全 文 ：补肾通络方对阳离子化牛血清白蛋白致膜性肾炎大鼠
高凝状态的影响
汪保和1 ,皮亦华2 ,黄 　畅1 ,金 　红3 ,卢岳华3 3
(11 湖南师范大学生命科学学院 ,湖南 长沙 　410081 ; 21 中南林业科技大学体育学院 ,湖南 长沙 　410004 ;
31 湖南师范大学医学院 ,湖南 长沙 　410006)
摘　要 :目的 　观察补肾通络方对阳离子化牛血清白蛋白 (C2BSA) 致膜性肾炎模型大鼠高凝状态的影响 ,并探究
其作用机制。方法 　72 只雄性 SD 大鼠随机分为对照组、模型组、泼尼松 + 阿司匹林给药组和高、中、低剂量补肾
通络方给药组。用 C2BSA 免疫法制备膜性肾炎大鼠模型 ,给药 4 周后测定 24 h 尿白蛋白、血小板聚集率、血浆纤
维蛋白原 ( Fib) 、肾皮质血栓素 B2 ( TXB2 ) 和 62酮2前列腺素 F1α (62keto2P GF1α) 的量。结果 　模型组大鼠 24 h 尿
白蛋白排泄量、血小板聚集率、血浆 Fib 和肾皮质 TXB2的量均显著高于对照组 ;补肾通络方给药组的这些检测指
标均显著低于模型组 ;造模后大鼠肾皮质 62keto2P GF1α量明显减低 ,补肾通络方给药使其量有所增加。结论 　补
肾通络方能使膜性肾炎大鼠的血小板聚集性、血浆 Fib 水平和肾皮质 TXA2的量降低 ,从而改善血液高凝状态和防
止肾小球内微血栓形成 ,这可能是其有效治疗慢性肾炎的重要机制。
关键词 :补肾通络方 ; 膜性肾炎 ; 高凝状态
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0721095204
Effect of Bushen Tongluo Fang on hypercoagulable state in rats with experimental
membranous glomerulonephritis induced by cationized bovine serum albumin
WAN G Bao2he1 , PI Yi2hua2 , HUAN G Chang1 , J IN Hong3 , L U Yue2hua3
(11 College of Life Science , Hunan Normal University , Changsha 410081 , China ; 2. College of Physical Education ,
Central South University of Forest ry and Technology , Changsha 410004 , China ;
3. Medical College , Hunan Normal University , Changsha 410006 , China)
Abstract : Objective 　This st udy was designed to assess whet her Bushen Tongluo Fang (BSTL F) , a
Chinese materia medica formula , can ameliorate t he hypercoagulable state in rat s wit h membranous glo2
merulonep hritis (M GN) induced by cationized bovine serum albumin (C2BSA) in order to gain an insight
into t he mechanisms responsible for it s t herapeutic effect . Methods 　Seventy2two male Sprague2Dawley
rat s were randomly separated into six group s : t he normal cont rol group , the M GN model group , t he p red2
nisone2plus2aspirin t reat ment group , and the low2 , moderate2 , and high2dose group s of BSTL F. The mod2
el of M GN was induced by sc (p reimmunization) and iv injections of C2BSA in t he latter five group s. After
t he develop ment of M GN model , t he decoctions of BSTL F and t he prednisone2plus2aspirin solution were ig
administered to the t reat ment group s respectively twice daily for four weeks. The rat s in t he model group
received t heir drinking water as vehicle cont rols. Urinary albumin excretion for 24 h was measured using a
rat albumin EL ISA kit . The platelet aggregation was analyzed by turbidimet ry. The plasma level of fibri2
nogen ( Fib) was determined by t he von Clauss assay. Radioimmunoassay was used to examine t hrombox2
ane B2 ( TXB2 ) and 62keto2p rostaglandin F1α (62keto2P GF1α) of t he renal cortex. Results 　Urinary albumin
excretion for 24 h , maximal platelet aggregation , plasma Fib level , and TXB2 production of renal cortex in
t he M GN model group were significantly higher than t ho se in t he normal cont rol group , respectively.
