全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月·1881·
酸积累起主导作用还需进行更细致和深入研究。
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RP—HPLC法测定甘草废渣及不同产地甘草中甘草查耳酮A
杨琳2“，车庆明P，孙启时2
(1．北京大学医学部药学院，北京100083；2．沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳110016)
甘草为豆科植物甘草Glycyrrhizauralensis
Fisch．、胀果甘草G．inJqataBat．或光果甘草G．
glabraL．的干燥根及根茎。具有补脾益气、祛痰止
咳、清热解毒、缓急止痛、调和诸药之功效，素有“国
佬”之称。甘草的化学和药理学研究表明，甘草酸和
甘草黄酮类成分是其主要的有效成分，其中黄酮类
成分具有显著的抗溃疡、抗肿瘤、抗氧化、抑菌、抗
炎、降血脂、镇痛等药理活性，同时还被广泛用于食
品添加剂及化妆品领域口’2]。长期以来，工业化生产
只对甘草中的甘草酸作为主要有效成分进行提取，
提取甘草酸后的甘草药渣则被当作废渣遗弃，造成
了环境污染和资源浪费。为了更加合理地利用有限
的甘草资源，笔者对工业提取甘草酸后的甘草废渣
进行了系统的化学研究，从中分离得到了以甘草查
耳酮A为主要成分的多种黄酮类化合物。文献报
道[3]，甘草查耳酮A有抑制肿瘤发生、抗病原微生
物、抑制杜氏利什曼原虫和硕大利什曼原虫的前鞭
毛体和无鞭毛体的生长等作用，体外对革兰氏阳性
球菌、杆菌和棒型菌有明显的抑制作用。目前，有关
甘草废渣中甘草查耳酮A的定量测定尚未见报道。
本实验首次采用RP—HPLC法对甘草废渣及其相关
药材中甘草查耳酮A的量进行了比较，以期为甘草
废渣的回收利用提供依据。本方法简便，快速，灵敏
度高，适合常规分析。
1仪器与药品
Agilent1100型高效液相色谱仪；G1365B
MWD型紫外检测器；G1311A四元泵；G1316A柱
箱；Agilent1100型数据处理系统；旋转蒸发仪(上
海申生科技有限公司)。
甘草药材经由沈阳药科大学孙启时教授鉴定，
新疆产甘草为胀果甘草G．inflataBa ．，内蒙产甘
草为甘草G．uralensisFi ch．。
甲醇(色谱纯、分析纯)、四氢呋喃(色谱纯)、
冰醋酸(分析纯)、去离子水，甘草查耳酮A自制，
由甘草废渣中分离得到，经光谱、色谱法鉴定，质量
分数>98％。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱BischoffC18(150nlm×
2．0mitt，5肛m)色谱柱；流动相：甲醇一四氢呋喃一l％
醋酸的水溶液(46：10：44)；检测波长：377nm；体
收稿日期：2006—03—14
作者简介：车庆明(1958一)，男，教授，主要从事中药化学及其成分的药理代谢研究。Tel：(010)82802468
*通讯作者
万方数据
·1882· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
积流量：0．3mL／min；柱温：30℃；进样量：5肛L。
2．2专属性试验；取甘草查耳酮A对照品、甘草废
渣及甘草药材样品的甲醇溶液，按上述色谱条件处
理，色谱图见图1。由图可见，在选定的色谱条件下
甘草查耳酮A与其他成分分离效果良好。
2．3标准曲线制备：精密称取甘草查耳酮A对照
品10．0mg，置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，作为对照品贮备液。精密吸取0．1、0．2、0．4、
0．8、1．6、3．2mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇至
刻度，摇匀，过0．45pm微孔滤膜，取续滤液作为对
照品溶液。精密吸取5弘L，注入液相色谱仪，测定，
以吸收峰面积为纵坐标(y)，质量浓度(弘g／mL)为
横坐标(x)，绘制标准曲线，甘草查耳酮A在1～
32pg／mL与峰面积呈良好线性关系。标准曲线方
