全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·221·
药理与临床
人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响
张皖东1，吕 诚1，刘振丽1，赵宏艳1，杨大坚2，陈士林2，吴志鹏3，吕爱平h2’3+
(1．中国中医科学院基础理论研究所，北京 100700；2．香港理工大学深圳现代中药研究所，广东深圳518057；
3．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330006)
摘要：目的观察人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响。方法分离SD大鼠外周血单个
核细胞(PBMC)、派伊尔结淋巴细胞(PPL)、肠道上皮内淋巴细胞(IEL)和黏膜固有层淋巴细胞(LPL)，分别与
不同质量浓度的人参多糖和猪苓多糖共同培养，检测上清液中肿瘤坏死因子一Q(TNF～a)和7一干扰素(IFN一7)水
平变化。结果人参多糖和猪苓多糖均可以使PBMC和PPL培养上清液中TNF—a和IFN一)，水平升高；2mg／mL
猪苓多糖可以使IEL培养上清液中TNF—a和IFN一7水平升高；人参多糖和猪苓多糖可以使LPL培养上清液中
TNF—a和IFN一7水平降低。结论人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能具有调节作用。
关键词：人参多糖；猪苓多糖；肠道黏膜免疫；淋巴细胞
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0221—04
EffectofginsengpolysaccharideandPolyporusumbellatuspolysaccharide
onfunctionoflymphocytesinentericmu osaofrats
ZHANGWan—don91，LUChen91，LIUZhen—lil，ZHAOHong—yanl，
YANGDa—jian2，CHENShi—lin2，WUZhi—pen93，LUAi—pin91’2’3
(1．InstituteofBasicTheory，ChinaAcademyofChineseMedicalSciences，Beijing100700，China；2．Instituteof
ModernChineseMedicine，TheHongKongPolytechnicUniversity，Shenzhen518057，China；3．NationalPharma—
ceuticalEngineeringResearchCenterfoSolidPreparationofChi eseMateriaMedica，Nanchang330006，China)
Abstract：ObjectiveToexploretheffectofginsengpolysaccharideandPolyporusumbellatus
polysaccharideonfunctionofT—lymphocytesinentericmucosaofrats．MethodsTheperipheralblood
mononuclearells(PBMC)，Peyer7SPatchlymphocyte(PPL)，intraepitheliallymphocyte(IEL)，and
laminaproprialymphocyte(LPL)ofSDratswereisolated．TheselymphocyteswerCO—culturedwith
ginsengpoIysaccharideand尸．umbellatuspolysaccharideofdiff rentconcentrations．Thechangesof
TNF一0【andIFN一7levelinsupernatantswereobservedwithELISA．ResultsGinsengpolysaccharideand
P．umbellatuspoly accharideincreasedthlevelofTNF—aandIFN一7inthesupernatantsofPBMCand
PPL；P．umbellatuspo ysaccharideinthedosageof2mg／mLincreasedthlevelofTNF—aandIFN一7in
supernatantofIEL；ginsengpolysaccharideandP．umbellatuspoly accharidedecreasedthlevelofTNF—d
andIFN一7insupernatantofLPL．ConclusionG nsengp01ysaccharideandP． umbellatuspolysaccharide
canregulatethefunctionoflymphocytesinentericmucosa]immunesystem．
Keywords：ginsengpolysaccharide；Polyporusumbe latuslysaccharide；intestinalmucosal
