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Role of NF-κB in the induction of delayed preconditioning in rat heart by pretreatment with Sini decoction

核因子-κB在四逆汤预处理诱导大鼠心肌延迟预适应中的作用



全 文 :¤¦¦²°³¤±¬¨§º¬·«¤µ¨§¨¦·¬²± ²©·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²©·¨¯²° µ¨¤¶¨ q „§√ µ¨¶¨ ¼¯ o·«¨ ªµ²º·«µ¤·¨ ²© ≤ º¤¶µ¨§∏¦¨§¥¼ Ž× o º«¬¦« º¤¶¤¦¦²°³¤±¬¨§
º¬·«¤± ±¨«¤±¦¨ ° ±¨·²©¤¦·¬√¬·¼²©·¨¯²° µ¨¤¶¨ q ²µ¨²√ µ¨o·«¨ ªµ²∏·«µ¤·¨ ²© ≤ ¤±§·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²©·¨¯²° µ¨¤¶¨ º µ¨¨ ¥²·«¬±«¬¥¬·¨§¥¼·«¨ ¦²°¥¬2
±¤·¬√¨∏¶¨ ²©Œ2t ¤±§Ž× º¬·«²∏·¤±¼¬±©¯∏¨ ±¦¨ ©µ²°·«¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ²©·«¨¬µ¤§°¬±¬¶·µ¤·¬²±q Χονχλυσιον : Ž× ¦²∏¯§¬±«¬¥¬·³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ¤±§
·¨¯²° µ¨¤¶¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²© ≤ º¬·«²µº¬·«²∏·³µ¨2¶·¬°∏¯¤·¬²± º¬·«Œ2t qŽ× °¬ª«·¥¨ ∏¶¨©∏¯·²³µ¨√ ±¨·¤±§·µ¨¤·ª¯²° µ¨∏¯¤µ±¨ ³«µ¬·¬¶µ¨ ¤¯·¨§·² ≤
³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] Ž¤±ª¯¤¬·¨¬±­¨¦·¬²±~ ° ¶¨¤±ª¬¤¯ ¦¨¯¯¶~·¨¯²° µ¨¤¶¨
≈责任编辑 方文贤 
核因子2ϑ…在四逆汤预处理诱导大鼠心肌
延迟预适应中的作用
刘 颖t ou 3 o吴伟康t o陈 晨v o刘克玄t
kt1 中山大学 中西医结合研究所 o广东 广州 xtss{| ~u1 广东药学院 病理生理教研室 o
广东 广州 xtsuuw ~v1 中国人民解放军第 wut医院 检验科 o广东 广州 xtsvt{l
≈摘要  目的 }探讨四逆汤能否诱导心肌延迟预适应及其可能机制 ∀方法 }≥⁄大鼠分为假手术组 !缺血再灌注
组 !延迟缺血预处理组 !四逆汤预处理组 ∀延迟缺血预处理组采用经典大鼠冠脉结扎 o缺血 x °¬±o再灌 x °¬±o反复
循环 v次 ouw «后缺血 t «o再灌 t «∀四逆汤预处理组给予四逆汤灌胃kx ª#®ªpt#§ptl连续 v §o末次灌药 uw «后缺
血 t «o再灌 t «∀以心肌梗死面积为评价指标并测定心肌中超氧化物歧化酶的活性 !丙二醛的含量 o通过 • ×2°≤•
检测 ±≥’⁄ °• ‘„及 ≤∏2±≥’⁄ °• ‘„的表达并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌 ‘ƒ2ϑ…亚单位 °yx的表达 ∀
