全 文 ：粉防己碱阿霉素脂质体的制备与体外释放度的研究
潘 　峰 ,胡春梅 ,潘黎军 ,王 　驰 3
(重庆医科大学药学院 ,重庆 　400016)
摘 　要 :目的 　以阿霉素和粉防己碱为模型药物制备脂质体并进行工艺研究 ,同时对该脂质体进行体外释放度的
研究。方法 　采用 3 种不同脂质体制备方法 ,并以包封率为指标采用正交设计法进行处方筛选和工艺优化。结果
确定了硫酸铵梯度法结合 p H 梯度法制备脂质体的最佳制备处方为 :药脂比为 1 ∶20 ,磷脂与胆固醇质量的比例为
3 ∶1、外水相 p H 值为 716 ,孵育温度 50 ℃、硫酸铵浓度为 250 mmol/ L 。释放度试验显示脂质体中阿霉素和粉防
己碱分别在 24 h 和 16 h 内完全释放。结论 　制备的粉防己碱阿霉素脂质体包封率及外观良好 ,具有一定的缓释
效果。
关键词 :粉防己碱阿霉素脂质体 ;硫酸铵 p H 梯度法 ;释放
中图分类号 :R28316 ;R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220215206
Preparation of tetrandrine2doxorubicin complex l iposomes and its release property in vit ro
PAN Feng , HU Chun2mei , PAN Li2jun , WAN G Chi
(College of Pharmacy , Chongqing University of Medical Sciences , Chongqing 400016 , China)
Abstract : Objective 　Selecting doxorubicin and tet randrine as model drug to p repare complex lipo2
somes , study t he met hods of p reparation , and research it s release p roperty i n vi t ro. Methods 　The formu2
lation of tet randrine2doxorubicin complex liposomes was optimized by t hree different kinds of methods.
And t he optimum formula was selected t hrough t he ort hogonal test according to the ent rap ment efficiency.
Results 　Tet randrine2doxorubicin complex liposomes were prepared by (N H4 ) 2 SO42gradient method com2
bined wit h p H gradient met hod. One optimum recipe was founded that tet randrine2doxorubicin complex li2
posomes/ egg p hosp hatidyl choline was 1 ∶20 , egg p hosp hatidyl choline/ cholesterol was 3 ∶1 , p H value
was 716 , incubation temperat ure was 50 ℃, concent ration of (N H4 ) 2 SO4 was 250 mmol/ L . The doxorubi2
cin completely released within 24 h , and t he tet randrine released wit hin 16 h. Conclusion 　Tet randrine2
doxorubicin complex liposomes have high ent rap ment efficiency wit h fine2looking , which is bet ter for t he
f urther studies
