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The renoprotect effect of Shenhua recipe on 5/6 renal ablation rats

复方肾华片对5/6肾切除大鼠的疗效观察



全 文 :复方肾华片对 xry肾切除大鼠的疗效观察
李建军 o陈香美 3 o顾 o魏日胞 o师锁柱 o尹 忠
k解放军总医院 肾病中心暨重点实验室 o北京 tss{xvl
≈摘要  目的 }观察复方肾华片对大鼠残余肾功能的保护作用 ∀方法 }以安博维为对照 o复方肾华片治疗 xry
肾切除大鼠 tu周后 o观察血压 !尿蛋白 !血生化及肾脏病理变化情况 ∀结果 }复方肾华片能降低xry肾切除大鼠的血
清肌酐 !尿素氮k Π s1sxl ouw «尿蛋白排泄k Π s1stl o降低血清胆固醇浓度k Π s1sxl o升高血清白蛋白 o减轻肾
小球硬化及肾间质纤维化程度 o但对大鼠血压没有影响 ∀结论 }复方肾华片可以通过非血流动力学机制 o减轻 xry
肾切除大鼠的肾损害 o延缓慢性肾功能不全的进展 ∀
≈关键词  复方肾华片 ~xry肾切除 ~大鼠
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlsx2svzz2sw
≈收稿日期  ussw2sz2s{
≈基金项目  国家/十五0科技攻关项目kusst…„zst„tw¤l ~国家
自然科学基金/创新研究群体0项目kvstutssxl ~北京/针对重大疾病
的创新药物研究0项目k⁄suswssvswtsvtl
≈通讯作者  3陈香美 oר¯ }kstslyy|vxwyu o∞2°¤¬¯}¬°¦«¨ ± ƒ ³∏¥2
¬¯¦1¥·¤1±¨ ·1¦±
慢性肾功能衰竭的进展除与各种病因性肾脏病
特异性病理生理改变有关外 o尚存在多种共同机制
或加重因素 ∀其中血流动力学改变和慢性炎症被认
为是肾小球硬化和肾小管间质损伤的主要机制≈t  ∀
随着病程的进展 o健存的肾单位因代偿而增生和高
滤过 o而这种代偿性机制导致肾小球的进一步硬化 o
肾单位进一步减少 o进而引起肾小管间质的损
伤≈u ov  ∀血管紧张素转化酶抑制剂k¤ª¬²·¨±¶¬± ¦²±2
√¨ µ·¬±ª ±¨½¼°¨ ¬±«¬¥¬·²µo „≤∞Œl和血管紧张素 µ受体
阻断剂k¤ª¬²·¨±¶¬± µ µ¨¦¨³·²µ¥¯²¦®¨µo„• …l可以打破
这一恶性循环而延缓疾病的进展 ∀但是任何一种药
物都不能完全阻断病程的进展 o特别是在疾病晚期
或伴有高血钾时 o肾素2血管紧张素系统kµ¨±¬± ¤±2
ª¬²·¨±¶¬±¶¼¶·¨° o• „≥l阻断剂的应用就受到限制 ∀近
来发现霉酚酸酯k°¼¦²³«¨ ±²¯¤·¨ °²©¨·¬¯o  ƒl可以
延缓 xry肾切除大鼠肾功能的恶化 o为临床免疫抑
制剂治疗慢性肾病提供了依据≈w ox  ∀笔者前期的研
究表明 o复方肾华片可以抑制大鼠慢性血清病模型
肾脏局部的炎症 o降低尿蛋白≈y  ∀本研究采用大鼠
xry肾切除动物模型 o观察复方肾华片对大鼠残余
肾脏功能及形态学的影响 o初步探讨其防治肾纤维
化及慢性肾功能衰竭的效果 ∀
1 材料
111 动物
健康雄性 •¬¶·¤µ大鼠 ys 只 o雌雄各半 o体重
uys ∗ vss ªo由军事医学科学院动物中心提供k合格
证号 }军动字 ussvtstsul ∀
112 药品及器材
复方肾华片ks1y ªr片 o含生药 x ª#ªpt o北京长
城药厂 o批号 ussvs|tsl o主要成分为黄芪 !莪术 !白
术 !黄芩等 ∀伊贝沙坦k赛诺菲 ∗ 圣得拉堡 ∗ 民生 o
安博维 o批号 ttzzl ∀日立 ztxs全自动生化分析仪 !