结果 }延迟缺血预处理组及四逆汤预处理组心肌梗死面积明显小于缺血再灌注组 o ⁄„ 的含量低于缺血再灌注
组 o≥’⁄活性和 ±≥’⁄ °• ‘„的表达高于缺血再灌注组 o‘ƒ2ϑ…发生核转位且蛋白表达显著高于缺血再灌注组 ∀缺
血再灌注组 !延迟缺血预处理组及四逆汤预处理组的 ≤∏2±≥’⁄ °• ‘„表达均下降 ov组之间无差异 ∀结论 }四逆汤
能诱导心肌延迟预适应 o其机制可能与 ‘ƒ2ϑ…的激活相关 ∀
≈关键词  四逆汤 ~延迟预适应 ~核因子2ϑ…~锰2超氧化物歧化酶
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlsy2swxv2sw
≈收稿日期  ussw2s{2sx
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|zzs|vyl
≈通讯作者  3刘颖 oר¯ }ksusl{zvvtyuw oƒ¤¬}ksusl{zvvtzz| o∞2
°¤¬¯ }¯¼¯ ¼ª½ƒ «²·°¤¬¯q¦²°
心肌缺血2再灌注损伤是一种临床上常见的病
理过程 ∀近年来 o研究发现心肌在经历短暂缺血后
能对随后发生的较长时间的缺血2再灌注损伤产生
明显的保护作用 o这就是心肌缺血预适应kŒ°≤l ∀
t||v年 o¤µ¥¨µ等≈t 发现心肌缺血预适应呈 / 双时
相0分布 o早期预适应k∞°≤l一般在缺血性刺激数分
钟后发生 o可持续 t ∗ v «~延迟预适应k⁄°≤l又称
/第二保护窗0k≥• ’°l在刺激后 tu ∗ uw «发生 o可持
续 zu «∀ ⁄°≤是一种内源性保护机制 o因其作用强
大 o保护时间长而成为研究热点 ∀随着研究的深入 o
人们发现可以通过药物激发保护机制而呈现心脏对
缺血 !缺氧的耐受 o即药理性预适应 ∀药理预适应与
缺血预适应一样都能促使心肌对缺血缺氧产生内源
性耐受反应 o其中中药因为其极少的不良反应及药
理作用多靶点而倍受关注≈u  ∀四逆汤k≥‘⁄l是汉代
张仲景5伤寒杂病论6的名方 o由附子 !干姜 !炙甘草
组成 o经多年的实验和临床研究证明具有较好的改
善冠状循环 !清除氧自由基 !保护缺血心肌的作
用≈v  o本实验在此基础上试探讨四逆汤是否可以模
拟 ⁄°≤的保护作用以及其可能机制 ∀
1 材料和方法
111 实验动物 ≥°ƒ 级雄性 ≥⁄大鼠 yw只 o体重
uxs ∗ vss ªo由中山大学动物实验中心提供 ∀
#vxw#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤µ¦«oussx
112 药物制备 四逆汤由熟附子 !干姜 !炙甘草按
xΒvΒu比例用水煎制成含生药 t ª#°pt ∀
113 动物模型的复制≈w  用 ts h水合氯醛ks1vx ª
#®ªpt o¬³l麻醉大鼠 ∀行气管插管连接小动物呼吸
机 o频率每分钟 zs ∗ {s次 o潮气量 w ∗ y °o呼吸比
为 uΒt ∀持续记录心电图变化 ∀在胸骨左缘 s1x ¦°
处剪断第 v肋骨 o分离组织 o轻压暴露心脏 o用穿有
x2s缝合线的 vr{弯针从左心耳下缘 t °°处进针 o
钩绕左冠状动脉前降支主干 o于肺动脉圆锥旁出针 ∀
两线间放置一根聚乙烯小管 o拉紧丝线形成闭环并
用止血钳固定即产生缺血 o放松丝线即发生再灌注 ∀
缺血的标志为 ≥× 段抬高和 • 波增高 o左室发绀 ∀
再灌注的标志为抬高的 ≥× 段和 • 波恢复 o发绀区
变红 ∀
114 分组 将 yw只大鼠随机分为 w组 ∀除给药组
外 o其余各组均灌服公斤体重相符的生理盐水 o各组
处理的详细方案如下 }假手术组k≥«¤°l只穿线 o不结
