全 文 ：3 　讨论
由于药材中可能含有黏液质 ,粗多糖提取前药
材粉碎不可过细 ,否则细胞壁破裂黏液质流出难以
滤过。多糖在高温下容易发生裂解 ,因此提取和浓
缩时温度不可过高 ,否则多糖可能易被破坏 ,本实验
采用 90 ℃水浴浸提。
粗多糖精制中 ,采用 H2 O2 脱色法可以脱除与
蛋白质、多糖等大分子结合的色素 , 效果明显。
H2 O2 脱色时温度为 40～50 ℃,温度过高多糖易被
破坏 ;温度过低达不到脱色的效果。除蛋白采用经
典的 Sevag 法 ,效果较明显 ,Sevag 法除蛋白需反复
多次 ,直至分层处无白色凝胶状物质出现。
本实验采用 DEA E232 纤维素阴离子交换柱、
Sep hacryl S2400 SF 凝胶柱分离纯化了吴茱萸多糖
主要组分 ,得到两个多糖组分 ERPS2a、ERPS3。蒸
馏水洗脱部分未见多糖组分 , ERPS2a、ERPS3 分别
为 012、015 mol/ L NaCl 溶液洗脱组分。推断吴茱
萸多糖中基本不含中性多糖 ,含有酸性多糖 ,该结果
与预试中季铵盐 CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)沉
淀法结果吻合。从组分单糖组成测定结果看
ERPS2a、ERPS3 中均含有一定量的半乳糖醛酸 ,也
证实了组分为酸性多糖。
在单糖组成分析方法中 ,气相色谱法分离单糖
繁琐费时 ,易出现色谱峰异构化裂分。H PL C 法测
定单糖可用糖分析柱和氨基键合相柱 ,但其价格昂
贵 ,分析成本高。同时单糖没有 C = C 双键和共轭
结构等生色团 ,分离后直接进行紫外检测比较困难。
本实验采用 PMP 衍生化方法将单糖转化成具有紫
外活性的物质 ,然后采用反相 H PL C2UV 法进行单
糖组成研究 ,同时分离测定了 6 种单糖和 1 种糖醛
酸 ,改善了分离特性 ,提高了检测灵敏度。同时
PMP 与单糖衍生时条件温和 ,操作简单 ,该方法可
推广应用到其他多糖。
参考文献 :
[ 1 ] 　杨凤珍 ,甄　攀 ,庞茂林 ,等. 中药吴茱萸中多糖的测定[J ] . 张
家口医学院学报 ,1996 ,16 (1) :17218.
[ 2 ] 　甄　攀 ,王治宝 ,张万明 ,等. 吴茱萸多糖的提取及其抗氧化作
用研究[J ] . 中成药 ,2005 ,27 (4) :4912492.
[ 3 ] 　王卫国 ,王继花 ,吴　强. 灰树花多糖脱色技术研究[J ] . 中国
食用菌 ,2003 ,22 (6) :49251.
[ 4 ] 　中国科学院上海药物研究所. 中草药有效成分提取与分离
[ M ] . 上海 :上海科学技术出版社 ,1983.
[ 5 ] 　吴梧桐. 生物制药工艺学 [ M ] . 北京 :中国医药科技出版社 ,
1998.
[6 ] 　张惟杰. 糖复合物生化研究技术[ M] . 第 2 版. 杭州 :浙江大学
出版社 ,1999.
[ 7 ] 　Honda S , Akao E , Suzuki S , et al . High2performance liquid
chromatography of reducing carbohydrates as st rongly ult ra2
violet2absorbing and elect rochemically sensitive 12phenyl232
met hyl252pyrazolone derivatives [ J ] . A nal B iochem , 1989 ,
180 :3512357.
[ 8 ] 　St rydom D J . Chromatographic separation of 12phenyl232
met hyl252pyrazolone2derivatized neut ral , acidic and basic al2
doses [J ] . J Chromatogr A , 1994 , 678 :17223.