immunity；lymphocyte
中药成分复杂、具有多途径、多靶点发挥药理作
用的特点。研究表明，多糖类物质是中药复杂成分之
一，在中药治疗中起着重要作用。研究发现多糖及多
糖复合物参与和介导了多种细胞功能的调节，它们
能够刺激多种免疫细胞，促进白细胞介素、肿瘤坏死
因子、干扰素等细胞因子的合成，调节抗体和补体等
来调节免疫系统‘¨。但对于多糖类的肠道黏膜免疫
调节途径和机制仍不清楚。肠道黏膜免疫系统是当
今许多学者共同研究的热门领域。肠道黏膜免疫系
统是指分布于机体胃肠道内表面黏膜内相关的淋巴
收稿日期：2006—05—20
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30171133)
作者简介：张皖东(1977一)，男，安徽省滁州市人，主治中医师，在读医学博士，主要从事中医药防治类风湿性关节炎和黏膜免疫研究。
*通讯作者吕爱平Tel：(OLO)6406761lE—mail： ap64067611@126．corn
万方数据
·222· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
组织(gut—associatedlymphoidtissue，GALT)，由
派伊尔结(Peyer
7
SPatches，PP)、肠系膜淋巴结以
及分散在黏膜固有层(1aminapropria，LP)和肠上
皮中的大量淋巴细胞组成[2]。研究表明肠道黏膜免
疫系统是产生免疫耐受作用的重要部位，通过激活
肠道黏膜免疫，达到免疫耐受或者免疫抑制是治疗
自身免疫性疾病的可能途径之一。
笔者设想难于被吸收的多糖可能部分是通过与
肠道黏膜系统接触，刺激黏膜系统淋巴细胞，发挥其
免疫调节作用。本研究选用临床常用的抗肿瘤中药
猪苓多糖、研究较多的人参多糖作为多糖的代表，探
讨它们对肠道黏膜免疫相关细胞的作用。
1材料与方法
1．1动物：雄性SD大鼠12只，清洁级，体重(190±
10)g，由广州中医药大学实验动物中心提供(许可
证号：SCXK粤20050001)，饲养于SPF级动物房。
1．2药物：人参多糖，6rag／2mL，沈阳双鼎制药有
限公司产品(批号05030102)；猪苓多糖10mg／2
mL，江苏正大天晴药业股份有限公司产品(批号
0404231)。
1．3细胞分离方法
1．3．1 分离外周血单个核细胞：取大鼠外周血3
mL，肝素抗凝，用ficoll(美国Pharmacia公司产
品)分离出单个核细胞(peripheralblood
mononuclearells，PBMC)。加入0．85％NH4Cl溶
液溶解残存的红细胞，获得纯化的PBMC。
1．3．2 分离PP结淋巴细胞(Peyer
7
SPatches
lymphocyte，PPL)：参照文献方法[33获取PP，机械
粉碎后，制成PBS混悬液，300目筛网滤过，再利用
ficoll，分离出PP中T淋巴细胞。
1．3．3分离小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial
lymphocyte，IEL)：参考WyattCR等[43报道的方
法，取出大鼠全部小肠，用含抗生素的D—Hank7S液
冲洗肠腔，翻转小肠使黏膜面向外，置于盛有消化液
的离心管中。消化1h，消化液滤过后，离心1min
(1000r／rain)，去除上清液，加入RPMI一1640培养
液，调整体积至5．4mI。，再加入100％percoll(美
国Pharmacia公司产品)至9mL，充分混匀后成为
40％细胞一percoll混悬液，在试管底部轻轻加入1
mL70％percoll，制成percoll梯度分离液，离心20
min(600×g)。收集40％与70％percoll界面间的
细胞，即为IEL。
1．3．4分离小肠固有层淋巴细胞(1aminapropria
lymphocyte，LPL)：将上述消化1次后的肠道组织
加入含有0．1％Ⅱ型胶原酶(美国Sigma公司产
品)的RPMI一1640培养液中。再次消化1h，滤过、
离心、去除上清液，加入培养液，调整体积至5．4
mL，再加入100％percoll至9mL，充分混匀后成
为40％细胞一pereoll混悬液，在试管底部轻轻加入
1mL70％percoll，制成percoll梯度分离液。离心
20min(600×g)，收集40％与70％percoll界面
间的细胞，即为LPL。
1．4 流式细胞仪检测：取分离出的细胞悬液100
肚L，参照产品说明书配好三色标记的抗大鼠单抗
(FITC标记CD3单克隆抗体、RPE标记CD4单克
隆抗体、RPE—Cy5标记CD8单克隆抗体，美国
Serotec公司产品)，室温避光反应0．5h，上流式细
胞仪检测，收集、分析数据。
1．5 细胞培养：将上述分离出的淋巴细胞加入含
10％胎牛血清培养液，调节细胞浓度为1x106／
mL，取细胞悬液分别置于96孔培养板中，每孑L200
肛L，分别加入不同质量浓度猪苓多糖、人参多糖(50
pL)，对照组加入等量培养液。细胞置37℃、5％
CO。的恒温培养箱中孵育48h，定期观察淋巴细胞
