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圆穗兔耳草化学成分的研究



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圆穗兔耳草化学成分的研究
杨爱梅1, 鲁润华2, 师彦平3Ξ
(11 兰州理工大学生命科学与工程学院, 甘肃 兰州 730050; 21 中国科学院成都生物研究所, 四川 成都 610041;
31 中国科学院兰州化学物理研究所 甘肃省天然药物重点实验室, 甘肃 兰州 730000)
摘 要: 目的 对圆穗兔耳草L ag otis ram alana 中化学成分进行分离纯化和结构确定。方法 利用普通硅胶柱色谱
和制备薄层色谱等方法进行分离、纯化, 并经超导核磁共振、质谱等波谱技术确定其结构。结果 从圆穗兔耳草的
95% 乙醇室温提取物中获得 10 个化合物, 其结构被确定为: 二十六烷 (É )、Β2谷甾醇 (Ê )、胡萝卜苷 (Ë )、Α2D 2吡喃
葡萄糖 (Ì )、桃叶珊瑚苷 (aucub in, Í )、葫芦素E (Î )、葫芦素B (Ï )、海绿甾苷É (arven in É , Ð )、丁香树脂酚2单2Β2D 2葡萄糖苷 (Ñ )、松脂素24′2O 2Β2D 2葡萄糖苷 (Ò )。结论 除化合物Î、Ï 外均为首次从该植物中分到。
关键词: 圆穗兔耳草; 兔耳草属; 化学成分
中图分类号: R 28411   文献标识码: A    文章编号: 0253- 2670 (2008) 03- 0337- 03
  圆穗兔耳草L ag otis ram a lana Batalin 是玄参科
兔耳草属植物。生于海拔5 300 m 高山、草地、冰河、
水坡。分布于青海、甘肃及四川西北部[1 ]。兔耳草为
常用藏药, 藏名洪连, 商品有 4 种兔耳草, 圆穗兔耳
草是其中之一。洪连味苦、性寒, 有清热、凉血、解毒
功能, 用于五脏有热、血分热毒、体虚潮热、高血压、
急、慢性肝炎、痔疮, 有体外抑菌、抗炎和降血糖的药
理作用[2 ]。兔耳草属植物多为药用, 该属植物化学成
分主要有黄酮、苯丙素苷、环烯醚萜等化合物[3, 4 ]。封
士兰等[5 ]曾经对圆穗兔耳草化学成分进行了初步研
究, 从中分得4 个化合物。为了进一步探讨圆穗兔耳
草的化学成分, 笔者对兔耳草全草进行了化学成分
的研究, 从中分离得到 4 个苯丙素苷类化合物[6, 7 ] ,
在后续的研究工作中, 又从中分离得到了10 个化合
物, 主要运用超导核磁共振技术, 结合文献中已报道
的波谱数据等, 其结构被确定为: 二十六烷 (É )、Β2
谷甾醇 (Ê )、胡萝卜苷 (Ë )、Α2D 2吡喃葡萄糖 (Ì )、
aucub in (Í )、葫芦素B (Î )、葫芦素E (Ï )、arven inÉ (Ð )、丁香树脂酚2单2Β2D 2葡萄糖苷 (Ñ )、松脂素24′2O 2Β2D 2葡萄糖苷 (Ò )。除化合物Î、Ï 外均为首 次从该植物中分到。1 仪器与材料XT - 4 显微熔点测定仪; N ico let A vatar 360FT 2IR 型红外光谱仪; V arian INOVA - 400 M H z核磁共振仪; E I2M S 质谱仪; B ruker A PEX 型质谱仪; V G ZAB- H S 型质谱仪; 柱色谱硅胶 (200~ 300目)、薄层色谱硅胶 (GF 254) 均为青岛海洋化工厂产品。藏药圆穗兔耳草购自青海隍中藏医院, 植物标本由中国科学院西北高原生物研究所黄荣福研究员鉴定, 植物标本 (ZY201201) 存于中国科学院兰州化学物理研究所甘肃省天然药物重点实验室。2 提取与分离取阴干圆穗兔耳草410 kg 粉碎, 用95% 医用酒精室温浸提3 次, 每次7 d, 减压浓缩至无醇味, 得到总浸膏 400 g, 加蒸馏水搅拌溶解稀释至约1 000mL , 分别用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取。减压回收溶剂后得到石油醚部分65 g、醋酸乙酯部分60 g、正丁醇萃取部分120 g。石油醚部分以160~ 200 目的硅胶拌样, 自然晾干, 研细。采用200~ 300 目硅胶 (700 g) 湿法上柱,
·733·中草药 Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs 第 39 卷第 3 期 2008 年 3 月
Ξ 收稿日期: 2007205216
基金项目: 中国科学院“知识创新工程”重要方向性项目 (KGCX22SW 2213) ; 甘肃省自然科学基金资助项目 (3ZS0512A 252077) ; 兰州理工
大学博士启动基金资助项目 (SB08200601)
作者简介: 杨爱梅, 女, 中国科学院兰州化学物理研究所博士, 现在兰州理工大学生命科学与工程学院任教, 主要从事天然药物化学
