全 文 ：55 5831 75 , r = 01 999 8。结果表明落新妇苷在
01041 48～81296 μg 与峰面积具有良好的线性
关系。
精密称取经减压干燥 12 h 的落新妇苷对照品
适量 ,用甲醇分别制成质量浓度为21204、41408、
22014、44018、88116μg/ mL 的溶液 ,分别精密吸取
上述溶液各 10μL ,进样 ,按上述色谱条件测定峰面
积。以进样质量对峰面积进行线性回归 ,得回归方
程 Y = 2 430 1781 91 X + 23 6231 34 , r = 01 999 9。
结果表明黄杞苷在01022 04～81816μg 与峰面积具
有良好的线性关系。
215 　重现性试验 :采用第一批样品 ,按供试品制备
方法制备样品共 6 份 ,在上述色谱条件下分别进样
测定 ,计算 ,结果样品中落新妇苷平均质量分数为
8517 mg/ g ,RSD 为 119 % ;黄杞苷平均质量分数为
2018 mg/ g ,RSD 为 116 %。
216 　精密度试验 :取同一份供试品溶液 ,连续进样
6 次 ,以落新妇苷及黄杞苷峰面积为考察对象 ,计算
6 次分析所得落新妇苷与黄杞苷峰面积的 RSD 值
均小于 013 %。
217 　稳定性试验 :取同一供试品溶液分别在 0、4、
8、12、16、20、24 h 进样测定 ,结果落新妇苷峰面积
的 RSD 值为 114 % ,黄杞苷 RSD 值为 116 %。表明
供试品溶液中落新妇苷与黄杞苷在 24 h 内均稳定。
218 　加样回收率试验 :采用第一批样品 ,取其粗粉
约 01125 g ,共 6 份 ,精密称定 ,分别精密加入含落新
妇苷215104μg/ mL 和黄杞苷44108μg/ mL 的对照
品溶液 50 mL ,按供试品制备方法制备样品共 6 份 ,
在上述色谱条件下测定 ,计算回收率。结果落新妇
苷平均回收率为 10116 %( RSD = 018 %) ;黄杞苷为
9811 %( RSD = 114 %) 。
219 　样品测定 :取 4 个不同批次的样品及第一批中
黄杞细枝 ,制备供试品溶液 ,在上述色谱条件下测
定 ,记录峰面积 ,按外标法计算质量分数。结果见表
1。黄杞细枝中落新妇苷和黄杞苷的量明显低于黄
杞叶中二者的量 ;且不同批次黄杞叶中落新妇苷与
黄杞苷的量比值也不尽相同。
表 1 　不同批次黄杞叶样品测定结果( n = 2)
Table 1 　Determination of E1 rcwburghiana leaves
in various batches ( n = 2)
批　次 落新妇苷/ (mg ·g - 1) 黄杞苷/ (mg ·g - 1)
第 1 批 851 7 2018
第 2 批 391 2 419
第 3 批 521 9 511
第 4 批 861 7 711
　黄杞细枝 201 0 110
3 　讨论
本实验比较了不同提取方式对样品提取效率的
影响 ,结果显示超声提取与回流提取差别不大 ,故采
用操作相对简单的超声提取方法 ;此外 ,还比较了不
同超声提取时间 (30、45、60、90 min) 对提取效率的
影响 ,4 种提取时间所测得的量与时间成正比 ,但 45
min 与 90 min 相差不大 ,故选择 45 min 提取 ,节省
时间。比较了不同提取溶液 (甲醇 ,75 %甲醇 ,50 %
甲醇 ;乙醇 ,75 %乙醇 ,50 %乙醇) 对提取效率的影
响 ,在相同条件下提取 ,甲醇提取所测得的量最高 ,
故选择甲醇作为提取溶剂。
RP2HPLC法测定黄荆子中牡荆脂素 A
唐莹翠1 ,2 ,曾光尧1 3 ,谭健兵1 ,李妍岚1 ,谭桂山1 ,周应军1 3
(11 中南大学药学院 ,湖南 长沙 　410013 ; 21 湖南省医药学校 ,湖南 长沙 　410014)
摘 　要 :目的 　建立黄荆子中抗肿瘤活性成分 62羟基242(42羟基232甲氧基苯基)232羟甲基272甲氧基23 ,42二氢 ( 3R ,
4S )222醛基萘 (牡荆脂素 A , VBE21) 的定量测定方法。方法 　采用反相高效液相色谱法。Kromasil ODS (250
mm ×416 mm ,5μm)色谱柱 ,乙腈2011 %冰醋酸梯度洗脱 (0 min ,15 ∶85 ;10 min ,15 ∶85 ;40 min ,28 ∶72) ,检测波
