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Study on analytical method for alkaloids in Bulbus Fritillariae Cirrhosae

中药川贝母定量分析方法研究



全 文 :中药川贝母定量分析方法研究
余 华t ou o姜 艳t o李 萍t 3 o李绍平u o王一涛u
kt q中国药科大学 现代中药重点实验室 o江苏 南京 utssv{ ~
u q澳门大学 中华医药研究所 o澳门l
≈摘要  目的 }研究常用中药川贝母的定量分析方法 ∀方法 }应用高效液相色谱法 ∀以 w种川贝母共有的有
效成分贝母辛为指标 ~采用 „ª¬¯¨ ±·‹¼³¨µ¶¬¯ …⁄≥2≤t{kw1s °° ≅ uxs °° ox Λ°l色谱柱 o以乙腈2水2二乙胺kvzΒyvΒs1svl
为流动相 o流速 t1s °#°¬±p t ~„¯ ·¯¨¦«usss蒸发光散射检测器检测 o外标两点法定量 ∀结果 }贝母辛在 s1svt {{ ∗
t1sus °ª#°pt呈线性 o回收率为 tsu1t h k ν € xl o• ≥⁄v1{y h ∀根据 vv批不同产地或来源的川贝母药材中贝母辛
的含量结果 o确定贝母辛的含量限度为 s1sszs h ∀结论 }本法为良好的贝母辛的定量分析方法 o可用于川贝母药材
的质量控制 ∀
≈关键词  川贝母 ~贝母辛 ~‹°≤2∞≥⁄~含量测定 ~质量控制
≈中图分类号  • u{w1t ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxls{2sxzu2sw
≈收稿日期  ussw2sv2us
≈基金项目  国家自然科学基金kvsszs{{yl ~教育部跨世纪人
才基金k≈ussu w{号l
≈通讯作者  3李萍 oר¯ }ksuxl {xv|tuww oƒ¤¬}ksuxl{xvuuzwz o∞2
°¤¬¯ }¯¬³¬±ª¯¬ ƒ ³∏¥¯¬¦t q³·q­¶q¦±
川贝母为常用止咳化痰药 o5中国药典6usss年
版一部川贝母的基源植物包括川贝母 Φριτιλλαρια χιρ2
ρηοσα ⁄1 ⁄²±1 !暗紫贝母 Φ1 υνιβραχτεατα ‹¶¬¤² ·¨Ž1
≤1 ‹¶¬¤!梭砂贝母 Φ1 δελαϖαψι ƒµ¤±¦«1 和甘肃贝母
Φ1 πρζεωαλσκιι ¤¬¬°1≈t  ∀由于川贝母药材来源于多
基源植物 o加之成分复杂 o因而其质量控制一直是一
个难题 o药典中仅有形态鉴别方法 o有效成分或指标
成分的含量测定方法尚为空白 ∀作者在多年研究贝
母化学成分和药理作用的基础上≈u ov  o建立川贝母
定量分析方法 o为完善川贝母的质量标准提供科学
依据 ∀
1 仪器与材料
„ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪 o„ª¬¯¨ ±·Štvtu„二
元泵 o• «¨ ²§¼±¨ zzux¬手动进样阀 kus ˏl o „ª¬¯¨ ±·
≤«¨ °¶·¤·¬²±y1st色谱工作站 o„ª¬¯¨ ±·vx|sst 数模转
换器 ~„¯ ·¯¨¦«usss蒸发光散射检测器 ~• ≠Žp u型无
音无油空压机k天津市蓝珂科技实业公司l ∀乙腈为
色谱纯 ~纯净水k杭州娃哈哈集团l ~二乙胺 !氯仿 !氨
水为分析纯 ~甲醇为特级纯k江苏汉邦科技有限公
司l ∀贝母辛 !西贝素苷 !西贝素 !贝母甲素和贝母乙
素对照品由本实验室自制 o结构经光谱鉴定 o纯度经
高效液相色谱分析大于 |{ h ∀川贝母药材样品共
vv份k见表 tl o均经作者本人鉴定 o并由中国药科大