zuu型光栅分光光度计k上海第三分析仪器厂l !∞
xssu血压仪k美国 ¨·¬¦¤科学仪器公司l ∀
2 方法
211 造模方法
ys只大鼠适应性饲养 t周 o随机抽取 y只作为
假手术组 o其余 xw只进行 xry肾切除 ∀方法 }大鼠
用 v h异戊巴比妥钠kvs °ª#®ªptl麻醉后 o俯卧位固
定于鼠台上 o从距左脊肋角 t1x ¦°处斜向外方切
口 o暴露左肾 o分离肾周围脂肪囊后 o弧行切除肾上
下极 o用明胶海绵压迫止血 t °¬±o复位肾脏 o缝合 ∀
t周后切除整个右肾 ou次手术共切除 xry个肾脏 ~
假手术组只分离脂肪囊 o不切除肾组织 ∀
212 分组及给药方法
第 u次手术 t周后 o选取存活的 xs只大鼠 o按
体重编号 o由 ≥°≥≥ 软件随机分为 }模型组 !安博维
组 !复方肾华片大 !中 !小剂量组 o每组 ts只 ∀根据
体表面积计算和预试验结果 o复方肾华片大 !中 !小
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第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤µ¦«oussx
剂量组分别按 u ot os1x ª#®ªptk分别合生药 ts ox o
u1x ªl给药 o安博维组按 us °ª#®ªpt给药 o每天
{ }vs ∗ | }vs灌胃给药 ~假手术组和模型组同时给予
相应量的蒸馏水 ∀各组大鼠每周称 t次体重 o按体
重调整给药和蒸馏水量 o连续给药 tu周 ∀
213 检测指标
21311 一般情况 观察大鼠的精神状态 !活动度 !
毛发光泽度 !摄食及死亡情况 o每周称 t次体重 o观
察体重变化 ∀第 tu周处死前测血压 ∀
21312 尿蛋白定量 各组分别于给药前k即 s周l !
给药后 w o{ otu周末采集 uw «尿液 ∀将每只大鼠分
别置于代谢笼中 uw «o留尿前 tu «至留尿结束期间
禁食 o自由饮水 o记录 uw «尿量 o用考马斯亮蓝法检
测尿蛋白浓度 o并计算尿蛋白总量 ∀
21313 血生化检查 各组于给药前及给药后 w o{ o
tu周 o乙醚轻麻 o眼眶取血 t °o用 ztxs自动生化
分析仪检测血清中尿素氮k…˜‘l !肌酐k≤µl !总蛋白
k׳l !白蛋白k„¯ ¥l !胆固醇kצ«l !甘油三酯k׊l ∀
21314 肾脏组织标本留取 各组大鼠于实验结束
时 o用 v h异戊巴比妥钠麻醉 o自眼眶放血后 o仰卧
位固定于手术台上 o腹正中切口 v1s ¦°o取出左肾 o
并将取出的肾组织 o修剪掉纤维结缔组织 o用 s1| h
生理盐水冲洗后 o部分肾组织置于 ts h 甲醛中固
定 ∀
21315 肾脏病理 ts h甲醛固定的肾组织经过常
规处理后 o石蜡包埋 o用 u Λ°的石蜡切片 o进行 °„≥
染色 o由病理医师参照文献方法≈z  o在光镜下进行半
定量积分 ∀肾小球的硬化程度积分 }s分k正常肾小
球l ~t分k系膜区扩张或硬化面积小于 ux h l ~u分
k硬化面积 ux h ∗ xs h l ~v 分 k硬化面积 xs h ∗
zx h l ~w分k硬化面积超过 zx h l ∀每个标本在 wss
倍光镜下观察 tss个肾小球 o求平均数作为肾小球
硬化指数 ∀小管间质积分 }根据病变k肾小管萎缩 !
