全 文 ：³¯¤±·¶q’³¬±¨ ¤±¤¯¼¶¬¶¬±§¬¦¤·¨§·«¨ ¬±·¨ªµ¤·¬²± ²© •¬×2⁄‘„ ¬±·«¨ ·µ¤±¶©²µ° §¨³¯¤±·¶qΧονχλυσιον : Αγροβαχ2
τεριυ µ ρηιζογενε ¦¤±¬±§∏¦¨ «¤¬µ¼ µ²²·¶©µ²° ¤∏·²·¨·µ¤³¯²¬§Œ¶¤·¬¶¬±§¬ª²·¬¦¤o¤±§·«¨ ²¥·¤¬±¨ §«¤¬µ¼ µ²²·¶¦¤±
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[ Κεψ ωορδσ] Αγροβαχτεριυ µ ρηιζογενεσ~¤∏·²·¨·µ¤³«²∏¬§ Ισατισινδιγοτιχα ~«¤¬µ¼µ²²·¶~³¯¤±·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±
≈责任编辑 王康正 
桃仁的愈伤组织诱导及成分分析
吴锦忠t o易 骏u o谢素治t o张谋铭t o蔡鸿色t
kt1 福建中医学院 药学系 o福建 福州 vxsssv ~u1 福建教育学院 生化系 o福建 福州 vxssstl
≈摘要  目的 }建立诱导桃仁愈伤组织的培养方法 ∀方法 }采用  ≥ o…x o‘¬·¶¦«o …¯¤¼§¨¶o • «¬·¨等 x种培养基
分别进行桃仁愈伤组织诱导培养 ~采用二阶导数光谱扫描法 o测定苦杏仁苷含量 ∀结果 }x种不同的培养基均可使
无菌的桃仁子叶诱导出愈伤组织 ∀以 • «¬·¨培养基的诱导率最高ky{ qzx h l o生长最快kt qu| ª#p t#§p tl o但未能
测出苦杏仁苷含量 ~以 …¯ ¤¼§¨¶培养基诱导的愈伤组织苦杏仁苷含量为 s qwvuy h o且愈伤组织诱导率为 xy qux h o生
长率为 s qzz ª#p t#§p t ∀结论 }…¯¤¼§¨¶培养基可以作为研究桃仁中苦杏仁苷生物合成和愈伤组织诱导的基础培
养基 ∀
≈关键词  桃仁 ~愈伤组织 ~诱导 ~苦杏仁苷
≈中图分类号 ≥xyz ~≥yst ≈文献标识码 … ≈文章编号 tsst2xvsukusssltt2syys2sv
桃仁为桃 Πρυνυσ περσιχα kql…¤·¶¦«的干燥成
熟种仁 o有活血祛瘀 !润肠通便等作用 ∀原产我国 o
是福建省道地药材之一 o也是我国/八五0攻关中药
道地性内在规律研究的主要品种之一 ∀其主要有效
成分苦杏仁苷有明显提高脑缺血状态下细胞色素氧
化酶活性≈t  !抑制肝贮脂细胞增殖等作用≈u  ∀本文
采用  ≥ o…x o‘¬·¶¦«o…¯¤¼§¨¶o • «¬·¨等 x种培养基
分别进行桃仁愈伤组织诱导培养 o并分析其苦杏仁
苷的含量 o为进一步研究桃仁中苦杏仁苷生物合成
及其工业化生产提供依据 ∀
1 实验材料
111 仪器
× Švu{…分析天平k上海天平仪器厂l ~• ‹uxs„
生化培养箱k广东省医药仪器厂l ~美国 …∞≤Ž „‘
⁄˜2yws紫外2可见分光光度计 ∀
112 供试药品
桃仁购自漳州市场成熟的鲜桃k由福建中医学
院药学系金琪漾副教授鉴定l o剥取种子的子叶 ~所
有化学试剂均为分析纯 ~苦杏仁苷标准品购自中国
≈收稿日期  usss2sv2s{
药品生物制品检定所 ∀
2 实验方法
211 培养基的配制
21111 常用培养基母液的配制≈v  按文献分别配
制 x种培养基的无机盐混合液 ∀按每升培养基加入
蔗糖 vs ªo甘氨酸 u °ªo肌醇 tss °ªoŒ„„ u °ªou o
w2⁄u °ªo半胱氨酸 t °ªo维生素 …t s qt °ªo维生素
…y s qx °ªo∆2泛酸钙 t qs °ª!烟酸 s qx °ªo激动素
ts °ªoy2苄基嘌呤 t qs °ªo定容至一定体积 o成为 x
种培养基相同的有机成分 ∀³‹x q{ ∗ y qs ∀
21112 培养基分装及消毒 以上培养基配制时 o琼
脂按 s q{ h加入 ∀培养基分装于 tss °¯ 三角瓶中
