全 文 ：#药理#
寒凉和温热药对大鼠脑 !垂体和肾上腺内
x2羟色胺及去甲肾上腺素神经元和纤维的影响 3
李良 刘国贞 k首都医科大学病理解剖学教研室 北京 tsssxwl
梁月华 k北京医科大学中西医结合研究室 北京 tsss{vl
摘要 目的 }观察寒凉及温热药对大鼠脑及肾上腺内 x2× 及 ∞神经元以及垂体内神经纤维的影
响 ∀方法 }采用免疫组织化学的方法进行形态学观察 o荧光测定法测量脑内两种递质的变化 ∀结果 }寒
药组 x2× 细胞着色加深 o热药组着色变线 ∀ ∞细胞的改变与上述相反 ∀结论 }寒凉药使脑内 x2× 含
量增加 o∞含量减少 ∀而温热药使 ∞含量增加 ox2× 含量减少 ∀形态学改变与机能变化一致 ∀
关键词 x2× 神经细胞 × 神经细胞 寒凉 !温热中药 免疫组化
中枢内含有多种神经递质 o而单胺类递质
与内分泌 o免疫机能更为密切 ∀大量中医中药
的研究证明 o在证的形成中以及中药的治疗作
用中神经系统的单胺类递质的机能活动均有改
变≈t ou ∀而机能变化与结构基础有密切关系 o中
药对中枢 !垂体 !肾上腺内单胺神经元及纤维的
形态学的影响研究尚未见报道 o本工作侧重用
免疫组织化学方法来观察丘脑下部 o脑干及肾
上腺内 x2羟色氨kx2×l o去甲肾上腺素k∞l神
经元及垂体中神经纤维的形态改变 ∀
1 材料与方法
111 动物的准备 正常 • ¬¶·¤µ雌性大鼠 o体重
在 uss ∗ uxsªo在正常日光周期 o室温 ty ∗ us ε
喂养 o饮食不限 ∀共分 v组 o每组 us只kx只用
于形态学研究 otx只用于递质测定l ∀对照组
喂生理盐水 ~寒药组 }知母 !石膏方 ok简称知石l
按 wΒv比例配方 ~热药组 }附子 !干姜方k简称附
干l按 tΒt比例 ∀以上复方制成 tss h水煎剂 o
每次喂药 w°¯ k约含 wª生药l喂药 v周 ∀
112 切片的制备 大鼠用乙醚麻醉 o经心脏灌
注固定k固定液 }ts h多聚甲醛 os qt h戊二醛 o
s qv h 苦味酸 os qt°²¯r磷酸缓冲液配成
uxs°¯ lt«后 o分别取脑 !垂体及肾上腺 ∀组织
放在后固定液内k上述固定液中去掉戊二醛lv
∗ w«后 o置换入含 vs h蔗糖的磷酸缓冲液 ow ε
过夜 ∀将脑自视交叉向皮层垂直切下去掉前
脑 o自丘脑下部后缘向皮层垂直切开 o去掉部分
大脑皮层 o此为间脑区k含丘脑 o丘脑下部l ∀余
下部分去掉脊髓 !小脑 o则为脑干k包括四叠体 !
