全 文 ：·1322· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
制剂与质量
大鼠皮肤角质层对青藤碱脂质体贴剂透皮吸收的影响
张英丰，汪小根，周莉玲
(广州中医药大学，广东广州 510405)
摘 要：目的 考察大鼠皮肤角质层对青藤碱脂质体贴剂透皮吸收的影响。方法 采用Franz扩散池法分别考察
正常腹部、背部皮肤及经采用胶带剥离法制备的去角质层腹部、背部皮肤的透皮吸收特性，以预设的采样间隔采
样，HPLC法检测，以单位面积累积透皮量对时间拟合，透皮速率常数(J)作为判断的标准。结果除去角质层的腹
部及背部皮肤比相应部位的正常皮肤J有明显增加，且皮肤中药物释放速率常数也大于相应部位的正常皮肤。结
论皮肤角质层对青藤碱脂质体贴剂透皮特性有显著影响，在制备动物皮肤时应注意皮肤的完整性。
关键词：青藤碱脂质体贴剂；胶带剥离；角质层；透皮吸收
中图分类号：R283．62；R286．02文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)09—1322—03
Impactofratskinstratumcorneumontransdermalabsorption
characteristicofSinomenineLiposomePatch
ZHANGYing—feng，WANGXiao—gen，ZHOULi—ling
(GuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine，Guangzhou510405，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofskinstratumcorneumontransdermalabsorption
characteristicofSinomenineLiposomePatch．MethodsT enormalandstrippedstratumcorneumskinof
backandabdomenwasusedtostudythetransdermalabsorptioncharacteristicbyFranzmethod．The
transdermalabsorptionsamplewastakenatthepresetsamplingtimepoint．Thesamplecontentwas
determinedbyHPLC．Thecumulativetransdermalamountofperunitareawasfittedwithsamplingtime
point，theransdermalrateconstant(Jvalue)wasselectedascomparatives andard．ResultsThe
transdermalrateconstant(，)ofskinwithstratumcorneumstrippedincreasedobviouslythanthatofthe
normalskin．SOwasthereleasedrateconstant．ConclusionThesk nstratumcorneumhasannotable
impactontransdermalabsorptioncharacteristicofSinomenineL posomePatch．Whent eskinof
experimentalanimalbeingprepared，theintegralityshouldbepaidmoreattention．
Keywords：SinomenineLiposomePatch；tapestripping；stratumco neum(SC)；transdermal
absorption
皮肤角质层是药物透皮扩散的主要屏障已经成
为共识，角质层的厚度0．8～1．2mm，角质层细胞
填充主要是类脂形成的液晶结构，这种致密“砖泥结
构”，既作为机体的一种防御屏障，也是药物扩散的
主要屏障。本实验采用Franz扩散池法从定量研究
青藤碱透皮吸收的角度考察角质层对药物透皮吸
收、皮肤药物储库的影响，为透皮试验时动物皮肤的
制备、体外试验相关影响因素的控制提供借鉴。
1仪器与试药
日本岛津LC一10ATHPLC，SPD一10A可变
波长紫外检测器，N2000双通道色谱工作站；TK一
12A型透皮扩散试验仪(上海锴凯科技贸易有限公
司，接收室容积7mL，有效透皮面积2．92cm2；十万
分之一电子分析天平(Sartorius公司)；LD5—2A型
高速离心机(北京医用离心机制造厂)。
青藤碱对照品购于中国药品生物制品检定所
(批号0774—200105)；色谱纯甲醇，水为超纯水，其
他试剂为分析纯。
2方法与结果
2．1青藤碱的HPLC法测定
2．1．1 色谱条件：色谱柱：大连依利特Hypersil
BDS柱(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相为甲醇一
水(50：50，加入的0．2％乙二胺作为改性剂)；体积
流量为1mL／min；检测波长为265nm；柱温为室温。
收稿日期：2005—11-06
