全 文 ：广西药用植物园 1～3 号样均采自植物园内的不同
植株 ,但 3 者的量差异也较大。这可能与喜树的生
长环境和树龄有关。
致谢 :试验所用部分样品分别由中国科学院昆
明植物研究所杨世雄研究员、四川省中药研究院舒
光明研究员、中国科学院广西植物研究所梁小燕副
研究员、广西药用植物园药用植物保育中心等采集
提供。
参考文献 :
[ 1 ] 　广西壮族自治区卫生厅. 广西中药材标准 [ M]1 南宁 :广西科 学技术出版社 , 19921[ 2 ] 　吴寿金 ,赵　泰 ,秦永琪. 现代中草药成分化学[ M ]1 北京 :中国医药科技出版社 , 20021[ 3 ] 　国家医药管理局中草药情报中心站1 植物药有效成分手册[ M ]1 北京 :人民卫生出版社 , 19861[ 4 ] 　周芳礼 ,黄瑞松 ,苏　青 ,等1 薄层扫描法测定不同产地喜树果中喜树碱的含量[ M ]1 华西药学杂志 , 2008 , 23 (5) : 6102612 1[ 5 ] 　蒋明廉 ,黄瑞松 ,吴　毅 ,等 1 TL CS 法对广西产喜树果中喜树碱含量动态积累的研究 [J ]1 中药材 , 2008 , 31 ( 5 ) :68426861[ 6 ] 　张丽艳 ,杨玉琴1 反相高效液相色谱法测定喜树果实中喜树碱的含量 [J ]1 中国中药杂志 , 1997 , 22 (4) : 23422351[ 7 ] 　张玉红 ,祖元刚1 不同产地和生长季节喜树叶中喜树碱含量测定 [J ]1 植物学通报 , 2003 , 20 (5) : 57225751
HPLC法测定鸭跖草中异荭草素
康明芹 ,赵士敏 ,杨卫萍 ,陆 　娟 ,金永日 ,李绪文
①
(吉林大学化学学院 ,吉林 长春 　130012)
摘 　要 :目的 　建立鸭跖草中异荭草素的定量测定方法 ,为鸭跖草质量标准的建立提供科学依据。方法 　采用反
相高效液相色谱法。色谱柱 :ZORBAX EXTEND C18柱 (250 mm ×4. 6 mm ,5μm) ,流动相 :乙腈20. 1 %磷酸 (15 ∶
85) ,检测波长 :350 nm。结果 　线性良好 ,异荭草素平均加样回收率为 99. 98 % ,RSD 为 1. 62 %。结论 　本方法准
确、简便 ,精密度和分离度良好 ,可用于测定鸭跖草药材中异荭草素的量。
关键词 :鸭跖草 ;异荭草素 ;高效液相色谱
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120140202
　　鸭跖草是鸭跖草科 (Commelinaceae) 植物鸭跖
草 Com mel i na com m unis L . 的干燥地上部分 ,具有
清热解毒、利水消肿之功效 ,用于风热感冒、高热不
退、咽喉肿痛、水肿尿少、热淋涩痛、痈肿疔毒等
症[1 ] ,华东、华北、西南均有分布。2005 年版《中国
药典》收载了该品种 ,但尚无定量测定的指标。文献
报道鸭跖草中主要含有鸭跖黄酮苷、木栓酮、黑麦芽
内酯、β2谷甾醇、12carbomet hoxy2carboline、花色苷、
正十三烷醇、对羟基桂皮酸、胡萝卜苷、D2甘露醇及
异荭草素 ,其中异荭草素的量较高[2 ] 。本实验利用
H PL C 法测定了鸭跖草中异荭草素的量 ,其研究结
果可为鸭跖草质量标准建立提供定量测定指标。
1 　仪器与试药
　　仪器 : Agilent 1200 series 高效液相色谱仪 ;
G1310A 四元泵 , G1322A 在线脱气机 , G1316A 柱
温箱 , G1314B 紫外可见检测器 ,配备 Agilent 1200
色谱工作站。
试剂 :乙腈 (色谱纯 ,山东禹王集团) ,水为重蒸馏
水 ,磷酸 (色谱纯 ,山东禹王集团) ,异荭草素对照品为
自制 ,并经 UV、IR、1 H2NMR、13 C2NMR、MS 等光谱
鉴定确认其结构 ,按本方法色谱条件 ,归一化测得其
质量分数大于 99. 9 %。实验所用药材采自吉林省长
春市郊区 ,系野生鸭跖草 ,经长春中医药大学邓明鲁
教授鉴定为鸭跖草 Commelina communis L. 。
2 　方法与结果
2. 1 　色谱条件 :色谱柱为 ZORBA X EXTEND C18
柱 (250 mm ×4. 6 mm ,5μm) ,流动相 :乙腈20. 1 %
磷酸 (15 ∶85) ,体积流量 : 1. 0 mL/ min ; 柱温 : 25
℃;检测波长 :350 nm ;进样量 :5μL 。在该条件下 ,
异荭草素与其他组分色谱峰的分离度大于 1. 5 ,色
谱图见图 1。
2. 2 　对照品溶液的制备 :精密称取干燥的对照品异
荭草素 20. 0 mg ,置于 50 mL 量瓶中 ,加适量甲醇溶
解并定容至刻度 ,摇匀。精密移取上述标准溶液
·041· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008206219
基金项目 :吉林省科技厅项目 (20060903)
作者简介 :康明芹 (1982 —) ,女 ,山东滨州市人 ,硕士研究生 ,研究方向为天然产物化学成分及质量控制。