桥脑 !延髓l ∀间脑区 !脑干均作冠状切片 ∀垂
体和肾上腺均作水平切片 ∀恒冷箱连续切片 o
片厚 wsΛ° o准备做免疫组化染色 ∀
113 免疫组织化学染色 使用美国 ≠ ∞⁄公
司生产的 ≥°× 试剂盒 ∀切片经 v h uu孵育 o
去除内源性过氧化物酶活性 o用 x h 正常羊血
清封闭 o去掉外源性过氧化物酶 ∀第一抗体用
x2×ktΒvssl和 ×ktΒxssl单克隆抗体 ok抗体
均由美国 ≠ ∞⁄公司提供 o利用酪氨酸羟化
酶k×l反映 ∞神经元的分布l ow ε 振荡孵育
过夜 ∀生物素化第二抗体ktΒvssl ovz ε 孵育
t«o辣根酶标记链霉卵白素ktΒvssl ovz ε 孵育
t«o最后 ⁄
显色 ∀
114 定量分析 用 ¨¬·½ °∂2≤
型纤维
分光光度计测定神经元细胞体 ⁄值 ∀
115 细胞计数 计数弓状核及室旁核处 ×
阳性细胞总数 o每例取 u张切片 o共 ts张 ∀
116 脑神经递质测定 大鼠经断头后立即取
脑 o置 p us ε 冰箱内保存 ∀将脑置于冰盒上 o分
3 国家自然科学基金资助 ²qv|vzs{yu
#syv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期
区方法与上述同 o分别称重 o按 tss°ª用 w°¯ 酸
性正丁醇的比例磨成匀浆提取 o离心 x°¬±后转
入 s qt°²¯r≤¯内 o分别经邻苯二甲醛和碘溶
液氧化后形成荧光 o用荧光分光光度计测定 ox2
× 波长为 vysrwzs ±° o∞ 波长为 v|xrwzx
±° o方法参考文献≈v ∀
2 实验结果
211 脑内变化
21111 形态变化
2111111 52× 细胞 对照组 }脑干中的缝际
核处可见 x2× 神经元的分布 ∀细胞较大 o多角
形 o可见轴突 o细胞核处因无免疫反应而呈圆形
空白区 ∀胞浆内可见 x2× 棕色反应颗粒 o其它
区未见 x2× 神经细胞 ∀给药组 }寒药组脑干 x2
×细胞着色比同区对照组深 o热药组比对照组
稍浅 o用纤维分光光度计定量测定 o结果见表 t
及图 t ∀采用 τ检验法 o给药组与对照组相比有
显著差异 o并有统计学意义 ∀
表 t 脑神经元染色定量分析k⁄值l
× x2×
对照组 s q{st ? s qsvy s qzvu ? s qszv
热药组 t qvuu ? s qs|zul s qwzv ? s qsx{ul
寒药组 s qxxs ? s qttzul s q|{z ? s qsvuul
注 }ξ ? σ 与对照组比 t) Π s .sx u) Π s qstk下同l
2111112 ∞细胞 对照组 }在膈区 o丘脑下部
的室旁核 !弓状核 !脑干的桥脑部位的背侧区和
腹外侧区均可见 ∞神经元的分布 o细胞体积
较大 o多角形 o可见轴突 o胞浆内有 × 棕色反
应颗粒 ∀给药组 }在上述区域内可见 × 阳性
细胞 ∀热药组细胞着色较深 o寒药组细胞着色
较浅 ∀选弓状核及室旁核区进行定量测定 o结
果见表 t及图 u ∀
图 t 寒药组脑干中 x2× 阳性细胞
图 u 热药组弓状核处 ∞阳性细胞
在弓状核及室旁核区内计数 × 阳性细胞
总数 }对照组 tvus个 o热药组 tzw{个 o寒药组
{zs个 o经 τ检验 o与对照组相比 o有显著差异 ∀
21112 x2× o∞递质含量变化 经用荧光分
光光度计测定脑内各区递质含量 o结果见表 u ∀
表 u 脑内 ∞ ox2× 递质含量 Λªrª
对照组 热药组 寒药组
脑干 s qwvy ? s qsty s qwyu ? s qsvt s qv|y ? s qsu{
∞ 间脑区 s qwus ? s qsuw s qxu| ? s qsu{vl s qwxy ? s qsutvl
前脑区 s qvty ? s qsuv s qvwv ? s qstyvl s qu{x ? s qsuvvl
脑干 s qzwz ? s qsvu s qzyy ? s qst|vl s q|tt ? s qsw{vl
x× 间脑区 s qy|| ? s qst| s qy|v ? s qsuzvl s q{sx ? s qsvuvl
前脑区 s qywu ? s qsus s qyuu ? s qsuxvl s qzsy ? s qsuvvl
