全 文 ：·药理与临床·
大黄酸鬼臼毒素酯对人骨肉瘤细胞作用机制的研究
万宗明, 陈　虹, 曹　波, 王　莹, 牟洪军Ξ
(武警医学院 生药教研室, 天津　300162)
摘　要: 目的　研究大黄酸衍生物大黄酸鬼臼毒素酯 (RH 201) 对人骨肉瘤 (HO S) 细胞的作用及其机制。方法
体外培养 HO S 细胞, 应用M T T 法测定 RH 201 作用 72 h 的 IC50值, 羟基磷灰石吸附实验测定 RH 201 在体外的骨
亲和性, 荧光染色观察 RH 201 对 HO S 细胞形态的影响, 流式细胞仪检测细胞周期分布情况, R T 2PCR 检测 HO S
细胞周期蛋白 Cyclin D 1, CD K4 基因表达的变化。结果　RH 201 能明显抑制 HO S 细胞的生长, 作用 72 h 的 IC50
值为 0118 Λmo löL ; 羟基磷灰石对四环素和 RH 201 吸附值分别为 (811±0115)、(1418±0111) Λmo lög, RH 201 的
骨亲和性高于四环素; 荧光染色后, 可见到经 RH 201 处理的 HO S 细胞膜皱褶、卷曲、破裂, 核碎裂固缩, 聚集成细
小的凝聚块; 流式细胞仪检测到细胞周期 G2 + M 期阻滞明显; R T 2PCR 的半定量检测结果表明 Cyclin D 1 和
CD K4 mRNA 表达降低。结论　RH 201 通过调控细胞周期驱动机制使细胞发生周期阻滞, 导致 HO S 细胞的生长
抑制, 并且 RH 201 在体外具有良好的骨亲和性。
关键词: 大黄酸鬼臼毒素酯; 人骨肉瘤细胞 (HO S 细胞) ; Cyclin D 1; CD K4
中图分类号: R 28611　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 025322670 (2008) 0120067205
M echan ism of Podophyllotox in rhe ina te (RH-01) on human
osteoma sarcoma tosum cells growth
W AN Zong2m ing, CH EN Hong, CAO Bo, W AN G Y ing, M OU Hong2jun
(D epartm ent of Pharm acogno sy, M edical Co llege of Ch inese Peop le’s A rm ed Po lice Fo rces, T ian jin 300162, Ch ina)
Abstract: Objective　To study the effects of Podophyllo tox in rheinate (RH 201) on hum an o steom a
sarcom ato sum (HO S) cells. M ethods　HO S Cells w ere cu ltu red in M EM alone o r expo sed to differen t
concen tra t ion s of RH 201. T he grow th inh ib it ion w as analyzed by M T T assay. T he bone2ta rgeted effect of
RH 201 w as evaluated by values of hydroxyapat ite ceram ic adso rp t ion. T he flow cytom etry (FCM ) , f luo2
rescence m icro scopy, and R T 2PCR assay w ere emp loyed to detect the act ion m echan ism of RH 201. Results
　RH 201 R em arkab ly inh ib ited HO S cells grow th, its IC 50 value w as 0. 18 Λmo löL at 72 h. V alues of hy2
droxyapat ite ceram ic adso rp t ion tow ards A cM and RH 201 w ere (8. 1±0. 15) and (14. 8±0. 11) Λmo lög,
respect ively, w h ich demon stra ted that RH 201 had m uch stronger bone2ta rgeted funct ion than A cM. A fter
the HO S cells w ith RH 201 dilu ted by Hoech st 33342 so lu t ion, it show ed typ ica lly mo rpho logic change com 2
pared w ith the con tro l group under f luo rescence m icro scope. R esu lts ind ica ted that RH 201 dram at ica lly in2
duced an accum u lat ion in G2öM phase of cell cycle a t 24 h by FCM analysis. R T 2PCR A ssay show ed that
the exp ression of cyclin D 1, CD K4 mRNA obviou sly decreased in a concen tra t ion dependen t m anner. Con-
clusion　T he compound RH 201 cou ld obviou sly inh ib it the grow th of HO S cell line and have a very strong
bone2afin ity fea tu re in v itro.