Key words : tet randrine2doxorubicin complex liposomes ; (N H4 ) 2 SO42p H gradient met hod ; release
　　粉防己碱是千金藤属防己科植物粉防己
S tep hani a tet rand ra S. Moore 的主要活性成分 ,化
学结构属于双苄基异喹啉类化合物。粉防己碱具有
抑制肿瘤细胞生长、放疗增敏、减轻放、化疗毒性反
应、逆转肿瘤细胞多药耐药等多种作用 ,在肿瘤治疗
中展现广泛的应用前景[1 ] 。粉防己碱能逆转多种耐
药细胞株的耐药 ,逆转作用明显优于维拉帕米以及
其他中药单体[ 2 ] ,且毒性较低。还能够逆转多药耐
药的粉防己碱与阿霉素制成复合脂质体 ,不仅降低
了阿霉素的毒性 ,而且由于脂质体可以提高渗透性
与停滞的效果 ,使其能够达到被动靶向的作用 ,增加
药物在实体瘤上的蓄积 ,从而用低于常规化疗剂量
可达到相同的化疗效果。因此本实验将粉防己碱与
阿霉素同时装载于脂质体中 ,制成可逆转多药耐药
脂质体 ,并经过试验筛选 ,确定了硫酸铵梯度法合并
p H 梯度法制备复合脂质体 ,并对其进行了稳定性
与体外释放度的研究。
1 　仪器与材料
1100 高效液相色谱仪、1100 检测器及色谱数据
处理系统 (美国 Agilent ) ,Sartorius BS210S 电子天
平 (德国 Sartorius 公司) , KQ2200B 超声波清洗仪
(昆山市超声仪器有限公司) ,W H - 1 型旋涡仪 (上
海沪西分析仪器厂) ,p HS - 3C 型精密酸度计 (上海
雷磁仪器厂) 。
粉防己碱原料药为实验室自制 ,质量分数为
98 % ,阿霉素原料药由浙江海正药业股份有限公司
提供 ,胆固醇 (广州天马精细化工厂) ,卵磷脂 (上海
国药集团化学试剂有限公司 ) , PBS 缓冲液 (p H
·512·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008206206　　　
作者简介 :潘　峰 (1983 —) ,女 ,重庆人 ,重庆医科大学药学院生物制药与生物医用材料在读硕士研究生 ,主要研究方向为靶向药物制剂。
E2mail : ppff2034 @163. com
* 通讯作者　王　驰　Tel : (023) 68485578 　E2mail : wchi639 @sohu. com
714) (自制) , Sep harose CL24B ( Sigma 公司) ,透析
袋 ( MW 12 000 ～ 14 000 ) ( Sigma 公 司 ) ,
(N H4 ) 2 SO4 、CHCl3 、Na2 HPO4 (重庆川东化工厂) ,
混合纤维微孔滤膜 (012、0145、018μm) (上海市新
亚净化器件厂) ,其他试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　脂质体制备方法的筛选
21111 　薄膜法 :卵磷脂与胆固醇按质量 4 ∶1 比例
溶于 10 mL 氯仿中 ,40 ℃旋转减压蒸发除去氯仿 ,
在瓶壁内形成均匀的脂质薄膜 ,40 ℃真空干燥过
夜。加入 10 mL 含有 5 mg 阿霉素、215 mg 粉防己
碱的 PBS 缓冲液 ,搅拌使膜溶解 ,放置 2h 使其充分
水化 ,间歇超声 10 min ,过 012μm 滤膜 ,即得。
21112 　硫酸铵梯度法 :卵磷脂与胆固醇按质量 4 ∶
1 比例溶于 10 mL 氯仿中 ,40 ℃旋转减压蒸发除去
氯仿 ,在瓶壁内形成均匀的脂质薄膜 ,40 ℃真空干
燥过夜。加入 10 mL 125 mmol/ L 硫酸铵溶液 ,60
℃水化 30 min 后 ,间歇超声 5 min ,置于透析袋中 ,
于 PBS 液中透析 ,2000 mL/ 次 ,共透析 2 次 ,6 h/
次 ,依此过 018、0145、012μm 微孔滤膜两次 ,形成
空白脂质体。在上述空白脂质体中滴入含 5 mg 阿
霉素、215 mg 粉防己碱的溶液 ,混匀 ,水浴 50 ℃孵
育 20 min ,即得。
21113 　硫酸铵梯度法结合 p H 梯度法 :卵磷脂与胆
固醇按质量 4 ∶1 比例溶于 10 mL 氯仿中 ,40 ℃旋
