；４个碱基“ＡＴＡＴ”缺失／插入是区别石蒜属与其近缘
植物水仙的显著特征。重建的系统发育树表明：供试的石蒜属物种聚成３类，除稻草石蒜、忽地笑、香石蒜的系统
位置有所不同之外，与经典分类结果基本相符。水仙属２个种形成１个单系类群，表明属间ｔｒｎＬＦ序列差异明显。
结论：分子系统树支持安徽石蒜是长筒石蒜的变种或杂交种观点，换锦花可能是玫瑰石蒜、红蓝石蒜的杂交母本。
石蒜属种间ｔｒｎＬＦ序列存在一定变异，是物种鉴别的有效分子标记。
［关键词］ 石蒜属；ｔｒｎＬＦ序列；序列变异；分子鉴别；系统树
［中图分类号］Ｒ２８２．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１３１５２３０５
石蒜属Ｌｙｃｏｒｉｓ植物为多年生球根草本，根据其
花型、花色和出叶期等，我国的石蒜资源被划分为
１５种２变种，分布全国１５个省区，尤以华东地区种
类最多，是其多样性分布中心［１，２］。石蒜属植物不
仅是我国特有球根花卉，而且还是重要的药用植物，
其鳞茎富含多种具有药理活性作用的生物碱，其中
具有显著抑制胆碱脂酶活性的加兰他敏从２０世纪
９０年代后被用于治疗轻中度老年痴呆症（Ａｌｚｈｅｉ
ｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）［３］。将石蒜碱进行结构改造制
成的石蒜内铵（ＡＴ１８４０）可治疗妇科肿瘤，对胃癌、
卵巢癌有较好疗效，可与放射治疗同时应用［４］。研
究结果表明，石蒜属种间的生物碱成分存在较大差
异［５］，石蒜碱、加兰他敏、伪石蒜碱等含量种间差异
很大［６］。因此，要对石蒜属植物资源进行有效地开
发利用，必须准确地鉴别物种。
由于石蒜属植物花叶不相见的特殊生长发育习
性，鉴别石蒜物种难度很大。分子标记因快速、准确
且不易受环境气候影响，在物种鉴别和分类中发挥
了很大作用。近年来，运用 ＲＡＰＤ，ＩＳＳＲ和 ＤＮＡ测
序来鉴别石蒜属物种、探讨石蒜属种间亲缘关系和
杂交起源的研究较多［７１０］，它们为石蒜属的分类和
鉴别提供了一些信息。ｔｒｎＬＦ序列为植物叶绿体基
因组之一，由编码 ｔＲＮＡ的 ｔｒｎＬ基因和 ｔｒｎＬ（ＵＡＡ）
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第３３卷第１３期
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中 国 中 药 杂 志
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３′外显子至ｔｒｎＦ（ＧＡＡ）之间的基因间区组成［１１］，这
２个非编码区序列进化速率快、能提供较多的具有
系统学意义的信息位点，多用于较低分类阶元及近
期分化类群间系统发育和种间、品种的鉴别研
究［１２１４］。水仙属与石蒜属分类位置相近，且中国水
仙鳞茎也含有多种石蒜科生物碱。为此，本实验在
测定石蒜属１３种２变种和中国水仙Ｎａｒｃｉｓｕｓｔａｚｅｔａ
Ｌ．ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＲｏｅｍ的 ｔｒｎＬＦ序列的基础上，分
析比较石蒜属物种间及其与中国水仙、多花水仙Ｎ．
ｔａｚｅｔａ该序列的变异情况，为石蒜属物种鉴别、种间
亲缘关系分析及阐明石蒜属与近缘水仙属植物系统
关系提供分子依据。
１ 材料
实验材料包括石蒜属１３种２变种和外类群中
国水仙共２０份材料，其编号、类群和采集地等（表
１）。长筒石蒜２、黄长筒石蒜、安徽石蒜１、安徽石蒜
２、中国石蒜和香石蒜由作者亲自采集，经江苏省中
国科学院植物研究所姚淦高级实验师鉴定，其他物
种由汤儆杉博士惠赠。
２ 方法
表１ 石蒜属１３种２变种及外类群中国水仙的基本资料
Ｎｏ． 类群 种名 采集地 采集号 登录号 备注
１ 安徽石蒜１ Ｌｙｃｏｒｉｓａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ 安徽琅琊山 ２００６０８０３ 花色浅黄
２ 安徽石蒜２ Ｌ．ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ 安徽琅琊山 ２００６０８０４ 花色深黄
