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Effect of Zishuijianghuoyin on Expression of Lymphocyte AngII Receptor (AT-1)mRNA of Experimental Hypertension Rats

滋水降火饮对实验性高血压大鼠淋巴细胞AngⅡ受体mRNA表达的影响



全 文 :Χοµ παρατιϖε Στυδψ ον Αντι2Ηψπερχηολεστερολεµια Αχτιϖιτψ οφ ∆ιοσγενιν
ανδ Τοταλ Σαπονιν οφ ∆ιοσχορεα παντηαιχα
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≈责任编辑 方文贤 
滋水降火饮对实验性高血压大鼠淋巴细胞
„±ªµ受体 °• ‘„表达的影响
廖圣宝t o丁荣光t o丁丽俐u o刘光伟t
kt q安徽中医学院 o安徽 合肥 uvssv{ ~u q中国科技大学 o安徽 合肥 uvssv{l
≈摘要  目的 }探讨高血压神经免疫调节的内在机制和滋水降火饮作用的可能环节 ∀方法 }采用反转录扩增
k• ×2°≤ • l技术检测二肾一夹高血压大鼠kuŽt≤2• ‹ • l„±ªµ受体k„×2tl°• ‘„ 在淋巴细胞的表达水平的改变及
滋水降火饮的干预作用 ∀结果 }模型对照组大鼠淋巴细胞 „×2t°• ‘„ 表达明显增强 o滋水降火饮组kus ows ª#
®ªp tl对此有抑制作用 ∀结论 }滋水降火饮降低淋巴细胞 „×2t °• ‘„ 的过度表达 o可能是其发挥神经免疫调节作
用的机理所在 ∀
≈关键词  滋水降火饮 ~„±ªŒŒ受体 ~淋巴细胞 ~ „×2t °• ‘„ ~ • ×2°≤ •
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsz2sxvt2sw
≈收稿日期  usst2tu2t|
≈基金项目  安徽省自然基金资助项目k|{wtwtuzl
≈通讯作者  电话 }ksxxtlu{utssy2us{v ∞2°¤¬¯} ⁄¤¬°¬±¯¬¤²ƒ
ut¦±q¦²°
血管紧张素 µk„±ªµl是肾素2血管紧张素系统
k• „≥l中主要活性肽 o淋巴细胞是免疫系统基本的
功能单位 o已有研究表明高血压存在免疫功能的紊
乱 o且 „±ªµ对淋巴细胞参与的免疫反应有调节作
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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∏¯¼ oussu
用 o并可影响细胞因子的产生和释放≈t ou  ∀二者间
在高血压病的神经免疫调节异常时有何联系 ‚中药
的整体调节作用是否与此有关 ‚迄今为止尚未见相
关资料报道 ∀滋水降火饮是中医治疗高血压经验
方 o临床疗效显著 o我们已有实验证明其降压效应与
神经免疫调节作用密切相关≈v  ∀本实验通过观察二
肾一夹肾性高血压大鼠 kuŽt≤2• ‹ • l淋巴细胞
„±ªŒŒ受体k„×2tl°• ‘„表达的改变及中药的干预
作用 o探讨高血压神经免疫调节的内在机制和滋水
降火饮作用的可能环节 ∀
1 材料和方法
1 q1 药物 滋水降火饮由生地 tx ª!熟地 tx ª!石
决明 vs ª!钩藤 us ª!牡蛎 vs ª!何首乌 us ª配伍组
成 o由安徽中医学院附属医院中药房提供 o加水煎煮
t «o滤液置恒温水浴浓缩为每毫升药液含复方生药
u ow ªo置冰箱备用 ∀马来酸依那普利片 }蒲东药业公
司生产k批号 ||ttsvl o配成 s qux h水溶液置冰箱备
用 ∀
1 q2 uŽt≤2• ‹ • 模型的复制≈w  健康 • ¬¶·¤µ雄性
大鼠k由安徽医科大学实验动物中心提供l o体重
txs ∗ uss ªo用戊巴比妥钠kw °ª#®ªp tl腹腔注射麻
醉后 o沿腹正中线打开腹腔 o经腹膜后近主动脉侧分
离左肾动脉 o用 s qu °°银夹狭窄左肾动脉 o右肾不
触及 o术后缝合腹腔并注射青霉素 tsw ˜r只 o常规饲
养 o瓶装饮水 o以此建立 uŽt≤2• ‹ • 模型 ∀
1 q3 动物与分组 待造模 t 周后 o以尾动脉收缩压
较术前升高 v ®°¤kuu qy °°‹ªl以上并超过 t{ ®°¤