k每瓶 us °¯ l o置蒸气高压锅中ktut ε ous °¬±l消
毒 o室温放冷备用 ∀
212 接种
新鲜桃 o取种子的子叶 ∀经 zs h 乙醇消毒后 o
在无菌条件下剪成约 v °°宽的外植体 o置不同培
养基中培养 ∀
213 培养条件
生化培养箱里暗中培养 o培养温度为 ux ∗ uz ε
恒温 o培养时间为 txx «∀
#syy#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtt
‘²√ qousss
214 愈伤组织诱导率调查
分别对不同培养基培养的桃仁愈伤组织的外植
数量进行统计 ∀求出诱导愈伤组织的外植体数量占
总外植体数量的百分比 ∀
215 桃仁愈伤组织生长速率测定
将桃仁培养前后的重量kªl差与培养基体积kl
和时间k§l相比 o可得桃仁愈伤组织的生长速率kª#
pt#§p tl ∀
216 苦杏仁苷含量测≈w 
采用二阶导数光谱扫描的测试法 o以苦杏仁苷
为标准品 ∀甲醇为溶媒 o扫描阶数 ν € u ~波长间隔
∃Κ€ u±° ~扫描范围 }uxs ∗ uzx±° ∀扫描速度 }
t uss ±°#°¬±p t ~狭缝宽度 }u ±° ~波长标度放大 u q
x ±°#¦°p t ∀记录波长为 uyx ∗ uyt ±° 的振幅值
∆ ∀以 ∆k„¥¶l对浓度 Χk°ª# °¯ p tl作图 o即得回归
方程 }Χ€ uw qutsu ∆ p s qsw{t|kρ € s q||||l o苦杏
仁苷浓度在 s qt ∗ t qs °ª# °¯ p t o浓度 Χ与 ∆ 值呈
线性关系 ∀各样品用甲醇提取苦杏仁苷 ∀按上述条
件测试 ∀
3 实验结果
311 愈伤组织的诱导培养
桃仁外植体于培养基上培养 v §左右 o即可从
伤口处长出淡黄色的愈伤组织 ∀愈伤组织表面结构
粘稠 o附着在外植体伤口处 o容易被剥离 ∀在培养过
程中 o发现外植体倾入培养基中往往不会形成愈伤
组织 o这与细胞分裂需要氧气有关 ∀带胚芽的外植
体受伤处容易形成愈伤组织 o并且愈伤组织生长迅
速 o这与胚根参与营养吸收有关 ∀不同培养基对桃
仁愈伤组织诱导及生长产生不同的影响 o结果见表
t ∀
表 t 不同培养基对桃仁愈伤组织诱导的影响
培养基 愈伤诱导率r h 愈伤组织生长速率rª#p t#§p t
 ≥ tu qxs s qzz ? s qsw
…x vt qux s qwy ? s qsx
‘¬·¶¦« wv qzx s qyy ? s qsx
…¯¤¼§¨¶ xy qux s qzz ? s qsu
• «¬·¨ y{ qzx t qu| ? s qsw
注 }ν € xs
由表 t可见 o这 x种培养基均可诱导桃仁的愈
伤组织 ∀诱导率以 • «¬·¨培养基最高ky{ qzx h l o其
次 …¯ ¤¼§¨¶培养基kxy qux h l o ≥ 培养基诱导率最
低ktu qxs h l ∀愈伤组织生长速率也以 • «¬·¨培养
基最快kt qu| ª#p t#§p tl o…x 培养基最慢ks qwy ª#
pt#§p tl ∀除  ≥培养基外 o其它 w种培养基的诱
导率和生长率呈正相关 ∀
312 愈伤组织中苦杏仁苷含量
采用二阶导数法测定桃仁愈伤组织中的苦杏仁
苷含量 o结果见表 u ∀
表 u 不同培养基培养的桃仁愈伤组织苦杏仁苷含量
培养基
样品鲜重
rª
∆值
k㴦l
浓度
r°ª# °¯ p t
含量
r鲜重 h
 ≥ t qws p p p
…x t qux p p p
‘¬·¶¦« t qvx s qsssv p p
…¯¤¼§¨¶ t qws s qstzs s qsuwx s qwvuy
• «¬·¨ t qyx s qsssu p p
注 }ν € ts
由表 u可见 ox种培养基只有 …¯ ¤¼§¨¶培养基诱
导的愈伤组织中测得苦杏仁苷 o其含量为
s qwvuy h o较测得的新鲜桃仁中苦杏仁苷含量ks q
{x|s h l低 ∀其它 w种培养基诱导的愈伤组织中未
能测得苦杏仁苷含量 ∀
4 讨论
由于这 x种培养基只是无机盐的组成和含量不