３ 安徽石蒜３ Ｌ．ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ 南京中山植物园 ２００５０８０２ ＤＱ６５９１６４
４ 长筒石蒜１ Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ 南京中山植物园 ２００５０８０３ 花被片白色中脉黄色
５ 长筒石蒜２ Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ 江苏南京汤山 ２００５０８０４ ＤＱ６５９１６５ 花色白色
６ 长筒石蒜３ Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ 南京中山植物园 ２００６０８０１ 花色淡紫红色
７ 黄长筒石蒜 Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａｖａｒ．ｆｌａｖａ 南京中山植物园 ２００６０８０２
８ 香石蒜 Ｌ．ｉｎｃａｒｎａｔａ 南京中山植物园 ２００５０８０１ ＤＱ６５９１６２
９ 鹿葱 Ｌ．ｓｑｕａｍｉｇｅｒａ 南京中山植物园 ２００５０８０５
１０ 换锦花 Ｌ．ｓｐｒｅｎｇｅｒｉ 江苏宜兴 ２００５０８０６ ＤＱ６５９１６９
１１ 红蓝石蒜 Ｌ．ｈａｙｗａｒｄｉ 杭州植物园 ２００５０８０７ ＤＱ６５９１７０
１２ 矮小石蒜 Ｌ．ｒａｄｉａｔａｖａｒ．ｐｕｍｉｌａ 杭州植物园 ２００５０９０８ ＤＱ６５９１７４
１３ 石蒜 Ｌ．ｒａｄｉａｔａ 江苏宜兴 ２００５０９０９ ＤＱ６５９１６７
１４ 忽地笑 Ｌ．ａｕｒｅａ 南京中山植物园 ２００５０９０１０ ＤＱ６５９１７１
１５ 中国石蒜 Ｌ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 江苏句容 ２００５０８０１１ ＤＱ６５９１６３
１６ 乳白石蒜 Ｌ．ａｌｂｉｆｌｏｒａ 南京中山植物园 ２００５０８０１２ ＤＱ６５９１６８
１７ 玫瑰石蒜 Ｌ．ｒｏｓｅａ 南京中山植物园 ２００５０９０１３ ＤＱ６５９１７２
１８ 稻草石蒜 Ｌ．ｓｔｒａｍｉｎｅａ 南京中山植物园 ２００５０９０１４ ＤＱ６５９１７３
１９ 江苏石蒜 Ｌ．ｈｏｕｄｙｓｈｅｌｉ 南京中山植物园 ２００５０９０１５ ＤＱ６５９１６６
２０ 中国水仙 Ｎａｒｃｉｓｕｓｔａｚｅｔａｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 福建漳州 ２００６０３０１ ＤＱ６５９１７５ 栽培材料
２．１ ＤＮＡ提取及其检测 选取幼嫩健康的叶片，
采用改良的 ＣＴＡＢ法与 ＰＣＲ产物纯化试剂盒相结
合提取总ＤＮＡ，用１％琼脂糖电泳检测ＤＮＡ的纯度
和浓度。
２．２ ｔｒｎＬＦ目的带的扩增 ＰＣＲ扩增引物为 ｃ（５′
ＣＧＡＡＡＴＣＧＧＴＡＧＡＣＧＣＴＡＣＧ３′）和 ｆ（５′ＡＴＴＴ
ＧＡＡＣＴＧＧＴＧＡＣＡＣＧＡＧ３′）［１１］，对供试的 ２０份种
质进行了ＰＣＲ扩增。扩增反应体系为５０μＬ，包括
１０×ＰＣＲｂｕｆｅｒ５μＬ，２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＭｇＣｌ２５μＬ，２５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ２５μＬ，１０μｍｏｌ·Ｌ－１引物 ｃ和 ｆ
各１５μＬ，ＤＮＡ（１０～３０ｎｇ）２５μＬ，２５ＵＴａｑＤＮＡ
聚合酶，用双蒸水补足５０μＬ。ＰＣＲ扩增程序：９４℃
预变性３ｍｉｎ，进入３５个ＰＣＲ循环（９４℃变性４５ｓ，
６０℃退火３０ｓ，７２℃延伸９０ｓ），最后于７２℃延伸５
ｍｉｎ，４℃保存。
２．３ ｔｒｎＬＦ目的带的检测及序列测定 ＰＣＲ扩增
产物经１５％琼脂糖电泳检测，确定为目的带且无
杂带干扰、ＤＮＡ的浓度达到测序要求后，送交上海
英骏生物技术有限公司，各样品均采用正向和反向
测序，以保证测序的准确性，测序引物同ＰＣＲ引物。
２．４ 序列拼接、比对和系统树的构建 用 ＤＮＡ
