全 文 ：cm- 1 : 3 347、2 946、2 848、1 655、1 614、1 507、1
466、1 360、1 264、1 170、1 120、836。1H
NMR
( DM SO)
: 7 33( 2H , s, H
2
, H
6
) , 6 98( 1H , s,
H
3) , 6 59( 1H , d, J = 2 0 Hz, H
8) , 6 23( 1H , d,
J= 2 0 Hz, H
6) , 3 89 ( 6H , s,
OCH 3  2) ; 13 C

NMR( DMSO )
: 181 7( C
4) , 163 8 ( C
2) , 163 6
( C
7) , 161 0 ( C
9) , 157 3 ( C
5) , 148 0 ( C
3
, C

5
) , 139 7( C
4
) , 120 4( C
1
) , 104 1( C
2
, C
6
) ,
104 0( C
10) , 103 6( C
3) , 98 6( C
6) , 94 2( C
8) ,
56 2(
OCH 3  2)。以上数据与对照品所测得数据
相同,因此确定所制备的供试品为苜蓿素。
3 讨论
苜蓿素为多种禾本科植物的共有成分, 在竹根
量较高,性质稳定,用上述制备方法进行提取、分离、
纯化,操作方便,重现性好, 符合对照品的质量分数
要求,因而可作为对照品使用,供竹根药材及禾本科
植物的定性、定量分析;也可为从其他原料中提取苜
蓿素对照品提供工艺参考。
苜蓿素为黄酮类化合物, 为了在增大提取效率
的同时尽量减少其他组分的引入, 通过 TLC、HPLC
法对比水、不同体积分数的乙醇提取液的色谱峰, 并
对比石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取物的色谱
峰,结果用 80%乙醇提取后用醋酸乙酯萃取的选择
性较好,进而对提取时间和提取次数进行了优化,确
定了本实验的条件,使苜蓿素的制备收率提高。
提取后的样品通过硅胶柱色谱处理, 可以去除
样品中大量的杂质, 并通过 50% 乙醇溶液重结晶,
此时可以得到粗品, 质量分数可达 91%, 但仍含有
多种杂质,需进一步纯化。曾将硅胶柱色谱后得到
的苜蓿素粗品进行制备薄层色谱制备, 得到苜蓿素
结晶,但质量分数仍达不到对照品的要求。故选择
制备高效液相色谱分离纯化,既减少了样品的损耗,
又提高了制备的效率。
本研究采用 HPLC/ DAD/ ELSD串联检测制备
所得供试品的质量分数, 利用 DAD 与 ELSD 性能
上的互补,一次进样即可得到样品紫外光谱图、峰质
量分数等信息。
参考文献:
[ 1] 吴燕红,张锐,王少军,等 竹根化学成分的研究( ! ) [ J] 时
珍国医国药, 2009, 20(10) : 2404
2405
[ 2] 张 锐,徐 彭,吴艳红 竹根的化学成分研究( ∀ ) [ J] 中草
药, 2009, 40( 12) : 1856
1858
[ 3] Verschoyle R D, Greaves P, Cai H , et al Prelim inary safety
evaluat ion of th e pu tat ive can cer chemoprevent ive agent t ricin ,
a naturally occu rring f lavone [ J ] Cance r Chemoth er Phar

macol , 2006, 57( 1) : 1
6
HPLC法测定甘遂及其醋制品中 3种二萜类成分
张 丽, 李征军,束晓云,唐于平, 丁安伟* ,段金廒
收稿日期: 2010
05
06
基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30672678, 30973940) ;国家教育部# 新世纪优秀人才支持计划∃ ( NCET
09
0163) ;江苏省中医药
管理局课题( H 05075) ; 江苏高等学校优秀科技创新团队支持计划( 2009年度)
作者简介:张 丽( 1971 % ) ,女,辽宁大连人,博士,主要研究方向为中药炮制与质量控制。 E
mail : zhangliguanxiong@ 163 com
* 通讯作者 丁安伟 E
mail: aw ding105@ 163 com
(南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室, 江苏 南京 210046)
摘 要:目的 测定甘遂与醋甘遂饮片中 3种二萜类成分。方法 采用 H PLC 法, 分别在 235 nm 和 268 nm 测定
了甘遂和醋甘遂饮片中甘遂大戟萜酯 C、3
O
苯甲酰基
20
去氧巨大戟二萜醇和 3
O
( 2
E, 4
Z
癸二烯酰基)
20
O