研究。3 通讯作者 师彦平 T el: (0931) 4968208 E2m ail: sh iyp@ lzb1ac1cn
依次用石油醚、石油醚2醋酸乙酯 (40∶1、20∶1、
15∶1、10∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1)、甲醇进
行梯度洗脱, 每500 mL 为1 流份。TL C 检查后合并
相同流份, 其中石油醚2醋酸乙酯 (40∶1) 洗脱部分
析出白色片状固体, 得到化合物É ; 石油醚2醋酸乙
酯 (20∶1)洗脱部分析出白色针状固体, 得化合物Ê
(38 m g)。
醋酸乙酯部分浸膏60 g, 以160~ 200 目的硅胶
拌样, 自然晾干, 研细。采用 200~ 300 目硅胶 (700
g ) 湿法上柱, 依次用石油醚2醋酸乙酯 (4∶0~ 0∶
1)、醋酸乙酯2甲醇 (1∶0~ 0∶1) 进行梯度洗脱, 每
500 mL 为 1 流份。TL C 检查后合并流份为 4 份
(F r11~ F r14)。F r11 析出黄色针状固体, 得化合物Î 的粗品, 经氯仿反复重结晶得到化合物Î (15
m g) ; F r12 析出黄色针状固体, 得化合物Ï 的粗品,
经氯仿反复重结晶得到化合物Ï (22 m g) ; F r13 析
出白色颗粒状固体, 得化合物Ë (50 m g)。F r14 (1
g ) 经过上硅胶色谱柱, 氯仿2甲醇 (30∶1) 反复色谱
分离后, 得到化合物Ì (20 m g)。
正丁醇部分浸膏上大孔吸附树脂柱, 分别用水
和甲醇洗脱除糖后得浸膏60 g, 进行硅胶 (200~ 300
目, 1 000 g ) 柱色谱分离, 湿法上柱, 氯仿2甲醇
(50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、7∶1、5∶1、3∶1、1∶
1、0∶1)梯度洗脱, 等份接样、薄层色谱检测、合并相
同部分, 得到多个部分 (F r11~ F r13)。F r11 部分 (3
g) 上硅胶 (200~ 300 目, 60 g) 柱, 醋酸乙酯2甲醇
(10∶1) 洗脱, 得到白色粉末状固体为化合物Ò (15
m g) ; F r12 部分 (515 g)上硅胶 (200~ 300 目, 100 g)
柱色谱分离, 氯仿2甲醇 (8∶1) 洗脱, 重复两次, 得到
白色粉末状固体化合物Í (10 m g) ; F r13 部分 (2 g)
上硅胶 (200~ 300 目, 50 g) 柱色谱分离, 氯仿2甲醇
( 10∶1) 洗脱, 得到两个部分 (F r13a, F r13b) ; F r13a
黄色粉末为化合物Ð ; F r13b ( 60 m g ) 上 C218 柱
(3 g) , 甲醇2水 (1∶3)洗脱, 得到化合物Ñ。
3 结构鉴定
化合物É : 白色片状晶体 (石油醚2醋酸乙酯) ,
E I2M S m öz : 366[M ]+ , 324, 295, 281, 267, 253, 197,
127, 85, 71, 57, 43 等, 显示了脂肪族链烃的裂解特
征。参考文献确定化合物É 为二十六烷[8 ]。
化合物Ê : 白色针状结晶, mp 138~ 140 ℃
(CDC l3)。IR ΜKB rm ax (cm - 1) : 3 419 (羟基) , 2 935, 2 848,
1 688, 1 666, 1 464, 1 381, 1 049, 红外光谱数据与Β2
谷甾醇对照品一致, 薄层色谱R f 值相同, 与对照品
混合熔点不下降, 确定该化合物为Β2谷甾醇。
化合物Ë : 白色粉末, mp 285~ 286 ℃ (分解) ,
L ieberm ann2Bu rchard 反应阳性。 13C2NM R 谱数据
显示有葡萄糖存在, 除此而外, 其它碳信号与Β2谷甾
醇的碳信号一致, 推断其为Β2谷甾醇的葡萄糖苷即
胡萝卜苷。13C2NM R谱数据与文献一致[9 ] , 最终确定
其为胡萝卜苷。
化合物 Ì : 白色颗粒状固体, 易溶于水,
13C2NM R谱有6 个碳, 是典型的糖信号。1H 2NM R谱
中 ∆ 4189 (1H , d, J = 810 H z, H 21) ; 13C2NM R (100
M H z, D 2O 2d2 ) ∆: 9212, 7213, 7310, 7015, 7119,
6112, 确定化合物Ì 为Α2D 2吡喃葡萄糖[10 ]。
化合物Í : 白色粉末, mp 153~ 156 ℃。FAB 2
M S: 347 [M + 1 ]+ , 结合1H 2NM R 谱、13C2NM R 谱和
D EPT 谱 推 出 分 子 式 为 C 15H 22O 9。1H 2NM R 和
13C2NM R 谱数据与文献一致[11, 12 ] , 确定其为桃叶珊
瑚苷。
化合物Î : 黄色针状晶体 (氯仿) , mp 235~
238 ℃, IR ΜKB rm ax (cm - 1 ) : 3 373, 1 721, 1 686, 1 662,