Key words: Podophyllo tox in rheinate (RH 201) ; hum an o steom a sarcom ato sum (HO S) ; Cyclin D 1;
CD K4
　　骨肉瘤, 又称成骨样肉瘤, 是一种恶性程度很高
的骨肿瘤, 主要的治疗方法是手术和手术后化疗, 使
5 年生存率达到 50% [1 ]。现阶段常用的临床治疗药
物有甲氨蝶呤、阿霉素、顺铂、异环磷酰胺和长春新
碱等, 有效率仅为 30% 左右。还有一些尚待进一步
研究的治疗骨肉瘤的药物, 如新的双磷酸盐抗癌药
唑仑磷酸、铂类新药洛铂、C ryp tophycin52、PUN 2
19548 和吡唑啉吖啶 (PZA ) 等[2 ]。但以上化疗药物
均有骨髓抑制、胃肠反应、心脏毒性、肝脏毒性、肾脏
及膀胱毒性等不良反应。因此努力寻找及合成新型
·76·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2007206220
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30371682)
作者简介: 万宗明 (1972—) , 男, 安徽省肥西县人, 药理学硕士, 实验师, 主要从事抗肿瘤药理学研究。
T el: (022) 60578256　E2m ail: w anzm @eyou. com
治疗骨肿瘤的药物显得尤为重要。本实验研究的大
黄酸衍生物大黄酸鬼臼毒素酯 (RH 201) 为大黄酸
和传统抗肿瘤药鬼臼毒素经偶联而得到的一类新型
化合物。本研究对 RH 201 在体外影响人源骨肉瘤
HO S 细胞的生长进行了初步的探讨。
1　材料
　　大黄酸衍生物 RH 201 的相对分子质量为 694,
黄色粉末, 难溶于水, 遇酸或碱易分解, 质量分数>
99% , 结构见图 1, 由武警医学院生药教研室陈虹博
士提供。鬼臼毒素和四环素由陈虹博士提供。M EM
培养基为 Gibco 公司产品。M T T (噻唑蓝) 为
Sigm a 公司产品。PCR 试剂购于北京鼎国生物技术
有限责任公司。其他常规试剂均购于天津联星生物
技术公司。
图 1　RH-01 化学结构
F ig. 1　Chem ica l structure of RH-01
2　方法
211　药品配制: RH 201 不溶于水, 体外实验用二甲
基亚砜 (DM SO ) 配制, 4 ℃ 保存, 实验前用无血清
培养基稀释,DM SO 终体积分数< 011%。
212　细胞培养: 人源骨肉瘤 HO S 细胞由中国协和
医科大学细胞中心提供, 体外培养于M EM 培养基
中, 内含 10% 胎牛血清、100 U öL 青霉素、100 Λgö
L 链霉素, 置 5% CO 2、37 ℃ 孵育箱中培养。
213　M T T 法检测: 取 HO S 细胞接种于 96 孔培养
板内, 培养 24 h 后加药 RH 201 (终浓度为 0105、
011、012、014、018 Λmo löL ) , 另设对照组 (加入 200ΛL 细胞悬液, 不加药) 和空白组 (只加 200 ΛL 培
养基) , 每组设3 个复孔, 置 37 ℃、5% CO 2培养箱中
培养 72 h 后, 加M T T 50 ΛL (1 m gömL ) , 培养箱
中孵育 4 h 后, 吸出上清液, 加 150 ΛL DM SO , 摇
匀, 用全自动酶标仪 (波长 490 nm ) , 测定各孔吸光
度 (A ) 值, 计算 IC 50值[3 ]。
214　RH 201 的体外羟基磷灰石吸附作用: 用无水
乙醇分别溶解四环素和 RH 201, 稀释至 01125
mmo löL , 各取样品 3 份, 分别向其中加入 25 m g 羟
基磷灰石, 各样品在超声波振荡器振荡 1 m in 后, 室
温平衡 16 h, 滤过, 测定羟基磷灰石对四环素和
RH 201 的吸附值, 并比较二者的吸附作用大小。
215　RH 201 对 HO S 细胞生长曲线的影响: 取
HO S 细胞培养于 96 孔培养板内 (共 4 块板) , 培养
24 h, 给药 RH 201 (0105、011、012、014、018 Λmo lö
L ) , 每组设 3 个复孔, 置 37 ℃、5% CO 2培养箱中培
养, 分别在 0、24、48、72 h 按M T T 法测定 A 值, 以
时间为横坐标,A 值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