管型 !间质炎症和纤维化l范围 o分别给 s ∗ v分 otss
倍光镜下 o每个标本观察 ts个视野 o求平均数作为
肾间质小管病变指数 ∀
214 统计学方法
计量资料用 cξ ? σ表示 o不同时间点各组大鼠
体重 !血肌酐和尿蛋白的比较采用重复测量的方差
分析 ~同一时间点不同组之间的比较采用单因素方
差分析 o两两比较采用最小显著差法k≥⁄l ~记数资
料采用卡方检验 ∀ Π s1sx为有统计学意义 ∀
3 结果
311 一般情况
假手术组大鼠表现机警 o反应快 o皮毛致密 !整
齐而有光泽 o生长 !进食及活动情况均无明显异常 o
体重逐渐增加 o无死亡 ∀手术组大鼠明显营养不良 o
精神萎靡 o活动迟缓 o食欲不振 o皮毛蓬松 !枯槁无光
泽 o体重增长缓慢 o见表 t ∀第 tu周时 o足部出现不
同程度的水肿 o其中以模型对照组最为明显 ∀模型
组大鼠分别在第 w o{ ots otu周各有 t只大鼠死亡 ∀
肾华小剂量组在 ts ott周各有 t只大鼠死亡 o其他
组大鼠无死亡 ∀
312 尿蛋白的变化
表 t 各组大鼠体重的变化kcξ ? σl
组别 剂量rª#®ªpt ν s周rª w周rª {周rª tu周rª
安博维组 s qsu ts u{t qtz ? t| q|x vww qyz ? vu qy| v{u quz ? vt q|x wsy qu{ ? vs q{s
肾华低剂量组 s qx { uy{ qtz ? tv qyw vvz qvv ? u{ qt| vzu qtz ? wv qzt vzs qtz ? x{ q|{
肾华中剂量组 t ts u{{ qys ? ty qtu vy{ qxs ? t| quvvl wsx quw ? tz qxxvl wsy qyw ? u{ qsw
肾华大剂量组 u ts u{u q{v ? ut qzv vxs qss ? wt qxz v|y qtz ? vs qxz wsw quu ? vy qyx
模型组 y uz| qxs ? z qyw vv{ q{v ? t| q|utl vyx qws ? u{ qzwul vzs qwu ? xv qzsul
假手术组 y uzy qxs ? | qyz vzw qvv ? vw qww wty qzs ? tw qz| www qsz ? ut q{w
注 }同一时间点内 o与假手术组比较tl Π s1sx oul Π s1st ~与模型组比较vl Π s1sx
手术前ks周l各组大鼠 uw «尿蛋白量无显著性
差异 ∀假手术组 uw «尿蛋白在整个实验周期内 o无
明显变化k Ё s1sxl o其余各组均随时间明显增多
k Π s1stl ~从第 w周起模型组 uw «尿蛋白比假手
术组显著增多 o安博维组可显著降低 uw «尿蛋白
量 ∀第 w周肾华各剂量组 uw «尿蛋白均显著低于
模型组 o各剂量组之间无显著性差异 ∀第 {周肾华
中剂量组和大剂量组 uw «尿蛋白显著低于模型组
和小剂量组 o第 tu周肾华大剂量组明显低于模型
组 o大剂量组降蛋白作用明显优于小剂量组k Π 
s1sxl o见表 u ∀
313 肾功能的变化
手术前ks周l各组大鼠肾功能k血肌酐l无显著
性差异 ∀假手术组血肌酐在整个实验周期内 o无明
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第 vs卷第 x期
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显变化k Ё s1sxl ~其余各组均随时间延长明显增
多k Π s1stl ~从第 w周起模型组血肌酐水平明显
高于假手术组 o安博维组和肾华大 !中剂量组明显低
于模型组和肾华小剂量组 o见表 v ∀
314 血液生化指标的变化 o见表 w ∀
315 血压及病理
表 u 各组大鼠尿蛋白的变化kcξ ? σl
组别 剂量rª#®ªpt ν s周rª#kuw «lp t w周rª#kuw «lp t {周rª#kuw «l p t tu周rª#kuw «l p t
安博维组 s qsu ts ts qvs ? t qzt { qwy ? t qzuvl xu qws ? ut qs|ul zs qz| ? uz qzuul