Compared wit h t he M GN model group , t hese four measurement s were decreased significantly in BSTL F2
t reated group s. The 62keto2P GF1α production of renal cortex in t he M GN model group was subnormal but
no statistically significant differences were observed between t he model group and BSTL F group s.
Conclusion 　The result s of t his st udy suggest t hat t he administ ration of BSTL F could at tenuate platelet
aggregability , lower plasma level of Fib and reduce t hromboxane A2 production by renal cortex in t he rat s
·5901·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008210211　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :湖南省科技厅计划项目 (05SK3039) ; 湖南省教育厅科研项目 (08W011)
作者简介 :汪保和 (1954 —) ,湖南省华容县人 ,博士 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事骨髓干/ 祖细胞生理调控和天然产物药理学研究。
Tel : 13786145098 　E2mail : baohewang @126. com3 通讯作者　卢岳华　Tel : (0731) 8872082
with M GN , so that t heir hypercoagulable state is corrected at least partly and glomerular microthroimbosis
is p revented in several ways. These effect s may cont ribute considerably to t he mechanisms of BSTL F effi2
cacy for chronic nep hritis.
Key words : Bushen Tongluo Fang (BSTL F) ; membranous glomerulonep hritis ; hypercoagulable state
　　补肾通络方是名老中医治疗肾炎和肾病综合征
的临床经验方。本课题组近期研究了补肾通络方对
大鼠阳离子化牛血清白蛋白 (C2BSA) 膜性肾炎的
疗效[ 1 ] ,证明了该药方能减少免疫复合物在肾小球
的沉积 ,减轻肾小球的炎症损伤 ,促进基底膜屏障的
修复 ,控制血浆蛋白丢失 ,还有助于纠正肾病综合征
的脂质代谢紊乱 ,明显改善肾功能 ,但是对其药效机
制的研究还不够深入。基于补肾通络方的主要作用
是补益肾气、活络行瘀 ,而中医学脉络瘀塞的表现与
现代医学的血栓形成及血栓前状态关系密切 ,本实
验重点探讨该药方对 C2BSA 膜性肾炎大鼠高凝状
态的影响 ,为其更好的应用提供理论基础。
1 　材料与方法
111 　实验动物及分组 : SD 大鼠 ,雄性 ,6～7 周龄 ,
体质量 182～204 g ,为清洁级 ( Ⅱ级) 实验动物 ,由
上海斯莱克实验动物有限公司提供 ,许可证号 :
SCXK(沪)220072005。72 只大鼠适应性喂养 1 周 ,
尿蛋白定性测试结果均为阴性 ,随机分为 6 组 ,即对
照组、模型组、泼尼松 + 阿司匹林给药组和补肾通络
方高、中、低剂量给药组 ,每组 12 只。
112 　实验药物 :补肾通络方药物组成为黄芪 20 g、