216　荧光染色: 取 HO S 细胞, 加药 RH 201 (01062
5、01125、0125 Λmo löL ) , 设空白对照组; 作用 24 h
后, 收集细胞, 离心后去上清液, 4% 多聚甲醛固定
细胞, 加入 Hoech st 33342 (终质量浓度为 10 Λgö
mL ) , 37 ℃ 染色 5～ 10 m in; O lympu s XSZ—D 2 型
荧光显微镜下观察并照相。
217　流式细胞仪检测: 将 RH 201 (01062 5、01125、
0125 Λmo löL ) 作用于 HO S 细胞, 设空白对照组加
入 011% DM SO ; 分别在 12、24、36 h 收集细胞, 用
70% 乙醇固定, 4 ℃ 过夜。作用 24 h 后 P I 染色, 用
流式细胞仪检测细胞周期分布情况。
218　HO S 细胞的 RNA 提取和 PCR 分析: 应用
P rim ier 软件优化设计出上下游引物, 由上海生工公
司合成, 引物序列分别为细胞周期素 (CyclinD 1) 正
向 引 物: 5′2CT GTCGCT GGA GCCCGT GAAA 2
AA G23′、反向引物: 5′2GAA GT T GT T GGGGCTC2
CTCA GGT T 23′; 细 胞 周 期 依 赖 性 蛋 白 激 酶
(CD K4) 正向引物: 5′2CA T GTA GA CCA GGA CC2
TAA GG23′、反向引物: 5′2AA CT GGCGCA TCA 2
GA TCCTA G23′; Β2act in 正向引物: 5′2CA TCTC2
T T GCTCGAA GTCCA 23′、反向引物: 5′2A TCA T 2
GT T T GA GA CCT TCAA CA 23′。
取 HO S 细胞, 加药 RH 201 (01062 5、01125、
0125 Λmo löL ) , 作用 24 h 后按 t rizo l 试剂盒说明书
进行总 RNA 的抽提, 定量。R T 2PCR 采用二步法:
首先按 PCR 试剂盒说明书添加试剂, 42 ℃ 逆转录
30 m in, 95 ℃、5 m in 使酶失活并与 RNA 分离, 终
止反应, 得到 cDNA 产物; 在所得的 cDNA 产物中
分别加入 CyclinD 1 和 CD K4 的上下游引物, 94 ℃
预变性 2 m in, 94 ℃ 变性 45 s, 58 ℃ 退火 45 s,
72 ℃ 延伸 45 s, 进行 35 循环, 最后一个循环 72 ℃
延伸 10 m in, 其中 CD K4 为 56 ℃ 退火 45 s。最后
取 Β2act in CyclinD 1 和 CD K4 基因 PCR 产物 5 ΛL
进行 75 V 恒压 115 h 琼脂糖凝胶电泳; 经 To tal2
labv1. 10 软件对凝胶照相结果分析, 得到待测的
RNA 扩增产物的电泳带总灰度与内参照 Β2act in
·86· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
RNA 扩增产物的电泳带总灰度, 将二者的比值作为
半定量结果 (相对值) , 并以此作为目的 RNA 的相
对表达量。
219　统计学处理: 实验资料用 x ±s 表示, 用 SPSS
1115 软件分析。
3　结果
311　RH 201 对 HO S 细胞毒性作用: HO S 细胞经
RH 201 处理 72 h 后, 经M T T 法检测, 活细胞数明
显减少, 在 RH 201 018 Λmo löL 组中已无成形细胞
可见, 与对照组比较, RH 201 组的A 值差异显著, 见
表1。RH 201 作用 72 h 的 IC 50值为 0118 Λmo löL。
表 1　RH-01 对 HOS 细胞的细胞毒性作用 (x±s, n= 3)
Table 1　Cytotox ic ity of RH-01 on HOS cells (x±s, n= 3)
组　别 Cö(Λmo l·L - 1) A 值
空白 - 01086±01006
对照 - 01520±01027
RH 201 0105 01439±010233
011 01287±010163
012 01208±010173
014 01165±010223
　　与对照组比较: 3 P < 0105
　　3 P < 0105 vs con tro l group
312　RH 201 在体外对羟基磷灰石的吸附作用: 羟
基磷灰石对四环素和 RH 201 的吸附值分别为