生长情况，留上清液备用。
1．6 7一干扰素(IFN一7)、肿瘤坏死因子一a(TNF—a)
水平检测：参照试剂盒(IFN一7、TNF—aELISA试剂
盒购自eBioscience公司)说明书检测培养上清液
中IFN一7和TNF—a水平。方法如下：向96孔板中
分别加入100肛L的待测上清液和标准品，室温下
孵育2h；用洗涤缓冲液洗5次，加入100肛L的检测
抗体，室温下孵育lh；用洗涤缓冲液洗5次，加入
100肚L的辣根过氧化物酶底物，室温下孵育30min；
用洗涤缓冲液洗7次，加入100肛L底物，室温孵育
15m n后，加入50肛L终止液，上酶标仪检测吸光度
(A)值。
1．7统计学方法：计量资料用37±S表示，组间比较
采用t检验。
2 结果
2．1 不同部位T淋巴细胞亚群流式检测结果：见
表1。外周血和PP淋巴细胞中CD4+细胞水平高于
CD8+细胞，在肠上皮内和肠黏膜固有层淋巴细胞中
CD8+细胞占绝大多数。
2．2 人参多糖和猪苓多糖对淋巴细胞上清液
TNF—a水平的影响：见表2。人参多糖和猪苓多糖均
可以使PBMC和PPL上清液中TNF—a水平升高，
与对照组比较，差异显著(P<0．05、0．01)，并在一
定范围内呈剂量一效应正相关。2mg／mL猪苓多糖
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·223·
表1不同部位T淋巴细胞亚群(z士S，n=12)
Table1 CD4+andCD8+cellsofT ymphocytes
indifferentpar s(；±s，一一12)
表2人参多糖和猪苓多糖对淋巴细胞上清液中TNF—a
水平的影响(；±s，n一6)
Table2 EffectsofginsengpolysaccharideandP．umbel—
latuspolysaccharideonTNF—alevelinsuper—
natantsoflymphocytesG±s，n一6)
剂量／
删(mE．mL_1)_F=BMC恤E·mL1，
TNF—a(A值)
PPL I[1cL LPL
与对照组比较：‘Pd0．05‘‘Pd0．01
▲P可以使IEL上清液中TNF—a水平升高(尸<
0．05)，而1、0．5mg／mL猪苓多糖和人参多糖对
IEL上清液中TNF—a水平无明显影响。人参多糖和
猪苓多糖与LPL共同培养时，上清液中的TNF—a
水平下降，差异显著(P2．3 人参多糖和猪苓多糖对淋巴细胞上清液中
INF一了水平的影响：见表3。人参多糖和猪苓多糖均
可以使PBMC和PPL上清液中INF一7水平升高，
与对照组比较，差异具有显著性(P并在一定范围内呈剂量一效应正相关。2mg／mL猪
苓多糖可以使IEL上清液中INF一7水平升高(P<
0．05)，而1、0．5mg／mL猪苓多糖和人参多糖对
IEL上清液中INF一7水平无明显影响。人参多糖和
猪苓多糖与LPL共同培养时，上清液中的INF一7
水平下降，差异具有显著性(P3讨论
多糖是一类结构复杂的高分子化合物，是构成
生命的四大基本物质之一，同时也是一类具有免疫
调节活性的生物大分子物质。研究表明，多糖具有抗
肿瘤、抗病毒、抗衰老、降血糖、免疫调节等作用口“]。
多糖不但可通过刺激机体的杀伤性T细胞，活化巨
噬细胞毒作用来发挥抗肿瘤作用；还可以影响肿瘤
细胞的分裂、增殖、生长周期以及某些相关基因的表
达口’8]，同时，作为一种免疫调节剂，多糖能起到刺激
表3人参多糖和猪苓多糖对淋巴细胞上清液中INF—y
水平的影响(；±s，聘一6)
Table3 EffectsofginsengpolysaccharideandP．umbel—
latuspolysaccharideonINF—ylevelinsuper—
natantsoflymphocytes(J±S，n一6)
剂量／删(醐．IIlL·)1Lmg。mLJ PBM0 1NF7(A值)PPL IEL LPL
与对照组比较：‘P▲P<0．05▲▲P机体的各种免疫活性细胞的成熟、分化和增殖，增加
巨噬细胞非特异性细胞毒，诱导白细胞介素一1(IL—
1)、白细胞介素一2(IL一2)、肿瘤坏死因子、干扰素等
细胞因子的产生和细胞因子受体的表达，促进抗体
形成，活化补体系统的经典途径及变更途径等作用。
但对于口服制剂的多糖类，被消化成单糖的部分可
以吸收人血发挥其作用，而难于被消化的多糖部分
的作用却不明确，笔者认为可能是通过与肠道黏膜
系统接触，刺激黏膜系统淋巴细胞，发挥其免疫调节
作用。
肠道黏膜处于沟通机体内外环境的重要位置，
具有消化、吸收、分泌和防御等重要功能。由于肠内
的淋巴细胞比任何器官的都多，且肠道接触抗原的
表面积最大，所以肠道是体内最大的免疫器官。肠道
相关的淋巴组织包括PP、黏膜归巢受体、分散在黏
膜固有层和肠上皮中的大量淋巴细胞[2]。肠道黏膜
免疫系统主要有3个功能：参与抗原刺激的应答过
程；产生分泌型IgA；介导口服抗原诱导的免疫耐
受。本实验结果表明，外周血和PP淋巴细胞的亚型
与肠道黏膜淋巴细胞亚型有显著不同，也提示肠道
黏膜免疫系统起着不同的作用。
TNF—a和IFN一7均是免疫反应中非常重要的
细胞因子。TNF—a主要由单核巨噬细胞产生，自然