制首乌 15 g、山茱萸 10 g、仙茅 10 g、冬虫夏草 6 g、
泽兰 10 g、当归 10 g、爵床 10 g、丹参 10 g、川芎 6
g、党参 10 g、茯苓 10 g、淮山药 20 g、芡实 15 g、车
前子 10 g、马鞭草 10 g ,水煎并浓缩至含生药 8 g/
mL ,由湖南中医药大学附属一医院药剂科提供。泼
尼松为湖南新汇制药公司产品 ,阿司匹林为中南制
药公司产品。
113 　主要试剂 :无水乙二胺 ( EDA) 、碳化二亚胺
( EDC) 、牛血清白蛋白 (BSA) 、弗氏不完全佐剂、腺
苷二磷酸 (ADP) 均为 Sigma 产品 ,考马斯亮蓝蛋
白检测试剂盒由南京建成生物公司提供 ,大鼠尿白
蛋白 EL ISA 试剂盒为美国 Assaypro 公司产品 ,血
栓素 B2 ( TXB2 ) 和 62酮2前列腺素 F1α ( 62keto2
P GF1α) 放免试剂盒购于解放军总医院放射免疫研
究所。
114 　C2BSA 制备 :参照文献方法[2 ] ,用 EDA 和
EDC 处理 BSA ,使其阳离子化 ,获得 C2BSA ,测得
等电点 ( PI) 为 916 ,透析后冻干 ,贮存于 - 70 ℃
冰箱中备用。
115 　C2BSA 膜性肾炎模型制备 :将 C2BSA 用灭菌
的 0101 mmol/ L PBS 稀释成 215 mg/ mL ,与等量
弗氏不完全佐剂研磨成白色悬液 ,模型组和给药组
大鼠做多部位 sc 预免注射 ,每只 1 mL 悬液 ;1 周
后 ,尾 iv C2BSA ,每只 215 mg ,每周 3 次 ,共 3 周。
对照组大鼠 iv 等量 PBS。
116 　给药方法 :造模结束后 ,各组开始 ig 给药 ,给
药剂量按大鼠和人体体表面积比率换算。补肾通络
方高、中、低剂量组的给药剂量 (生药量) 分别为
160、80、40 g/ (kg ·d) ;泼尼松 + 阿司匹林组 ,给药
剂量为泼尼松 5 mg/ ( kg ·d) 、阿司匹林 10 mg/
(kg ·d) ;对照组及模型组给予等量温白开水。每
天分 2 次给药 ,共 4 周。
117 　观察指标
11711 　实验动物一般情况观察 :每天记录大鼠进食
和活动状况 ,每周称取体质量 1 次。
11712 　24 h 尿白蛋白测定 :大鼠单只置代谢笼内 ,
收集 24 h 尿液 ,4 ℃下 800 ×g 离心 10 min ,按试
剂盒说明书操作 ,在 EL x800 酶标仪 450 nm 处测
定尿样的吸光度 ( A) 值 ,计算 24 h 尿白蛋白量。
11713 　血浆纤维蛋白原 ( Fib) 测定 :用氨基甲酸乙
酯麻醉大鼠 ,腹主动脉取血 , 318 % 枸橼酸钠抗凝
(1 ∶9) ,分离血浆 ,Clauss 凝固法测定 Fib 浓度。
11714 　血小板聚集率测定 :取血及抗凝同 11713
项方法 ,1 000 r/ min 离心 5 min 制备富血小板血浆
( PRP) ,3 000 r/ min 离心 10 min 制备贫血小板血
浆 ( PPP) , 取 PRP 调透光度为 0 (吸光度为
100 %) ,PPP 调透光度为 100 % (吸光度为 0) ,10
μmol/ L ADP 作诱聚剂 ,用 W T T2Ⅲ型血小板聚集
率测定仪 (中国人民解放军 9795 工厂产) ,比浊法
测定 5 min 血小板最大聚集率。
11715 　肾皮质 TXB2和 62keto2P GF1α测定 :切取肾
皮质 ,快速称质量 ,按 1 ∶9 的体积比即刻加入无水
乙醇2生理盐水 (2 ∶8 ,用盐酸调 p H 至 310) ,冰浴
中匀浆 ,提取物于 - 70 ℃保存。按试剂盒说明书
进行测定 ,仪器为 FJ —2008 型放射免疫γ计数仪。
匀浆可溶性蛋白定量测定为考马斯亮蓝法。TXB2
和 62keto2P GF1α定量以每毫克可溶性蛋白的皮克数
·6901· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
(pg/ mg) 表示。
118 　统计学方法 :检测指标用 x ±s 表示 ,差异显