(811±0115)、(1418±0111) Λmo lög, 二者比较差异
显著, 表明 RH 201 在体外具有骨亲和性, 其吸附作
用高于四环素。
313　RH 201 作用后 HO S 细胞的生长曲线: 见图2,
给药组细胞生长受到抑制, 呈时间、剂量依赖性关
系, 在 RH 201 018 Λmo löL 组中已无成形细胞可见。
图 2　RH-01 对 HOS 细胞的生长抑制作用
F ig. 2　Inh ibition of RH-01 on growth of HOS cells
314　荧光显微镜检测 RH 201 对 HO S 细胞形态的
影响: Hoech st 33342 染色后的 HO S 细胞, 在紫外
光激发下, 发出蓝色荧光。给药组细胞形态变化明
显, 胞膜皱褶、卷曲和破裂, 核碎裂固缩, 聚集成细小
的凝聚块。随着药物浓度的加大, 镜下成形细胞数渐
少, 见图3。
A 2对照　B～D 2RH 201 01062 5、01125、0125 Λmo löL
A 2con tro l　B—D 2RH 201 01062 5、01125、0125 Λmo löL
图 3　不同浓度 RH-01 作用后 HOS 细胞形态学变化
F ig. 3　M orpholog ica l changes of HOS cells treated
by RH-01 at d ifferen t concen tration s
315　流式细胞仪检测: HO S 细胞经 RH 201 作用
24 h 时, G2+ M 期细胞比例明显增加, 且呈明显剂
量依赖性, 表明 RH 201 对 S 期细胞向 G2+ M 期移
行的阻滞作用明显。RH 201 作用 HO S 细胞 36 h
后, 流式细胞仪已检测不到完整的细胞, 见表2。
表 2　RH-01 作用 12、24 h 后 HOS 细胞周期分布
(x±s, n= 3)
Table 2　Cell cycle d istr ibution of HOS cell treated
by RH-01 for 12, and 24 h (x±s, n= 3)
RH201
Cö(Λmo l·L - 1) 作用 12 h 后细胞周期分布ö%G1 S G2+ M 作用 24 h 后细胞周期分布ö%G1 S G2+ M
0 (对照) 4312±118 3614±115 1814±111 4519±114 4017±118 1914±119
01062 5 4414±115 3419±114 1717±113 4013±116 3815±119 2511±112
01125 4310±116 3610±116 1618±117 3118±118 3017±112 3512±1133
0125 3910±111 3813±117 2217±118 1911±118 1715±116 4917±1143
　　与对照组比较: 3 P < 0105
　　3 P < 0105 vs con tro l group
316　RH 201 对调节细胞周期相关基因表达的影
响: 经 R T 2PCR 检测结果显示, 与对照组相比, 不同
浓度的 RH 201 作用于 HO S 细胞 24 h 后, Cy2
clinD 1、CD K4 mRNA 表达量随作用剂量增加而明
显减少, 差异显著, 见图4 和5。
4　讨论
　　大黄的蒽醌类化合物大黄酸的结构与四环素相
似, 具有碱金属离子络合的能力, 并经羟基磷灰石体
外吸附实验证实有类似于四环素的骨亲和性。鬼臼
毒素有很强的抗癌活性, 但由于其有严重的骨髓抑
制和胃肠道反应等副作用, 所以在临床上不能直接
用来作为抗肿瘤应用[4 ]。大黄酸衍生物RH 201 是大
黄酸和鬼臼毒素进行化学结构改造而得到的新的化
·96·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
A 2对照组　B～D 2RH 201 01062 5、01125、0125 Λmo löL 组
与对照组比较: 3 P < 0105
A 2con tro l group　B—D 2RH 201 01062 5, 01125, and
0125 Λmo löL group　3 P < 0105 vs con tro l group
图 4　RH-01 对 HOS 细胞 CD K4 mRNA 表达的
影响 (x±s, n= 3)
F ig. 4　Effect of RH-01 on CD K4 mRNA expression
in HOS cells (x±s, n= 3)