ktvx °°‹ªl者为模型复制成功 ∀按血压随机分为
模型对照组 !滋水降火饮 ws ous ª#®ªp t组k分别相当
成人临床用药等效量的 ts 倍 !x 倍l !依那普利阳性
对照组 o另设假手术组k按造模大鼠同样的方法麻醉
后打开腹腔 o分离左肾动脉 o但不予银夹狭窄即关闭
腹腔l和正常对照组 o各组大鼠 ts 只 ∀在造模后第
w周 o各组大鼠开始用药 o每天灌胃给药 t 次 o正常
组 !假手术组及模型组均给予同容积生理盐水溶液 ∀
连续用药 y 周k造模后 ts 周l o停止喂食半日 o次日
晨颈总动脉取血作以下指标的检测 ∀
1 q4 • ×2°≤ • 检测 „×2t °• ‘„的表达
1 q4 q1 大鼠淋巴细胞总 • ‘„的提取 常规分离获
取各大鼠外周血淋巴细胞 o按总 • ‘„ 提取试剂盒
k上海华美生物技术工程公司l说明书要求提取淋巴
细胞总 • ‘„ ∀用紫外分光光度计进行 • ‘„定量kt
’⁄uys € ws Λª#°p tl o用 ’⁄uys与 ’⁄u{s的值之比确
定 • ‘„纯度 ∀
1 q4 q2 引物 根据文献发表的 „×2t• ‘„ 序列用
计算机软件设计 o由中国科学院上海生化所合成 ∀
上游引物 } x . 2× ≤≤ „≤≤≤ „„× Š„„Š× ≤ × ≤ Š≤≤ ×2
v. ~下游引物 }x2Š≤ „≤ „„× ≤ Š≤≤ „× „„× × „× ≤≤2
v ∀
1 q4 q3 • ×2°≤ • 反应 按 • ×2°≤ • 试剂盒k上海华
美生物技术工程公司提供l说明书 o取总 • ‘„ u ˏ
加入逆转录酶进行逆转录 o补加 °≤ • 反应成分 o在
°≤ • 扩增仪k˜‘’ µ ׫¨ µ°² ¦¼¦¯ µ¨o德国 …¬²©∏ª¨ ¤
i µ¨ª公司产l进行扩增 o°≤ • 产物用 t qx h琼脂糖
凝胶电泳 ∀
1 q4 q4 °≤ • 产物的检测 各 °≤ • 产物及 ¤µ®¨ µ
k¤°¥§¤ ⁄‘„r∞¦²• Œo ‹¬±§¶酶切lts ˏ上样于
t qx h琼脂糖凝胶k含 s qxΛª#°p t的溴化乙锭l o电
泳完毕后 o于紫外灯下拍照 o并切下 °≤ • 产物条带
凝胶 oxs ε 烤箱烘干 o液闪计数 o测定 ¦³° ∀
2 实验结果
2 q1 总 • ‘„的提取及鉴定 • ‘„经提取后 o所有
样品 ’⁄uys与 ’⁄u{s的比值均在 t q| ∗ u qv之间 ∀
2 q2 • ×2°≤ • 产物的合成和鉴定 图 t示淋巴细
胞总 • ‘„经 • ×2°≤ • 后的电泳图 o与 ¤µ®¨ µ比较 o
°≤ • 产物片段长度与预期结果kvw{¥³l一致 ∀各组
每一样品 • ×2°≤ • 产物电泳均可在 vw{¥³处有清晰
的扩增条带 o说明 „×2t °• ‘„ 扩增的结果是可靠
的 ∀
图 t „×2t °• ‘„的 • ×2°≤ • 产物电泳图
t q为模型组 u q为治疗组
2 q3 „×2t °• ‘„的表达 实验结果见表 t ∀可见
模型对照组的 „×2t °• ‘„ 表达明显增强 o滋水降
火饮组kus ows ª#®ªp tl对此有抑制作用 o而依那普
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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利组与模型组间未见显著差异 ∀
表 t 各组大鼠淋巴细胞 „×2t °• ‘„的表达k ξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª#®ªp t
„×2t °• ‘„相对含量
r ≅ tsu ¦³°
空白对照组 tww qs ? uv qx
假手术组 txw qx ? t{ qz
模型对照组 vx{ qy ? wz qxtl
滋水降火饮组 us t|v qs ? v{ qzvl
ws usy qx ? wu qzul
依那普利组 s qsux vvy qs ? vs qx
注 }与假手术组比较 tl Π s .st 与模型对照组比较 u) Π
 s .sx v) Π s qst
3 讨论
目前 o受体学说已为生命科学各学科所接受 o并
成为共同的理论基础 o是分子生物学的一个重要领
域 ∀尤其是近年来 o围绕中药发挥作用的受体基础 o
业已开展了大量的研究工作 o并已取得了较大的进
展≈x  o„±ªµ是 • „≥中活性最强的物质和主要活性
肽 o也是高血压病治疗的特异性靶点 o干扰其合成 !