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30371783)；广州市科技局资助项目(200223一E5011)
作者简介：张英丰(1977一)，男，广州中医药大学2003级博士研究生，研究方向为生物药剂学与药动学。
E—mail：fredzhangfeng@163．com
万方数据
中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
2．1．2标准曲线的制备：精密称取P。O。干燥至恒重
的青藤碱对照品7．50mg，置于25mL量瓶中，甲醇
定容，振摇即得0．30mg／mL对照品贮备液。分别吸
取0．5、2、4、6、8、10、12、14肛L注入高效液相色谱仪。
以峰面积对进样量进行线性回归，得回归方程y一467
978X+17633，r=0．9997，进样量在0．15～4．2弘g
与峰面积呈良好的线性关系。再取1mL置于25mL
量瓶中，甲醇定容，分别吸取0．5、1、2、4、6、8、10、12
肛L注入高效液相色谱仪，以峰面积对进样量进行线性
回归，得回归方程Y一480622X+492．37(r=
0．9991)，进样量在0．006～0．1444肛g与峰面积呈
良好的线性关系。
2．1．3精密度试验：高、低质量浓度对照品液在1d
内连续进样5次，每次进样10肚L，并分别在连续5
d每天进样1次，每次进样lO弘L，考察日内RSD和
日间RSD，结果分别为0．53％、1．08％、2．08％、
2．98％。
2．1．4稳定性试验：取供试品溶液分别于0、2、4、
8、24h进样测定，结果青藤碱峰面积的RSD为
2．52％，表明供试品溶液在24h内比较稳定。
2．1．5阴性干扰试验：按透皮试验方法将空白脂质
体贴剂贴于皮肤表面，接收室加入7mLpH6．8的
PBS液(实测pH6．73)，在24h时用微量进样器取
出100肛L接收液进样分析，结果表明在青藤碱出峰
位置无干扰峰，分析条件可行。
取空白大鼠皮肤按2．6项下的皮肤处理方法处
理，进样10扯L，结果表明皮肤内源性成分对青藤碱
无明显干扰，皮肤处理条件可行。
2．2离体皮肤及去角质层皮肤的制备：取雌性体重
180---．200gSD大鼠，用BaS在腹部及背部脱毛，并
饲养1周以待BaS对皮肤造成的损伤完全恢复。脱
颈处死后分别取下腹部及背部皮肤，仔细剥离皮下
脂肪组织，并用生理盐水反复冲洗，直至无浑浊为
止，将制备好的一半皮肤用压敏胶带均匀用力地、平
行操作地剥离角质层各25次，得去角质层背部及腹
部皮肤uJ。
2．3接收液的处理：接收液为7mL经过10min超
声脱气并放冷至室温的pH6．8的PBS液(实测pH
6．73)。
2．4皮肤的预处理：皮肤自然解冻后固定于Franz
扩散池，角质层向上，在达到预定温度后平衡1h。
2．5 透皮吸收试验：考察温度设定32℃。采用
TK一12A型透皮扩散试验仪，将上述4种皮肤同时
固定在Franz扩散池内[2]，皮肤上表面与剥离保护
层的青藤碱脂质体贴剂紧密接触，真皮层与接收液
接触。在接收室中注入接收液7mL并小心将气泡
完全驱逐出。磁力搅拌转速为(200士10)r／min，分
别在0．5、1、2、4、6、8、10、12、14、22、24h用注射器
吸取1mL接收液，并随即补充相同体积、相同温
度、相同组成的接收液。样品经0．44肛m水系微孔
滤膜滤过后按上述色谱条件进样10肛L，测定青藤
碱的质量浓度。实验重复3次。
2．6皮肤储库效应的考察：在经皮渗透结束后立即
剥离脂质体贴剂，取出全部接收液换以新鲜的7mL
接收液，用恒温32℃的生理盐水液冲洗皮肤表面
后，将皮肤继续固定在Franz扩散池内，并在2、4、
6、8、10、24h取样2mL置于10mL具塞玻璃离心
管内，加入5mL碱性氯仿，涡旋混匀器混匀lmin
后3000r／rain离心5min，用干燥的刻度吸管精密
吸取4mL萃取液，50℃N。吹干，100肛L甲醇涡旋
1min溶解残渣后转移到0．5mL的EP管中，
10000r／rain离心5min后进样lO肛L分析。在皮
肤释放结束后立即将皮肤剪碎置玻璃匀浆器内，碱
性氯仿(1mL×3)匀浆，3000r／min离心5min后
将氯仿50℃N。吹干，100弘L甲醇涡旋1min溶解
残渣后转移到0．5mL的EP管中，1000r／min离
心5min后进样10肛L分析。实验重复3次。
2．7结果处理：采用SPSSll．0数据处理软件处理
数据。按以下公式计算单位面积累积渗透量。
n一1，I一1
C。×7+三C,-X1 C。×7+三Cf×2
Q一————jFL—一Qc”一————_产L+Q匀浆
式中，Q：单位面积累积渗透量(弘g／cm2)；C。：第咒个取样点
测得的药物质量浓度(pg／mL)；C。：第i(i一雄一1)个取样点
测得的药物质量浓度(／-g／mL)；A：有效透皮面积(2．92cm2)
以Q的平均值对时间t分别按零级、Higuchi方
程口3进行拟合，所得方程的斜率即为透皮速率常数
(，)，同时以EF—J去角质层皮肤∥正常皮肤评价角质层对
药物经皮渗透的影响。结果见表1。
以单位面积累积释放量Q。T，的平均值对时间t
分别按零级、Higuchi方程进行拟合，所得方程的斜
率即为皮肤储库释放速率常数(R)，R7一R去角质层皮肤／
R正常皮肤评价剥离角质层对药物经皮释放的影响。累
积释放量与皮肤残留药量之和即为皮肤储库总药
量。结果见表2。