转减压蒸发除去氯仿 ,在瓶壁内形成均匀的脂质薄
膜 ,40 ℃真空干燥过夜。加入 10 mL 125 mmol/ L
硫酸铵溶液 ,60 ℃水化 30 min 后 ,间歇超声 5 min ,
置于透析袋中 ,于 PBS 液中透析 ,2 000 mL/ 次 ,共
透析 2 次 ,6 h/ 次 ,依此过 018、0145、012μm 微孔滤
膜两次 ,形成空白脂质体。在上述空白脂质体中滴
入含 5 mg 阿霉素溶液 ,混匀 ,水浴 50 ℃孵育 30
min。加入 Na2 HPO4 调节外水相 p H 值为 712 ,滴
入含有粉防己碱 215 mg 的溶液 ,混匀 ,水浴 50 ℃
孵育 30 min ,即得。
212 　粉防己碱的 HPL C 法的测定
21211 　色谱条件 :色谱柱为 Lichrosp her Cl8 (250
mm ×416 mm , 5μm) ,柱温为 25 ℃,流动相为乙
腈220 mmol/ L 磷酸二氢钾2三乙胺 ( 80 ∶20 ∶
0106) ,检测波长为 282 nm ,体积流量为 1 mL/ min ,
进样量为 50μL 。在此色谱条件下粉防己碱得到很
好分离 ,保留时间为 1118 min。
21212 　标准曲线的制备 :精密称取粉防己碱对照品
适量 ,加甲醇制成 100μg/ mL 溶液 ,作为对照品溶
液。精密吸取上述该溶液分置于 1 mL 量瓶中 ,制
成质量浓度为 015、110、215、510、1010、2510、5010
μg/ mL 粉防己碱对照品溶液 ,加甲醇稀释并定容至
刻度 ,混匀 ,各取 50μL 进样 ,记录峰面积。以峰面
积 ( A) 与质量浓度 ( C) 作线性回归 ,回归方程为 A =
371934 C + 61597 8 , r = 01999 8。结果表明粉防己
碱在 015～5010μg/ mL 与峰面积线性关系良好。
21213 　回收率试验 :精密量取 015 mL 空白脂质体
溶液 ,分别加入至 0105、0150、2150 mL 100μg/ m L
粉防己碱对照品溶液中 ,每个样品各 3 份 ,以适量
Triton X2100 破乳后 ,用甲醇定容至 10 mL 。根据
测得的粉防己碱的量与加入粉防己碱量的比值计算
回收率。结果低、中、高 3 个质量浓度的回收率分别
是 10410 %、10014 %、10016 %。可见辅料对测定没
有干扰。
213 　阿霉素的紫外分光光度法测定
21311 　检测波长 :用 p H 714 PBS 缓冲液配制一定
质量浓度的阿霉素标准品溶液 , PBS 缓冲液为空白
在 220～600 nm 波长处进行扫描 ,根据扫描图谱选
用可见光区吸收波长 480 nm 作为 PBS 的检
测波长。
21312 　标准曲线的制备 :精密称取阿霉素标准品
10 mg ,置于 100 mL 量瓶中 ,加 p H 714 PBS 缓冲液
溶解定容 ,混匀 ,即得 100μg/ mL 标准储备液。精
密吸取上述标准储备液 0 11、012、015、1 10、210、
410、610 mL ,加至 10 mL 量瓶中 , PBS 缓冲液稀释
并定容至 10 mL 刻度 ,混匀即得质量浓度为 110、
210、510、1010、2010、4010、6010 μg/ mL 阿霉素标
准液。以 PBS 为空白 ,480 nm 波长处测定以上各
溶液的吸光度值。以吸光度值 ( A) 对阿霉素质量浓
度 ( C) 进行线性回归 ,回归方程为 A = 01018 9 C -
01006 5 , r = 01999 5。结果表明 ,阿霉素在 110～
6010μg/ mL 线性关系良好。
214 　包封率的比较 :取粉防己碱阿霉素脂质体混悬
液 015 mL 上 Sepharose CL24B 葡聚糖凝胶柱 ,用 PBS
缓冲液以 013 mL/ min 洗脱 ,分离脂质体和游离药
物 ,收集 4～18 mL 洗脱液 ,UV 检测脂质体中阿霉
素质量浓度 , H PL C 检测粉防己碱质量浓度 ,计算
包封率 (包封率 = 包入脂质体的药物质量/ 投入的总
药物质量 ×100 %) 。上述 3 种脂质体制备方法的包
封率结果见表 1。通过以上 3 种方法的比较 ,硫酸