扎 ~缺血再灌注组kŒ• l缺血 t «o再灌 t «~延迟缺血
预处理组kŒ°≤r≥• ’°l缺血 x °¬±再灌注 x °¬±o重复
v个 Œ°≤ ouw «后 o缺血 t «o再灌 t «~四逆汤预处理
组k≥‘⁄l大鼠灌胃连续 v §ox ª#®ªpt#§pt o末次灌药
uw «后使心肌缺血 t «o再灌注 t «∀
115 梗死组织范围测定 ××≤ku ov ox2 ·µ¬³«¨ ±¼¯·¨2
·µ¤½²¯¬∏° ¦«¯²µ¬§¨l染色 o称重法计算梗死范围 ∀
心肌梗死范围k h l €梗死心肌重量kŒ≥• lr左心室重量
k∂ • l ≅ tss h
116 生化指标测定 实验结束时 o取心室组织匀浆
测定超氧化物歧化酶k≥’⁄l 的活性及丙二醛k⁄„l
的含量 ∀组织 ≥’⁄o⁄„由南京建成生物工程研究
所提供的药盒测定 ∀
117 • ×2°≤• 测定锰2超氧化物歧化酶k±≥’⁄l°•2
‘„及铜2锌超氧化物歧化酶k≤∏2±≥’⁄l°• ‘„的表
达 主要试剂 }⁄∞°≤ k„ • ∞≥≤’l o琼脂糖k≠¬·²l o
וŒ’kŒ±√¬·µ²ª¨±l o2∂ 逆转录酶kƒ µ¨°¨ ±·¤¶l o
• ±¤¶¬±k……Œl oפ´ ⁄‘„ ³²¯¼°¨ µ¤¶¨k……Œl ∀引物设计及
合成 }通过 Š¨ ±¨ …¤±®检索获得大鼠 ±≥’⁄ °• ‘„
kwxw ¥³ Š¨ ±¨ ¥¤±® uxtxzl o≤∏2±≥’⁄ °• ‘„kvzu ¥³
Š¨ ±¨ ¥¤±® ≠ssw|zl oΒ2¤¦·¬± kwww ¥³ Š¨ ±¨ ¥¤±® ‘2
svttwwl全序列 o用美国 °µ¬°¨ µu1u版引物设计软件
自行设计 v对引物 o其序列如下 }
±≥’⁄
x. 2Š„Š≤„Š„„ŠŠ≤„„Š×ŠŠ×Š„2v. x. 2„≤„Š×2
ׄŠ≤„ŠŠ≤≤„Š≤„Š„2v.
≤∏2±≥’⁄
x . 2≤Š≤≤×≤„Š≤„„׊×׊׊×≤2v . x . 2„ׄŠ≤2
≤×≤≤„Š≤„„≤×≤×≤≤2v.
Β2¤¦·¬±
x. 2Š≤ׄ≤„Š≤××≤„≤≤„≤≤„≤„2v. x. 2ׄŠ„Š≤2
≤„≤≤„„×≤≤„≤„≤„2v.
以上引物由上海生物工程公司合成 ∀
总 • ‘„的提取 }于实验结束时各组取心尖组织
tss °ªo立刻放入液氮中保存 ∀使用 וŒ’• ¤¨ª¨ ±·
提取心肌总 • ‘„ o紫外分光光度计测 Αuys及 Αu{s o要
求 ΑuysrΑu{s比值介于 t1{ ∗ u1s o根据 Αuys计算总
• ‘„含量 op us ε 保存备用 os1{ h琼脂糖凝胶电泳
分析其完整性 ∀• ×2°≤• 按试剂盒说明操作 o°≤• 反
应体系为 ux ˏots ≅ °≤• ¥∏©©¨µu1x ˏou1x °°²¯ #
pt§‘×° u1x ˏoux °°²¯#pt ª≤¯ u u1x ˏo¦⁄‘„ v
ˏo上游引物和下游引物终浓度为 s1{ Λ°²¯ o各加 t
ˏoפ´ ⁄‘„ ³²¯¼°¨ µ¤¶¨ s1x ˏo加入无核酸酶水至总
体积 ux ˏ∀然后执行如下反应条件 }|w ε t °¬±oxx
ε t °¬±ozu ε v °¬±o循环 vx次 o取 ts ˏ扩增产
物 o进行 u h琼脂糖凝胶电泳 o结果拍照 o采用法国
∂Œ…∞• ’˜• „×凝胶成像及分析系统进行吸光度
扫描kŒ’⁄l o以各组条带 Œ’⁄和相应的 Β2¤¦·¬±条带
的 Œ’⁄比值表示 °• ‘„表达的强弱 ∀
118 采用免疫组织化学染色方法检测 ‘ƒ2ϑ… °yx
蛋白的表达 于实验结束时各组分别选 {只大鼠 o
在结扎线以下取 u ¦°厚的全心组织 o放入 w h甲醛