乙酰基巨大戟二萜醇。结果 甘遂大戟萜酯 C、3
O
苯甲酰基
20
去氧巨大戟二萜醇和 3
O
( 2
E, 4
Z
癸二烯酰
基)
20
O
乙酰基巨大戟二萜醇的进样量分别在 1 636~ 0 052 g ( r= 0 999 8) , 1 458~ 0 046 g ( r= 0 999 6)和
1 782~ 0 056g ( r= 0 999 6)呈良好的线性关系,平均回收率分别为 98 96% ( RSD= 2 71% )、99 21% ( RSD=
2 88% )、96 44% ( RSD= 2 78% )。结论 该法简便、快速、准确,重现性好, 可用于甘遂与醋甘遂饮片的质量控制。
关键词:甘遂; 醋甘遂;甘遂大戟萜酯 C; 3
O
苯甲酰基
20
去氧巨大戟二萜醇; 3
O
( 2
E, 4
Z
癸二烯酰基)
20
O
乙
酰基巨大戟二萜醇
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 1987 04
甘遂为大戟科大戟属植物甘遂 Euphor bia kansui
T N Liou ex T P Wang 的干燥块根 [ 1] ,别名主
田、猫儿眼、黄甘遂、京甘遂、苦泽、甘泽、白泽、肿手
花根、重泽、鬼丑、陵泽、甘藁、陵藁、化骨丹、萱根子、
&1987&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
头痛花、九头狮子草等[ 2] ,主产于陕西、山西、河南、
山东、宁夏等地,其中以陕西产者质量最佳[ 3]。甘遂
性味苦、寒, 有毒, 归肺、肾、大肠经, 醋制后毒性降
低,多入丸散用, 具有泻水饮, 破积聚, 通二便等功
效,常用于治水肿胀满,留饮, 结胸,癫痛、噎隔,症疲
积聚、二便不通等症。中医用来治疗晚期食道癌、乳
腺癌等恶性肿瘤以及哮喘、慢性支气管炎等症 [ 4]。
甘遂中的二萜类成分为其毒效部位 [ 4
6] ,因此本实验
以分离所得的甘遂大戟萜酯 C ( kansuipho rin C,
KC)、3
O
苯甲酰基
20
去氧巨大戟二萜醇 ( 3
O

benzoy l
20
deoxyingeno l, 3
BDI)和 3
O
( 2
E, 4
Z

癸二烯酰基)
20
O
乙酰基巨大戟二萜醇( 3
O
( 2
E,
4
Z
decadienoy l)
20
O
acety ling enol, 3
DAI )为指
标性成分,建立了甘遂及醋甘遂饮片中有效成分的
HPLC测定方法,以期为甘遂与醋甘遂饮片的质量
控制提供依据。
1 仪器与试药
Waters515型液相色谱泵、Waters2996 紫外检
测器、Waters717 自动进样器、Empow er 数据处理
系统、红外测温仪 ( AZ8868)、AY220 型电子天平
(精确到 0 1mg)、BP211D型电子天平(精确到 0 01
mg)、万能粉碎机(天津泰斯特)。
KC ( 自 制, HPLC 法 测 定 质 量 分 数 为
98 10%)、3
BDI (自制, HPLC 法测定质量分数为
98 05%)和 3
DA I (自制, HPLC 法测定质量分数
为 98 01%)。甲醇 (色谱纯)、乙腈(色谱醇, 美国
Tedia公司) ,水为重蒸水, 其余试药均为分析纯。
生甘遂饮片 10批(陕西产编号 1、2、3、4 批, 山
西产编号 5、6批,河南产编号 7、8 批, 市场统货 9、
10批) ,醋甘遂饮片(陕西产编号 1、0、3、4批, 山西
产编号 5、6批,河南产编号 7、8 批, 市场统货 9、10
批) , 炮制品 9、10批直接购自市场,其余均由生品按
炮制规范的标准工艺炮制。甘遂药材分别购自安徽
省亳州市药材总公司、无锡山禾集团靖江医药有限
公司、南京中医药大学百草堂、国医堂门诊部, 并经
本院中药鉴定教研室王春根教授鉴定为大戟科大戟
属植物甘遂 Euphor bia kansui TN Liou ex T P
Wang 的块根,见表 1。
2 方法与结果
2 1 炮制品的制备
2 1 1 生甘遂饮片:取生甘遂数个,除去杂质,抢水
冲洗, 50 ∋ 热风干燥, 密封于塑料袋中于阴凉干燥
处放置,备用。
2 1 2 醋甘遂饮片:取生甘遂数个,大小分档,加醋
表 1 生甘遂药材的采集情况
Table 1 Collection case of Kansui Radix
批号 产 地 购买来源
1 陕西 安徽省亳州市药材总公司
2 陕西 安徽省亳州市药材总公司
3 陕西 安徽省亳州市药材总公司
4 陕西 安徽省亳州市药材总公司
5 山西 无锡山禾集团靖江医药有限公司
6 山西 无锡山禾集团靖江医药有限公司
7 河南 南京中医药大学百草堂
8 河南 南京中医药大学百草堂
9 市场统货 国医堂门诊部
10 市场统货 国医堂门诊部
拌匀,闷透, 待醋被吸尽后, 将炒锅加热到 260 ∋ 左
右,不断翻炒, 9 min后出锅,放凉,即可。每 100 kg
用醋 30 kg。醋制品颜色加深,略有焦斑。
2 2 色谱条件: Apo llo C18色谱柱 ( 200 mm  4 6
mm, 5 m) ; 流动相:甲醇( A)
水( B)二元梯度洗脱,
0~ 26 m in, A 为 75% ; 26~ 28 min, A 为 75% (
83 0% ; 28~ 52 min, A 为 83%; 52~ 55 m in, A 为
83% ( 100% ; 55~ 65 min, 100%; 65~ 70 m in, A 为
100% ( 75%; 体积流量: 1 0 mL/ min, 检测波长分
别为 235 nm( KC、3
BDI)和 268 nm( 3
DAI) ,柱温:
38 ∋ ,进样量 20 L。理论塔板数按 KC 峰计算不
得低于 3 000。色谱图见图 1。
2 3 对照品溶液的制备:分别精密称取 50 ∋ 减压
干燥至恒重的 KC 对照品 7 58 mg , 3
BDI 对照品
6 75 mg 和 3
DAI 对照品 8 23 mg ,分别置 25 mL
量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为对照
品储备液。再分别精密量取上述 3种对照品储备液
2 7 mL 置 10 mL 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇
匀,即得含 KC 81 8 g/ mL, 3
BDI 72 9 g/ mL, 3