铵梯度法结合 p H 梯度法的包封率最好 ,此法极大
的提高了脂质体中阿霉素与粉防己碱的包封率。
因此 ,确立了硫酸铵梯度法结合p H梯度法作为复
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表 1 　不同制备方法的包封率比较
Table 1 　Comparison of entrapment eff iciency
of tetrandrine2dexorubicin complex
liposomes prepared by three methods
制备方法
包封率/ %
阿霉素 粉防己碱
薄膜法 35129 27131
硫酸铵梯度法 90192 48161
硫酸铵梯度法结合 p H 梯度法 90101 75160
方脂质体的制备方法 ,下一步考察相关因素对包封
率的影响。
215 　单因素考察复方脂质体的处方和工艺 :固定其
他的条件不变 ,改变单个因素 ,以包封率为主要考察
指标 ,同时观察脂质体的形态、放置是否沉淀来考察
其处方和工艺。
21511 　孵育时间的影响 :硫酸铵梯度法结合 p H 梯
度法制备脂质体 ,孵育时间分别为 5、10、20、25、30、
35、40、45 min ,孵育温度为 50 ℃,硫酸铵浓度为
125 mmol/ L ,外水相 p H 值为 712 ,卵磷脂与胆固醇
质量比例为 4 ∶1 ,药物与脂质质量比为 1 ∶20 ,不同
孵育时间制备的脂质体包封率结果见图 1。结果显
示包封率随着孵育时间的延长而增大 ,当孵育时间
为 30 min 时 ,包封率曲线趋于平缓 ,故选择 30 min
作为温育时间。
图 1 　不同孵育时间对包封率的影响
Fig. 1 　Effect of various incubation times
on entrapment eff iciency
21512 　孵育温度的影响 :硫酸铵梯度法结合 p H 梯
度法制备脂质体 ,硫酸铵浓度为 125 mmol/ L ,卵磷
脂与胆固醇质量比例为 4 ∶1 ,药物与脂质质量比为
1 ∶20 ,孵育温度分别为 30、40、50、60、70 ℃,孵育
30 min ,外水相 p H 值为 712 ,不同孵育温度对制备
的脂质体包封率影响见图 2。结果显示包封率随温
度升高而增加 ,当温度升高到 50 ℃时达到平台 ,故
选择 50 ℃作为孵育温度。
21513 　卵磷脂与胆固醇质量比例的影响 :硫酸铵梯
度法结合 p H 梯度法制备脂质体 ,药物与脂质质量
比为 1 ∶20 ,硫酸铵浓度为 125 mmol/ L ,水浴 50 ℃
孵育 30 min ,外水相 p H 值为 712 ,卵磷脂与胆固醇
质量比例为 2 ∶1、4 ∶1、8 ∶1 ,对制备的脂质体包封
图 2 　不同孵育温度对包封率的影响
Fig. 2 　Effect of various incubation temperatures
on entrapment eff iciency
率影响结果见表 2。结果显示随着卵磷脂与胆固醇
质量比例的增加 ,包封率有上升的趋势 ,同时卵磷脂
与胆固醇质量比例为 8 ∶1 时制备所得脂质体有少
许沉淀现象 ,可见其比例对包封率有影响 ,故选择卵
磷脂与胆固醇质量比例为 4 ∶1。
表 2 　不同卵磷脂与胆固醇质量比例下的包封率
Table 2 　Effect of different proportions of egg phosphatidyl
choline and cholesterol on entrapment eff iciency
卵磷脂与胆固
醇质量比例
包封率/ %
阿霉素 粉防己碱
2 ∶1 361 07 28167
4 ∶1 851 56 67102
8 ∶1 871 31 69157
21514 　硫酸铵浓度的影响 :硫酸铵梯度法结合 p H
梯度法制备脂质体 ,卵磷脂与胆固醇质量比例为
4 ∶1 ,药物与脂质质量比为 1 ∶20 ,水浴 50 ℃孵育
30 min , 调节硫酸铵浓度分别为 125、250、300
mmol/ L 时对脂质体包封率的影响 ,结果见表 3。从
结果可知 , 随着硫酸铵浓度的增加 , 包封率有
所增加。
表 3 　硫酸铵浓度对包封率的影响