长为 255 nm ,柱温为 25 ℃,体积流量为 1 mL/ min。结果 　黄荆子中牡荆脂素 A 在该条件下有较好的线性关系。
结论 　测定方法简便、准确 ,建立了黄荆子药材的牡荆脂素 A 的定量测定方法 ,为黄荆子质量控制及综合利用提供
了可靠的依据。
关键词 :黄荆子 ;62羟基242(42羟基232甲氧基苯基)232羟甲基272甲氧基23 ,42二氢 ( 3R , 4S )222醛基萘 ;高效液相色谱
·703·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008205205
作者简介 :唐莹翠 ,女 ,高级讲师 ,中南大学药学院在职研究生 ,从事天然药物研究与开发。3 通讯作者　曾光尧　Tel : (0731) 2650372 　E2mail :zenggy2005 @1261com
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220307203
　　黄荆子为被子植物马鞭草科的牡荆属植物黄荆
V itex neg un do L1 的种子[ 1 ] ,分布于我国 20 余省
市 ,其中以秦巴山区资源最为丰富 ,其味苦 ,辛 ,温 ,
具有清热解表、利湿解毒、止咳平喘及缓解支气管痉
挛的作用 ,主治感冒、咳嗽、哮喘、疟疾、中暑、风湿、
跌打肿痛等 ,并能防止甲醛性关节炎肿胀的发展。
现代药理实验表明 ,黄荆子具有抗菌及抗氧化作
用[2 ,3 ] 。黄荆子的化学成分研究主要为黄酮类化合
物、二萜类化合物和木脂素类化合物。62羟基242(42
羟基232甲氧基苯基)232羟甲基272甲氧基23 ,42二氢
( 3R , 4S )222醛基萘 (牡荆脂素 A ,以下简称 VB E21)
为从黄荆子分离得到的木脂素类化合物 ,在进行深
入研究的基础上 ,发现其具有较强的抗肿瘤活性 ,对
人乳腺癌 (MCF27) 细胞、人卵巢癌 ( COCl) 、人肝癌
(SMMC27721)和人结肠癌 ( H T229) 细胞增殖有抑
制活性 ,特别是对卵巢癌 ( COCl) 的抑制作用较强 ,
其 IC50 达 1177 μmol/ L ,目前已申请发明专利[4 ] 。
为了解黄荆子中 VB E21 的量 ,掌握含 VB E21 的药
用植物资源 ,本实验确立了黄荆子药材中 VB E21 的
高效液相定量测定方法。
1 　仪器与试药
Aglient 1100 型高效液相色谱仪 (美国 HP 公
司 ,低压四元泵 ,自动进样器 ,柱温箱 , UV 检测器 ,
ChemStation 色谱工作站) ; VB E21 对照品 (本实验
室自制并进行了结构确定[4 ] ,经制备 HL PC 纯化 ,
H PL C 检测面积归一法测得其质量分数 99175 %) ;
药材购自湖南省药材公司 ,经中南大学药学院李劲
平副教授鉴定并确定为马鞭草科牡荆属植物黄荆
V1 neg undo L1 的种子 ; HPL C 流动相中的乙腈为
色谱纯 ,冰醋酸为分析纯 ,水为超纯水。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 : Kromasil ODS21 柱 (250 mm ×416
mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2011 %冰醋酸水溶液梯度
洗脱 (0 min ,15 ∶85 ;10 min ,15 ∶85 ;40 min ,28 ∶
72) ;检测波长 :255 nm ;体积流量 :110 mL/ min。色
谱图见图 1。
212 　对照品溶液的制备 :取 VB E21 对照品 10175
mg ,用甲醇溶解并定容到 50 mL ,避光保存。
213 　供试品溶液的制备 :取粉碎后的黄荆子细粉 5
g ,精密称定 ,置 250 mL 圆底烧瓶中 ,加 40 %乙醇
50 mL ,加热回流 1 h ,脱脂棉滤过 ,滤渣加 40 %乙醇
40 mL 加热回流 015 h 滤过 ,合并两次滤液至 100
t/ min3 2VBE21
图 1 　对照品( A)与样品( B)的高效液相色谱图
Fig11 　HPLC Chromatogram of reference