液中固定 uw «o石蜡包埋 o切片 o然后按 ≥„…≤ 免疫
组化试剂盒进行操作 ∀ ‘ƒ2ϑ… °yx免疫组化试剂盒
由武汉博士德生物工程有限公司提供 ∀
观察方法及判断标准 }光镜下观察 o以胞浆和胞
核出现黄染者为 ‘ƒ2ϑ…阳性细胞 o随机选取 x个视
野利用 …Œ2usss医学图像分析系统进行灰度测定 o
并计算 ‘ƒ2ϑ…蛋白表达阳性单位k°˜l ∀
119 统计学处理 数据以 cξ ? σ表示 o多组间均数
比较采用单因素方差分析 o组间比较采用 ≥⁄法进
行双侧检验 o所有数据均用 ≥°≥≥ tt1s统计软件处
理 ∀
2 结果
211 各组大鼠心肌梗死面积的测定 Œ°≤r≥• ’°组
及 ≥‘⁄组与 Œr• 组相比心肌梗死面积明显减少 o前
u组间无显著差异k表 tl ∀
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤µ¦«oussx
表 t 各组大鼠心肌梗死面积的比较kcξ ? σoν € {l
组 别 左心室rª
梗死心肌

梗死面积
r h
假手术组 s1xz ? s1sx s s
缺血再灌注组 s1ys ? s1su s1uw ? s1st ws1ww ? s1{ut oul
延迟缺血预处理组 s1x| ? s1sw s1t{ ? s1su vs1ws ? t1zttl
四逆汤预处理组 s1ys ? s1sv s1t| ? s1st vt1{y ? u1sttl
注 }与假手术组相比较tl Π s1st ~与延迟缺血预处理组及四逆
汤预处理组相比较ul Π s1stk表 u ∗ w同l
212 各组大鼠心肌中 ≥’⁄活性及 ⁄„含量的比较
缺血再灌注组心肌组织 ≥’⁄活性明显降低 o⁄„
含量显著升高 ~与 Œr• 组相比 oŒ°≤r≥• ’° 组及 ≥‘⁄
组可明显提高 ≥’⁄的活性 o减少 ⁄„ 的生成k表
ul ∀
表 u 各组大鼠心肌 ≥’⁄活性及 ⁄„含量
的比较kcξ ? σoν € {l
组 别
≥’⁄r
˜#°ªpt
⁄„
r ±°²¯#ªpt
假手术组 tsu1xs ? |1|| {1sv ? s1{
缺血再灌注组 y{1tv ? z1ytt oul t|1|w ? w1tyt oul
延迟缺血预处理组 |t1tt ? {1uvtl ts1{{ ? s1zztl
四逆汤预处理组 {{1yz ? y1tutl tt1zx ? t1sxtl
213 各组大鼠心肌 ±≥’⁄ °• ‘„及 ≤∏2±≥’⁄ °•2
‘„的表达 Œr• 组 !Œ°≤r≥• ’° 组及 ≥‘⁄组 ≤∏2±2
≥’⁄ °• ‘„的表达与假手术组相比显著减少 ov组间
无显著性差异 ∀Œ°≤r≥• ’°组和 ≥‘⁄组与 Œr• 组相
比 o±≥’⁄ °• ‘„的表达明显升高k表 vl ∀
表 v 各组大鼠心肌 ±≥’⁄ °• ‘„及 ≤∏2±≥’⁄ °• ‘„
表达比较kcξ ? σoν € {l
组 别 ±≥’⁄rΒ2¤¦·¬± ≤∏2±≥’⁄ rΒ2¤¦·¬±
假手术组 t1xz ? s1tw t1{y ? s1v{
缺血再灌注组 s1yt ? s1tvul t1sx ? s1tttl
延迟缺血预处理组 t1sy ? s1uxtl t1t{ ? s1v|tl
四逆汤预处理组 t1su ? s1vztl t1tz ? s1vutl
214 各组大鼠心肌 ‘ƒ2ϑ… °yx蛋白表达的比较
‘ƒ2ϑ… °yx在假手术组中主要存在于胞浆 o但经过
Œ°≤和用四逆汤 uw «后 o在胞膜和胞核也可见 o这说
明 Œ°≤和用药 u种情况激活了 ‘ƒ2ϑ… °yx使其发生
转位 o且促进蛋白的表达k表 wl ∀
3 讨论