Table 3 　Effect of different ammonium sulfate
concentration on entrapment eff iciency
硫酸铵浓度/
( mmol ·L - 1)
包封率/ %
阿霉素 粉防己碱
125 501 95 35167
250 851 61 68155
300 861 68 69153
21515 　药物与脂质质量比的影响 :硫酸铵梯度法结
合 p H 梯度法制备脂质体 ,药物与脂质质量比为
1 ∶5、1 ∶10、1 ∶20 ,卵磷脂与胆固醇质量比例为
4 ∶1 ,硫酸铵的浓度为 275 mmol/ L ,水浴 50 ℃,孵
育 30 min。不同药物与脂质质量比制备的脂质体
的包封率见表 4。结果显示 ,随着药物与脂质质量
比的增大 ,包封率逐渐上升。
21516 　外水相 p H 值的影响 :p H 梯度法制备脂质
体 ,跨膜 p H 梯度是影响包封率最主要的因素。硫
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　　　表 4 　不同药物与脂质质量比对包封率的影响
Table 4 　Effect of ratio of ( tetrandrine + doxorubicin) / egg
phosphatidyl choline on entrapment eff iciency
药物/ 脂质
包封率/ %
阿霉素 粉防己碱
1 ∶5　 50167 40127
1 ∶10 79130 66181
1 ∶20 88114 79118
酸铵梯度法结合 p H 梯度法制备脂质体 ,加入
Na2 H PO4 调节外水相 p H 值为 618、712、716、810 ,
其他因素不变 ,制备的脂质体包封率见表 5。结果
表明 ,外水相 p H 值对脂质体包封率有重要影响 ,特
别是对粉防己碱的包封率有明显影响。随着外水相
p H 值的升高 ,粉防己碱包封率明显升高。
21517 　超声时间的影响 :在制备空白脂质体时 ,当
超声时间在 10 min 以上时 ,所得脂质体形态均匀 ,
无沉淀絮集等现象发生 , 故选取超声时间为
10 min。
表 5 　不同外水相 pH值对包封率的影响
Table 5 　Effect of different pH values on entrapment eff iciency
p H 值
包封率/ %
阿霉素 粉防己碱
61 8 801 14 65118
71 2 871 95 68191
71 6 891 63 82181
81 0 851 29 83163
216 　正交设计法优选最佳处方 :采用单因素筛选的
条件 ,初步制定粉防己碱阿霉素脂质体的制备处方 ,
在此基础上采用 L 9 (34 ) 的正交设计方案 ,选择对粉
防己碱包封率影响较大的药物与脂质质量比 (A) 、
卵磷脂与胆固醇质量比例 (B) 、硫酸铵浓度 ( C) 、外
水相 p H 值 (D) 4 个因素作为考察因素 ,每个因素取
3 个水平 ,经过 9 个处方的试验 ,以阿霉素、粉防己
碱的包封率为指标 ,计算综合评分 [综合评分 = (粉
防己碱包封率 + 阿霉素包封率) ×015 ] ,选择最佳制
备条件。正交试验设计及结果见表 6。
表 6 　粉防己碱阿霉素脂质体的正交设计结果
Table 6 　Design and results of orthogonal test of tetrandrine2doxorubicin complex liposomes
试验号 A B C D
粉防己碱
包封率/ %
阿霉素包
封率/ %
综合评
分
1 1 (1 ∶15) 1 (3 ∶1) 1 (225) 1 (7. 4) 78. 22 86. 24 82. 23
2 1 (1 ∶15) 2 (4 ∶1) 2 (250) 2 (7. 6) 81. 07 85. 36 83. 22
3 1 (1 ∶15) 3 (5 ∶1) 3 (275) 3 (7. 8) 70. 35 87. 21 78. 78
4 2 (1 ∶20) 1 (3 ∶1) 2 (250) 3 (7. 8) 78. 12 85. 77 81. 45