substance ( A) and sample ( B)
mL 量瓶中 ,40 %乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
214 　线性关系及范围的考察 :取上述 VB E21 对照
品溶液 ,分别进样 2、4、6、8、10、15、20、25、30μL ,以
VB E21 的峰面积对进样的质量进行线性回归 ,回归
方程为 Y = 1 8891 4 X —21 991 9 , r2 = 01 999 9 ,其
在 0143～6145μg 线性关系良好。
215 　精密度试验 :精密吸取上述 VB E21 对照品溶
液 ,连续测定 6 次 ,每次进样 10μL ,结果显示其峰
面积的 RSD 为 1104 %。
216 　稳定性试验 :吸取同一供试品溶液 ,分别于 0、
6、12、18、24、30、48 h 进样测定 ,考察 VB E21 所对应
的峰面积 ,RSD 为 1175 %。结果表明供试品溶液在
室温条件下放置 48 h ,溶液中 VB E21 基本稳定。
217 　重现性试验 :取黄荆子粉末 5 份 ,每份称取药
材粉末约 210 g ,按制备供试品溶液的操作方法提
取 ,制备 5 份 50 mL 供试品溶液。分别吸取供试品
溶液 10μL 进样测定 ,测得药材中 VB E21 的平均质
量分数为 01149 % ,RSD 为 1198 %。
218 　加样回收试验 :取黄荆子粉末 (含 VB E21 为
01149 %) 6 份 ,每份约 210 g ,精密称定 ;分别加入
11016 mg/ mL VB E21 对照品液各 310 mL ,制备供
试品溶液 ,测定 ,并计算回收率 ,结果平均回收率为
100142 % ,RSD 为 1192 %。
219 　样品测定 :取不同产地黄荆子药材 ,制备供试
品溶液 ,测定 VB E21 的量。结果见表 1。
表 1 　样品测定结果( n = 3)
Table 1 　Determination of samples ( n = 3)
批　　号 VBE21/ %
湖南 061021 01119 2
湖南 061223 01113 1
湖南 061107 01216 6
四川 070523 01048 2
四川 070723 01116 8
江西 070710 01023 4
·803· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 　讨论
311 　流动相的选择 :为使色谱峰分离效果好 ,并在
较短的时间出峰 ,先后摸索流动相 ,最终采用本实验
选定的流动相进行梯度洗脱 ,峰形对称 ,出峰时间适
中 ,且分离效果好。
312 　不同产地、不同批次药材中样品的量差别较
大。首次对黄荆子药材中 VB E21 的量进行测定 ,建
立了其定量测定方法学。
参考文献 :
[ 1 ] 　湖南药物志编委会1 湖南药物志 [ M ]1 长沙 : 湖南科学技术
出版社 , 20041
[ 2 ] 　Kawazoe K , Yutani A , Tamemoto K , et al1 Phenylnapht ha2
lene compound f rom t he subterranean part of V itex rot undi 2
f olia and t heir antibacterial activity against met hicillin2resist2
ant S taphy lococcus aureus [J ]1 J N at Prod , 2001 , 64 : 5882
5911
[ 3 ] 　Ono M , Nishida Y , Masuoka C , et al1 Lignan derivatives
and a norditerpene f rom t he seeds of V itex negundo [J ]1 J
N at Prod , 2004 , 67 : 2073220751
[ 4 ] 　周应军1 芳基二氢萘类木脂素衍生物及其用途 [ P]1 中国专
利1 CN2005101366561 7 , 20072072041
蒺藜果中蒺藜呋甾皂苷 B的 HPLC2ELSD 法测定