杀伤细胞(NK细胞)、T细胞也可以产生TNF—a；
而IFN一7主要来自活化的Thl淋巴细胞，亦可由
NK细胞产生。本实验结果表明猪苓多糖和人参多
糖与PBMC和PPL共同培养，均可以促进TNF—Q
和IFN一7的分泌，并在一定质量浓度范围内呈量一
效正相关。说明猪苓多糖和人参多糖均可以激活外
周血和PP中的单核巨噬细胞和T淋巴细胞，诱导
万方数据
·224· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
TNF—a和IFN一7的生成，发挥免疫促进活性，与以
往研究一致[9]。猪苓多糖与IEL共同培养时，仅在2
mg／mL时可以得到TNF—a和IFN一7水平升高的
结果，而在1、0．5mg／mL时，TNF—a和IFN一7水
平无明显变化，人参多糖则对IEL分泌TNF—a和
IFN一7的水平无明显影响，这可能与多糖的相对质
量浓度过低，不足以活化该部位的Thl细胞，抑或
与Th2细胞活化有关。研究表明[1叩低剂量的抗原
可以导致T细胞介导的主动抑制，当抗原进入黏膜
后，被抗原呈递细胞摄取，经过复杂的加工，呈递，诱
导Th2细胞分泌抑制性细胞因子IL一4、IL一5和
TGF—B等，在这些细胞因子的作用下，引导免疫应
答的主动抑制，导致TNF—a和IFN一了的分泌减少。
猪苓多糖和人参多糖与LPL共同培养时，淋巴细胞
分泌TNF—a和IFN一7的能力均受到不同程度的抑
制。这种抑制的原因可能是：(1)Th2细胞活化，分
泌IL一4、IL一10、TGF—p等抑制因子，使得机体对外
来抗原的特异性的免疫应答被抑制；(2)由于在固
有层的淋巴细胞中CD4+细胞仅有8．06％，使得抗
原的相对水平升高，从而导致CD4+细胞凋亡。
本研究结果说明猪苓多糖和人参多糖对
PBMC和PP淋巴细胞具有活化作用，可以诱导
TNF—a和IFN一7生成；同时在一定的质量浓度下，
引起肠上皮内和黏膜固有层的淋巴细胞的免疫功能
低下，这种低下是否能减少肠道黏膜免疫通常反映
的免疫抑制作用，以及这种免疫影响形成的机制有
待于进一步研究。
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汉防己甲素大鼠在体肠吸收机制研究
张颖1’2，蒋学华p
(1．四川大学华西药学院，四川成都610041；2．四川抗菌素工业研究所，四川成都610051)
摘 要：目的 研究汉防己甲素在大鼠在体肠吸收机制。方法 采用大鼠在体肠段灌流实验，利用紫外分光光度法
和HPI。C法分别测定酚红和汉防己甲素的量，分别研究药物质量浓度和吸收部位对汉防己甲素吸收的影响。结果
在5．4～21．8btg／mL药物质量浓度对小肠吸收速率常数(K。)无影响；各肠段的K。回肠>空肠>结肠>十二指
肠，分别为0．1686、0．1260、0．1254、0．1109h～。结论汉防己甲素的吸收符合一级动力学特征，吸收机制为被
动扩散；汉防己甲素在各肠段均有较好的吸收。
关键词：汉防己甲素；在体肠灌流；吸收速率常数；膜表观渗透系数
中图分类号：R285．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0224—05
收稿日期：2006—06—01
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30271614；30572373)
作者简介：张颖，女，硕士研究生，副研究员，从事药物新制剂研究。
*通讯作者蒋学华Tel：(028)85501370E—mail：jxhl013@vip．163．com
万方数据
人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响
作者： 张皖东， 吕诚， 刘振丽， 赵宏艳， 杨大坚， 陈士林， 吴志鹏， 吕爱平， ZHANG Wan-
dong， L(U) Cheng， LIU Zhen-li， ZHAO Hong-yan， YANG Da-jian， CHEN Shi-lin，
WU Zhi-peng， L(U) Ai-ping
作者单位： 张皖东,吕诚,刘振丽,赵宏艳,ZHANG Wan-dong,L(U) Cheng,LIU Zhen-li,ZHAO Hong-yan(中
国中医科学院基础理论研究所,北京,100700)， 杨大坚,陈士林,YANG Da-jian,CHEN Shi-
lin(香港理工大学深圳现代中药研究所,广东,深圳,518057)， 吴志鹏,WU Zhi-peng(中药固
体制剂制造技术国家工程研究中心,江西,南昌,330006)， 吕爱平,L(U) Ai-ping(中国中医
科学院基础理论研究所,北京,100700;香港理工大学深圳现代中药研究所,广东,深圳
,518057;中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西,南昌,330006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)
被引用次数： 11次

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