5 2 (1 ∶20) 2 (4 ∶1) 3 (275) 1 (7. 4) 79. 45 86. 89 83. 17
6 2 (1 ∶20) 3 (5 ∶1) 1 (225) 2 (7. 6) 82. 43 87. 65 85. 04
7 3 (1 ∶25) 1 (3 ∶1) 3 (275) 2 (7. 6) 82. 73 84. 24 83. 49
8 3 (1 ∶25) 2 (4 ∶1) 1 (225) 3 (7. 8) 47. 21 85. 33 66. 27
9 3 (1 ∶25) 3 (5 ∶1) 2 (250) 1 (7. 4) 66. 53 88. 69 77. 61
K1 81 . 41 82 . 39 77 . 85 81 . 00
K2 83 . 22 77 . 55 80 . 76 83 . 92
K3 75 . 79 80 . 48 81 . 81 75 . 50
R 7. 43 4. 84 3. 97 8. 42
　　采用直观分析法分析 ,结果表明 ,各因素对包封
率的影响程度为 D > A > B > C。最佳组合为
A2B1 C2 D2 ,即药物与脂质质量比为 1 ∶20、卵磷脂
与胆固醇质量比例为 3 ∶1、硫酸铵浓度为 250
mmol/ L ,外水相 p H 值为 716。
217 　粉防己碱阿霉素脂质体的理化性质
21711 　形态及粒径的考察 :取适量粉防己碱阿霉素
脂质体 ,用 PBS 缓冲液稀释后 ,滴至载玻片上 ,用
2 %磷钨酸负染 ,滴至专用铜网上 ,自然挥干 ,静置使
粒子在铜网上沉积 ,用透射电镜观察粒径大小和形
态并拍照 ,见图 3。可见脂质体外观形态基本圆整 ,
未发生黏连。
21712 　包封率的考察 :取最佳工艺下制得的复合脂
质体 ,测定包封率 ,结果阿霉素的包封率为 90199 %
( n = 5) ,粉防己碱的包封率为 80112 % ( n = 5) 。
21713 　稳定性的考察 :精密量取以上脂质体 015
mL ,充氮保存于 25 ℃与 4 ℃,分别测定包封率 ,计
算贮存过程中的渗漏率[渗漏率 = (制备时包封量 -
贮存一定时间后的包封量) / 制备时的包封量 ×
100 %] ,结果见表 7。
·812· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
图 3 　脂质体透射电镜照片
Fig. 3 　Light microscope picture of tetrandrine2
doxorubicin complex liposome
表 7 　粉防己碱阿霉素脂质体渗漏率的变化
Table 7 　Leaking ratio changes of tetrandriner2doxorubicin
complex liposomes at different temperatures
温度
/ ℃
渗漏率/ %
0 d 3 d 6 d 9 d 12 d 15 d 20 d 30 d
4 0. 00 0. 43 0. 56 0. 68 0. 85 0. 91 0. 95 1. 05
25 0. 00 0. 57 0. 65 0. 87 0. 98 1. 52 1. 64 2. 41
　　脂质体的粒径和分布与稳定性有关 ,直接影响
脂质体在体内的组织分布。当不需要定量测定粒径
小分布时 ,透光率测定法是测定脂质体相对大小的
非常实用的方法[ 3 ] 。试验过程中以水为空白测定脂
质体在 500 nm 处的透光率和吸光值 ,反映脂质体
相对大小的变化情况 ,吸光值随透光率增加而减小。
透光率大表明脂质体粒径相对较小。结果见图 4。
图 4 　粉防己碱阿霉素脂质体在不同温度下的透光率变化
Fig. 4 　Transmittancy changes of tetrandrine2doxorubicin
complex liposomes at different temperatures
21714 　磷脂的量的测定 :采用硫氰铁铵显色法测定
磷脂的量[4 ] 。精密吸取 2 mL 脂质体用适量乙醇裂
解后 ,加硫氰酸铁铵溶液 210 mL ,再补加氯仿 ,使每
个试管中氯仿的最终体积为 210 mL 。将以上溶液
分别转移至 25 mL 分液漏斗 ,充分振摇 1 min 静置 ,