著性采用方差分析和 L SD2t 检验 ,用 SPSS 1310 软
件进行数据统计运算。
2 　结果
211 　动物的一般生存情况 :大鼠在造模开始 2 周
后 ,出现皮毛不泽 ,萎顿少动 ,摄食量减少 ,体质量增
长缓慢 ,大便稀溏等现象 ,其中模型组最明显。实验
期间模型组 2 只大鼠死亡 ,泼尼松 + 阿司匹林组、补
肾通络方高剂量和低剂量组各有 1 只大鼠死亡。
212 　24 h 尿白蛋白量 :各组大鼠实验前 24 h 尿白
蛋白排泄量无明显差异 ; C2BSA 造模大鼠的 24 h
尿白蛋白均明显高于对照组 ;经 4 周的补肾通络方
治疗 ,各剂量组的 24 h 尿白蛋白均显著低于模型
组 ;中、高剂量组的尿白蛋白量低于泼尼松 + 阿司匹
林组。结果见表 1。
表 1 　补肾通络方对 C2BSA 膜性肾炎大鼠 24 h尿白蛋白
水平的影响 ( x ±s)
Table 1 　Effect of BSTLF on 24 h urinary albumin excretion
in rats with experimental membranous glomerulo2
nephritis induced by C2BSA ( x ±s)
组别
剂量/
(g·kg - 1 )
动物/
只
24 h 尿白蛋白/ mg
实验前 造模后 实验末
对照 - 12 3193 ±1141 3184 ±1193 3179 ±1125
模型 - 10 3181 ±0197 15137 ±4104 # # 14170 ±5129 # #
泼尼松 +阿司匹林 01005 + 01010 11 3157 ±1139 15156 ±5106 # # 11108 ±4149 3
补肾通络方 160 11 4121 ±2105 16114 ±3180 # # 9143 ±3143 3
80 12 3182 ±1166 13166 ±3175 # # 9122 ±4126 3 3
40 11 4104 ±1142 14152 ±2187 # # 11125 ±3102 3
　　与对照组比较 : # # P < 0101
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　# # P < 0101 vs cont rol group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
213 　血小板聚集率 :模型组大鼠的血小板最大聚集
率明显高于对照组 ;补肾通络方给药各剂量组的血
小板最大聚集率也比对照组高 ,但比模型组低 ,具有
显著性 (图 1) 。
214 　血浆 Fib 水平 :模型组大鼠 Fib 水平显著高于
对照组 ;补肾通络方中、高剂量给药组的 Fib 水平显
著低于模型组 (图 2) 。
215 　肾皮质 TXB2 和 62keto2P GF1α水平 :造模后 ,
大鼠肾皮质 TXB2 的量显著高于对照组 , 62keto2
P GF1α的量显著降低。补肾通络方治疗 4 周后 ,各
剂量组的 TXB2 量显著低于模型组 , 而 62keto2
P GF1α的量有所升高 ,但与模型组之间的差异无显
著性 (表 2) 。
3 　讨论
　　膜性肾炎是原发性肾小球疾病的一种病理类
型 ,多表现为肾病综合征。肾病综合征的低蛋白血
症引起肝脏合成蛋白的代偿反应和脂质代谢紊乱 ,
可使血浆纤维蛋白原等凝血因子浓度改变、抗凝血
酶 Ⅲ等抗凝物质浓度降低、血脂水平升高 ,参与血液
高凝状态的形成。肾炎时肾内花生四烯酸代谢失
调 ,促进血小板在肾小球内聚集和活化、纤维蛋白沉
·7901·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
表 2 　补肾通络方对 C2BSA 膜性肾炎大鼠肾皮质 TXB2
和 62keto2PGF1α水平的影响 ( x ±s)
Table 2 　Effect of BSTLF on TXB2 and 62keto2PGF1α levels of
