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Studies on TLC fingerprint of flavonoids in rhizome of Polygonatum odoratum

玉竹中黄酮类成分的薄层色谱指纹图谱研究



全 文 :w . Αγριχυλτυραλ Υνιϖερσιτψ οφ Ηεβει Προϖινχε , Βαοδινγ sztsst , Χηινα ;
x . Αρχηιτεχτυραλ ανδ Χιϖιλ Ενγινεερινγ Θυαλιτψ Συπερϖισιον Στατιον οφ Βαοδινγ Χιτψ, Βαοδινγ sztsxt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε :ײ ¶·∏§¼·«¨ ¶«¤§¨2 ±¨§∏µ¤±¦¨ ³µ²³¨µ·¼ ²© Γλψχψρρηιζα υραλενσισ ¤±§³µ²√¬§¨ µ¤·¬²±¤¯¨©²µ·«¨ ³µ¤¦·¬¦¨ ²©¬±·¨µ2
¦µ²³³¬±ª Γ . υραλενσισ º¬·«·µ¨ ¶¨q Μετηοδ : …¯¤¦®¶«¤§¬±ª±¨ ·¶º µ¨¨ ∏¶¨§·²³µ²√¬§¨ ©¬√¨§¬©©¨µ¨±·¨ ±√¬µ²±° ±¨·¶²© ¬¯ª«·¬±·¨±¶¬·¬¨¶k¯¬ª«·³¨ ±¨ 2
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σιον : Γ . υραλενσι󬶤 ¬¯ª«·2©¤√²µ¨§³¯¤±·q׫¨ ªµ²º·«¬±§¬¦¨¶¶∏¦«¤¶³¯¤±·«¨¬ª«·o¶·¨° §¬¤° ·¨¨µo¯¨ ¤√ ¶¨±∏°¥¨µoµ²²·§¬¤° ·¨¨µo¥¬²°¤¶¶o
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[ Κεψ ωορδσ] Γλψχψρρηιζα υραλενσισ; ¶«¤§¨2 ±¨§∏µ¤±¦¨ ~¬±·¨µ¦µ²³³¬±ª ° §¨¬¦¬±¤¯ ³¯¤±·¶º¬·«·µ¨ ¶¨
≈责任编辑 王康正 
≈收稿日期  ussw2su2ty
≈通讯作者  3陈四保 oר¯ }kszxxluyzvztz| o∞2°¤¬¯}¥¦¶¥¦«¨ ± ƒ
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玉竹中黄酮类成分的薄层色谱指纹图谱研究
杨先国t ou o陈四保t 3 o陈士林t o杨大坚t o刘塔斯u
kt1 香港理工大学 应用生物与化学技术系 o香港 红 ~
u1 湖南中医学院 o湖南 长沙 wtssszl
≈摘要  目的 }对玉竹的黄酮类成分进行薄层色谱指纹图谱研究 o以期解决玉竹的专属性鉴别 o并为其质量控
制提供依据 ∀方法 }采用薄层色谱法 o甲苯2醋酸乙酯2甲酸kxΒwΒtl为展开剂 o氨水熏蒸显色 o用 Κ• € xss ±° oΚ≥ € u{s
±°双波长扫描 ∀结果 }建立了由 ts个特征荧光斑点构成的玉竹黄酮类成分的薄层指纹图谱 ∀结论 }该方法可以有
效地鉴别玉竹 o并评价其质量 ∀
≈关键词  玉竹 ~薄层色谱 ~指纹图谱
≈中图分类号  • u{w1t ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlsu2stsw2sv
中药玉竹为百合科植物玉竹 Πολψγονατυµ οδορα2
τυµ k¬¯¯1l⁄µ∏¦¨ 的干燥根茎 o性平 !味甘 o具养阴润
燥 o生津止渴之功效 ∀用于肺胃阴伤 o燥热咳嗽 o
咽干口渴 o内热消渴≈t  ∀药理学研究表明玉竹具有
强心 !扩张血管 !降血压 !降血糖 !降血脂和加强免疫
功能的作用≈u2w  ∀玉竹根茎中主要含有甾体皂苷 !多
糖 !黄酮及其糖苷以及多种蒽醌类化合物≈u ox oy  ∀
对于玉竹药材质量的控制 o主要是利用薄层2分光光
度法测定玉竹中甾体皂苷成分含量 ~分光光度法测
定其多糖含量≈u  o5中国药典6usss年版规定玉竹的
多糖含量以葡萄糖k≤y≠tu’yl计不低于 y1s h ∀这些
分析方法都是控制玉竹某类总含量 o一方面不能全
面反映药材的质量 o另一方面这些分析方法受到的
干扰因素比较多 o选择性 !专属性 !灵敏度 !重复性和
准确度差 ∀薄层色谱指纹图谱应用于中药的质量控
制 o可以综合地 !直观地反映药材的质量≈z  ∀薄层色
谱图色彩鲜艳 o便于鉴别 ~采用薄层扫描法 o将各成
分斑点转换成不同的色谱峰 o在薄层扫描图上显示
出来 o通过评价不同样品中各色谱峰的相对比移值 !
