全 文 ：素最优水平组合为 A2B3 C3 ,即孵化温度为 60 ℃,药
脂比为 1 ∶40 ,孵化时间为 30 min 时所制得石杉碱
甲脂质体的包封率最高。
214 　最优制备工艺的验证 :按正交试验优化处方制
备 3 批石杉碱甲脂质体 ,并且对包封率进行测定 ,包
封率测定结果为 87102 %、89100 %、88160 % ,结果
表明 3 批石杉碱甲脂质体的包封率无显著性差异 ,
制备工艺重现性良好。
3 　讨论
　　葡聚糖凝胶柱色谱法测定脂质体包封率具有方
法简便、准确的特点 ,能使混合物依据分子大小不同
而分离。在柱色谱过程中 ,洗脱液的流速及上样量
的多少均对脂质体中分离游离药物有影响 ,因此宜
选择能使脂质体达到最大分离程度的洗脱条件 ,才
能保证测得准确的包封率。若上样量大 ,脂质体有
拖尾现象 ;洗脱速度对分离效果可产生很大影响 ,洗
脱速度快 ,凝胶微孔内外的游离药物来不及平衡 ,提
前出峰 ,分离不好。本实验通过研究发现脂质体上
样量为 015 mL ,控制流速在 015 mL/ min 以内时 ,
可避免拖尾现象 ,达到良好分离。
　　硫酸铵梯度法是脂质体制备方法中主动载药方
法2p H 梯度法的一种 ,主要是依靠内、外水相硫酸铵
梯度产生的较高驱动力来进行载药。石杉碱甲为弱
碱性生物碱类药物 ,能与脂质体双分子层内的硫酸
根离子结合生成溶解度小的硫酸盐 ,药物与硫酸根
形成难溶性盐后 ,不易透过双分子层 ,从而减少了药
物的泄漏。采用硫酸铵梯度法制备石杉碱甲脂质体
可以达到良好的包封率 ,解决了被动载药法包封率
低的问题。
参考文献 :
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反相制备色谱法从朱砂根中分离朱砂根皂苷
甄 　铧 3
(四川农业大学 ,四川 都江堰 　611830)
摘 　要 :目的 　研究了 C218 制备色谱柱从朱砂根中分离朱砂根皂苷的方法。方法 　用BüCHI制备色谱系统 ,以甲
醇2水为流动相进行梯度洗脱 ,用反相高效液相色谱监控分离过程。结果 　朱砂根皂苷的得率为 519 % ,相对纯度
9514 %。结论 　该法简便 ,耗时短 ,效率高 ,分离效果好 ,可连续进样制备 ,该法作为制备朱砂根皂苷对照品有较好
的参考价值。
关键词 :朱砂根 ;朱砂根皂苷 ;反相制备色谱 ;高效液相色谱。
中图分类号 :R28412 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 0620898203
　　朱砂根皂苷 ( cyclamiretin A232O2[α2L2rham2
nopyranosyl2(1 →4)2β2D2glucopyranosyl2( 1 →4) ]
[β2D2glucopyranosyl2( 1 →2 ) ]2α2L2arabinopyrano2
side ;ardicrenin[ 1 ,2 ] )是朱砂根 A rdisi a crenat a Sims
中所含三萜皂苷之一 ,结构见图 1。朱砂根皂苷具
有明显抑制癌细胞增殖和直接杀伤癌细胞[3～5 ] 以及
抗 H IV 活性[6 ] 等作用。目前 ,关于从朱砂根中提
取、纯化三萜皂苷研究有报道[7 ] ,但用 C218 制备柱
纯化朱砂根皂苷未见报道。本实验采用 C218 制备
柱对朱砂根皂苷进行了分离 ,采用反相高效液相色 图 1 　朱砂根皂苷的化学结构式
Fig11 　Chemical structures of ardicrenin
·898· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008209218　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :四川省教育厅攻关项目 (2006A016) ; 四川农业大学分校科技基金资助项目 (N2200802)
作者简介 :甄　铧 (1963 —) ,男 ,副教授 ,研究方向 :天然药用植物分析、提取和分离。
Tel : (028) 87122847 　Fax : (028) 87133300 　E2mail : zhenhua @scfc1edu
谱法测定朱砂根皂苷[2 ] ,全程监控分离过程 ,研究了
C218 制备柱分离朱砂根皂苷的条件。朱砂根皂苷对
照品在市场上难以购买 ,对其研究带来不便。该方法
作为制备朱砂根皂苷对照品有较好的参考价值。
1 　仪器与试药
　　岛津 L C —20AB 高效液相色谱系统 ,具 CTO —
10AS 柱箱、D GU —20A3 在线脱气、CBM —20A 系