学生药学教研室李萍教授复核 o现存放于中国药科
大学生药学教研室及澳门大学中华医药研究所 ∀
2 方法与结果
211 提取条件的优化
以甘肃漳县产甘肃贝母为样品 o对样品提取方
法进行考察 ∀
21111 提取溶剂的选择 采用氨水浸润 t «后 o分
别以乙醚 !甲醇 !氯仿 !氯仿2甲醇kwΒtlw种溶剂冷浸
过夜 o超声提取 t «o见表 t o结果表明 o乙醚提取杂
质最少 o但提取率低 ~氯仿2甲醇kwΒtl提取率最高 o
且杂质少 ∀因此选用氯仿2甲醇kwΒtl作为提取溶
剂 ∀
表 t 不同溶剂提取率的比较k ν € vl h
溶剂 贝母辛提取率
乙醚 s1stw ? s1sss y
氯仿 s1stv ? s1sss t
甲醇 s1sut ? s1sss u
氯仿2甲醇kwΒtl s1suz ? s1sss t
21112 提取方式的选择 由于氯仿2甲醇kwΒtl混
合溶剂不适宜用索氏提取 o因此比较了冷浸后超声 !
热回流 u种方式 ∀结果见表 u o可见氯仿2甲醇kwΒtl
回流提取较完全 ∀
21113 提取时间的选择 样品以氯仿2甲醇kwΒtl
#uzx#
第 vs卷第 {期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ {
„³µ¬¯oussx
表 u 不同方法提取率的比较k ν € vl h
提取方法与时间 贝母辛提取率
超声 t « s1suz ? s1sss t
回流 w « s1swv ? s1sss t
注 }超声前先用溶剂冷浸过夜
分别加热回流k{s ε lt ou ov ow «o结果见表 v ∀贝母
辛 u «即已提取完全 o由此可确定贝母辛的最佳提
取条件为 }氨水浸润 t «后 o以混合溶剂氯仿2甲醇
kwΒtl加热回流k{s ε l提取 u «∀
表 v 不同提取时间的提取率比较k ν € vl
提取时间r« 贝母辛提取率r h
t s1swv ? s1sss w
u s1swx ? s1sst t
v s1sww ? s1sst x
w s1swv ? s1sss t
212 色谱条件
„ª¬¯¨ ±·‹¼³¨µ¶¬¯ …⁄≥2≤t{色谱柱 kw1s °° ≅ uxs
°°ox Λ°l ~流动相 „ }梯度洗脱 os ∗ tx °¬±乙腈2水2二
乙胺kvzΒyvΒs1svl otx ∗ us °¬±线性上升到乙腈2水2二
乙胺 kxsΒxsΒs1svl ous ∗ xs °¬± 乙腈2水2二乙胺
kxsΒxsΒs1svl oxs ∗ xt °¬±线性上升到乙腈2水2二乙胺
k|sΒtsΒs1svl oxt ∗ xx °¬±乙腈2水2二乙胺k|sΒtsΒ
s1svl ~流动相 …}乙腈2水2二乙胺kvzΒyvΒs1svl ~流速
t1s °# °¬±pt ~„¯ ·¯¨¦« usss 蒸发光散射检测器
k∞≥⁄l o漂移管温度 ttx ε o载气流速 v1s #°¬±pt ∀
213 样品制备
对照品溶液的制备 }精密称取贝母辛 !西贝素
苷 !西贝素 !贝母甲素和贝母乙素对照品各约 x °ªo
置 x °量瓶中 o加甲醇溶解并稀释至刻度 o摇匀 o即
得混合对照品贮备液 ~精密称取贝母辛对照品约 x
°ªo置 x °量瓶中 o加甲醇溶解并稀释至刻度 o摇
匀 o即得贝母辛对照品贮备液 ∀
供试品溶液的制备 }取本品粉末k过 w号筛lu
ªo精密称定 o置圆底烧瓶中 o加氨水 w °浸润 t «o
加混合溶剂氯仿2甲醇kwΒtlws °o称重 o混匀 o置 {s
ε 水浴加热回流 u «o放冷 o称重 o加混合溶剂补足重
量 o滤过 o精密量取续滤液 ux °o置蒸发皿中蒸干 o