取下层 ,以氯仿为空白 ,在 488 nm 处测定吸光度 ,
根据标准曲线 C = 01415 9 A - 01006 6 , r = 01999 6
计算磷脂的量 ,结果见表 8。从结果可知 ,放置 30 d
内 ,25 ℃时 ,脂质体渗漏率明显增加 ,磷脂的量明显
降低 ,粒径增大明显 ,说明温度对脂质体稳定性影响
较大 ,在 4 ℃时则相对稳定 ,故应低温充氮保存。
21715 　脂质体体外释放试验[5 ] :分别取粉防己碱阿
　 表 8 　粉防己碱阿霉素的磷脂的变化
Table 8 　Phospholipids changes of tetrandrine2doxorubicin
complex liposomes at different temperatures
温度
/ ℃
磷脂/ mg
0 d 3 d 6 d 9 d 12 d 15 d 20 d 30 d
4 1. 46 1. 43 1. 41 1. 39 1. 36 1. 35 1. 34 1. 32
25 1. 46 1. 40 1. 38 1. 28 1. 24 1. 19 1. 15 1. 05
霉素脂质体和阿霉素、粉防己碱水溶液 5 mL ,加入
长约 10 cm 的透析袋中 ,两端扎紧后 ,悬置于盛有
50 mL PBS(p H 714)缓冲液的具塞锥形瓶中 ,密塞 ,
于 37 ℃水浴恒温振荡 ,定时取外液 210 mL ,同时补
加等量同温的 PBS 缓冲液。参照复方脂质体的包
封率测定方法 ,测定释药介质中两药物质量浓度 ,并
计算累积释放率 Q( Q = 释药介质中药物的质量/ 包
入脂质体的药物质量 ×100 %) ,见图 5。由结果可
知 ,脂质体中阿霉素和粉防己碱分别在 24 h 和 16 h
内释放完全 ,而水溶液中阿霉素和粉防己碱分别在
8 h 和 4 h 内就释放完全。结果表明脂质体形式对
阿霉素和粉防己碱均起到了较好的缓释作用。
图 5 　阿霉素( A)和粉防己碱( B)分别在溶液和脂质体中的
累积释放率
　 Fig. 5 　Accumulated release rate of doxorubicin ( A)
and tetrandrine ( B) from water solution
of tetrandrine2doxorubicin and tetrandrine2
doxorubicin complex liposomes
3 　讨论
在制备脂质体中 ,采用硫酸铵梯度法时 ,阿霉素
取得了较高包封率 ;粉防己碱属于生物碱 ,适合采用
p H 梯度法制备 ,本实验利用 p H 梯度法的原理将粉
防己碱包封于脂质体中 ,使两种药物达到了较高的
包封率。经紫外检测阿霉素的包封率平均达到
90177 % ,粉防己碱包封率平均达到 80112 %。因此
·912·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
确定了采用硫酸铵梯度法结合 p H 梯度法制备粉防
己碱阿霉素脂质体。
稳定性的检查是脂质体制备中质量控制的重要
环节。该实验对复合脂质体稳定性进行了一系列的
检查。发现用硫酸铵梯度法结合 p H 梯度法制备的
粉防己碱阿霉素脂质体需要在 4 ℃充氮气保存下 ,
药物的渗漏率、粒径的大小变化和磷脂含量的变化
最小。在后续的实验中 ,提高复合脂质体稳定性是
重要的研究工作之一。
体外释药实验表明脂质体中的药物在 24 h 内
几乎全部释放 ,而游离的药物在 8 h 内就已经释放
完全 ,证明了脂质体具有较好的缓释作用 ,原因可能
与药物被脂质体包裹后形成了难溶盐很难透过脂质
体膜有关。此外 ,药物与脂质膜结合力大小也可能
会对缓释作用产生一定的影响。
本实验通过对粉防己碱阿霉素复方脂质体的工
艺优化、稳定性及释放度试验 ,表明了将两种药物同
时包封于同一脂质体的可能 ,为下一步粉防己碱阿
霉素复方脂质体逆转乳腺癌耐阿霉素细胞 MCF27/
DOX 最佳比例试验提供参考。
参考文献 :
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[3 ] 　张灵芝. 脂质体制备及其在生物医学中的应用 [ M ] . 北京 :北
京医科大学中国协和医科大学联合出版社 ,1998 :57258.