HPLC法测定复方紫草颗粒中咖啡酸四聚体异构体
秦冬梅1 ,买尔旦2 3 ,李 　静3 ,王新兵1
(1.石河子大学药学院 ,新疆 石河子 　832000 ; 2. 新疆医科大学附属肿瘤医院 ,新疆 乌鲁木齐 　830011 ;
3. 石河子大学第一附属医院 ,新疆 石河子 　832000)
摘 　要 :目的 　建立 HPLC 法测定复方紫草颗粒剂中咖啡酸四聚体异构体的方法。方法 　YMC ODS2A C218 色谱
柱 (250 mm ×416 mm , 5μm) ;流动相 :甲醇2015 %磷酸水 (40 ∶60) ;体积流量 :1 mL/ min ;检测波长 :252 nm ,柱温 :
室温 ;进样量 :10μL 。结果 　咖啡酸四聚体异构体在 01052～1165μg 与峰面积值呈良好的线性关系。平均回收率
为 1011 8 % , RSD 为 2146 %。结论 　本方法简便可靠 ,结果稳定 ,重复性好 ,可用于测定复方紫草颗粒剂中咖啡酸
四聚体异构体。
关键词 :复方紫草颗粒 ;咖啡酸四聚体异构体 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286. 02 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0420576203
　　复方紫草颗粒是由紫草、丹参、黄芪、人参组成 ,
具有抗病毒、增强机体免疫之功效。咖啡酸四聚体
及其旋光异构体是紫草中的活性成分。经体外抗
HIV 药效筛选发现 :咖啡酸四聚体及其旋光异构体
·675· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
3 收稿日期 :2008207228　　　
作者简介 :秦冬梅 (1976 —) ,女 ,江苏省赣榆县人 ,讲师 ,2007 年获新疆医科大学药学院医学硕士 ,主要从事药剂学教学及中药民族药研
究。Tel : 13999738518 　E2mail :dongmeiqinli @163. com3 通讯作者　买尔旦
对艾滋病毒整合酶具有较强的抑制作用 ,在 M T22
细胞系 ,具有抗 H IV21 体外活性[1 ] 。经抗 HIV21
体外酶药效筛选 ,咖啡酸四聚体异构体抗 H IV21 整
合酶活性强于咖啡酸四聚体 ,且对 HIV21 逆转录酶
也有较好的抑制活性。因此本实验以咖啡酸四聚体
异构体为指标 ,建立了复方紫草颗粒的高效液相色
谱测定方法 ,取得满意结果。
1 　仪器与试药
Series2000 高效液相色谱仪 (美国 PerkinElmer
公司) ;单盘光电分析天平 (北京光学仪器厂) 。
复方紫草颗粒由新疆医科大学第一附属医院药
剂科提供 ;咖啡酸四聚体异构体对照品 (自制) ,质量
分数达 98106 % ,其 H2NMR、13 C2NMR、UV、IR 和
ESI2MS 数据与文献报道[2 ] 一致 ;甲醇为色谱纯 ,水
为重蒸水 ,磷酸等均为分析纯试剂。
2 　方法和结果
211 　色谱条件 : YMC ODS2A C218 色谱柱 (250
mm ×416 mm , 5μm) ;流动相 :甲醇2015 %磷酸水
(40 ∶60) ;体积流量 :1 mL/ min ;检测波长 :252 nm ,
柱温 :室温 ;进样量 :10μL 。
212 　溶液的配制
21211 　对照品溶液的配制 :精密称取咖啡酸四聚体
异构体对照品适量 ,用水制成 01100 mg/ mL 的溶
液 ,即得。
21212 　供试品溶液的配制 :取本品研细 ,精密称取
约 1 g ,置于棕色具塞锥形瓶中 ,加水 25 mL ,密塞 ,
超声提取 30 min ,放冷至室温 ,过 0145μm 微孔滤
膜 ,即得。
21213 　阴性对照溶液的配制 :按处方制备不含紫草
的颗粒剂 ,并按供试品溶液的配制项下方法制备阴
性对照溶液。
213 　系统适应性试验 :分别取对照品溶液、供试品
溶液、阴性对照溶液注入色谱仪 ,测定 ,结果阴性对
照溶液在与咖啡酸四聚体异构体相同保留时间处未