促进其分解以及阻断其受体均可产生降血压作用 o
并能逆转高血压所致的心肌肥厚 ∀由于 „±ªµ的产
生除了经典的途径外 o尚可通过非 „≤∞依赖性途
径 o即糜蛋白旁路途径产生 o这条途经不依赖 „≤∞o
单纯用 „≤∞Œ不能完全阻断 „±ªµ的产生 o因此在
„±ªµ受体环节进行干预更具有一定的优势 ∀现已
发现 o„±ªµ受体有 w 种亚型 o即 „×t o„×u o„×v和
„×w≈y oz  o而 „±ªµ在成年心血管组织的大多数生理
效应是由 „×t介导的 ∀
本研究发现与正常大鼠比 ouŽt≤2• ‹ • 淋巴细
胞 „×t表达显著升高 o已知 „±ªµ对细胞因子的产
生有调节作用 o因此 o淋巴细胞 „×t的超表达 o可能
是高血压病神经免疫调节异常的内在原因之一 ∀滋
水降火饮kus ows ª#®ªp tl能降低 „×t的超表达 o则
是该复方在神经免疫学层次发挥整体调节作用的机
理之一 o而依那普利不能改变 „×t受体的表达 o这
可能是因为依那普利是通过减少 „±ªµ合成 o抑制
缓激肽降解等因素来发挥作用 o而不是直接作用于
受体 o这一结果与 ¤®¬±²等在研究 „×t受体在自
发性高血压大鼠心肌组织中表达得出的结论相
似≈{  o这也可部分解释依那普利降压作用显著 o而对
免疫机制的异常无明显影响 ~而滋水降火饮治疗高
血压病所发挥的神经免疫调节机制 o可能在于降低
„×t的超表达 ∀
≈参考文献 
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≈v  廖圣宝 o刘光伟 o张雪冰 o等 q滋水降火饮对肾性高血压大鼠血
清细胞因子水平的影响 q中医药学报 ousst ou|kvl }yt q
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≈x  凌昌全 q中医药与受体关系的研究进展 q中医杂志 ot||y ovz
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ŒŒ ×¼³¨ uk„×ul • ¦¨¨³·²µ„±·¤ª²±¬½¨ ¶·«¨ Šµ²º·« ∞©©¨ ¦·¶²©·«¨
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Εφφεχτ οφ Ζισηυιϕιανγηυοψιν ον Εξπρεσσιον οφ Λψµ πηοχψτε ΑνγΙΙ Ρεχεπτορ
(ΑΤ2t) µ Ρ ΝΑ οφ Εξπεριµενταλ Ηψπερτενσιον Ρατσ
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬¨³¯²µ¨ ·«¨ ¬°°∏±²p ±¨ ∏µ²¯²ª¬¦µ¨ª∏¯¤·¬²± ²©«¼³¨µ·¨±¶¬²± ¤±§¬·¶¬±«¨ µ¨±·¯¤º ¤¶º¨¯¯¤¶·«¨ ° ¦¨«2
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·º²2®¬§±¨ ¼2²±¨ 2¦¯¤°³µ¨±¤¯ «¼³¨µ·¨±¶¬²±µ¤·¯¼°³«²¦¼·¨ ¦¨¯¯ ¥¼ ° ¤¨±¶²© • ×2°≤ • q Ρεσυλτ : × «¨ ¯¨ √¨¯ ²© „×2t °• ‘„ ¬± ¼¯°³«²¦¼·¨
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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º¤¶«¬ª«¨µ¬± ªµ²∏³²©uŽt≤2• ‹ • ·«¤±·«¤·¬± ±²µ°²¯ ªµ²∏³q≥‹ ≠ kusªr®ªowsªr®ªl «¤§µ¨ª∏¯¤·¬±ª ©¨©¨ ¦·²±·«¬¶qΧονχλυτιον :
⁄¨ ³µ¨¶¶¬±ª ¬¨¦¨¶¶¬√¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ¼¯°³«²¦¼·¨ „×2t °• ‘„ °¤¼ ¥¨ ²±¨ ²©·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶°¶º«¨ µ¨ ≥‹ ≠ ¬¨¨ µ·¬°°∏±²µ¨ª∏¯¤·¬²± ¤¦2