程为：Y一186．37X+15．262，r一0．9997。
2．4供试品溶液的制备：精密称取甘草废渣样品及
药材样品各1．0g，分别置索氏提取器中，加甲醇
150mL，回流提取至无色，滤过，加10mL甲醇洗涤
滤渣及容器，合并滤液及洗液，浓缩，浓缩液定量转
移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取
1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过
0．45p．m微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2．5 精密度试验：精密吸取同一份供试品溶液5
肛L，重复进样5次，测定峰面积，其RSD为1．8％。
2．6稳定性试验：取同一份供试品溶液；分别于制备
后0、3、6、9、12h进样测定，每次进样5pL，测定峰
面积，结果其RSD为2．0％，样品在12h内稳定。
2．7重现性试验：精密称取同一样品5份，按供试
品溶液制备项下方法平行制备，进样测定，计算，结
果RSD为2．6％。
2．8 回收率试验：精密称取同一样品1．0g，分别
精密加入甘草查耳酮A对照品2．55、3．40、5．10
mg，按2．3项下方法处理，进样测定，计算，平均回
收率为95．7％，RSD为0．7％(起一3)。
2．9 样品测定：精密吸取各供试品溶液5弘L，注
入液相色谱仪测定，计算，色谱图见图1，结果见表1。
O 2．5 5 7．5 10125 15175 20225 0 2．5 5 7．5 10125 15175 20225 0 2．5 5 7．5 10125 15175 20225
r／rain
图1 甘草查耳酮A(A)，甘草废渣样品(B)和新疆样品(c)色谱图
Fig．1HPLCChromatogramoflicochaiconeA(A)，G．uralensisresidue(B)，andsamplefromXinjiang
表1样品中甘草查耳酮A的测定结果(聘一3) 为流动相。根据甘草查耳酮A的紫外吸收性质，考
TableI Determinationof¨cOchalcOneA
insamples(n一3)
3讨论
本实验对甘草查耳酮A的提取方法进行了考
察，比较了超声提取、回流提取及索氏提取的差异，
最终采用了提取比较完全的索氏提取法进行提取。
根据文献，考察了乙腈一1％冰醋酸水溶液、甲醇一
1％冰醋酸水溶液作流动相对甘草查耳酮A的分离
效果，结果样品中甘草查耳酮A均未达到满意分
离，而加入四氢呋喃后，甘草查耳酮A与其他成分
达到基线分离，而且保留时间缩短，故而采用了甲
醇一四氢呋喃一1％冰醋酸水溶液(46：i0：44)作
察了254、377nm检测波长下对甘草查耳酮A的分
离效果，选用了紫外吸收响应值高、杂质干扰小的
377nm作为检测波长。
研究结果显示，甘草废渣中甘草查耳酮A的量
远高于原药材中甘草查耳酮A的量，高温提取甘草
酸后的甘草废渣比低温提取甘草酸后的甘草废渣中
甘草查耳酮A的量更高。这可能与工业上甘草酸的
提取过程有关。工业上甘草酸的提取采用的是水提
取法，药材中的水溶性成分被大量提取出去，而甘草
查耳酮A在水中的溶解度很小，在此过程中几乎不
能被提取出来，故而甘草废渣中甘草查耳酮A的量
相对比原药材中高。另据文献报道[4]，在甘草的工业
提取过程中，甘草酸的提取率随提取温度的升高而提
高，这就使得高温提取甘草酸后的甘草废渣比低温提
取甘草酸后的甘草废渣中水溶性成分的量更少，故而
高温甘草废渣比低温甘草废渣中甘草查耳酮A的量
更高。在试验中，内蒙古产的甘草药材中甘草查耳酮
万方数据
中草|s ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月·1883·
A没能检测到，这与甘草的种类有关E5|。
本实验建立了甘草废渣及甘草药材中甘草查耳
酮A的定量方法，测定了不同甘草废渣样品中甘草
查耳酮A的量，为甘草废渣的回收再利用提供了科
学的依据。
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RP—HPLC法测定云南移械树皮中白杨素
台海川