1 631, 1 380, 1 262, 1 125, 1 039, 992; ES I2M S
m öz : 579 [M + N a ]+ ; 结合 1H 2NM R、13C2NM R、
D EPT 推出分子式为C 32H 44O 8, 不饱和度为 11;
1H 2NM R ( 400 M H z, CDC l3 ) ∆: 0192, 0196, 1116,
1128, 1131, 1137, 1146, 1150, 6198 ( 1H , d, J = 16
H z, H 224) , 6140 ( 1H , d, J = 16 H z, H 223 ) , 5170
(1H , t, J = 214 H z, H 26) , 5188 (1H , d, J = 214 H z,
H 22) ; 13C2NM R (100 M H z, CDC l3 ) ∆: 11416 (C21) ,
14415 (C22) , 19817 (C23) , 4715 (C24) , 13617 (C25) ,
12013 (C26) , 2315 (C27) , 4116 (C28) , 5016 (C29) ,
3416 (C210) , 21219 (C211) , 4818 (C212) , 4811 (C2
13) , 4811 (C214) , 4515 (C215) , 7113 (C216) , 5811
(C217) , 1918 (C218) , 1813 (C219) , 7913 (C220) ,
2319 (C221) , 20214 (C222) , 12018 (C223) , 15119 (C2
24) , 7812 (C225) , 2518 (C226) , 2614 (C227) , 2916
(C228) , 2719 (C229) , 2012 (C230) , 17014 (C = O ) ,
2011 ( CH 3 ) ; 以 上 数 据 与 参 考 文 献 对 照, 其
1H 2NM R、13C2NM R谱数据一致[5, 13 ] , 确定其结构为
葫芦素E。
化合物Ï : 淡黄色针状结晶 (氯仿) , mp 183~
185 ℃, L ieberm ann 反 应 阳 性; IR、1H 2NM R 和
13C2NM R谱数据结合查阅文献, 确定化合物Ï 为葫
芦素B [14 ]。
化合物Ð : 黄色粉末 (氯仿2甲醇) , L ieberm ann
反应 阳 性; IR ΜKB rm ax ( cm - 1 ) : 3 500, 1 719, 1 700,
1 690; 1H 2NM R ( 400 M H z, A cetone2d6 ) ∆: 0189,
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1102, 1122, 1129, 1133, 1140, 1138, 1151, 1154, 6196
(1H , d, J = 16 H z, H 224) , 6180 (1H , d, J = 16 H z, H 2
23) , 5180 (1H , b rs, H 26) , 4132 (1H , d, J = 716 H z,
H 21′) ; 13C2NM R (100 M H z, A cetone2d6) ∆: 3412 (C2
1 ) , 8011 (C22) , 21216 (C23) , 4911 (C24) , 14111 (C2
5 ) , 12016 (C26) , 2511 (C27) , 3514 (C28) , 4817 (C2
9) , 4314 (C210) , 21315 (C211) , 4913 (C212) , 4911
(C213) , 5112 (C214) , 4612 (C215) , 7110 (C216) ,
5911 (C217) , 2114 (C218) , 1910 (C219) , 7912 (C2
20 ) , 2414 (C221 ) , 20317 (C222 ) , 12211 (C223 ) ,
15017 (C224) , 7914 (C225) , 2618 (C226) , 2414 (C2
27 ) , 2910 (C228) , 2119 (C229) , 1910 (C230) , 17018
(C = O ) , 2010 (CH 3 ) , 10411 (C21′) , 7510 (C22′) ,
7716 (C23′) , 7110 (C24′) , 7716 (C25′) , 6216 (C26′) ,
以上数据对照文献, 确定化合物Ð 为海绿甾苷É
(arven in É ) [15, 16 ] , 即葫芦素B 222O 2Β2D 2葡萄糖苷。
化合物Ñ : 白色无定形粉末,M o lish 反应呈阳
性, 遇 FeC l3 显浅绿色。mp 174~ 176 ℃, FAB 2M S