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脂含量的测定[J ] . 中国药房 ,2008 ,19 (7) :5472548.
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体外释放研究[J ] . 中国药科大学学报 ,2004 ,35 (6) :2082512.
Caco22 细胞单层研究淫羊藿黄酮类成分的吸收转运
陈 　彦1 ,贾晓斌1 , HU Ming2 3　
(1. 江苏省中医药研究院 ,江苏省现代中药制剂工程技术研究中心 ,江苏 南京 　210028 ;
2. University of Houston , Houston 77030 , USA)
摘 　要 :目的 　研究淫羊藿黄酮类成分在 Caco22 细胞模型中的吸收转运。方法 　采用超高压液相法测定药物浓
度 ,计算表观渗透系数 ( Papp) ,研究淫羊藿黄酮 5 个主要成分淫羊藿苷、朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C、宝藿苷 Ⅰ在
Caco22 细胞模型中的双向转运。结果 　淫羊藿苷、朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C 的吸收渗透系数 ( PAB ) 较小 ,分别
为 5191 ×10 - 7 、3122 ×10 - 7 、2176 ×10 - 7 、4123 ×10 - 7 cm/ s ,宝藿苷 Ⅰ相对较大 ,为 1146 ×10 - 6 cm/ s ;5 个化合物的
分泌渗透系数 ( PBA )都比其相应的吸收渗透系数要大 ,其中宝藿苷 Ⅰ的分泌渗透系数是其吸收渗透系数的 918 倍。
结论 　淫羊藿黄酮类成分的肠道吸收较差 ,可能存在肠道转运蛋白的外排机制 ,其中三糖苷 (朝藿定 A、朝藿定 B、
朝藿定 C)的吸收要小于二糖苷 (淫羊藿苷) ,二糖苷的吸收要小于单糖苷 (宝藿苷 Ⅰ) 。
关键词 :淫羊藿黄酮 ;Caco22 细胞单层模型 ;淫羊藿苷 ;渗透系数
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220220205
Absorption and transportation of flavonoids in Herb Epimedii across Caco22 monolayer model
CH EN Yan1 , J IA Xiao2bin1 , HU Ming2
(1. J iangsu Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine , J iangsu Engineering and Technology
Research Center for Modern Chinese Pharmaceutical Preparation , Nanjing 210028 , China ;
2. University of Houston , Houston 77030 , USA)
Abstract : Objective 　To st udy t he absorption and t ransportation of flavonoids in Herb Epi medi i by
using Caco22 monolayer model . Methods 　Caco22 cell monolayer model was used to st udy the bi2direction
t ransport of icariin , epimedin A , epimedin B , epimedin C , and baohuoside Ⅰ. The concent ration of t he
five flavonoids in cell cult ure medium was measured by U PL C and t he apparent permeability coefficient s
( Papp) were calculated. Results 　The absorptive permeability coefficient s ( PAB ) of icariin , epimedin A ,
epimedin B , epimedin C , and baohuoside Ⅰwere 5191 ×10 - 7 , 3122 ×10 - 7 , 2176 ×10 - 7 , 4123 ×10 - 7 , and
·022· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008204203　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30572372)
作者简介 :陈　彦 (1968 —) ,女 ,江苏南京人 ,副研究员 ,博士 ,江苏大学硕士生导师 ,中华中医药学会炮制分会委员 ,美国休斯顿大学高
级访问学者 ,主要从事中药制剂学研究 ,特别在中药多组分离子剂型 ,如中药滴丸、多组分微丸、复方微乳等研究领域。
Tel : (025) 85608672 　E2mail : ychen202 @yahoo. com. cn