残渣加甲醇溶解并转移至 t °量瓶中 o加甲醇至刻
度 o摇匀 o即得 ∀
214 川贝母质量控制指标的确定
取川贝母 !暗紫贝母 !梭砂贝母 !甘肃贝母标准
药材 o按 213项下方法制成供试品溶液 o混合对照品
溶液和各样品溶液以 212 项下色谱条件k„l进行分
析 o结果见图 t ∀从样品分析结果可以看出 ow个基
源川贝母中均未检出西贝素苷和西贝素 o云南产川
贝母中含有贝母甲素和贝母乙素 o但其他川贝母中
均未检出这些组分 o仅贝母辛为 w个基源川贝母共
有组分 ∀因此 o作者选用贝母辛作为川贝母质量控
制指标成分 ∀
图 t 对照品及 w个基源川贝母药材提取物
的 ‹°≤2∞≥⁄图
„1混合对照品 ~…1川贝母k云南白马雪山l ~≤1暗紫贝母k甘肃l ~
⁄1 梭砂贝母k四川石渠l ~∞1甘肃贝母k甘肃漳县l ~
t1 贝母辛 ~u1西贝素苷 ~v1 西贝素 ~w1 贝母甲素 ~x1 贝母乙素
215 线性关系的考察
取 213项下贝母辛贮备液依次精密稀释为 vrw o
tru ovr{ otrw ovrty otr{ ovrvu otrty ovryw otrvu含量
梯度 o其含量从低到高依次为 }s1svt {{ os1swz {t o
s1syv zx os1s|x yv os1tuz x os1t|t v os1uxx s o
s1v{u x os1xts s os1zyx s ot1sus °ª#°pt o每一含量
进样 us ˏo按 212项下色谱条件 …进行分析测定 o
重复 v次 o记录各峰峰面积 ∀以对照品含量的自然
对数值为纵坐标 o以峰面积的自然对数值为横坐标
进行线性回归 o结果表明 o贝母辛含量在 s1svt {{ ∗
t1sus °ª#°pt与峰面积值呈导数线性关系 o回归方
程为 }Ψ€ s1y|| x Ξ p y1utw z oρ€ s1||{ x ∀对照品
及样品的色谱图见图 u ∀
216 精密度试验
取浓度为 s1t|t v °ª#°pt的对照品溶液 o按
212项下色谱条件 …重复进样 x次 o每次 us ˏo贝
母辛的峰面积积分值日内精密度k ν € xl的 • ≥⁄为
u1s h ~日间精密度k ν € vl的 • ≥⁄为 u1x h ∀
217 重复性试验
取同批甘肃贝母药材粉约 u ªo共取 x份 o精密
称定 o按 213项下方法提取 o制成供试品溶液 o按 212
#vzx#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ {
„³µ¬¯oussx

图 u ‹°≤2∞≥⁄图
„1 贝母辛对照品 ~…1 甘肃贝母提取物 ~t1贝母辛
项下色谱条件 …进行测定 o计算贝母辛的含量 ∀结
果该批甘肃贝母中贝母辛的含量为 s1sv{ ux h o• ≥⁄
为 t1x h ∀实验表明 o本法有较好的重复性 ∀
218 稳定性试验
取同一供试品溶液 o按 212 项下色谱条件 …o在
s ot ou ow o{ «测定贝母辛的含量 o• ≥⁄为 t1v h ∀
219 加样回收率的测定
准确称取已测知贝母辛含量的暗紫贝母粉末 t
ªo加入贝母辛对照品贮备液适量 o按 213 项下方法
提取 o制成供试品溶液 o按 212项下色谱条件 …进行
测定 o计算回收率 ∀结果平均回收率为 tsu1t h o
• ≥⁄为 v1| h oν € x ∀
2110 样品含量测定
取贝母辛对照品配制成 s1t|t v os1s|x yv °ª#
°pt的溶液 ~取不同川贝母样品 o按 213 项下方法
提取 o制成供试品溶液 ∀对照品及各样品溶液以
212 项下色谱条件 …进行分析 o按外标两点法计算
贝母辛含量 o含量测定结果见表 w ∀