(m öz ) : 603 [M + N a ]+ , 结合 1H 2NM R、13C2NM R、
D EPT 推 出 分 子 式 为 C 28H 36O 13; 1H 2NM R ( 400
M H z,DM SO 2d6) ∆: 6166 (2H , s, H 22′, 6′) , 6164 (2H ,
s, H 22, 6) , 4187 ( 1H , d, J = 712 H z, H 21″) , 4165
( 1H , d, J = 4 H z, H 27) , 4160 (1H , d, J = 414 H z, H 2
7′) , 4117 (2H , t, J = 618 H z, H 29) , 3179 (2H , m , H 2
9′) , 3108 ( 1H , m , H 28) , 3105 ( 1H , m , H 28′) , 3174
( 6H , s, 3, 52OCH 3 ) , 3175 ( 6H , s, 3′, 5′2OCH 3 ) ,
13C2NM R ( 100 M H z, DM SO 2d6 ) ∆: 13711 (C21 ) ,
10411 (C22) , 15216 (C23) , 13317 (C24) , 15216 (C2
5 ) , 10411 (C26) , 8513 (C27) , 5316 (C28) , 7112 (C2
9) , 5610 (3, 52OCH 3 ) , 13113 (C21′) , 10316 (C22′) ,
14718 (C23′) , 13418 (C24′) , 14718 (C25′) , 10316 (C2
6′) , 8510 (C27′) , 5315 (C28′) , 7111 (C29′) , 5614 (3′,
5′2OCH 3 ) , 葡萄糖碳信号: 10216 (C21″) , 7411 (C2
2″) , 7711 (C23″) , 6919 (C24″) , 7614 (C25″) , 6019 (C2
6″) ; 以上数据, 结合文献确定化合物Ñ 为丁香树脂
酚2单2Β2D 2葡萄糖苷[17 ]。
化合物Ò : 白色无定形粉末 (氯仿2甲醇) ,M o l2
ish 反应呈阳性, 遇 FeC l3 显浅绿色。FAB 2M S: 527
[M + L i ]+ 和 543 [M + N a ]+ , 结 合 1H 2NM R、
13C2NM R 和 D EPT 推 定 分 子 式 为 C 26H 32O 11,
1H 2NM R (400 M H z, A cetone2d6) ∆: 7113 (1H , d, J =
814 H z, H 25) , 6198 (1H , d, J = 210 H z, H 22) , 6183
(1H , dd, J = 210, 814 H z, H 26) , 6178 (1H , d, J = 810
H z, H 25′) , 7103 ( 1H , d, J = 210 H z, H 22′) , 6188
( 1H , dd, J = 210, 810 H z, H 26′) , 4190 (1H , d, J =
716 H z, H 21″) , 4171 (1H , d, J = 410 H z, H 27) , 4167
( 2H , d, J = 414 H z, H 27′) , 4121 (2H , dd, J = 614,
814 H z, H 29) , 3179 (2H , m , H 29′) , 3109 (1H , m , H 2
8) , 3108 (1H , m , H 28′) , 3183 (3H , s, OCH 3 ) , 3181
(3H , s,OCH 3)。13C2NM R (100M H z,A cetone2d6) ∆:
13615 (C21) , 11015 (C22) , 14716 (C23) , 14915 (C2
4 ) , 11614 (C25) , 11819 (C26) , 8519 (C27) , 5415 (C2
8) , 7116 (C29) , 5517 ( 3, 52OCH 3 ) , 13312 (C21′) ,
11010 (C22′) , 14613 (C23′) , 14611 (C24′) , 11418 (C2
5′) , 11816 (C26′) , 8516 (C27′) , 5414 (C28′) , 7116 (C2
9′) , 5515 (3′, 5′2OCH 3 ) , 葡萄糖碳信号: 10117 (C2
1″) , 7317 (C22″) , 7617 (C23″) , 7013 (C24″) , 7710 (C2
5″) , 6117 (C26″) ; 以上数据与文献对照[18 ] , 确定化合
物Ò 为松脂素24′2O 2Β2D 2葡萄糖苷。
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