注 }寒药热药组间相比 vl Π s qsx
以上表明 o热药使脑内 ∞含量增多 o间脑
区更为明显 o寒凉药使全脑 x2× 含量增多 o此
结果与形态的观察是一致的 ∀
212 垂体的改变 x2× 神经纤维在垂体的中
间叶和神经叶内均有分布 o热药组 x2× 纤维着
色略浅 o寒药组较深 ∀∞神经纤维在中间叶较
多 o神经叶内也有分布 o寒药组染色略浅 o热药
组染色较深 o见图 v ∀ 图 v 热药组垂体中间叶中 ∞神经纤维
#tyv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期
213 肾上腺的改变 对照组与给药组在肾上
腺髓质内均可见 x2× 和 × 阳性细胞 o细胞
大 o圆形 o细胞核部位呈空白区 o胞浆内充满棕
褐色反应颗粒 o见图 w ∀对照组与给药组间染色
无明显差异 ∀
图 w 对照组肾上腺髓质内 ∞阳性细胞
3 讨论
x2× 细胞存在于脑干的缝际核 o在对照组
完全可以染出 o寒药组细胞染色较深 o递质测量
结果含量也增多 o表明递质合成增多 ∀热药组
细胞染色较浅 o递质测量略低 o说明合成减少 ∀
对照组丘脑下部室旁核处未能染出 x2× 神经
细胞 o因该区 x2× 含量较少 o动物受刺激后胞
体内 x2× 大量的释放入轴突内 o神经元内含量
降低 o故不易着色 ∀曾报道在动物处死前预先
注射 2色氨酸及优降宁各 uss°ªr®ªo使神经元
内 x2× 合成增多 o并抑制其降解 o因而在丘脑
下部室旁核内可染出 x2× 神经元 ∀本工作中
大鼠用寒药后脑内 x2× 含量确实增多 o根据递
质测量 o间脑区增加 s qtsyΛªrªo但因不能阻止
其降解和释放入轴突 o因此仍难染出 ∀形态变
化的研究 o其优点在于能明确定位 o但须达到一
定含量方可显出 ∀含量的测量能精确地了解对
机能的影响 o但定位不清 ∀
∞细胞 o在对照组的隔区 !丘脑下部 !室旁
核 !弓状核 !脑干等处均能染出 ∀热药组染色明
显增多 o在室旁核 !弓状核的神经元用纤维分光
光度计测量以及计数方法证明 o热药使该区阳
性细胞数增多 o染色加深 o递质含量测定在间脑
区 !前脑区明显高于寒药组 o寒药组上述指标均
降低 o因此热药提高丘脑下部 ∞含量更加明
确 ∀
对照组垂体中间叶和神经叶有 x2× 及 ∞
神经纤维分布 o此结果与已往报道一致 ∀热药
组 ∞神经纤维染色加深 o寒凉药组 ∞纤维着
色较浅 ∀寒凉药使 x2× 纤维染色变深 o而热药
则影响不大 o这些改变与下丘脑单胺类神经元
内递质含量变化是一致的 ∀因此可以认为寒凉
和温热药影响丘脑下部 x2× o∞神经元 o并通
过神经纤维深入垂体 o直接调控垂体机能 ∀
肾上腺髓质内可见大量 ∞ox2× 细胞 o染
色深浅不易比较 ∀但曾有实验测定尿内 ∞ox2
× 含量证明 o热药可促使 ∞排出增多 o寒凉药
使其排出量减少 o而使尿内 x2× 排出量增多 o
而热药对 x2× 影响不大≈w ∀因此寒凉和温热
药对肾上腺髓质递质的影响也很明显 ∀
总之 o温热药使 ∞神经元递质合成增多 o
寒凉药使 x2× 合成增多 ∀该结果与递质含量
测定完全一致 ∀因此寒凉和温热药对单胺递质
的影响 o其形态变化和机能变化结果是完全一
致的 ∀机能与形态结合的研究 o既能精确反应
机能变化 o又能明确定位 o是个值得坚持的研究
方向 ∀
4 参考文献
t 梁月华 o谢竹番 q寒热本质的初步研究 1 中华医学杂志 o
t|z| ox|ktul }zsx
u 梁月华 o李薪萍 o任红 q寒证和热证脑 !脊髓 !内脏 ∞ !⁄ !x2
× 含量变化 q中医杂志 ot||t ou{ktul }y{
v ≤∏µª²± q ¤³¬§ ·¨«²§©²µ·«¨ ⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²© x2× ¤±§x2
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w 梁月华 o王晶 1 寒凉药与温热药对交感神经及代谢机能的
影响 1 北京医科大学学报 ot|{z ot|ktl }xw
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