肾华小剂量组 s qx { | qts ? w qx{ ut qxu ? y q|svl ttv q{y ? y| qu| tux qyz ? zu qyy
肾华中剂量组 t ts | quw ? v qz{ ux qsw ? tv qysul x{ quy ? uw q{{u owl |u qyy ? vy qs|
肾华大剂量组 u ts { qzx ? u qzy t| qwx ? { qvsul w{ qzu ? vu qzzu owl y{ qt{ ? tw q||v owl
模型组 y ts qww ? t q{u xv qyt ? ux qwxtl |v qtu ? vz quutl tus qwz ? wx qtvtl
假手术组 y | quv ? u qxs tu q{z ? w qtz tu qwu ? z quy t{ q{s ? w qxy
注 }同一时间点内 o与假手术组比较tl Π s1st ~与模型组比较ul Π s1sx ovl Π s1st ~与小剂量组比较wl Π s1sx
表 v 各组大鼠血肌酐的变化kcξ ? σl °°²¯#pt
组别 剂量rª#®ªpt ν s周r°°²¯#pt w周r°°²¯#pt {周r°°²¯#pt tu周r°°²¯#pt
安博维组 s qsu ts vu qw{ ? x qws zz qys ? tu qvxul zu qvs ? tv qzvul zs qxx ? tw q{{ul
肾华小剂量组 s qx { vx qzz ? z qv| || qxv ? wy quy tsu qw{ ? wy qyx t{s qvz ? v| q||
肾华中剂量组 t ts ws q{w ? y qyt yy qtu ? tu qsvu owl ys qt{ ? ty qsuv owl zy qxw ? x{ qwuu oxl
肾华大剂量组 u ts vu qw{ ? x qws yv q|s ? v qvyv owl yu qyv ? x qzzv owl yz ? x q|su oxl
模型组 y vz qty ? y q{{ ts{ qvs ? wv qtttl tut q{t ? xz qtxtl t|v qww ? tsy qz{tl
假手术组 y vv ? x qvu v| q{s ? { qxs vv qtt ? y qsz vt qsx ? { qw{
注 }同一时间点内 o与假手术组比较tl Π s1st ~与模型组比较ul Π s1sx ovl Π s1stk表 w ox同l ~与小剂量组比较wl Π s1sx oxl Π s1st
表 w 第 tu周各组大鼠血液生化指标情况kcξ ? σl
组别 剂量rª#®ªpt ν צ«r°°²¯#pt ׊r°°²¯#pt „¯ ¥rª#pt ׳rª#pt
安博维组 s qsu ts u qyx ? s qytul t qus ? s qws vs quz ? w qv{vl w| qxx ? x q{|
肾华小剂量组 s qx { u qtt ? s q{|vl t qw| ? s qyv u{ qsx ? v qstul xs qyx ? y q|s
肾华中剂量组 t ts u qvy ? s qzzvl t qv| ? s qyu u| qyu ? z qwxul ww qu{ ? w qxw
肾华大剂量组 u ts u q{x ? s qwtul t qzt ? s qzu vs qwv ? v qxzvl xu q{u ? tw quv
模型对照组 y v q{y ? t qvytl t quv ? s qzu uu qtz ? v qz{tl xv qyu ? w qsu
假手术组 y t qvy ? s quv s q|{ ? s qvy vx qw{ ? y qzy xw qxv ? x q|z
假手术组肾小球 !肾小管及间质无明显改变 o排
列分布及形态均正常 ∀空白对照组大鼠肾小球系膜
细胞增生 o系膜基质增多 o毛细血管或扩张或闭塞 o
肾小球囊壁增厚 o部分肾小球局灶性或全部硬化 o肾
小管扩张或萎缩 o可见大量蛋白管型 ~肾间质增宽 o