A 2对照组　B～D 2RH 201 01062 5、01125、0125 Λmo löL 组
与对照组比较: 3 P < 0105
A 2con tro l group　B—D 2RH 201 01062 5, 01125, and
0125 Λmo löL group　3 P < 0105 vs con tro l group
图 5　RH-01 对 HOS 细胞 Cycl in D 1 mRNA 表达的影响
(x±s, n= 3)
F ig. 5　Effect of RH-01 on Cycl in D 1 mRNA expression
in HOS cells (x±s, n= 3)
合物。本实验在研究 RH 201 抑制 HO S 细胞生长和
体外羟基磷灰石吸附作用的基础上, 进一步对 RH 2
01 的作用机制进行了初步探讨。
经体外药效学研究证实, RH 201 对体外培养的
人源骨肉瘤 HO S 细胞有很强的杀伤力, 对 HO S 细
胞的 IC 50为 0118 Λmo löL。通过对 HO S 细胞的生长
曲线观察, 发现 RH 201 对 HO S 细胞的生长抑制作
用呈浓度及时间依赖性。由此表明 RH 201 在体外能
抑制 HO S 细胞的生长; 经体外羟基磷灰石吸附实验
证实 RH 201 与钙离子结合能力强, 具有骨亲和性。
肿瘤的发生主要是细胞周期调控的异常, 包括
细胞周期启动、运行和终止的异常, 使细胞获得以增
殖过多、凋亡过少的失控性生长特征。细胞周期受控
于精密的细胞周期调控机制。细胞周期调控机制涉
及一组蛋白激酶, 称为细胞周期依赖性蛋白激酶
(CD K) , 它们在细胞周期内特定的时间激活, 通过
对相应的底物磷酸化, 驱使着细胞完成细胞周期, 人
类细胞主要的 CD K 有 CD K1 (CDC2)、CD K2、
CD K3、CD K4、CD K5、CD K6、CD K7; CD K 的细胞周
期特异性又依赖于一类呈细胞周期特异性表达、累
积与分解的蛋白质, 称为细胞周期素 (Cyclin)。人类
细胞主要的 Cyclin 有 CyclinB 1、CyclinA、CyclinE、
CyclinD 1、D 2 和 D 3。与肿瘤关系最为密切的 Cy2
clin, 首推 CyclinD , 大量的研究表明, 在大多数的肿
瘤中, 由于基因的扩增或移位导致 CyclinD 1 的过度
表达。目前, 越来越多的研究证明, 在不同的肿瘤细
胞中, 存在着不同的 Cyclin 和 CD K 的过度表达和
基因重排, 从而影响细胞的周期调控机制, 致使细胞
进入了失控性生长——癌变。M a 等[5 ]在研究唾液
腺囊性癌时发现 CyclinD 1 和 CD K4 与细胞周期
G2+ M 期有关, 抗癌药物作用后, 使细胞周期阻滞
在 G2+ M 期, 抑制了肿瘤细胞的过度增殖, 而细胞
周期调控机制的 CyclinD 1 和 CD K4 的蛋白表达量
也降低。本实验通过流式细胞仪对 HO S 细胞的细
胞周期的检测结果显示: RH 201 作用于 HO S 细胞
后, G1期细胞数明显减少, G2 + M 期细胞数显著增
多, 而 R T 2PCR 结果显示: RH 201 作用于 HO S 细
胞后, 细胞周期调控机制的相关蛋白 CyclinD 1 和
CD K4 基因 mRNA 表达明显降低, 由此推测,
RH 201 对 HO S 细胞 G2+ M 的阻滞作用与细胞周
期调控机制 CyclinD 1 和 CD K4 基因表达降低
相关。
综上所述, 本实验发现大黄酸衍生物 RH 201 可
能是一种具有骨亲和性的化合物, 并且通过调控细
胞周期蛋白 CyclinD 1 和 CD K4 的表达, 使 HO S 细
胞周期发生阻滞, 最终抑制了 HO S 细胞的生长。本
研究提示大黄酸衍生物 RH 201 可能是一种具有特
异性抗骨肉瘤作用的药物, 本课题组将进行动物体
内实验研究, 拟对其做进一步的验证。
·07· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
参考文献:
[ 1 ]　Schw am eis E, Dom inkus M , Krep ler P, et a l. Reconstruc2
t ion of the pelvis after tumo r resection in ch ildren and ado les2
cen ts [J ]1 C lin O rthop , 2002, 402: 22022351