(西双版纳州食品药品检验所，云南景洪666100)
移械树皮是蔷薇科植物云南移械Docynia
delavayi(Franch．)Schneid．的茎皮n]，性味酸涩、
凉，有消炎、收敛、接骨之功效，在西双版纳傣医中常
作为治疗烧烫伤、骨折之药用。云南移核树皮中含有
多种黄酮类化合物[2]，白杨素是其主要组成成分，目
前还没有文献报道对云南移械树皮中的白杨素进行
定量测定。本实验采用HPLC法测定其中白杨素的
量，并考察了方法学。试验结果表明，该法专属强、准
确性高。
1仪器与试药
日本岛津LC--10ATvp高效液相色谱仪，日本
岛津SIL一10Avp自动进样器，日本岛津SPD一
10Avp紫外检测器，日本岛津Class—VP6．12工
作站；岛津UV一2401PC紫外可见光分光光度计；
YB—Z真空恒温干燥箱(天津药典标准仪器厂)。
白杨素对照品(美国进口，上海中标君达有限
公司分装，质量分数为99．26％，批号：20060602)。
乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。云南移械树皮药
材由西双版纳州民族医药研究所提供。
2方法与结果
2．1 色谱条件与系统适用性考察：色谱柱为Shim—
packC18(150mm×4．6mm，5．0弘m)；流动相：乙
腈一0．4％磷酸(35：65)；体积流量：1mL／min；检
测波长：269nm；柱温：30℃；进样量：10弘L；理论板
数以白杨素峰计大于6000；白杨素峰与最近峰的
分离度大于1。5。色谱图见图1。
L．．．．．．．．．．．．．．．．—1．．．．．．．．．．．．．．．．。．L．．．．．一L．．．．．。。．．．．．．．．．．1．．．．．．．．．．．．．．．．．．L．．．．_j
0 10 20 0 10 20
t|rain
1一白杨素
1一chrysin
图1对照品(A)和样品(B)的色谱图
Fig．1Chromatogramsfreferenceubstance(A)
andsample(B)
2．2对照品溶液的制备：精密称取经40℃、24h
真空恒温五氧化二磷干燥的白杨素对照品适量，用
甲醇制成604．8pg／mL的对照品储备液。取对照品
储备液5mL置于50mL量瓶中，加甲醇至刻度，
摇匀，制得60．48t-g／mL的对照品溶液。
2．3 供试品溶液的制备：精密称取本品粉末0．5
g，置回流瓶中，加甲醇50mL，超声30min，放置过
夜，再超声5min，加25％盐酸溶液5mL，回流60
rain，放冷，转移至100mL量瓶中，并加甲醇至刻
度，摇匀，滤过，取滤液作样品溶液。
2．4线性关系考察：取对照品储备液适量，加甲醇
配制得0．6048、6．048、24．19、60．48、121．0、
收稿日期：2006—03—31
作者简介：台海川(1972一)，男，云南景洪市人，云南省西双版纳州食品药品检验所，执业药师、主管药师，1992年云南大学化学系毕业，
主要从事药品检验、药品质量控制和民族植物药研究。
Tel：(0691)2161335Fax：(0691)2160404E—mail：thch66@126．com、Thch@bn．yn．cninfo．net
．I●●jiiiii¨iiiiijill●I．㈧
万方数据
RP-HPLC法测定甘草废渣及不同产地甘草中甘草查耳酮A
作者： 杨琳， 车庆明， 孙启时
作者单位： 杨琳(沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳,110016;北京大学医学部药学院,北京,100083)，
车庆明(北京大学医学部药学院,北京,100083)， 孙启时(沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳
,110016)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(12)
被引用次数： 1次

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引证文献(1条)
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