ＭＡＮ软件（Ｌｙｎｎｏｎｂｉｏｓｏｆｔｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）进行序列拼
接，然后用 ＣｌｕｓｔａｌＸ１８１软件进行排序，并根据峰
图进行手工校正。运用ＭＥＧＡ２０进行序列分析并
用其中的最大简约法（ｍａｘｉｍｕｍｐａｒｓｉｍｏｎｙ，ＭＰ）构
建系统发育树，加入 ＧｅｎＢａｎｋ中的多花水仙（登录
号ＡＹ３５７１４４）的 ｔｒｎＬＦ序列，空位（ｇａｐ）作为缺失
（ｍｉｓｓｉｎｇ）处理。对分支的可靠性评价使用靴带值
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２００８年７月
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（ｂｏｏｔｓｔｒａｐ，１０００次重复）分析，统计序列间的碱基
突变位点，计算总的平均遗传距离和碱基颠换数和
转换数的百分率。石蒜属大部分物种的序列已注册
到ＧｅｎＢａｎｋ（表１）。
３ 结果与分析
３．１ 石蒜属植物 ｔｒｎＬＦ序列特征 在所有的被子
植物中，迄今为止报道 ｔｒｎＬ（ＵＡＡ）３′外显子至 ｔｒｎＦ
（ＧＡＡ）之间的基因间区即 ｔｒｎＬｔｒｎＦ序列长度为
３６０～４７０ｂｐ［１３］，其相邻ｔｒｎＬ（ＵＡＡ）内含子约３９０～
６１５ｂｐ［１１］，两者一起总长度为７５０～１０８５ｂｐ。所有
供试的样品ＰＣＲ产物琼脂糖电泳后在９３０ｂｐ处出
现一目的条带（图 １），测序后得到的序列长度在
９０５～１０３６ｂｐ。加入多花水仙的 ｔｒｎＬＦ序列，排序
后两端切平，得到 ８８６ｂｐ的整齐序列，其中 ｔｒｎＬ
（ＵＡＡ）内含子长度为５２９ｂｐ，ｔｒｎＬｔｒｎＦ长度为３５７
ｂｐ，符合上述规律。所测物种的变异位点为１４个，
信息位点数 １０个，分别占序列总长度 １５８％和
１１３％，虽然石蒜属植物的 ｔｒｎＬＦ序列变异位点和
信息位点偏少，却多于石蒜属１１种２７个品系的叶
绿体基因ｍａｔＫ和ａｔｐＢｒｂｃＬ之间的非编码间隔区序
列中的变异位点（前者１１个后者仅７个）［１０］。供试
物种ｔｒｎＬＦ序列总的平均遗传距离是０３２％（其中
颠换 ０２１％，转换 ０１１％），序列碱基组成：Ａ
３６０％，Ｇ１５６％，Ｃ１７３％，Ｔ３１１％；Ｇ＋Ｃ含量，
３２９％。
图１ 供试样品的ｔｒｎＬＦ的扩增图谱
１～２０．同表１；ＣＫ．阴性对照；Ｍ．１００ｂｐＤＮＡｌａｄｄｅｒ
序列比对结果表明石蒜属植物与外类群中国水
仙和多花水仙相比，在序列长度的２７９～２８２ｂｐ出
现４个碱基“ＡＴＡＴ”缺失／插入，且该缺失／插入发
生在ｔｒｎＬ内含子区，这是比对的２个水仙物种与石
蒜属植物最大的区别。２个水仙物种独特的信息位
点７个（６个颠换１个转换），也可用于区分石蒜属
物种。１４个变异位点和 １０个信息位点中分别有
１１，７个在ｔｒｎＬ内含子区，而ｔｒｎＬｔｒｎＦ基因间区富含
ｐｏｌｙＴ，其中有一处连续为８～１０个“Ｔ”，与花色有一
定相关性，花色由黄色、白色或淡紫红色→深紫红→
红色有递增趋势。如黄色或白色花物种如安徽石
蒜、长筒石蒜、乳白石蒜、江苏石蒜、中国石蒜等为８
个；红蓝石蒜、玫瑰石蒜、香石蒜、石蒜为９个；矮小
石蒜最多１０个。此外，石蒜属植物 ｔｒｎＬＦ序列中
Ａ＋Ｔ含量高，与中国桫椤科植物、桑树该序列特征
一致［１２，１３］。实验中发现ｐｏｌｙＴ的存在会增加了测序
的难度，花色为黄色或白色的物种比花色为红色的
物种测序相对容易成功。
３．２ 基于ｔｒｎＬＦ序列的石蒜属植物系统重建 采
用最大简约法，经１０００次重复抽样计算，获得了石
蒜属植物的 ｔｒｎＬＦ序列分子系统树。由树状图可
知，石蒜属物种聚成３类，并得到了７３％的自展百
分比。外类群中国水仙和多花水仙构成一个单系，
获得了很高的支持率（自展百分比达９９％），表明石
蒜属植物与水仙属植物 ｔｒｎＬＦ序列差异明显。除
花色纯白的长筒石蒜２以外，花色为黄色或花被片
上有彩色条纹的长筒石蒜与安徽石蒜亲缘关系很
近，玫瑰石蒜、换锦花、稻草石蒜和红蓝石蒜４个种
的遗传差异小。
４ 讨论
４．１ ｔｒｎＬＦ序列变异位点用于物种鉴别 根据
ｔｒｎＬＦ序列很容易区分水仙与石蒜属植物，石蒜属
内种间ｔｒｎＬＦ序列变异位点可作为物种鉴别的分