统控制器、SPD —20A 紫外可见检测器、L C solution
工作站 ; Sepacore 制备色谱系统 (BüCH I) ,具 C —
605 泵 (两台) 、C —615 泵管理器、C —690 ODS 玻璃
制备柱 (230 mm ×26 mm ,50μm) ; TU —1810 紫外
可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公
司) ;离心浓缩机 ( CV E —2000 ,东京理化器械株式
社会) ;显微热分析仪 ( WRX —1S ,上海精密科学仪
器有限公司) 。
　　朱砂根皂苷对照品由本实验室制备 ,经中国科
学院成都生物研究所质谱与核磁共振分析 ,分子式
C53 H86 O22 ,相对分子质量 1 074 ,熔点 239～241 ℃,
质量分数大于 98 % ;朱砂根为四川都江堰灵岩山、
般若寺等地野生天然植株 ,经四川农业大学植物分
类学专家易同培研究员鉴定。将采集的朱砂根鲜植
株根部洗尽泥土 ,50 ℃恒温烘至质量恒定后粉碎过
40 目筛 ,放入干燥器备用。HPL C 分析用乙腈为色
谱纯、重蒸水、提取、制备用乙醇、甲醇为分析纯。
2 　方法与结果
211 　朱砂根的提取 :取朱砂根粉末 10100 g ,按固液
比 1 ︰ 20 加入 80 %乙醇 ,回流 ,提取 20 min ,共提
取 3 次 (该条件为正交试验优化确定) 。每次提取液
4 000 r/ min 离心 10 min ,用 80 %乙醇适量洗涤沉
淀物 ,4 000 r/ min 离心 10 min ,收集合并上清液。
减压浓缩至溶液发泡 ;加蒸馏水至 200 mL 进行陈
化。10 000 r/ min 离心 15 min ,收集上清液至 250
mL 量瓶 ,加蒸馏水至刻度 ,即得。
212 　朱砂根皂苷的高效液相色谱法测定[2 ]
21211 　色谱条件 : SH IM2PAC K V P2ODS 色谱柱
(250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2水 (37 ∶
63) ;体积流量 :110 mL/ min ;柱温 :40 ℃;最大进样
量 :20μL ;检测波长 :205 nm ;灵敏度 :0116 AU FS 。
21212 　对照品溶液的制备 :精密称定朱砂根皂苷对
照品 2818 mg ,置于 10 mL 量瓶中 ,加甲醇适量溶解
并加至刻度 ,摇匀 ,即得 (质量浓度为 2188 mg/ mL) 。
21213 　标准曲线的建立 :精密吸取 2188 mg/ mL 朱
砂根皂苷对照品溶液 ,依次稀释 ,配制质量浓度分别
为 01028 8、01057 9、01288、01576、2188 mg/ mL 溶
液 ,分别进样 1010μL 进行分析。结果朱砂根皂苷
在进样量 01288～5716μg 时与色谱峰面积线性关
系良好 ,线性回归方程为 Y = 2107 ×104 X + 1176 ×
104 ( r = 01999 8) 。
21214 　提取液的测定 :取朱砂根提取液 ,按以上所
述测定方法 ,外标法计算 ,色谱图见图 2。测得朱砂
根皂苷的质量为 60210 mg ,朱砂根皂苷提取率为
6102 %。
图 2 　朱砂根皂苷对照品( A)和朱砂根提取液( B)的色谱图
Fig12 　Chromatograms of ardicrenin reference sub2
stance ( A) and A1 crenata extract solution ( B)
213 　制备色谱的条件 :BUCHI C2690 ODS 玻璃制
备柱 (230 mm ×26 mm ,50μm) ,内装 C218 79 g ;流
动相 :甲醇2水 ;体积流量 : 3010 mL/ min ;温度 :室
温 ;梯度洗脱 ,0 %甲醇洗脱 15 min ,然后使用 20 %
甲醇洗脱 2010 min ,再用 70 %甲醇洗脱 5 min。
214 　制备色谱的操作 :将朱砂根提取液用大体积进
样仓进样 250 mL (朱砂根皂苷质量为 60210 mg) ,
按上述制备色谱的条件进行分离 ,当洗脱程序进入
用 70 %甲醇洗脱 5 min 阶段 ,以每份 10 mL 分段收
集馏分 ,用高效液相色谱仪检测馏分中的目标物。
合并目标物中质量分数高的馏分 ,减压旋转蒸发大
量溶剂 ,离心浓缩 ,真空干燥后得朱砂根皂苷产品
59112 mg。此过程 ,朱砂根皂苷收率为 9812 %。
215 　制备过程的检测分析 :在上述制备过程中 ,梯