见相同色谱峰 ,表明阴性对照无干绕。见图 1。
214 　标准曲线的制备 :精密吸取 01130 0 mg/ mL
咖啡酸四聚体异构体对照品溶液 015、2、5、8、10、14
μL ,在上述色谱条件下进样 ,测定峰面积值。以峰
面积积分值对进样质量绘制标准曲线 ,得回归方程
Y = 584 827 X - 40 072 , r = 01999 5 ,结果表明咖啡
酸四聚体异构体在 01052～1165μg 与峰面积值呈
良好的线性关系。
t/ min3 2咖啡酸四聚体异构体3 2isomer of caffeic acid tet ramer
图 1 　咖啡酸四聚体异构体对照品( A) 、复方紫草颗粒( B)
和阴性对照样品( C)的 HPLC色谱图
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of isomer of caffeic acid
tetramer reference substance ( A) , Compound
Zicao Granula ( B) , and negative sample ( C)
215 　精密度试验 :精密吸取 01130 0 mg/ mL 咖啡
酸四聚体异构体对照品溶液 10μL ,在上述色谱条
件下连续进样 5 次 ,测定峰面积值 ,计算得其 RSD
为 0187 %。
216 　稳定性试验 :精密吸取同一供试品溶液 10
μL ,分别在 0、2、4、6、8、10 h 进样 ,结果表明供试品
溶液在 10 h 内稳定性良好 ,咖啡酸四聚体异构体峰
面积值的 RSD 为 1123 %。
217 　重现性试验 :取同一批样品 ,6 份 ,制备供试品
溶液 ,测定峰面积 ,计算咖啡酸四聚体异构体的质量
分数 ,结果咖啡酸四聚体异构体平均质量分数为
01162 mg/ g ,RSD 为 0135 %。
218 　加样回收率试验 :称取样品 (批号 070201) 9
份 ,每份 0115 g ,分别精密加入咖啡酸四聚体异构体
对照品 012、014、016 mg ,制备供试品溶液 ,进样测
定 ,计算 ,结果咖啡酸四聚体异构体的平均回收率为
10118 % , RSD 为 2146 %。
219 　样品测定 :取不同批号复方紫草颗粒样品 ,制
备供试品溶液。依上述方法分别精密吸取供试品溶
液和咖啡酸四聚体异构体对照品溶液各 10μL ,注
入液相色谱仪 ,以外标法计算样品中咖啡酸四聚体
异构体的质量分数 ,结果见表 1。
表 1 　复方紫草颗粒中咖啡酸四聚体异构体的测定结果( n = 3)
Table 1 　Determination of isomer of caffeic acid tetramer
in Compound Zicao Granula ( n = 3)
批号 咖啡酸四聚体异构体/ (mg ·g - 1) RSD/ %
070201 0. 168 0. 43
070301 0. 159 0. 56
070401 0. 172 0. 65
·775·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
3 　讨论
以流动相作溶剂 ,在 200～400 nm 波长测定了
咖啡酸四聚体及其异构体紫外光谱图 ,结果均在
252 nm 处有最大吸收 ,确定 252 nm 为测定波长。
本实验比较了咖啡酸四聚体异构体在甲醇、水
中的稳定性[3 ] ,结果均在 8 h 内稳定 ,而因水价廉易
得 ,故选用水为溶剂。
实验中曾用甲醇2水2甲酸 (29 ∶71 ∶011) 为流
动相 ,结果主峰与邻峰分离不佳。经摸索筛选采用
甲醇20. 5 %磷酸水 (40 ∶60)分离效果理想。
参考文献 :
[ 1 ] 　Robinson W E J , Reinecke M G. Inhibitors of HIV21 replica2
tion t hat inhibit HIV integrase [ J ] . Proc N atl A cai d Sci
US A , 1996 , 61 (5) : 2682270.