子标记。用以区分种的几个关键位点分别位于序列
的２２，２１４，３９６，６３６ｂｐ处，在２２ｂｐ处发生了碱基的
颠换，可能与石蒜属植物花色变异有关，因为供试物
种中除忽地笑以外，同为黄色或白色花的石蒜物种
此位点为“Ｃ”，而红色花或花瓣带红色条纹的物种
此位点为“Ａ”，由此可见，该位点基本上可用于区分
石蒜属不同花色的物种。在序列长度的２１４，６３６ｂｐ
处都发生了“Ｇ／Ａ”转换，玫瑰石蒜、红蓝石蒜、换锦
花、稻草石蒜４个种该位点为“Ｇ”，本属中其他物种
为“Ａ”，这１个位点的变异，不仅可用来区分外形差
异较大的石蒜物种，而且玫瑰石蒜与石蒜，稻草石蒜
与江苏石蒜等外形相似的物种，凭此位点也可达区
分的目的。３９６ｂｐ处石蒜、矮小石蒜和香石蒜３个
种为“Ａ”，其他种为缺失。本研究还发现在 ｔｒｎＬ内
含子区 １７７ｂｐ处，香石蒜与石蒜属其他种在存在
“Ａ／Ｇ”变异位点；在４９７ｂｐ处矮小石蒜与其他种发
生了“Ｔ／Ａ”颠换，重复测定不同个体也能稳定出现。
因此，这２个位点分别确定为香石蒜和矮小石蒜种
特异性鉴别位点。此外，本研究所测定的中国水仙
的序列与其原种多花水仙相比，同源性非常高，仅在
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表２ 石蒜属植物和外类群水仙ｔｒｎＬＦ序列的简约信息位点
类群／位点
ｔｒｎＬ内含子
２２ １８３ ２１４ ２２６ ２９７ ３８９ ３９６
ｔｒｎＬｔｒｎＦ间隔区
５６２ ６３６ ８５０
换锦花 Ｌｙｃｏｒｉｓｓｐｒｅｎｇｅｒｉ Ａ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ｇ Ａ
稻草石蒜 Ｌ．ｓｔｒａｍｉｎｅａ Ａ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ｇ Ａ
红蓝石蒜 Ｌ．ｈａｙｗａｒｄｉ Ａ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ｇ Ａ
玫瑰石蒜 Ｌ．ｒｏｓｅａ Ａ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ｇ Ａ
忽地笑 Ｌ．ａｕｒｅａ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
矮小石蒜 Ｌ．ｒａｄｉａｔａｖａｒ．ｐｕｍｉｌａ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ａ
石蒜 Ｌ．ｒａｄｉａｔａ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ａ
香石蒜 Ｌ．ｉｎｃａｒｎａｔａ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ａ
鹿葱 Ｌ．ｓｑｕａｍｉｇｅｒａ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
江苏石蒜 Ｌ．ｈｏｕｄｙｓｈｅｌｉ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
中国石蒜 Ｌ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
乳白石蒜 Ｌ．ａｌｂｉｆｌｏｒａ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
长筒石蒜１Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
长筒石蒜２Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
长筒石蒜３Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
黄长筒石蒜 Ｌ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａｖａｒ．ｆｌａｖａ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
