全 文 ：栝楼 v个农家品种间亲缘近似
关系的 • „°⁄分析 3
王敏 黄璐琦 付桂芳
k中国中医研究院中药研究所 北京 tsszssl
摘要 目的 }对山东牛心栝楼这一新的农家品种在收购和使用上产生的争议进行初步探讨 ∀方法 }
采用 • „°⁄分子标识法对山东产仁栝楼 !糖栝楼 !牛心栝楼 v个栝楼农家品种进行亲缘关系分析 ∀结
果 }三者以牛心栝楼与仁栝楼间的遗传距离最小 o以牛心栝楼与糖栝楼间的遗传距离最大 ∀结论 }牛心
栝楼在遗传表现上更近似于仁栝楼 ∀
关键词 栝楼农家品种亲缘关系 牛心栝楼 • „°⁄
栝楼 Τριχηοσαντηεσ κιριλοωιι ¤¬¬° q是常用
中药瓜蒌 !天花粉的来源 o由于它是异花授粉植
物 o再加上长期的栽培 !选择 o产区出现了很多
植物类型 o使栝楼质量变化较大 ∀在山东主产
区 o过去主要有仁栝楼和糖栝楼两个农家品种 o
传统上认为仁栝楼质量较优 o收购价格高出糖
栝楼 u ∗ v倍 ∀近年来在调查中又发现牛心栝
楼这一新品种 o产量较高 o因其果实重者内部似
糖栝楼 o轻者似仁栝楼≈t  o常在收购时引起争
议 ∀为此 o本文拟从决定物种遗传本质 ⁄‘„ 差
异出发 o采用 • „°⁄这一分子标识方法试对上
述 v种栝楼农家品种进行亲缘关系分析 o以明
显牛心栝楼的归属 o为其合理收购和使用提供
理论依据 ∀
1 材料 !仪器 !引物和试剂
111 材料 选用栝楼的幼叶 o用硅胶快速干燥
保存 ∀具体情况见表 t ∀
表 t 材料来源 !产量和质量
编号 名称 产地
产量
®ªryy qz°u≈t 
质量
t 仁栝楼 山东长清伏牛镇 uxs ∗ vss 优
u 糖栝楼 山东长清伏牛镇 uxs ∗ vss 中
v 牛心栝楼 山东宁阳伏山镇  vss 优
112 仪器 tty{ 型电脑全自动基因扩增仪
k北京市新技术应用研究所l ~¬¦µ²2 … vyty型
高速离心机kŒ∞≤ 公司 o美国l ~˜∂2 ´型多功能
紫外透射仪k北京市新技术应用研究所l ∀
113 引物 所用引物序列见表 u o由华美生物
工程公司合成 ∀
表 u 本实验所用引物序列
引物号 序列 xχ ϖvχ
t ×≤ŠŠ≤Š„ׄŠ
u ≤„„„≤Š×≤ŠŠ
v „ŠŠŠŠ×≤×׊
w Š×Š„≤Š×„ŠŠ
x „„×≤ŠŠŠ≤׊
y ≤„ŠŠ≤≤≤××≤
z ≤„Š≤„≤≤≤„≤
{ „≤×≤„Š≤≤„≤
| ׊≤≤Š„Š≤׊
114 试剂 פ´ 酶k˜2° …¬²·¨¦«oŒ±¦˜≥„l ~琼
脂糖k°µ²° ª¨¤公司l ~§‘×°¶k°µ²° ª¨¤公司l ~
≤ׄ…k≥¬ª°¤公司l ~溴化乙锭kƒ¯ ∏®¤公司l ~其
余试剂为北京化工厂产的分析纯 ∀
2 方法
211 ⁄‘„模板的提取 取材料少许置 t qx°¯
∞³管中 o加入液氮用镊子研碎 o立即加入 xssΛ¯
保温 ys ε 的 u ≅ ≤ׄ…提取液≈≤ׄ…u h o×µ¬¶2
‹≤ k¯³‹{ qsltss°°²¯ro∞⁄ׄus°°²¯ro‘¤≤¯
tt qw°²¯ro巯基乙醇 u h  及 usΛ¯ 巯基乙
3 国家科委博士创新项目 ‘²q|yswttwus ~国家自然科学
基金资助 ‘²1v|yzssxw
#yvv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期
醇混匀 oys ε 保温 ws°¬± ~加入等体积的氯仿异
戊醇kuwΒtl抽提 o轻轻颠倒混匀 otssssµr°¬±离
心 ts°¬± o吸取上清液 o加入 trts体积的 ts h
≤ׄ…溶液 o再加入等体积氯仿2异戊醇kuw }tl
重复抽提 t次 o吸取上清液加入等体积的沉淀