DA I 89 1 g / mL 的 1 号混合对照品溶液(总二萜
类成分质量浓度为 0 243 8 mg / mL)。
2 4 供试品溶液的制备:取甘遂饮片与醋甘遂饮片
粉末约 2 g, 精密称定,置 25 mL 具塞锥形瓶中, 精
密加入甲醇 10 mL, 称定质量, 超声处理(功率 250
W, 频率 50 kHz)处理 30 m in,放冷, 再称定质量,用
甲醇补足损失的质量, 摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2 5 线性关系考察:精密量取 1号混合对照品溶液
5 mL 置 10 mL 量瓶中,加甲醇至刻度, 摇匀, 得 2
号混合对照品溶液,同法采用逐级稀释法制得 3~ 6
号混合对照品溶液。分别精密吸取上述各混合对照
品溶液 20 L,注入高效液相色谱仪, 按外标法以峰
面积计算,以各对照品峰面积为纵坐标,质量浓度为
横坐标,绘制标准曲线, 得 KC、3
BDI、3
DAI 回归方
程为: Y= 29 041 450 43 X- 34 834 ( r= 0 999 8) ;
&1988& 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
1
甘遂大戟萜酯 C ( KC) 2
3
O
苯甲酰基
20

去氧巨大戟二萜醇 ( 3
BDI) 3
3
O
2
E, 4
Z

癸二烯酰基
20
O
乙酰基巨大戟二萜醇 ( 3
DAI)
1
kansuiphorin C ( KC) 2
3
O
b enzoyl
20
deoxyingenol
( 3
BDI) 3
3
O
( 2
E , 4
Z
decadien oyl )
20
O
acetylingenol
( 3
DAI)
图 1 对照品( A)、甘遂饮片( B) 和醋甘遂饮片( C)的
HPLC图谱
Fig 1 HPLC Chromatogram reference substance ( A) ,
Kansui Radix ( B) , and Kansui Radix
stir
baked with vinegar ( C)
Y= 38 955 942 05 X - 964 83 ( r= 0 999 6) ; Y=
27 107 778 45 X- 45 770( r= 0 999 6)。结果表明
各成分进样量分别在 0 052 ~ 1 636、0 046 ~
1 458、0 056~ 1 782 g 呈良好的线性关系。
2 6 精密度考察: 在上述色谱条件下, 以 3号混合
对照品溶液 ( 总二萜类成分质量浓度为 60 95
g/ mL)为考察对象, 依法测定, 连续进样 6 次, 得
KC、3
BDI和 3
DAI 3种成分峰面积的 RSD分别为
1 07%、1 08%、1 09%。
2 7 重现性试验: 取批号为 9号的醋甘遂饮片, 依
法处理 6份,依法测定,结果表明供试品中 KC 的平
均质量分数为 376 6 g / g, RSD 为 2 35% ; 3
BDI
的平均质量分数为 40 4 g/ g, RSD 为 1 46%; 3