峰高 !峰面积及峰面积之间的相对比值等的相对稳
定来达到指纹图谱对中药质量的总体控制 ∀本研究
选定玉竹中黄酮类化合物为考察对象 o利用薄层色
谱方法 o对湖南邵阳玉竹基地所产的 ts批玉竹药
材 o进行了黄酮类化合物指纹图谱的研究 ∀为控制
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第 vs卷第 u期
ussx年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤±∏¤µ¼oussx
其内在质量提供科学依据 ∀
1 仪器与材料
薄层色谱摄像仪k≤¤°¤ªµ¨³µ²¶·µ¤µvl ~半自动点
样仪 ≤¤°¤ª ¬¯±²°¤·xk瑞士 ≤„„Š公司l ~薄层色谱
扫描仪 ≤¤°¤ª×≤ ¶¦¤±±¨ µvk瑞士 ≤„„Š公司l ~硅
胶 Š预制板 ts ¦° ≅ us ¦° k德国  µ¨¦®公司l ~聚酰
胺ktw ∗ vs目l ~薄膜旋转蒸发仪 ¤¥²µ²·¤wsst ∀
所用试剂均为分析纯 ∀ts批药材样品来源于
湖南邵阳玉竹基地 ∀
2 试验方法与结果
211 供试品溶液的制备
取粉碎过 ws目筛的药材粉末 v ªo加 zs h乙醇
vs °o超声处理 vs °¬±o过滤 o滤渣重复提取 t次 o
滤液合并 o减压回收乙醇 ∀残渣用水溶解 o醋酸乙酯
萃取 u次 o每次 us °o萃取液蒸干 o用水溶解 o上于
处理好的聚酰胺柱 o先用蒸馏水洗至无色 o再用
zs h乙醇 xs °冲洗 o洗脱液蒸干 o甲醇溶解 o作为
供试品溶液 ∀
212 薄层色谱实验条件
取上述各样品的供试品溶液 tx ˏo用半自动点
样仪带状点样于硅胶 Š预制板上 o放入双槽展开缸
中 o饱和 ts °¬±o展开 o展距 { ¦°∀展开剂甲苯2醋酸
乙酯2甲酸 kxΒwΒtl ∀挥干溶剂 o用氨水熏 x °¬±o在
紫外光 vyx ±°下观察 o并成像 ∀通过对各斑点的最
大吸收波长的扫描测定 o选定测定波长为 u{s ±° o
参比波长为 xss ±° o狭缝 w1ss °° ≅ s1us °° ~光源
⁄u灯 o扫描速度 us °°#¶pt ∀
213 方法学考察
21311 精密度试验 取供试品溶液k批号 tl o在同
一薄层板上连续点样 x次 o以 y号峰为参照 o测得各
共有峰相对峰面积的 • ≥⁄小于 x h o表明精密度良
好 o符合指纹图谱的要求 ∀
21312 重复性试验 取供试品k批号 tlx份 o按 211
项下方法制备供试品溶液 o分别点样 !展开 o以 y号
峰为参照 o测得各共有峰相对峰面积的 • ≥⁄小于
x h o表明其重复性较好 o符合指纹图谱的要求 ∀
21313 稳定性试验 取供试品溶液k批号 tl o点于
薄层板上 o展开 o晾干 o每隔半小时测定其积分值 o连
续测 y次 o峰面积的 • ≥⁄小于 x h ∀结果表明斑点
在 u1x «内基本稳定 ∀
214 结果
21411 得到 ts批样品在同一薄层板上同时平行分
析的薄层色谱荧光图像及扫描轮廓图谱k图 t ∗ vl ∀
21412 黄酮类成分指纹图谱的建立和识别 玉竹
黄酮类成分的薄层色谱图像 o以 vyx ±°下的荧光色
谱信息最丰富 o可以明显观察到 ts个荧光条斑 o依
次为 t号k蓝白色l ou号k黄绿色l ov号k黄绿色l ow
号k黄绿色 o弱l ox号k灰蓝色l oy号k黄绿色 o弱l oz
号k蓝色l o{ 号k蓝色l o| 号k蓝色l ots 号k蓝色l ∀
扫描图谱中的特征峰与荧光条带相对应 ou号与 v
号样品中的条带 u与条带 v o条带 v与条带 w之间各
有 u个小峰 o可能是与背景颜色太深有关 ∀
图 t ts批玉竹样品薄层色谱图
图 u ts批玉竹样品薄层色谱扫描轮廓图
图 v 玉竹样品薄层色谱扫描轮廓图
共有峰的确定 }在 ts批样品的指纹图谱中 o其
•©值及色谱峰较稳定的峰有 ts个 o确定玉竹共有
峰为 tks1svxl ouks1ttl ovks1uxl owks1vxl oxks1v{l o
yks1wyl ozks1xvl o{ks1ywl o|ks1ztl otsks1|vl ∀用
此指标来考察玉竹的质量 ∀通过对 v块薄层板上各
共有斑点的 •©值进行分析 o结果 • ≥⁄ 均小于
v1x h ∀说明在不同板之间 •©值变异不大 ∀
21413 指纹图谱的评价 以上 ts个共有峰构成了
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第 vs卷第 u期