度洗脱程序在水洗脱 15 min 后 ,以 20 %甲醇洗脱
2010 min ,以每分钟为单位收集馏分 (每份 30 mL) ,
HPL C 检测收集馏分 ,结果无朱砂根皂苷成分。然
后 70 %甲醇洗脱 ,5 min ,再以 90 %甲醇洗脱结束 ,
以每 20 s 为单位 (每份 10 mL) 收集馏分 15 份并编
号 ,进样 10μL 测定 ,对 15 个馏分进行 H PL C 法检
测 ,测得朱砂根皂苷色谱峰面积值代入线性回归方
程计算质量浓度。以朱砂根皂苷质量浓度为纵坐
标 ,时间为横坐标绘制洗脱曲线 ,结果见图 3。
216 　产品的分析和得率测定 :以产品得率 = 产品的
质量/ 药材的质量 ×100 % 计算得产品收率为
519 %。熔点仪测出该产品的熔点为 239～240 ℃,
与朱砂根皂苷对照品熔点一致。称取产品 116 mg ,
·998·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
图 3 　洗脱曲线
Fig13 　Elution curve
用乙腈2水( 37 ∶63) 溶解 ,1100 mL 定容 ,得产品供
试液 ,进样 2010μL 进行分析 ,该产品所含目标物的
保留时间 (101791 min)与朱砂根皂苷对照品的保留
时间 (101795 min) 一致 ,外标法测得其质量分数为
9514 %( n = 6) 。采用乙腈2水 (37 ∶63) 、(35 ∶65、
(32 ∶68)洗脱系统 ,分别进样 2010μL 产品供试液 ,
H PL C 面积归一法测得质量分数为 9614 % ( n = 6) ,
见图 4。
图 4 　朱砂根皂苷的色谱图
Fig14 　Chromatogram of ardicrenin
3 　讨论
　　制备色谱流动相的选择 :以反相高效液相色谱法
测定朱砂根提取液中朱砂根皂苷的色谱图为依据进
行分析 ,朱砂根皂苷的色谱峰独立 ,目标峰前后物质
相距较远 ,为用反相柱制备朱砂根皂苷提供了很好的
条件。制备色谱流动相选择了甲醇2水体系。在该体
系中 ,调整甲醇的比例 ,可以控制目标物的保留时间 ,
甲醇的比例越小 ,目标物的保留时间越长。考虑到乙
腈有较大毒性 ,制备色谱未使用乙腈作流动相。
　　制备色谱的条件建立和洗脱液的检测 :通过预
试验得知 ,在甲醇2水体系中 ,甲醇比例在 50 %以
内 ,目标物保留时间较长 ,甲醇比例在 70 %以上 ,目
标物保留时间较短。根据这一性质 ,确定两个阶段
的梯度洗脱程序 ,70 %甲醇洗脱之前阶段 ,主要分离
极性杂质 ,使目标物保留 ;70 %甲醇洗脱之后阶段阶
段 ,主要分离极性与目标物接近的成分 ,从洗脱曲线
得知 ,在该阶段 2～4 min 收集的馏分 ,经 H PL C 检
测 ,为高质量分数的目标物馏分。
　　由于朱砂根皂苷的吸光系数较小 ,最大吸收波
长为 205 nm ,甲醇的截止波长为 210 nm ,这就使得
紫外检测难以在线进行 ,因此 ,采用柱后分段收集 ,
HPL C 检测。
　　利用反相制备色谱对朱砂根皂苷进行了制备分
离。通过一次分离 ,可得朱砂根皂苷单体。整个过
程 ,用时短 ,效率高 ,分离效果好 ,可连续进样制备。
本文提供的朱砂根皂苷制备方法 ,作为提供朱砂根
皂苷对照品有较好的参考价值。
参考文献 :
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全鹿丸的质量标准研究
郑 　成1 ,2 ,姚彤炜1 ,向智敏2 3
(11 浙江大学药学院 ,浙江 杭州 　310080 ; 21 浙江省药品检验所 ,浙江 杭州 　310004)
摘 　要 :目的 　制定全鹿丸的质量标准。方法 　采用薄层色谱法对方中的甘草、五味子、陈皮进行定性鉴别 ;采用反
相高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素。结果 　薄层色谱鉴别特征明显、专属性强 ;补骨脂素和
·009· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008211225　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :郑　成 (1978 —) ,男 ,浙江温州人 ,主管中药师 ,2001 年毕业于沈阳药科大学中药学专业 ,现为浙江大学硕士研究生 ,主要从
事中药的质量标准研究工作。Tel : (0571) 86459425 　E2mail :joeff20 @yahoo. com. cn