缓冲液≈≤ׄ…t h o×µ¬¶2‹≤tk³‹{ qslxs°°²¯ro
∞⁄ׄ ts°°²¯ro巯基乙醇 t h   o室温下放置
vs°¬±以上 otssssµr°¬±离心 ts°¬± o小心去上
清 o分别用 zs h乙醇和无水乙醇各洗涤 t次 o弃
掉洗液 o挥干 ∀以 wsΛ¯ ×∞溶解后进行 °≤• 扩
增 ∀
212 °≤• 反应 反应体系总体积 xsΛ¯ o中引物
为 t°°²¯ro核 ⁄‘„约 txs±ªoפ´ 酶 v˜ o§‘×°¶
各 s qsx°°²¯r∀扩增程序为沸水预变性 x°¬± o
|w ε wx≥ ozu ε wx≥ ovz ε ys≥ ws个循环 o后延
伸 zu ε x°¬± ∀取 tsΛ¯ 扩增产物于 t qs h琼脂
糖凝胶上用 t ≅ ׄ∞电泳缓冲液电泳 o紫外检
测拍照 ∀
3 结果
实验选择了 |个扩增多态性好的引物对 v
个品种的 ⁄‘„ 分别进行 • „°⁄扩增 o得到清
晰 !稳定的特征条带 t{条k图略l o将迁移率相
同的带均作为同源位点处理 o得到 trs数据k有
计为 t o无计为 sl矩阵 o用 • „°⁄ 分析软件
• „°⁄¬¶·¤±¦¨ °¤¦®¤ª¨ 2∂ µ¨¶¬²± t qsw中 ⁄¬¦¨ 的方
法计算任意两个样品间的遗传距离 o结果显示
牛心栝楼更近似于仁栝楼 o二者的遗传距离ks q
wz{uytl要小于仁栝楼与糖栝楼之间的遗传距
离ks qzsssssl o其中以牛心栝楼与糖栝楼的遗
传距离ks q{wytxwl最大 ∀
4 讨论
411 本实验所用模板 ⁄‘„ 是混合个体取样 o
旨在排除个体差异≈u  ∀
412 重复上述实验 o结果稳定 o空白对照表明
本实验条件无明显污染 ∀
413 本实验结果表明牛心栝楼这一新品种在
遗传表现上更接近于仁栝楼 o这与产地将牛心
栝楼作仁栝楼收购和药用的传统做法≈t 是一致
的 o说明从物种遗传本质出发对从外部形态难
以判断的牛心栝楼的归属问题进行探索是有意
义的 o并为今后此类问题的解决提供了方法 ∀
5 参考文献
t 靳光乾 o刘善新 o杨荣志 o等 q山东栝楼农家品种调查报告 q
中国中药杂志 ot||s qtxktsl }tw
u 孟祥栋 o马红 o张卫华 q利用 • „°⁄技术对葱属品种遗传关
系的分析 q生物多样性 ot||{ oyktl }vz
致谢 调查中得到山东省药材技工学校的靳光乾
同志的帮助 ∀
t||{2sw2u{收稿
薄层扫描法测定苦参中苦参碱的含量
杨梦玉 邬国庆 周富荣 k北京市药品检验所 北京 tsssvxl
摘要 目的 }研究不同产地苦参中苦参碱及总生物碱的含量 ~比较薄层扫描及酸碱滴定两种方法的
测定结果 ∀方法 }薄层扫描法及酸碱滴定法 ∀结果 }苦参碱含量为 s qszzy h ∗ s qustt h ~总生物碱含量
为 u qwz h ∗ u q|y h ∀结论 }异地苦参中苦参碱含量相差较大 ~而总生物碱含量差异不大 ~薄层扫描法结
果准确性好 !重现性好 o所选显色剂使斑点稳定持久 ∀
关键词 苦参 苦参碱 薄层扫描法
苦参为常用中药 o系豆科槐属植物苦参
Σοπηοραφλαϖεσχενσ „¬·q的干燥根 ∀苦参内含苦
参碱 !氧化苦参碱 !槐定碱等≈t ou  ∀苦参碱具抗
肿瘤 !平喘和抑菌作用≈u ov  ∀本品以碘化铋钾试
液及 x h亚硝酸钠试液依次显色后 o斑点清晰 !
稳定性强 ∀采用薄层扫描法测定了 ts批样品
中苦参碱的含量 o并与5中国药典6酸碱滴定法
测定苦参总碱含量结果进行比较 o结果不同产
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