安徽石蒜１Ｌ．ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
安徽石蒜２Ｌ．ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
安徽石蒜３Ｌ．ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ － Ａ Ａ Ａ
中国水仙 Ｎａｒｃｉｓｕｓｔａｚｅｔａｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ｃ
多花水仙 Ｎ．ｔａｚｅｔａ Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ｃ
图２ 基于叶绿体基因ｔｒｎＬＦ序列的石蒜属
植物的系统发育树以多花水仙和中国水仙为外类群分支上面
的数字代表１０００次重复抽样检测的自展百分比
序列的第５３１，５３３，５３４ｂｐ处有３个位点出现了简
并碱基，即“Ｎ／Ｇ”“Ｎ／Ａ”“Ｎ／Ａ”，其他碱基相同。
４．２ 基于ｔｒｎＬＦ分子数据的种间关系分析 本研
究中安徽石蒜、长筒石蒜（包括黄长筒石蒜）的序列
完全相同，分子系统树中它们也聚在一类，表明它们
的亲缘关系很近。又因叶绿体基因组为母系遗传，
因此推测安徽石蒜可能是长筒石蒜为母本的杂交
种。ＩＳＳＲ分子标记和 ＩＴＳ序列分析结果也不支持
传统分类中将安徽石蒜作为一个独立种的观
点［８，９］。本研究中红蓝石蒜、稻草石蒜、玫瑰石蒜和
换锦花４个种在比对的８８６个碱基中ｔｒｎＬＦ序列完
全一致，这些种聚成一类获得７３％的自展百分比，
表明具有很近的亲缘关系，人工杂交试验表明玫瑰
石蒜和红蓝石蒜是来自矮小石蒜与换锦花的杂
交［１５］，而本研究中换锦花可能作为杂交母本。
分子系统树显示矮小石蒜、石蒜与香石蒜的亲
缘关系很近，外部形态上，香石蒜花被裂片上有红色
条纹，花被筒较短，花丝紫红色，这些性状与石蒜或
矮小石蒜接近；这３个种的核型都含有２２ｓｔ染色
体。但香石蒜是不是起源于石蒜或矮小石蒜，目前
还缺乏足够的证据。染色体数和核型差异明显的忽
地笑与石蒜、矮小石蒜聚在一类，其原因有待今后进
一步研究。
４．３ ｔｒｎＬＦ分子系统学与经典分类的矛盾 本研
究中大多数种的归类都体现出 ｔｒｎＬＦ分子系统学
与经典分类方法的相同之处，但２种分类方法也存
在一些矛盾。如 ｔｒｎＬＦ分子系统树不支持经典的
石蒜属分亚属的结果；忽地笑、香石蒜、稻草石蒜的
系统学位置等。出现矛盾的原因可能是叶绿体基因
ｔｒｎＬＦ序列不是外部性状的编码基因，且石蒜属物
种该序列较为保守。尽管如此，石蒜属 ｔｒｎＬＦ序列
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的变异特征为部分物种的鉴别提供了有力的分子证
据，对阐明石蒜属种间亲缘关系和系统演化也具有
一定理论与现实意义。
［参考文献］
［１］ ＪｉＺＨ，ＡｌａｎＷ Ｍ．ＦｌｏｒａｏｆＣｈｉｎａ２４［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｐｒｅｓｓｏｆ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００：２６４．
［２］ 王仁师．关于石蒜属（Ｌｙｃｏｒｉｓ）的生态地理［Ｊ］．西南林学院学
报，１９９０，１０（１）：４１．
［３］ ＨａｒｖｅｙＡＬ．Ｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆｇａｌａｎｔｈａｍｉｎｅａｎｄｉｔｓａｎａｌｏｇｕｅｓ
［Ｊ］．ＰｈａｒｍａｃＴｈｅｒ，１９９５，６８（１）：１１３．
［４］ 胡庆和，何 萍，林兆翔，等．石蒜内铵（ＡＴ１８４０）综合治疗妇
科晚期恶性肿瘤［Ｊ］．浙江中西医结合杂志，１９９７，７（３）：１３４．
［５］ ＬｉＨＹ，ＭａＧＥ，ＸｕＹ，ｅｔａｌ．ＡｌｋａｌｏｉｄｓｏｆＬｙｃｏｒｉｓｇｕａｎｇｘｉｅｎｓｉｓ
［Ｊ］．ＰｌａｎｔａＭｅｄｉｃａ，１９８７（３）：２５９．
［６］ 肖培根．新编中药志第１卷［Ｍ］北京：北京工业出版社，
２００１：２８９．