·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] ¬¶«∏¬­¬¤±ª«∏²¼¬±k≥‹ ≠l ~ „±ªŒŒ~ ¼¯°³«²¦¼·¨ ~ „×2t °• ‘„ ~ • ×2°≤ •
≈责任编辑 方文贤 
实验性心肌缺血时内源性 ∞× o≤ Š• °和 ‘’
水平的变化及心舒平的调节作用
刘晓岩t o王银叶t o陈世忠u o李长龄t
kt q北京大学 药学院药理系 o北京 tsss{v ~u q北京大学 药学院天然药物学系 o北京 tsss{vl
≈摘要  目的 }观察异丙肾上腺素造成大鼠心肌缺血模型心肌内 ∞× o≤ Š• °含量和血清 ‘’ 水平的变化及中
药心舒平对心肌缺血的影响和对这些血管活性物质的调节 ∀方法 }测定异丙肾上腺素引起心肌坏死大鼠血清中心
肌酶 !‘’ 水平和心肌组织中 ∞× 及 ≤ Š• °含量 ~或结扎冠状动脉造成大鼠心肌缺血 o观察手术后不同时间心电图
变化和心肌梗死范围 ∀结果 }异丙肾模型动物心肌中 ∞× 含量明显升高 o≤ Š• °含量变化不明显 ~血浆中 ‘’ 浓度
亦未见明显改变 ∀心舒平组动物血清的 ‘’ 浓度明显升高 ~心肌中 ∞× 和 ≤ Š• °含量与模型组相比无显著差异 ∀
心舒平可显著降低异丙肾模型的血清 ⁄‹ 和 ≤Ž水平kk Π s qsx 或 Π s qstl ~降低冠脉结扎大鼠升高的 ≥2× 段
k Π s qsx 或 Π s qstl o使心肌梗死范围减小 k Π s qsx 或 Π s qstl ∀结论 }内源性 ∞× 可能参与异丙肾上腺素
引起的大鼠心肌缺血 ~心舒平对不同的心肌缺血模型均有明显的保护作用 o其可能的机制之一是促进血管内皮释
放 ‘’ ∀
≈关键词  心肌缺血 ~内皮素 ~降钙素基因相关肽 ~血管内皮舒张因子 ~心舒平
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsz2sxvw2sw
因血流动力学改变 o心肌耗氧量增加 o引起冠
脉血管痉挛 ~动脉粥样硬化引起冠脉血管重构和冠
脉狭窄等多种因素造成心肌组织缺血 !损伤或坏死 o
常用的心肌缺血动物模型有冠状动脉堵塞 o或异丙
肾上腺素引起的心肌缺血坏死 o前者可反映冠状动
脉狭窄造成部分心肌缺血缺氧损伤 o后者主要反映
因心肌耗氧量过度增加引起的组织坏死 ∀内皮素
k∞×l为一强的缩血管物质 ~内皮舒张因子k‘’l和
降钙素基因相关肽k≤ Š• °l为扩血管物质 o它们与心
肌缺血关系的研究有不少报道 o但结论 ) ) ) 特别是
≤ Š• °与心肌缺血的关系的结论尚不明了≈t ∗ w  ∀本
文旨在探讨这些内源性活性物质是否参与异丙肾上
腺素引起的心肌缺血坏死 o并观察中药心舒平的抗
心肌缺血作用和初步探讨其作用机制 ∀
≈收稿日期  usst2tu2tu
≈通讯作者  电话 }kstslyus|uyxu ∞2°¤¬¯}º¤±ª¼¬±¼¨ƒ ¥­°∏q
§¨∏q¦±
1 材料
1 q1 药品及试剂 盐酸异丙肾上腺素注射液 }每 u
毫升注射剂内含 t °ª盐酸肾上腺素 o上海禾丰制药
有限公司生产 o批号 ||sxsu ∀心舒平胶囊原料k简称
心舒平l }为棕色固体 o由北京大学药学院中药室提
供 o批号 ||szty o其中丹参素含量为 s qv h ~总皂苷
含量为 w qv h o临用时以蒸馏水配制成含生药 t ou ow
ª#®ªp t的药液 ∀地奥心血康k简称心血康l }市售胶
囊 o成都地奥制药集团有限公司生产 o批号
sssussv o临用时以蒸馏水配制成甾体总皂苷 v °ª#
°p t ∀
1 q2 动物 雄性 ≥⁄大鼠k二级l o体重 txs ∗ t{s ªo
购自北京大学实验动物科学部 o合格证号 }京动字第
st2vsxx ∀
1 q3 实验仪器  ≥2u…型二道生理纪录仪 o成都
仪器厂产品 ∀ƒ×2ywy免疫计数器 o北京核仪器厂生
产 ∀ ˜ ∂ |tss型紫外2可见分光光度计 o朝阳华洋光
#wvx#
第 uz卷第 z期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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