DAI 的平均质量分数为 333 0 g/ g, RSD 为
2 23%。
2 8 稳定性试验:取批号为 9号的同一份醋甘遂饮
片供试品溶液, 在上述色谱条件下, 分别于 0、4、8、
12、16、20、24 h进样测定, 得 KC、3
BDI和 3
DAI 3
种成分峰面积的 RSD 分别为 2 85%、2 39%、
2 69%。
2 9 加样回收率试验:取批号为 9号的醋甘遂粉末
品 6份,每份各 1 g,精密称定,分别精密加入 KC对
照品储备液 1 2 mL、3
BDI 对照品储备液 0 16 mL
和 3
DAI 对照品储备液 1 0 mL, 依法测定, 计算,
得 KC 的加样回收率为 98 96%, RSD为 2 71%; 3

BDI的加样回收率为 99 21%, RSD 为 2 88% , 3

DA I的加样回收率为 96 44% , RSD为 2 78%。
2 10 样品测定: 分别对 10批甘遂和醋甘遂饮片制
备供试品溶液, 进行测定, 并以外标一点法进行计
算,结果见表 2。
表 2 甘遂和醋甘遂饮片中有效成分的测定结果( n= 2)
Table 2 Determination of active compoents
in Kansui Radix and Kansui Radix
stir
baked with vinegar ( n= 2)
批 号 KC/ ( mg& g - 1 ) 3
BDI/ (mg& g - 1 ) 3
DAI/ (mg& g - 1)
甘遂 1 0 361 6 0 049 2 0 194 3
2 0 427 0 0 026 2 0 197 5
3 0 395 7 0 033 6 0 405 4
4 0 383 4 0 033 9 0 394 8
5 0 576 5 0 069 1 0 326 6
6 0 572 9 0 068 5 0 326 2
7 0 248 3 0 027 6 0 105 7
8 0 263 9 0 031 1 0 108 7
9 0 444 9 0 041 6 0 160 0
10 0 439 2 0 039 9 0 158 3
醋甘遂 1 0 197 7 0 025 0 0 099 7
2 0 198 4 0 023 1 0 098 9
3 0 226 7 0 033 6 0 240 2
4 0 226 1 0 033 6 0 236 3
5 0 223 8 0 032 0 0 237 0
6 0 123 4 0 025 6 0 129 6
7 0 117 1 0 025 2 0 130 7
8 0 405 2 0 057 5 0 357 1
9 0 376 6 0 040 4 0 333 0
10 0 288 8 0 025 2 0 377 4
结果表明,各产地甘遂饮片的二萜类成分有较
大差异, KC 的范围为 0 025% ~ 0 058%; 3
BDI 的
范围 为 0 003% ~ 0 007% ; 3
DAI 的 范 围为
0 011% ~ 0 041%。各产地醋甘遂饮片 KC 的范围
0 012% ~ 0 041% ; 3
BDI 的 范 围 0 002% ~
0 006% ; 3
DAI 的范围为 0 010% ~ 0 038%。结
果表明,不同产地的甘遂中二萜类的成分差别较大,
应用时为保证质量应注意产地。
3 讨论
对色谱柱温的考察结果表明, 因甘遂中二萜类
成分较多,若柱温较低, 则分离效果较差, 因此色谱
柱温选择 38 ∋ 。
&1989&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
实验过程中选择了 3种流动相系统甲醇
水、乙
腈
水、乙腈
水( 0 05% TFA)进行梯度洗脱,对流动
相的考察结果表明甲醇
水系统与乙腈
水系统差别
不大,从实验成本角度考虑, 选择了较为经济的甲
醇
水系统。
实验选择了索氏提取法、回流提取法和超声提
取法 3种提取方法进行提取方式的考察。结果表明
超声提取法优于其他两种提取方法。同时对超声时
间的考察结果表明, 超声 30、45、60 min的提取能力
无显著性差异,故超声时间确定为 30 min。
参考文献:
[ 1] 吴晓磊,潘 勤 甘遂化学成分的研究 [ J ] 中草药, 2010, 41
( 6) : 877
881
[ 2] 刘道清 中药别名大辞典[ M ] 郑州:中原农民出版社, 1999
[ 3] 权宜淑 中药甘遂的本草调查[ J ] 西北药学杂志, 1994, 12
( 9) : 255