renal cortex in rats with experimental membranous
glomerulonephritis induced by C2BSA ( x ±s)
组别
剂量/
(g ·kg - 1 )
动物/
只
TXB2 /
(pg ·mg - 1 )
62keto2PGF1α/
(pg ·mg - 1 )
对照 - 12 482126 ±115190 1 170128 ±265147
模型 - 10 653195 ±193137 # # 818124 ± 91186 # #
泼尼松 + 阿司匹林 01005 + 01010 11 535128 ±133173 3 1 002109 ±123117 3
补肾通络方 160 11 515143 ±128115 3 890137 ±189140
80 12 496124 ± 86190 3 3 904173 ±216188
40 11 537146 ±121165 3 869143 ±234142
　　与对照组比较 : # # P < 0101
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　# # P < 0101 vs cont rol group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
积、微血栓形成。聚集的血小板和肾组织细胞释放
多种细胞因子 ,刺激系膜细胞、间质成纤维细胞增
殖 ,细胞外基质堆积 ,导致肾小球硬化和肾纤维
化[3 ] 。因此 ,抗凝、抗血小板聚集是慢性肾病治疗的
重要手段[4 ] 。
中医学“水肿”、“虚劳”、“关格”等范畴可包含慢
性肾炎及肾病综合征 ,其病机多为正虚邪实 ,湿热结
聚 ,伤及脏腑 ,肾气亏损尤著。肾气亏虚则阳失宣
畅 ,阴无以化 ,血瘀水停 ,脉络阻滞。临床观察和实
验研究表明 ,瘀血阻络多与高凝状态有关 ,补气活
血、化瘀通络药物具有抗凝及溶栓的作用。在中西
医结合治疗的基础上 ,重用益气活血、疏络祛瘀中
药 ,对慢性肾炎 ,尤其是难治性肾病综合征能取得较
好效果[5 ] 。
本研究的结果显示 ,膜性肾炎模型大鼠的 24 h
尿白蛋白量明显增加 ,经 4 周的补肾通络方治疗 ,尿
白蛋白显著减少 ,这在前期研究的基础上进一步证
明了该药方对膜性肾病的疗效。给药组的血小板聚
集率显著低于模型组 ,说明补肾通络方对血小板聚
集和活化有抑制作用。纤维蛋白/ 纤维蛋白原同免
疫复合物在肾小球内沉积 ,可刺激血小板2多形核白
细胞的共迁移和共激活 ,并可介导多形核白细胞呼
吸爆发 ,导致肾小球损伤[6 ] 。补肾通络方使血浆
Fib 水平降低 ,有助于肾组织损伤的修复。
肾小球内免疫复合物、内皮细胞和血小板之间
的相互作用导致原位组织花生四烯酸衍生激素生成
异常 ,其中包括血栓烷 A2 ( TXA2 ) 与前列腺素 I2
( P GI2 ) 比值的失衡[7 ] 。TXA2具有很强的缩血管作
用 ,还刺激血小板的聚集和活化 , 而 P GI2 则与
TXA2相对抗。TXB2和 62keto2P GF1α分别是 TXA2
与 P GI2的稳定代谢产物。本实验检测到模型组大
鼠肾皮质 TXB2 的量增高 ,而 62keto2P GF1α的量减
低 ,补肾通络方能使前者显著降低 ,后者有所增加。
这提示补肾通络方对肾炎时肾内花生四烯酸代谢失
调具有一定的纠正作用。
补肾通络方中首乌、仙茅、山茱萸、虫草补肾护
本 ,泽兰、当归、爵床、丹参、川芎活血疏络 ,而黄芪、
党参、茯苓、山药、车前子等药益气扶正、健脾利湿。
现代药理研究显示这些药物具有慢性肾病治疗相关
的多种作用。首乌、当归、黄芪、党参、山茱萸、仙茅、
虫草、茯苓对免疫功能有调节作用[8 ] 。黄芪、当归促
进肝脏合成白蛋白 ,提高血浆白蛋白浓度[ 9 ] 。补肾
通络方药物的多种有效成分能通过不同机制改善血
液的高凝状态[10～12 ] 。总之 ,补肾通络方可能通过多
方面的作用而有效治疗慢性肾炎 ,改善血液高凝状
态是其重要机制之一。
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