表 w vv批川贝母药材中贝母辛的含量测定 h
编号 植物学名 来 源 含量
t 川贝母 Φριτιλλαρια χιρρηοσα 四川布拖县(产地) s .stu
u 川贝母 Φ. χιρρηοσα 云南白马雪山(产地) s .stt
v 川贝母 Φ. χιρρηοσα 云南热水塘(产地) s .stv
w 川贝母 Φ. χιρρηοσα 四川松藩(商品)t) s .ssy {
x 川贝母 Φ. χιρρηοσα 四川阿坝(商品)t) s .stu
y 暗紫贝母 Φ. υνιβραχτεατα 四川茂县(产地) s .sut
z 暗紫贝母 Φ. υνιβραχτεατα 四川马尔康(产地) s .ssz z
{ 暗紫贝母 Φ. υνιβραχτεατα 甘肃 s .ssy v
| 梭砂贝母 Φ. δελαϖαψι 四川石渠县(产地) s .stt
ts 梭砂贝母 Φ. δελαϖαψι 云南白马雪山(产地) s .ssx y
tt 甘肃贝母 Φ. πρζεωαλσκιι 甘肃漳县(产地) s .sv{
tu 甘肃贝母 Φ. πρζεωαλσκιι 四川南坪(产地) s .ss{ x
tv 长腺贝母 Φ. υνιβραχτεατα √¤µqλονγινιχταρεα 四川松藩(产地) s .ssx y
tw 松贝 Φ. χιρρηοσα 四川阿坝州(商品)u) s .ssx z
tx 青贝 Φ. χιρρηοσα 四川色达县(商品)u) s .stu
ty 松贝 Φ. χιρρηοσα . 四川原县(商品)u) s .ssz v
tz 梭砂贝母 Φ. δελαϖαψι 四川(商品)u) s .svz
t{ 青贝 n松贝 Φ. χιρρηοσα s .ssz w
t| 松贝 Φ. χιρρηοσα s .ss{ s
us 松贝 Φ. χιρρηοσα s .ssz x
ut 青贝 Φ. χιρρηοσα s .sut
uu 青贝 Φ. χιρρηοσα s .ss{ v
uv 青贝 Φ. χιρρηοσα s .ssw |
uw 炉贝 Φ. δελαϖαψι s .ssv {
ux 青贝 Φ. χιρρηοσα s .ss{ t
uy 炉贝 Φ. δελαϖαψι s .sst {
uz 炉贝 Φ. δελαϖαψι s .ssv {
u{ 炉贝 Φ. δελαϖαψι s .sst {
u| 青贝 n松贝 Φ. χιρρηοσα 甘肃(商品)v) s .ss{ {
vs 青贝 n松贝 Φ. χιρρηοσα s .ss{ y
vt 青贝 n松贝 Φ. χιρρηοσα s .ss{ z
vu 炉贝 Φ. δελαϖαψι s .st|
vv 炉贝 Φ. δελαϖαψι s qst{
注 }tl购自成都荷花池药材市场 ~ul由四川省药品检验所提供 ~vl由甘肃省药品检验所提供
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∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ {
„³µ¬¯oussx
3 讨论
311 蒸发光散射检测器k∞≥⁄l是一种新的质量型
检测器 o对于不易挥发的化合物 o无论有无紫外吸收
均能检测 ∀根据本课题组的研究结果≈w ox  o本试验
选择该检测器对川贝母中贝母辛进行 ‹°≤ 直接分
析 o结果表明该方法对贝母辛的检测灵敏度理想 ∀
312 由于蒸发光散射检测器要求流动相必须能在
一定的漂移管温度下完全蒸发 o若采用离子对色谱
法在流动相中加入缓冲盐或表面活性剂则均会导致
检测器响应值本底增大 o灵敏度下降 ∀因此 o作者选
择了在流动相中加入二乙胺的离子抑制色谱法 ∀本