可见炎症细胞浸润 ~肾间质微血管病变呈局灶性分
布 !排列紊乱 !毛细血管腔缩小和变形 o与假手术组
相比较差异显著 ∀各治疗组病变较模型对照组有不
同程度的减轻 o各组大鼠的血压及病理积分见表 x o
图 t ∀
4 讨论
健存肾单位代偿性增生和高滤过 o导致肾小球
的进一步硬化 o进而引起肾小管间质损伤的恶性循
环是慢性肾病进展的机制之一 ∀导致肾小球硬化和
肾小管间质损伤进行性加重的主要机制是血流动力
学改变和炎症反应 ∀xry肾切除模型是最常用的实
验模型之一 o大鼠经过 xry肾切除后 o其残余肾单位
表 x 第 tu周各组大鼠血压及病理积分kcξ ? σl
组别
剂量
rª#®ªpt
ν 收缩压r°°‹ª 肾小球积分
肾小管间
质积分
安博维组 s qsu ts tsv ? twul s qv| ? s qtvvl s qwy ? s qusvl
肾华小剂量组 s qx { tvy ? t| s qw| ? s qutul s qy{ ? s quy
肾华中剂量组 t ts tws ? tv s qws ? s qtuvl s qyx ? s qvsul
肾华大剂量组 u ts tvv ? tu s qw| ? s qttul s qyv ? s qvzul
模型对照组 y tv| ? tytl s q{u ? s qu|tl t quy ? s qx{tl
假手术组 y ttt ? tv s qt| ? s qs{ s qws ? s qut
发生血液动力学改变 o肾脏出现高灌注 !高滤过 !高
压力 o导致残余肾代偿性肥大 !增生 !硬化 o最终表现
为进行性肾功能减退 !尿毒症 ∀
中医认为慢性肾衰的病机为本虚标实 o本虚以
肾虚为主 o标实多为湿浊 !水邪 o而瘀血贯穿于慢性
肾衰竭的始终 ∀中医的/瘀0涵盖肾小球硬化 !小球
系膜外基质增多 o基底膜增厚 o球囊粘连 o肾小球内
微血栓 o毛细血管腔塌陷或狭窄 o血管襻挤压 !闭塞
以及小管间质纤维化和萎缩等病理改变 ∀ /血实者
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图 t 各组大鼠肾小球病理改变 • „≥k ≅ wssl
直决之0 o/疏其血气 o令其条达0 o治宜活血化瘀 o行
气消肿 ∀方中以黄芪为君 o补气 !利水 !消肿 ~莪术为
臣 o消瘀血 o止扑损痛 o内伤恶血等 ∀结果表明本方
可减缓肾小球代偿性肥大的趋势 o减少肾小球内纤
维蛋白的渗出和硬化 o减轻间质纤维化程度和残余
肾单位的进行性毁损 o进而保护残余肾单位的功能 ∀
动物实验和临床资料表明蛋白尿和脂代谢紊乱
是加速慢性肾病进展的重要因素≈{  o同时还会增加
肾病患者发生心肌梗死和冠心病的风险≈|  ∀因此降
低蛋白尿 !调节脂代谢紊乱可以减少慢性肾脏病患
者的心血管事件的发生率 o延缓慢性肾病的进
展≈ts ott  ∀常规剂量的 „≤∞Œ 和 „• …o可以降低
us h ∗ xs h的蛋白尿 o大剂量可以直接或间接的调
节脂代谢紊乱≈tu  ∀本研究结果表明安博维 !肾华片
均可以明显降低 xry肾切除大鼠 uw «尿蛋白 !血清
胆固醇水平 o升高血清白蛋白 o延缓肾脏功能恶化的
进程 ∀而肾华片治疗组血压没有改善 o提示肾华片
可能是通过非血流动力学机制 o减少尿蛋白 o调节蛋
白代谢 o而间接调节脂代谢紊乱≈tt  ∀
≈参考文献 
≈t  ‘²µ²±«¤Œoƒ∏­¬«¤µ¤ ≤ Žo¤·½ • q׫¨ ¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ¦²°³²±¨ ±·¬±
³µ²ªµ¨¶¶¬√¨ µ¨±¤¯ §¬¶¨¤¶¨¤µ¨ ¬±·¨µ√¨ ±·¬²±¶ ³²¶¶¬¥¯¨‚ Νεπηρολ ∆ιαλ
Τρανσπλαντ , ussu otzkvl }vyv q
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§¨¶³¬·¨ ³¨µ¶¬¶·¨±·«¼³¨µ·¨±¶¬²±q ΚιδνεψΙντ , ussv oyvkvl }||w q
≈y  张五星 q陈香美 q魏日胞 o等 q复方肾华治疗大鼠改良慢性血