⁄°≤作用机制复杂 o其过程涉及细胞内信号转
导途径的激活 o短暂缺血促使心肌释放各种触发物
质k如 }活性氧 !腺苷 !一氧化氮 !钙基因相关肽 !阿片
肽等l o通过与相应受体结合或借助一些中介物质激
活信号转导通路 o导致多种蛋白激酶的激活 o通过转
表 w 各组大鼠心肌组织 ‘ƒ2ϑ… °yx蛋白表达
阳性单位的比较kcξ ? σoν € {l
组 别 ‘ƒ2ϑ… °yxr°˜
假手术组 |1uw ? t1ww
缺血再灌注组 ts1zx ? v1tsul
延迟缺血预处理组 uu1{| ? t1{xtl
四逆汤预处理组 uw1vw ? u1vxtl
录因子促使细胞保护蛋白合成从而发挥对心脏的保
护作用≈x  ∀ ±≥’⁄是一种内源性抗氧化因子 o为
⁄°≤的效应蛋白 o其诱导和活化在 ⁄°≤对抗缺血2再
灌注损伤中起着重要作用 o有实验发现 ±≥’⁄可增
强心肌细胞对 uw «后缺氧的耐受力≈y  o利用 ±≥’⁄
的反义寡核苷酸 „≥’⁄‘可取消 ⁄°≤ 效应 o这在缺
血和药理预适应的实验中都能观察到≈z o{  ∀核因子2
ϑ…k‘ƒ2ϑ…l是一种具有基因转录多向调控作用的转
录因子 o最常见的结构是由 °yx与 °xs组成的异源
二聚体 ∀在静息细胞的胞浆中 o‘ƒ2ϑ…与抑制蛋白
´ϑ…结合 o使 ‘ƒ2ϑ…的核定位信号不能暴露 o处于
非活性状态 ∀当细胞外刺激通过某种信号途径激活
´ϑ…蛋白激酶 o使 ´ ϑ…磷酸化而降解 o从而与 ‘ƒ2
ϑ…发生解离 o暴露出其核定位信号 o最终导致 ‘ƒ2ϑ…
发生核转位 o进入细胞核与靶基因启动区或增强子
上相应位点结合 o从而启动或调控有关基因的转录
和蛋白的合成≈|  ∀ ÷˜„‘等≈ts 发现缺血诱导 ⁄°≤
可引起 ‘ƒ2ϑ…的快速活化 o使用 ‘ƒ2ϑ…抑制剂可阻
断其核转位并取消 ⁄°≤ 作用 ∀此外 o‘ƒ2ϑ…的活化
也可被一氧化氮合酶抑制剂 !自由基清除剂 !蛋白激
酶 ≤抑制剂 !酪氨酸激酶抑制剂所阻断 o这表明 ‘ƒ2
ϑ…是 ⁄°≤信号转导途径共同的下游通道 ∀本实验
结果显示 o四逆汤可模拟 ⁄°≤ 使心肌梗死面积缩
小 o≥’⁄活性提高 o⁄„含量下降 o这为其临床应用
提供了一条新思路 ∀作者发现延迟缺血预处理组和
四逆汤预处理组 ±≥’⁄ °• ‘„ 的表达明显高于缺
血再灌注组 o说明四逆汤与缺血刺激一样可使 ±2
≥’⁄的转录加强 o结合延迟缺血预处理组和四逆汤
预处理组 ‘ƒ2ϑ…活化发生转位且表达增加这一事
实 o作者推论四逆汤预处理可激活 ‘ƒ2ϑ…o而 ‘ƒ2ϑ…
被激活转移至核启动或加强 ±≥’⁄基因的转录和
表达 o促使 ±≥’⁄的合成增加 o通过 ±≥’⁄清除缺
血再灌注过程中生成的活性氧 o降低 ⁄„的含量 o
发挥对缺血心肌的保护作用 ∀延迟缺血预处理组和
四逆汤预处理组 ≤∏2±≥’⁄ °• ‘„ 表达下降的原因
可能是由于长时间的缺血再灌注损伤造成的 o说明
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≤∏2±≥’⁄可能没有参与缺血和四逆汤所诱导的
⁄°≤ ∀四逆汤预处理通过哪些途径最终激活 ‘ƒ2ϑ…o
‘ƒ2ϑ…与 ±≥’⁄的确切关系 o这些问题都有待进行
下一步的阻断实验来加以验证 ∀
≈参考文献 
≈t  ¤µ¥¨µ ≥ o¤·¦«°¤± ⁄ ≥ o • ¤¯®¨µ  o ετ αλq ≤¤µ§¬¤¦¶·µ¨¶¶³µ²2
·¨¬± ¨¯ √¨¤·¬²± uw «²∏µ¶¤©·¨µ¥µ¬¨©¬¶¦«¨ °¬¤²µ«¨¤·¶·µ¨¶¶¬¶¤¶¶²¦¬¤·¨§