同 o其它条件均相同 ∀因此 o产生桃仁愈伤组织的诱
导率 !生长率 !及其苦杏仁苷含量的不同是与该因素
有关 ∀
根据文献记载≈v  o分析 x种培养基的无机元素 o
• «¬·¨培养基含有钾 o钠 o镁 o钙 o锰 o锌 o硼 o铁元素 o
与  ≥培养基相比缺钴 !铜 !钼元素 ~• «¬·¨和 …¯ ¤¼2
§¨¶培养基对桃仁愈伤组织的诱导率和生长率均较
其它 v种培养基k含有钴 !铜 !钼元素l高 ∀钴 !铜 !钼
这 v种元素存在可能不利于桃仁的愈伤组织诱导和
生长 o钠元素的存在与否不是主要影响因素 o因为
• «¬·¨培养基中钠含量为 yz qxw ≅ tsp y ª# °ªp t o
…¯¤¼§¨¶培养基中不含 o但其对桃仁愈伤组织也有较
高的诱导率和生长率 ∀另外 o ≥ o…x o‘¬·¶¦«培养基
无机元素比较 o‘¬·¶¦«培养基不含钴元素 o但含有铜
和钼 o其对桃仁愈伤组织的诱导率较  ≥ o…x 培养基
高 ∀…x与  ≥培养基无机元素组成相同 o两者对桃
仁愈伤组织的诱导率均较低 ∀比较这 x种培养基对
桃仁愈伤组织诱导和生长的影响 o• «¬·¨培养基为
最佳培养基 ∀
虽然 • «¬·¨和 …¯ ¤¼§¨¶培养基对桃仁的愈伤组
织均有较高的诱导率和生长率 o但只有 …¯ ¤¼§¨¶培养
基诱导桃仁的愈伤组织中含有苦杏仁苷 o比较 x种
#tyy#
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培养基的无机元素组成 o…¯¤¼§¨¶培养基不含钠元
素 o其培养基的无机元素组成除钠外 o其它与 • «¬·¨
相同 o另外 v种培养基也含有钠元素 ∀虽然培养基
中钠元素的存在不是桃仁愈伤组织的诱导和生长的
主要影响因素 o但比较 • «¬·¨和 …¯ ¤¼§¨¶培养基无机
元素表明 o钠元素的存在不利于桃仁愈伤组织中苦
杏仁苷的生物合成 ∀
从桃仁的愈伤组织中未能测得苦杏仁苷 o或即
使能测得k…¯¤¼§¨¶培养基 s qwvuy h l o也低于新鲜桃
仁ks q{x|s h l o这现象在其它植物的组织培养中也
有出现≈x  ∀这是由于代谢产物通常是由植物中的特
定组织或器官产生 o愈伤组织细胞往往缺少这样的
特定组织或器官 o或者其次生代谢过程由于这方面
的原因而不能表达 ∀因此 o愈伤组织中所测的代谢
产物 o其浓度通常也低于植株 ∀
总之 o桃仁愈伤组织的诱导 !生长 !及其苦杏仁
苷的生物合成受培养基的无机元素的影响 o这和国
内报道/中药道地性与生态的土壤矿物质组成有关0
的结论一致≈y  ∀
综上所述 o鉴于 …¯ ¤¼§¨¶培养基不仅对桃仁愈伤
组织有较高的诱导率和生长率 o而且苦杏仁苷的含
量也较高 o因此 o研究桃仁中苦杏仁苷生物合成及愈
伤组织诱导 o建议选择 …¯ ¤¼§¨¶培养基为基础培养
基 ∀
≈致谢  苦杏仁苷含量的测定得到我院中心实验室林
薇 !郑良朴协助 ~药学系凌伟坚 !陈卫琳 !沙玫老师也参加部
分工作 ∀
≈参考文献 
≈t  杨小平 o杨俊何 o黄 勤 o等 1 苦杏仁苷对脑缺血能量代谢中细
胞色素氧化酶的影响 1 中药新药与临床药理 ot||y ozkul }xs1
≈u  徐列明 o刘 成 o刘平新 1 扁桃苷对大鼠贮脂细胞增殖和产生胶
原的影响 1 消化病学杂志 ot||z oxkul }{w1
≈v 谢启昆 1 药用植物组织培养 1 上海 }上海科学技术出版社 ot|{y q
t{1
≈w  沙 明 o王玉珍 o曹克慧 1 二阶导数光谱法测定苦杏仁中苦杏仁
苷的含量 1 中成药 ot|{| ottkul }tx1
≈x  甘烦远 o周立刚 o郑光植 1 三七愈伤组织分化的研究 1 云南植物
研究 ot||v otx }yt1
≈y  徐颂芬 1 生态因素对药用植物有效成分的影响 1 中药材 ot|{| o
tukttl }wz1
≈责任编辑 王康正 
征订启事
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