清病肾炎的实验研究 q北京中医药大学学报 oussv okul }vu q
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µ¤·¨¶·«¨ ³µ²ªµ¨¶¶¬²± ²©¦«µ²±¬¦µ¨±¤¯ ¬±­∏µ¼q Κιδνεψ Ιντ , ussw oyx
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χυλατιον , ussv otszkwl }x{y q
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Τηε ρενοπροτεχτ εφφεχτ οφ Σηενηυα ρεχιπε ον x/ y ρεναλ αβλατιον ρατσ
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( ∆επαρτµεντ οφ νεπηρολογψ, Γενεραλ Ηοσπιταλ οφ ΠΛΑ, Βειϕινγ tss{xv , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ µ¨±² ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²© ≥«¨ ±«∏¤µ¨¦¬³¨ ²± ·«¨ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ °²§¨¯ ²©xry µ¨±¤¯ ¤¥¯¤·¬²±q
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≈责任编辑 古云侠 
≈收稿日期  ussv2ts2uv
≈通讯作者  3彭海燕 oר¯ }ksuxlxt||zvuv
槲寄生碱抗肿瘤作用的研究
彭海燕t 3 o章永红t o韩 英u o王 梦u
kt1 南京中医药大学 第一临床医学院 o江苏 南京 utssu| ~
u1 江苏省药物研究所 o江苏 南京 utsss|l
≈摘要  目的 }通过体内 !体外实验研究槲寄生碱的抗肿瘤作用 ∀方法 }体外实验采用 ×× 法测定槲寄生碱
对食管癌细胞株k∞¦¤2ts|l生长的抑制作用 ∀取对数生长期的肿瘤细胞培养 uw «后加入含不同浓度槲寄生碱培养
液 ~作用 uw «后倾去上清液 o加入 ×× ~w «后吸去上清液 o加入二甲亚砜k⁄≥’l ~vs °¬±后测吸光度k Αl并计算抑
制率 ~体内实验将制备的肿瘤细胞悬液 o以 s1u °r只的量接种于小鼠右前肢腋部皮下 ouw «后将已接种的小鼠随
机分组 ∀各组均连续给药 z §o停药后 t ∗ v §将小鼠拉颈处死 o剥取瘤块称重 o计算抑瘤率 ∀结果 }体外实验证实槲
寄生碱对肿瘤细胞生长有显著的抑制作用 ~体内实验证实槲寄生碱可抑制肿瘤生长 !延长荷瘤动物的生存期 ∀结
论 }槲寄生碱具有抗肿瘤作用 ∀
≈关键词  槲寄生碱 ~抗肿瘤 ~食管癌细胞株
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlsx2sv{t2sv
中医药在抗肿瘤方面具有效果广泛持久而无多
药耐药等弊端 o因此逐渐成为抗肿瘤药物研究的热
点 ∀近年来 o槲寄生的抗癌作用受到国内外医药学
界的重视 o已从多种槲寄生植物中提取到具有抗癌
活性的植物糖蛋白和生物碱 ∀本研究从槲寄生植物
中提取到具有抗癌活性的生物碱 o通过实验发现其
对数种癌细胞均有显著的抑制作用 ∀现报告如下 ∀
1 材料
111 动物
昆明种小鼠 o雌性 o体重 t{ ∗ uu ªo南京中医药
大学实验动物中心提供 ∀
112 药物与试剂
槲寄生碱 o由江苏省药物研究所植化室提供 ~对
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第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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