试验曾选用甲醇2水2二乙胺系统进行洗脱 o未得到
满意的结果 ∀最终采用本试验的洗脱条件 o可使贝
母辛得到很好的基线分离 o并且样品中其他成分也
具有很好的分离度 o同时该方法缩短了分析时间 ∀
整个分析可在 tx °¬±内完成 o适合常规分析 ∀
313 试验选择比较了乙醚 !甲醇 !氯仿 !氯仿2甲醇
kwΒtl等提取溶剂系统 o并考察了提取方法和提取时
间等因素的影响 ∀试验结果表明 u ª药材以氨水 w
°碱化 t «o加混合溶剂氯仿2甲醇kwΒtlws °o{s
ε 水浴热回流提取 t次 o回流时间为 u «的提取方
法 o即可以得到满意的提取效果 ∀
314 5中国药典6usss年版中 o未收载川贝母有效
成分的含量测定标准 ∀而作者在对 w个基源川贝母
中生物碱成分进行分析的结果表明 o贝母辛k³¨¬°¬2
¶¬±¨ l为其共有成分 ∀本课题组的研究表明 o川贝母
中的总生物碱为其主要有效成分 o而贝母辛又是总
生物碱的主要组成成分 o因此 o本研究选取该成分作
为川贝母的质量评价指标 o来建立其质量控制方法 o
可以更为科学地反映川贝母的内在质量 ∀在所测定
的 vv个川贝母样品中 o贝母辛含量最高的是甘肃漳
县产甘肃贝母样品 o含量为 s1sv{ h ~最低为四川药
品检验所提供的 u 批商品炉贝 o含量均为
s1sst { h ∀所测样品的平均含量为 s1stt h o综合
上述研究结果 o建议川贝母中贝母辛的含量限度定
为 s1ssz s h ∀
≈致谢  四川大学药学院生药学教研室唐心曜教授 !四
川省药品检验所 !成都市药品检验所及甘肃省药品检验所提
供川贝母药材样品 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 1 一部 1usss1uz q
≈u  Œ‘Š¨ o ≠¨¨2°¬±ª ‹²oŒ °¬±ªoετ αλ1 °∏´¬¨§¬±²±¨ o¤ ±²√¨¯ x ¤¯³«¤2
¦¨√¤±¬±¨ ¤¯®¤¯²¬§©µ²°·«¨ ¥∏¯¥¶²© Φριτιλλαρια πυθιενσισ , ¤± ¤±·¬·∏¶¶¬√¨
·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ 1 ϑ Νατ Προδσ , t||x ox{kttl }tyyu1
≈v  李 萍 o季 晖 o徐国钧 o等 1 贝母类中药的镇咳祛痰作用研
究 q中国药科大学学报 ot||v ouwkyl }vys1
≈w  Œ≥²±ª2¯¬±oŒ‘Š¨ o≤‹„‘≥«∏±2º¤±oετ αλ1 ⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²±²©·«¨ °¤2
­²µ¬¶²¶·¨µ²¬§¤¯ ¤¯®¤¯²¬§¶¬±¥∏¯¥¶²© Φριτιλλαρια¥¼ «¬ª«2³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´2
∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ ¦²∏³¯ §¨ º¬·« √¨¤³²µ¤·¬√¨ ¬¯ª«·¶¦¤·¨µ¬±ª§¨·¨¦·¬²±1
ϑ Χηροµατογραπηψ Α,usst o|s|kul }usz1
≈x  ≤‹„‘≥«∏±2º¤±oŒ ≥²±ª2¯¬±oŒ‘ Š¨ oετ αλ1 °«¤µ°¤¦²®¬±¨ ·¬¦¶·∏§¼
¤±§§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¬°³¨µ¬¤¯¬±¨ o·«¨ °¤­²µ¥¬²¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·¬± ¤±2