皮肤储库的总药量计算为：Q(丁)=Q释放+Q匀浆，
结果见表3。
万方数据
·1324· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
表1 脂质体贴剂透皮吸收特性拟合方程血一3)
Table1 FittingequationsontransdermalabsorptioncharacteristicofSinomenineLiposomePatch白一3)
皮肤 回归方程 J EF
腹部皮肤
去角质层腹部皮肤
背部皮肤
去角质层背部皮肤
Q一9．7188t+0．9948 (r2—0．987O) 9．7188
Q一55．5tl／2—59．7397 (rz一0．9625) 55．500
Q一34．6815￡+142．8048(r2—0．9533) 34．6815 3．5685
Q一205．4623 tl／2—92．6096 (r2—0．984) 205．4623 3．7020
Q一3．6719f+3．5407 (r2—0．9964) 3．6719
Q一19．6284tl／2—23．6900 (r2—0．9137) 19．6284
Q一15．3812t一2．159(rz一0．9972) 15．3812 4．1889
Q一83．4282tl／2—90．0411 (r2—0．9137)83．4282 4·2504
当以零级拟合时，t，的单位是pg／(cm2·h)；当以Higuchi拟合时，，的单位是弘g／(cm2·hi／Z)，表2同
WhenfittinginzeroorderunitofJispg／(cm2·h)；WhenfittingHiguchiunitofJis肛g／(cm2·hl／Z)，Table2 iss me
表2脂质体贴剂皮肤释放特性拟合方程(弹一3)
Table2 FittingequationsonskinreleasingcharacteristicsofSinomenineLiposomePatch(n一3)
皮肤 回归方程 R 尺
腹部皮肤 Q一0．4722≠+0．6413 (r2—0．9928)0·4722
Q一3．0455tI／2—3．6130 (r2—0．9621) 3．0455
去角质层腹部皮肤 Q一0．8299f+0．0262 (r2—0．976o)0．8299 1·7575
背部皮肤 Q一5．1479 t“2—7．0747 (r2一O．9857) 5-1479 1·6884
Q一0．5593f+3．155l (r2—0．9105)0．5593
Q一3．75tl／2—1．9952 (r2—0．9313) 3．7500
去角质层背部皮肤 Q一1．2645f+2．9989 (r2—0．8981) 1．2645 2·2609
Q一8．201tI／2—8．6568 (r2—0．9511)8．2010 2．1869
表3脂质体贴剂皮肤储库效应 扩散进接收室内。因除去了角质层，故药物相比于完
Table3 SkinstoringeffectofSinomenine
LiposomePatch
可以看出，皮肤储库总的药量顺序为：
Q去角质层背皮>Q去角质层腹皮>Q背皮>Q腹皮。
从不同拟合方程所得到的EF值来看，除去角
质层的皮肤的透皮速率常数要明显高于正常皮肤，
且同一皮肤不同方程拟合得到的比值接近，腹部皮
肤与背部皮肤之间的EF值差异不大，表明角质层
对腹部及背部皮肤有相同或相近的影响。
从皮肤释放特性来看，根据R7值，表明去角质
层的皮肤释放速率常数要快于正常皮肤。皮肤储库
储存的总药物量：Q去角质层背皮>Q去角质层腹皮>Q背皮>
Q腹皮。
3讨论
在药物渗透时根据扩散室与接收室的浓度差扩
散，J=DKAC／h[43(D为扩散系数，K为分配系数，
△C为扩散室与接收室的浓度差，h为角质层厚
度)，由上式看出J与浓度差成正比。当药物扩散结
束后，残留在皮肤中的药物储库做为扩散的原动力，
替代了原△C起的作用。药物在储库的推动下被动
整皮肤渗透明显增多，而皮肤储库释放速率亦明显
快过完整皮肤。
从药物透皮吸收行为看，根据，=DKAC／h可
知，与皮肤厚度^成反比，因大鼠背部皮肤比腹部
皮肤厚，，相比于腹部皮肤小，去角质层的背部皮肤
，也小于去角质层腹部皮肤，。
从皮肤释放药物行为看，去角质层皮肤因除去
角质层这个主要渗透屏障，吸收速率快于完整皮肤，
沉积于皮肤内部的量(即形成药物储库)相应也大于
完整皮肤，故在以药物储库做为扩散原动力的情况
下去角质层皮肤的释放速率快于完整皮肤。因背皮
厚于腹皮，相应皮肤中沉积的药物量也高于腹皮，故
从结果可以看到背部皮肤的释放快于腹部皮肤，去
角质层背部皮肤释放快于去角质层腹部皮肤。
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万方数据
大鼠皮肤角质层对青藤碱脂质体贴剂透皮吸收的影响
作者： 张英丰， 汪小根， 周莉玲， ZHANG Ying-feng， WANG Xiao-gen， ZHOU Li-ling
作者单位： 广州中医药大学,广东,广州,510405
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(9)
被引用次数： 6次

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