[ 2 ]　N akam ura H , O ish i S, Yagyu H , et a l. Comparative study
of bone reso rp tion m arkers fo r the diagno sis of bone m etasta2
sis in lung cancer [J ]1 N ihon K oky uk i Gakka i Z assh i, 2002,
40 (5) : 35523591 [ 3 ]　韩　锐1 抗癌药物研究与实验技术 [M ]1 北京: 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社, 19971[ 4 ]　郑培楠, 李朝峰, 赵长琦1 鬼臼毒素及其衍生物 [J ]1 天然产物研究与开发, 2004, 16 (1) : 802821[ 5 ]　马　杰, 王　洁, 钟　鸣, 等1 Genistein 对腺样囊性癌细胞SA CC283 中细胞周期蛋白表达的影响 [J ]1 上海口腔医学,2006, 15 (1) : 692721
川芎嗪对缺氧人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响
张国平1, 孙　梅1, 杨洁红2, 万海同2Ξ
(11 浙江大学医学院附属第二医院 中医科, 浙江 杭州　310009; 21 浙江中医药大学心脑血管病研究所, 浙江 杭州　310053)
摘　要: 目的　应用人脐静脉内皮细胞 (HUV EC s) 缺氧模型, 观察川芎嗪对其抗凝和纤溶功能的影响。方法　制
备正常人脐静脉原代 EC, 待 EC 培养达融合状态后, 将其放入含 95% N 2、5% CO 2混合气体的缺氧环境, 制备人脐
静脉原代 EC 缺氧损伤模型。并设正常组, 模型组, 川芎嗪组, 观察各组细胞培养上清液中漂浮细胞数、抗凝、纤溶
指标等变化。结果　与对照组相比, 模型组培养液中的漂浮细胞数显著增高, 前列环素 (62keto2PGF 1Α) 水平显著下
降, 组织型纤溶酶原激活物抑制物 (PA I) 活性显著增高, 组织型纤溶酶原激活物 ( t2PA ) 活性显著降低, 内皮素
(ET ) 水平显著增高, NO 水平显著降低; 川芎嗪具有显著提高 62keto2PGF 1Α水平, 调节 PA I、t2PA 活性和 ET、NO
水平的作用。结论　本实验制备的人脐静脉原代 EC 缺氧损伤模型存在着 EC 受损, 分泌功能下降, 血管舒缩功能
失调; 川芎嗪具有保护在缺氧环境下 EC 受损, 调节 EC 分泌功能和血管舒缩功能。
关键词: 川芎嗪; 内皮细胞; 缺氧; 前列环素; 组织型纤溶酶原激活物; 内皮素
中图分类号: R 286132　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 025322670 (2008) 0120071203
Effect of tetram ethylpyraz ine on hypox ic m odel in human um b il ica l ve in endothel ium cells
and its function s of an ticoagula tion and f ibr inolysis
ZHAN G Guo2p ing, SUN M ei, YAN G J ie2hong, W AN H ai2tong
(11D epartm ent of T radit ional Ch inese M edicine, Second A ffilia ted Ho sp ita l, Co llege of M edicine,
Zhejiang U niversity, H angzhou 310009, Ch ina; 2. Inst itu te of Cardio2cerebral D iseases,
Zhejiang Co llege of T radit ional Ch inese M edicine, H angzhou 310053, Ch ina)
Abstract: Objective　To set the hypox ic model in hum an um b ilica l vein endo thelium cells (HUV EC s)
and ob serve the effect of tet ram ethylpyrazine in its funct ion s of an t icoagu la t ion and fib rino lysis. M ethods