ussx年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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玉竹薄层指纹图谱的基本骨架 o其中 t号峰是玉竹
黄酮的主要成分 o各批药材都含有 o而且含量变异较
少 ∀因此 t号峰应该作为玉竹鉴定的特征性成分 o
但是作为不同批次药材质量比较没有特征性意义 ∀
u ov ow ox o{ o|号峰构成图谱的指纹鉴定特征 o不同来
源和批次样品的药材质量的差异 o可以从这几个峰
的峰强度k峰高 !峰面积 !斑点颜色深度l得到反映 ∀
u ov o|号样品中这几个斑点深度相似 o比较深 o说明
这 v批样品相似性较大 o品质差异小 ~w ox oy oz o{号
样品相似性较大 o斑点深度略浅 ~t ots号样品比较
相似 o以上斑点极浅 o质量与其他几批样品有一定的
差异 ∀
3 讨论
311 不同样品处理方法的比较 选择同一批药材 }
≠样品直接用醋酸乙酯超声提取 o浓缩 ~ zs h乙醇
超声提取 o过聚酰胺柱 ozs h乙醇洗脱 o蒸干 o残渣用
甲醇溶解 ~≈ 用甲醇超声提取 ~…zs h 乙醇超声提
取 o蒸干后水溶解 o醋酸乙酯萃取 o再过聚酰胺柱 o
zs h乙醇洗脱 o蒸干 o残渣用甲醇溶解 ∀观察上述 w
份样品所得指纹图谱可见 o前 v种方法所得图谱中
的主强峰基本一致 o但杂质略多 o直接增加扫描时的
背景吸收 ∀因此选用第 w种方法 o虽然方法稍微复
杂 o但扫描效果较好 ∀
312 不同显色方法的比较 三氯化铝乙醇试液为
常用黄酮类化合物显色剂 o但对玉竹中黄酮类化合
物 o硅胶板上的荧光很弱 o不适用 o改用氨水薰蒸显
色 o结果斑点更加清晰 o而且显色的条带多 o因此选
用氨水作为显色剂 ∀
313 展开系统的比较 比较 v种展开系统 o甲苯2
醋酸乙酯2水kxΒwΒtl o氯仿2甲醇ktssΒtl o甲苯2醋酸
乙酯2甲酸kxΒwΒtl ∀结果以黄酮类常用的第 v种展
开系统展开后 o条带展开清晰 o信息量较丰富 ∀
314 扫描波长的确定 对不同斑点进行最大吸收
波长的扫描 o结果表明 t ov ow oy oz o{ o| ots号斑点在
u{s ±°处有最大吸收 ou ox号斑点虽然在该波长不
是最大吸收 o但也有较强的吸收 o因此扫描波长选用
u{s ±° ~所有的斑点在 xss ±°处没有吸收 ∀
315 该指纹图谱不仅能反映玉竹的特征性成分 o也
能反映不同来源药材之间的差异 o可以用于玉竹药
材的质量控制 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 1 一部 1usss1yw1
≈u  肖培根 o李大鹏 o杨世林 1 新编中药志 1 第 t卷 1 北京 }化学工
业出版社 oussu1uww1
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≈w  肖锦松 o崔风军 o宁廷选 o等 1 玉竹 o菟丝子醇提物对烧伤小鼠
免疫功能的影响 1中国中药杂志 ot||s otx k|l }xxz1
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Ψακυγακυ Ζασσηι ot|zy o|y ktsl }tt{s1
≈y  林厚文 o韩公羽 o廖时萱 1 中药玉竹有效成分研究 1 药学学报 o
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≈z  谢培山 1 中药制剂色谱指纹图谱k图像l鉴别 1 中成药 ousss ouu
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u1 Ηυναν Χολλεγε οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Χηανγσηα wtsssz , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ·«¬± ¤¯¼¨ µ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦k׏≤l ©¬±ª¨µ³µ¬±·²©©¯¤√²±²¬§¦²±¶·¬·∏¨±·¶©µ²° Πολψγονατυµ οδορα2
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