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ｃｏｒｉｓ（Ａｍａｒｙｌｉｄａｃｅａｅ）ｉｎｆｅｒｅｄｆｒｏｍｉｎｔｅｒｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅ
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ＧｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎｓｉｎｔｒｎＬＦｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇｏｆ
Ｌｙｃｏｒｉｓｓｐｅｃｉｅｓ
ＹＵＡＮＪｕｈｏｎｇ１，２，ＳＵＮＳｈｉ１，ＰＥＮＧＦｅｎｇ１，ＦＥＮＧＸｕ１，ＺＨＥＮＧＹｕｈｏｎｇ１，ＸＩＡＢｉｎｇ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ，ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ＆ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓＮａｎｊｉｎｇＢｏｔａｎｉｃａｌＧａｒｄｅｎＭｅｍ．ＳｕｎＹａｔｓｅｎ，
Ｎａｎｊｉｎｇ２１００１４，Ｃｈｉｎａ；
２．ＲｅｓｏｕｒｃｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＭａｎａｇｅｍｅｎｔＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＪｉａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＦｉｎａｎｃｅａｎｄＥｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００３２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｓｏｍｅｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄＬｙｃｏｒｉｓｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｅｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓａｍｏｎｇｔｈｅｍ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｃｐＤＮＡｔｒｎＬＦｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆ２０ｔａｘａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ１５ｓｐｅｃｉｅｓｏｆＬｙｃｏｒｉｓａｎｄＮａｒｃｉｓｓｕｓｔａｚａｅｔａｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓａｓｏｎｅｏｕｔ
ｇｒｏｕｐｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｕｓｉｎｇｄｉｒｅｃｔｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔ，ａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｍｅａｎｓｏｆｔｈｅｓｏｆｔｗａｒｅｏｆＣＬＵＳＴＲＡＬａｎｄ
ＭＥＧＡ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆｔｒｎＬＦｏｆａｌｔａｘａｗａｓ９０５～１０３６ｂｐ．Ｗｈｅｎｔｈｅｇａｐｓｗｅｒｅａｌｗａｙｓｔｒｅａｔｅｄａｓｍｉｓｓｉｎｇ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ１４ｖａｒ