P reparing the no rm al p rim ary HUV EC s, w hen the cu ltu red endo thelia l cells (EC s) w ere ino scu la ted they
w ere pu t in to the anox ic condit ion w ith 95% N 2 and 5% CO 2 to m ake hypox ic model in p rim ary HUV EC s.
N o rm al, model, and tet ram ethylpyrazine group s w ere divided and u sed to ob serve the difference of f loa t ing
cells, an t icoagu la t ion and fib rino lysis indexes in supernatan t of each group. Results　Compared w ith the
con tro l group , the num ber of f loa t ing cells in supernatan t w as increased obviou sly, the level of 62keto2
PGF 1Αw as declined sign if ican t ly, the act ivity of p lasm inogen act iva to r inh ib ito r (PA I) and the level of en2
do thelin (ET ) w ere enhanced obviou sly, the act ivity of t issue p lasm inogen act iva to r ( t2PA ) and the level
of NO w ere declined sign if ican t ly in model group; the level of 62keto2PGF 1Αw as ra ised sign if ican t ly, the ac2
t ivity of PA I and t2PA , and the levels of ET and NO cou ld be regu la ted in the tet ram ethylpyrazine group.
Conclusion　 In the hypox ic model of p rim ary HUV EC s m ade in th is experim en t, EC s are in ju red, secret2
ing funct ion is declined, vasomo tion is ou t of con tro l. T etram ethylpyrazine cou ld p ro tect hypox ic EC s from
being in ju red, regu la te the secret ing funct ion of EC s and the vasomo tion. T he model cou ld p rovide a
m ethod fo r basic study and m edicine select ion of an t icoagu la t ion and fib rino lysis.
Key words: tet ram ethylpyrazine; endo thelia l cells (EC s) ; hypox ia; p ro stacyclin; t issue p lasm inogen
act iva to r ( t2PA ) ; endo thelin (ET )
·17·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
收稿日期: 2007204215
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30371789) ; 浙江省自然科学基金资助项目 (Z204424)
作者简介: 张国平 (1967—) , 男, 浙江嵊州市人, 主治医师, 医学硕士, 主要从事心脑血管病的中西医结合临床研究。
E2m ail: zhangguop ing@zj. com3 通讯作者　万海同　E2m ail: w anhaitong@zjtcm. net