º¬·«µ¨¶¬¶·¤±¦¨ ·² °¼²¦¤µ§¬¤¯ ¬±©¤µ¦·¬²±q Χιρχυλατιον , t||v o{{kvl }
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≈u  傅俊英 o史载祥 q心肌预适应延迟保护的研究现状及应用前
景 q心血管病学进展 oussv ouwkul }|u q
≈v  吴伟康 o尧宏斌 o侯 灿 o等 q四逆汤保护缺血心肌功能的实验
研究 q中国中医基础医学杂志 ot||x oukvl }uw q
≈w  Ž¤¬¤¦«¤µ²º¶®¬o ¬®¨ ’·²o Š¨ µ§ ‹¤©±¨ µo ετ αλq∞±§²·²¬¬±¬±§∏¦¨¶
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·¬²±¬±ª¬± ¦²±¶¦¬²∏¶µ¤¥¥¬·¶q Χιρχ Ρεσot||| o{wkwl }ts|x q
Ρολε οφ ΝΦ2ϑΒ ιν τηεινδυχτιον οφ δελαψεδ πρεχονδιτιονινγ
ιν ρατ ηεαρτ βψ πρετρεατµεντ ωιτη Σινι δεχοχτιον
Œ˜ ≠¬±ªtou o • ˜ • ¬¨2Ž¤±ªt o≤‹∞‘≤«¨ ±v oŒ˜ Ž¨2÷∏¤±t
(t1 Ινστιτυτε οφ Ιντεγρατεδ Τραδιτιοναλ Χηινεσε ανδ Ωεστερν Μεδιχινε Συν Ψετ2Συν Υνιϖερσιτψ, Γυανγζηου xtss{| , Χηινα ;
u1 ∆επαρτµεντ οφ Πατηοπηψσιολογψ οφ Γυανγδονγ Πηαρµαχολογιχαλ Χολλεγε , Γυανγζηου xtsuuw , Χηινα ;
v . Νο . wut ηοσπιταλ οφ ΠΛΑ, Γυανγζηου xtsvt{ , Χηινα .)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ׫¨ ³µ¨¶¨±·¶·∏§¼ º¤¶§¨¶¬ª±¨ §·²¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ º«¨·«¨µ≥¬±¬§¨¦²¦·¬²± k≥‘⁄l ¦²±·¤¬±¬±ª¶¨√ µ¨¤¯ ¦«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬2
±¤¯ «¨µ¥¶o¦²∏¯§¬±§∏¦¨ §¨ ¤¯¼¨ § ³µ¨¦²±§¬·¬²±¬±ª2¯¬®¨ ©¨©¨¦·¬± µ¤·«¨¤µ·¤±§·«¨ ³²¶¶¬¥¯¨ ° ¦¨«¤±¬¶° q Μετηοδ : Œ± ¤±¨ ¶·«¨·¬½¨ § ²³¨ ±2¦«¨¶·
≥³µ¤ª∏¨ ⁄¤º¯ ¼¨ µ¤·¶o¯¨©·¤±·¨µ¬²µ§¨¶¦¨±§¬±ª¦²µ²±¤µ¼ ¤µ·¨µ¼ k„⁄l º¤¶²¦¦¯∏§¨§©²µt «¤±§µ¨³¨µ©∏¶¨§©²µt «q „¯¯µ¤·¶º µ¨¨ µ¤±§²°¯ ¼ §¬2
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≈责任编辑 方文贤 
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第 vs卷第 y期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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