ｉａｂｌｅｓｉｔｅｓａｎｄ１０ｐａｒｓｉｍｉｎｆｏｓｉｔｅｓ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｓｏｍｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆＬｙｃｏｒｉｓ．Ｆｏｕｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｉｎｓｅｒｔｅｉｏｎｓ／ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ
ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｔａｍｏｎｇＬｙｃｏｒｉｓａｎｄｔｗｏｓｐｅｃｉｅｓｏｆＮａｒｃｉｓｓｕｓ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙｔｒｅｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｐａｒｓｉｍｏｎｙ
ｍｅｔｈｏｄｓｂｙｂｏｏｔｓｔｒａｐｔｅｓｔ．ＴｈｒｅｅｉｎｆｒａｇｅｎｅｒｉｃｃｌａｄｅｓｏｆａｌＬｙｃｏｒｉｓｓｐｅｃｉｅｓｗｅｒｅｒｅｓｏｌｖｅｄ．Ｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓｂａｓｉｃａｌｙｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈ
ｔｈａｔｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｅｘｃｅｐｔｆｏｒＬ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ，Ｌ．ａｕｒｅａ，ａｎｄＬ．ｓｔｒａｍｉｎｅａ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｔｒｅｅｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔＬ．ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓｃａｎｎｏｔｂｅ
ｔａｋｅｎａｓａｎｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓ，ｗｈｉｌｅｉｔｍａｙｂｅｏｆａｖａｒｉｅｔｙｏｒａｈｙｂｒｉｄｏｆＬ．ｌｏｎｇｉｔｕｂａ．Ｒｅｇａｒｄｉｎｇｔｈｅｈｙｂｒｉｄｏｒｉｇｉｎｓｐｅｃｉｅｓ，ｔｈｅｍａ
ｔｅｒａｌｐａｒｅｎｔｏｆＬ．ｒｏｓｅａａｎｄＬ．ｈａｙｗａｒｄｉｗａｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｏｂｅＬ．ｓｐｒｅｎｇｅｒｉ．ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｓｏｍｅｖａｒｉａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｔｒｎＬＦｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｗｈｉｃｈ
ｗｅｒｅｇｏｏｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｅｓｏｆＬｙｃｏｒｉｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｌｙｃｏｒｉｓ；ｔｒｎＬＦｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｖａｒｉａｔｉｏｎ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅ
［责任编辑 吕冬梅］
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第３３卷第１３期
２００８年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００８