·¬·∏¶¶¬√¨ Φριτιλλαρια χιρρηοσα o¬± µ¤·¥¼ ‹¬ª«2°¨ µ©²µ°¤±¦¨ ¬´∏¬§ ≤«µ²2
°¤·²ªµ¤³«¼ ¦²∏³¯ §¨ º¬·« √¨¤³²µ¤·¬√¨ ¬¯ª«·2¶¦¤·¨µ¬±ª §¨·¨¦·²µ1 Αναλ
Βιοχηεµ , usss ou{xktl }tzu1
Στυδψ ον αναλψτιχαλ µετηοδ φορ αλκαλοιδσιν Βυλβυσ Φριτιλλαριαε Χιρρηοσαε
≠˜ ‹∏¤tou oŒ„‘Š ≠¤±t oŒ °¬±ªt oŒ ≥«¤²2³¬±ªu o • „‘Š ≠¬2·¤²u
(t . Κεψ Λαβορατορψ οφ Μοδερν Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινεσ ανδ ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχογνοσψ, Χηινα Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ,
Νανϕινγ utssv{ , Χηινα ;u1 Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Υνιϖερσιτψ οφ Μαχαυ , ΣΑΡ Μαχαυ)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨ √¨¯²³¤ ‹°≤2∞≥⁄ ° ·¨«²§©²µ·«¨ ∏´¤±·¬·¤·¬²± ²© ³¨¬°¬¶¬±¨ ¬± …∏¯¥∏¶ƒµ¬·¬¯¯¤µ¬¤¨ ≤¬µµ«²¶¤¨ q Μετηοδ :
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v1{y h q „¦¦²µ§¬±ª·²·«¨ µ¨¶∏¯·¶²©·«¨ vv §¬©©¨µ¨±·…∏¯¥∏¶ƒµ¬·¬¯¯¤µ¬¤¨ ≤¬µµ«²¶¤¨ ²¥·¤¬±¨ §©µ²° √¤µ¬²∏¶²µ¬ª¬±¶o·«¨ ¦²±·¨±·¯¬°¬·²© ³¨¬°¬¶¬±¨
º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §·² ¥¨ s1ssz s h q Χονχλυσιον : ׫¨ ¤¶¶¤¼ º¤¶¶∏¦¦¨¶¶©∏¯¯ ¼ ∏·¬¯¬½¨ §·² ∏´¤±·¬©¼ ·«¨ °¤­²µ¥¬²¯²ª¬¦¤¯ ¼¯ ¤¦·¬√¨ ¤¯®¤¯²¬§¬± ©²∏µ
¶³¨¦¬¨¶²©…∏¯¥∏¶ƒµ¬·¬¯¯¤µ¬¤¨ ≤¬µµ«²¶¤¨ q׫¨ §¨ √¨¯²³¨ §° ·¨«²§¬¶¶¬°³¯¨oµ¤³¬§o¤¦¦∏µ¤·¨ ¤±§¶¨±¶¬·¬√¨©²µ§¨·¨µ°¬±¬±ª·«¨ ¦²±·¨±·²©³¨¬°¬¶¬±¨
¬± ¦µ∏§¨ …∏¯¥∏¶ƒµ¬·¬¯¯¤µ¬¤¨ ≤¬µµ«²¶¤¨ q
[ Κεψ ωορδσ] …∏¯¥∏¶ƒµ¬·¬¯¯¤µ¬¤¨ ≤¬µµ«²¶¤¨ ~³¨¬°¬¶¬±¨ ~ ‹°≤2∞≥⁄~¦²±·¨±·§¨·¨¦·¬²± ~´ ∏¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ≈责任编辑 王康正 
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