解生旭1 ,徐暾海2 ,韩 　冬1 ,赵宏峰1 ,司云珊1 ,徐雅娟1 3 3
(11 吉林省中医药科学院 ,吉林 长春 　130021 ; 21 北京中医药大学 ,北京 　100102)
摘 　要 :目的 　建立反相高效液相色谱2蒸发光检测法 ( HPLC2EL SD)测定蒺藜呋甾皂苷 B 的方法。方法 　色谱柱
Vp2ODS C18柱 ,柱温 40 ℃,流动相 :乙腈2水 (26 ∶74) →(28 ∶72) →(31 ∶69) →(50 ∶50)梯度 ,体积流量 1 mL/ min ,
温度 :105 ℃,气体流量 : 310 mL/ min。结果 　该方法的线性范围为 210～1010μg , r = 01997 3 ,平均回收率为
96168 %。结论 　方法准确 ,灵敏度高 ,专属性强 ,重现性好 ,可用于蒺藜药材中该成分的定量测定。
关键词 :蒺藜 ;蒺藜呋甾皂苷 ; HPLC 法
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220309202
　　蒺藜为蒺藜科植物蒺藜 T ribul us terrest ris L1
的干燥成熟果实 ,为我国常用传统中药 ,味辛、苦 ,微
温 ,有小毒 ,归肝经。具平肝解郁 ,活血祛风 ,明目 ,
止痒之功效[1 ] 。蒺藜已被广泛应用于临床制剂中 ,
笔者用蒺藜药材开发出蒺藜果总皂苷制剂 ,蒺藜果
及其制剂尚无可质量控制的对照品。为控制药材及
其总皂苷制剂质量 ,笔者从蒺藜药材中分离提纯化
合物蒺藜呋甾皂苷 B ,并作为对照品进行了纯化及
标定 ,建立了蒺藜果测定方法。
1 　试验仪器与药品
111 　仪器 : 岛津 2010 自动高效液相色谱仪 ,
2000 ES 蒸发光散射检测器 ,N2000 工作站。
112 　试剂与样品 :蒺藜呋甾皂苷 B 实验室自制 ,由
ESI2MS、1 H2NMR、13 C2NMR、HMBC、HMQC 光谱
分析确定结构式为 262O2β2D2吡喃葡萄糖基2(25 R)2
5α2呋甾烷220 (22)2烯22α,3β,262三醇232O2β2D2吡喃
半乳糖基 (1 →2)2β2D2吡喃葡萄糖基 (1 →2)2β2D2吡
喃半乳糖苷 ,质量分数 98180 %以上 ;甲醇为色谱 纯 ,水为纯净水。蒺藜果采自吉林省洮南市、安徽省亳州市、山东省淄博市、河北省安国市等地 ,经长春中医药大学邓明鲁教授鉴定为蒺藜药材为蒺藜科植物蒺藜 T1 terrest ris L1 的干燥成熟果实。2 　方法与结果211 　色 谱 条 件 : 色 谱 柱 为 Vp2ODS 色 谱 柱(250 mm ×415 mm , 5 μm) ;流动相 :乙腈 ( A )2水(B) ,梯度洗脱 ,0～15 min (A :26 % →28 % ,体积流量 1 mL/ min) ;15～25 min (A :28 % →31 % ,体积流量 1 mL/ min) ;25～30 min (A :31 % →50 % ,体积流量 1 mL/ min) ;进样量 10μL ;检测器 :2000 ES 型蒸发光散射检测器 ;柱温 :40 ℃;检测器温度 :100 ℃;气体流量 218 mL/ min。色谱图见图 1。212 　对照品溶液制备 :精密吸取蒺藜呋甾皂苷 B对照品 516 mg ,置 10 mL 量瓶中 ,甲醇溶解至刻度。213 　供试品溶液制备 :取蒺藜果 6 g ,精密称定 ,加70 %乙醇加热回流提取 3 次 ,每次 1 h ,合并提取液 ,回收乙醇至无醇味 ,经过大孔树脂柱 (D21) ,水洗至
·903·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008206225
基金项目 :国家自然基金资助项目 (30371739)
作者简介 :解生旭 (1975 —) ,男 ,长春市人 ,学士学位 ,1997 年毕业于长春中医学院中药学专业 ,现任职于吉林省中医药科学院重点实验
室 ,主要从事中药化学的基础研究和新药研发。　Tel : (0431) 86816848 　E2mail :jshx222 @1261com3 通讯作者　徐雅娟　Tel : (0431) 86816848 　Fax : (0431) 85910067 　E2mail :xyj6492 @shhu1com