Tel :13504338478 　E2mail :mqkang @yahoo. cn3 通讯作者　李绪文　Tel : (0431) 85628012 　E2mail :xwli @jlu. edu. cn
3 2异荭草素3 2isoorientin
图 1 　异荭草素对照品( A)和鸭跖草样品( B)的
HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of isoorientin reference
substance ( A) and C. communis sample ( B)
5 mL于 25 mL 量瓶中 ,再用甲醇稀释至刻度。
2. 3 　供试品溶液的制备 :精密称取干燥的鸭跖草粉
末 2. 0 g 置于 250 mL 圆底烧瓶中 ,每次加入 70 %
的乙醇水溶液 40 mL ,分别加热回流 3 次 ,回流时间
分别为 2、115、1 h。合并 3 次提取液 ,滤过 ,减压回
收溶剂至干 ,加入甲醇溶解 ,定容到 25 mL 量瓶中 ,
经 0. 45μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,备用。
2. 4 　标准曲线绘制 :精密称取异荭草素对照品
20. 0 mg ,置于 50 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解制成0140
mg/ mL 的对照品储备液。分别精密移取对照品储
备液 1. 0、2. 5、5. 0、7. 5、12. 5 mL 于 25 mL 量瓶中 ,用
甲醇稀释至刻度 ,摇匀。分别精密吸取上述 6 个对照
品溶液 5. 0μL ,进样 ,以峰面积为纵坐标 ( Y) ,对照品
进样量为横坐标 ( X)绘制标准曲线 ,回归方程为 Y =
2 271 . 702 6 X - 2 ( n = 6) , r = 0. 999 8。结果表明 ,
在 0. 08～1. 00μg 异荭草素进样量 ( X) 与峰面积
( Y) 呈良好的线性关系。
2. 5 　精密度试验 :吸取同一质量浓度对照品溶液 ,
在上述色谱条件下连续进样 6 次 ,测得对照品峰面
积的 RSD 为 0. 42 %( n = 6) 。
2. 6 　稳定性试验 :取同一份供试品溶液 ,分别对其
在 0、2、4、6、8、10、12 h 进行分析 ,异荭草素峰面积
的 RSD 为 0. 38 %( n = 6) ,表明供试品溶液在 12 h
内稳定性良好。
2. 7 　重现性试验 :精密称取干燥的同一批鸭跖草粉
末 6 份 ,依据供试品溶液的制备方法制备样品液 ,分
别进样 5. 0μL ,测得异荭草素峰面积 ,计算其质量
分数 RSD 为 1. 40 %( n = 6) 。
2. 8 　加样回收率试验 :精密称取干燥的鸭跖草粉末
6 份 ,每份 1. 000 0 g ,分别加入 7 mg/ mL 的异荭草
素对照品溶液 1 mL ,即加入异荭草素 0. 7 mg ,按供
试品溶液制备的方法制备样品液 ,分别进样 5. 0
μL ,测得异荭草素的峰面积 ,计算其平均回收率为
99. 98 % ,RSD 为 1. 62 %( n = 6) 。
2. 9 　样品的测定 :分别将对照品溶液和 6 批供试品
溶液各 5. 0μL 注入高效液相色谱仪 ,记录色谱图 ,
按外标法以峰面积计算样品中异荭草素的量。测得
结果见表 1 ,6 批样品中异荭草素的平均质量分数为
0. 703 9 mg/ g。
表 1 　鸭跖草中异荭草素的测定结果( n = 3)
Table 1 　Determination of isoorientin in C1 communis ( n = 3)
样品批次 异荭草素/ (mg ·g - 1) 样品批次 异荭草素/ (mg ·g - 1)
1 0. 696 8 4 0. 696 8
2 0. 719 3 5 0. 705 5
3 0. 694 0 6 0. 711 0
3 　讨论
3. 1 　提取方法的选择 :在供试品的制备过程中 ,先
后分别比较了 20 倍甲醇、70 %甲醇、50 %甲醇、乙
醇、70 %乙醇、50 %乙醇加热回流提取的效果 ,结果
70 %乙醇回流提取率最高。本实验还考察了提取次
数和提取时间 ,结果表明 ,提取 4 次 ,每次提取时间
分别为 2、1. 5、1、1 h ,第 4 次提取物中已经检测不到
异荭草素 ,说明提取 3 次已经提取完全。
3. 2 　流动相的选择 :异荭草素系碳苷类黄酮 ,色谱
峰易拖尾 ,所以在流动相中加入 1 %的磷酸。本实
验考察了甲醇2水、甲醇2醋酸水、乙腈2醋酸水系统 ,
结果以乙腈20. 1 %磷酸 (15 ∶85)分离效果最好。
3. 3 　本测定方法可以准确、便捷地测定鸭跖草中异
荭草素的量 ,化合物异荭草素能达到基线分离 ,重现
性及回收率好 ,结果可靠。本实验方法及其结果可
为鸭跖草质量标准的建立提供科学依据。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典[ S]1 一部1 20051
[ 2 ] 　中药大辞典[ M ]1 上海 :上海科学技术出版社 ,19861
·141·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月