[ 2 ] 　Kashiwada Y , Nishizawa M , Yamaagishi T , et al . Anti2
AIDS agent s , 18. Sodium and potassium salt s of caffeic acid
tet ramers f rom A rnebia euchroma as anti2HIV agent s [J ] . J
N at Prod , 1995 , 58 (3) : 3922400.
[ 3 ] 　贺金华 ,买尔旦. HPL C 法测定新疆软紫草中咖啡酸四聚体
的含量[J ] . 新疆医科大学学报 ,2005 ,28 (5) :4292430.
HPLC法测定裸花紫珠片中木犀草素
李 　伟 ,徐向平 ,关 　怀 ,张艳娜 3　
(海南九芝堂药业有限公司 ,海南 海口 　570311)
摘 　要 :目的 　建立 HPL C 法测定裸花紫珠片中木犀草素的方法。方法 　将裸花紫珠片用酸水解。采用 HPLC
法测定。色谱柱为 Eurospher2100 C18 (250 mm ×4 mm , 5μm) ;流动相 :甲醇2水2磷酸 (50 ∶50 ∶012) ;柱温 :室温 ;
检测波长 :350 nm ;体积流量 :110 mL/ min ;进样量 :10μL 。结果 　木犀草素在 01029 4～01147μg 与峰面积呈良好
的线性关系 , r = 01999 8。平均回收率为 10014 % ,RSD 为 1192 % ( n = 6) 。结论 　本方法准确 ,重复性好 ,专属性
高 ,可用于裸花紫珠片的定量控制。
关键词 :裸花紫珠片 ;木犀草素 ;高效液相色谱
中图分类号 :R284. 2 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0420578203
　　裸花紫珠片为裸花紫珠经提取加工制成的单味
药制剂 ,具有消炎、解毒、收敛、止血的功效 ,主要用
于细菌感染引起的炎症 ,急性传染肝炎 ,呼吸道和消
化道出血的治疗。裸花紫珠片原为糖衣片 ,收载于
《中华人民共和国卫生部药品标准》中成药成方制剂
第 6 册 ,缺乏定量控制项。目前有文献报道采用分
光光度法测定裸花紫珠片中总黄酮[1 ] ,但该法干扰
多 ,专属性差。裸花紫珠地上部分中含有木犀草素
苷和木犀草素[2 ] 。因此本实验选择木犀草素为指标
成分 ,对裸花紫珠片中的木犀草素的测定方法进行
了研究 ,以控制裸花紫珠片的质量。
1 　仪器与试药
德国 Knauer 液相色谱仪 ,包括 K—1001 泵、
K—2501 紫外检测器 ; Cary 50 紫外分光光度计 ;
CQ —10 超声波清洗器。
甲醇 (色谱纯) 、磷酸 (分析纯) 、纯化水 ;木犀草
素对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,批号
1115202200201 ;裸花紫珠片由海南九芝堂药业有限
公司提供 ,规格为 015 g/ 片。
2 　方法与结果
211 　方法的选择 :经预试验 ,裸花紫珠片可见一个
很小的游离木犀草素峰 ,而裸花紫珠片酸水解物中 ,
与木犀草素对照品相同保留时间处有较大的游离木
犀草素峰 ,可以用酸来水解木犀草素的苷类 ,采用高
效液相色谱法来测定木犀草素 ,间接控制裸花紫珠
片的质量。
212 　色谱条件的选择
21211 　检测波长的选择 :取木犀草素甲醇溶液进行
紫外扫描 ,其最大吸收波长在 350 nm 附近 ,选用
350 nm 作为本品测定的检测波长。
21212 　流动相的选择 :以甲醇和水作流动相 ,磷酸
调 p H 值 ,进行流动相配比试验。甲醇2水的比例依
·875· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
3 收稿日期 :2008207204　　　
作者简介 :李　伟 (1966 —) ,男 (彝族) ,云南永仁县人 ,制药工程师 ,1988 年毕业于上海医科大学药学院 (现复旦大学药学院) 药学专业 ,
主要从事药物制剂生产管理、质量管理和研究。Tel : (0898) 6863160828212 　E2mail :greatleo @21cn. com