257
[ 4] 王立岩 甘遂的化学成分及其生物活性的研究[ D] 沈阳: 沈
阳药科大学, 2003
[ 5] 郑维发 甘遂提取物抗病毒活性成分及其毒性研究 [ D] 南
京:南京中医药大学, 1998
[ 6] 张 耀,汪俊松,孔令义 甘遂烷型三萜的研究进展[ J] 中草
药, 2010, 41( 10) : 1733
1739
黄柏生物碱大孔树脂纯化工艺研究
刘丽梅1 , 陈 琳1 , 王瑞海1 ,陈韩英2 ,杨立新3 ,牛燕梅1 ,刘凤华4 ,许剑琴5
收稿日期: 2010
02
27
基金项目:北京市科技计划课题( Y0705003041631)
作者简介:刘丽梅( 1965 % ) ,女,黑龙江人,副研究员,从事中药研究及中医方证基础研究。
T el : ( 010) 64014411
2592 E
mail: liulimeihrb@ sina com
( 1 中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700; 2 石河子大学药学院, 新疆 石河子 832000; 3 中国中医科学院
中药研究所,北京 100700; 4 北京农学院 动物科技系,北京 102206; 5 中国农业大学动物医学院,北京 102206)
摘 要:目的 筛选黄柏总生物碱大孔树脂纯化工艺。方法 对黄柏总生物碱提取液纯化所用大孔树脂型号、洗
脱剂体积分数、大孔树脂吸附容量、上柱药液 pH 值、上柱速度、洗脱剂用量、洗脱剂流速、洗脱液浓缩质量浓度、洗
脱液浓缩后 pH 值进行考察。结果 黄柏总生物碱大孔树脂纯化最佳工艺:大孔树脂载样量为 AB
8 大孔树脂 )
黄柏药材= 1) 1 2( g/ g ) , 上样速度为 2 BV/ h, 50%乙醇洗脱, 速度 1 5 BV / h,收集 6BV 洗脱液,回收乙醇,浓缩至
1 5 g 生药/ mL ,其相对密度为 1 015~ 1 017( 70 ∋ ) , 放置室温, 浓盐酸调节 pH 0 2~ 0 4, 冷藏放置 12 h, 离心,
沉淀低温减压干燥,得黄柏总生物碱。提取物中盐酸小檗碱质量分数达到 57 38% , 黄柏总生物碱质量分数达到
59 04%。结论 该工艺稳定,质量可控,可用于柏总生物碱纯化的产业化生产。
关键词:黄柏; 总生物碱;大孔树脂; 纯化
中图分类号: R284. 2; R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 1990 04
黄柏为芸香科植物黄皮树 Phel lod endr on
chinense Schneid 的干燥树皮,习称川黄柏,具有清
热燥湿、泻火除烦、解毒疗疮等功效 [ 1]。黄柏中含有
多种生物碱,主要为小檗碱,还有巴马汀、药根碱、黄
柏碱、蝙蝠葛碱、白瓜蒌碱、木兰花碱等生物碱 [ 2]。
资料表明黄柏生物碱具有抗溃疡及抗腹泻作用, 对
免疫功能具有调节作用 [ 2] , 是本课题组提取的有效
部位。前期研究确定了黄柏总生物碱提取工艺 [ 3] ,
本实验采用大孔树脂纯化, 使黄柏总生物碱大于提
取物的 50%。
1 仪器和材料
SPS202 Ohaus 电子天平 (梅特勒
托利多 (常
州)称重设备系统有限公司) , Startor ius CP 2250天
平(德国) , T6紫外可见分光光度计(北京普析通用
仪器设备有限公司) , WAT ERS % 717 % 2487 高效
液相色谱仪。紫外灯(上海精科实业有限公司)。
AB
8、D4020、S
8大孔树脂(天津南开大学化
工厂) , 860021、DM
130、CD
180、D001
SD 大孔树
脂(山东鲁抗医药股份有限公司) ,医用酒精(挚友酒
精厂) , 氯仿、甲醇、氨水均为分析纯。薄层色谱板
(烟台市化学工业研究所)。
黄柏药材购自河北安国, 经中国中医科学院中
药所冯学峰研究员鉴定为芸香科植物黄皮树 Phel

lod end ron chinense Schneid 的干燥树皮,其盐酸小
檗碱的质量分数为 3 65%。
2 方法与结果
2 1 盐酸小檗碱的 HPLC测定方法的建立 [ 1]
2 1 1 色谱条件:色谱柱Water s C18柱( 250 mm 
4 6 mm, 5 m) ; 流动相:乙腈
0 1%磷酸溶液( 50)
50) (每 100 mL 加十二烷基磺酸钠 0 1 g ) ; 检测波
&1990& 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月