全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 699·
虎杖蒽醌提取物抗柯萨奇B3型病毒作用及机制研究
李凤新1’2，孙振国1，苏红1，王巍巍1，王金霞1，孙非2。
(1．吉林省药物研究院，吉林长春130061-2．吉林大学药学院。吉林长春130021)
擒 要：目的研究虎杖蒽醌提取物抗柯萨奇B3型病毒(CoxsackieB。VITU$，CoxB。)的作用。方法通过对病毒性
心肌炎致病有关的CoxBa型病毒体感染模型．观察虎杖蒽醌提取物对CoxBs型病毒感染宿主细胞的抑制作用及对
病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。结果 虎杖蒽醌提取物对感染细胞的治疗指数(TI)分别为6．73(Vero)和4．00
(原代培养心肌细胞)，对照品抗病毒口服液组Tl为4．01(Vero)和3．56(原代培养心肌细胞)；虎杖葸醌提取物
对CoxB。病毒感染细胞的T1高于抗病毒口服液(P<0．05)。小鼠感染病毒后，各给药组血清中乳酸脱氢酶
(LDH)、天冬氨酸转移酶(ASTase)、肌酸激酶(CK)水平显著降低(PCoxBa型病毒引起的病毒性心肌炎具有一定的治疗作用。
关键词：虎杖葸醌提取物i柯萨奇B3型病毒(CoxB。)；病毒性心肌炎
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1699—03
现代研究表明，10％虎杖水煎液对1型单纯疱
疹病毒(HSV一1)、2型单纯疱疹病毒(HSV一2)、甲
型流感病毒京科68—1株、埃可病毒11型有抑制作
用；3％虎杖煎剂对3型腺病毒、I型脊髓灰质炎病
毒、9型埃可病毒、A9及B5型柯萨奇病毒、乙型脑
炎病毒也有较高的抑制作用[1]。柯萨奇病毒
(Coxsackievirus)是病毒性心肌炎的主要致病病
毒，为了开发虎杖的抗病毒作用，本实验对虎杖葸醌
提取物抗柯萨奇B。型病毒(CoxB。)作用及机制进
行了研究。
1材料
1．1药物：虎杖蒽醌提取物(含大黄素50％)，由吉
林省药物研究所提取；抗病毒口服液，河北恒利集团
制药股份有限公司，批号0303301；盐酸胍，SigmaI
荣心丸，上海玉丹药业有限公司产品，批号
20030804。
1．2 仪器和试剂：NCPC03100一1多用气体培养
箱，美国；G3022型酶标仪，中国；OLYMPUSBHF
双筒显微镜，日本。IMDM细胞培养液，Gibco公司，
美国；胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)，Sigma，美国，干扰
素标准品，国家卫生部药品检定所。
1．3动物和细胞株：Wistar乳鼠、雄性Balb／C小
鼠，长春高新医学动物实验研究中心提供；非洲绿猴
肾细胞(Vero)、L929细胞、原代培养Wistar大鼠
乳鼠心肌细胞、CoxB。型病毒、水泡性口腔炎病毒
(Vesicularstomatitisvirus，VSV)，由吉林大学再
生医学科学研究所病毒研究室制备。
方法与结果
2．1体外抗CoxB。试验：设正常细胞对照组、病毒
感染组、盐酸胍对照组、抗病毒口服液对照组和给药
组。给药组分为5个质量浓度组：75、50、37．5、25、
18．75弘g／mL；抗病毒口服液浓度为16倍稀释；盐酸
胍质量浓度为250pg／mL。
2．1．1细胞病变(CPE)抑制实验：Vero细胞以
2．0×106／mL接种于96孔板。待培养细胞贴壁后，
以100TCID50的CoxB3型病毒(Nancy株)感染相
应宿主细胞；大鼠乳鼠心肌细胞2．5×105／mL接种
于96孔板，0．1mL／孔，培养2d贴壁搏动后，以
100TCID。。的CoxB。病毒感染相应宿主细胞，并按
上述分组方法进行实验，显微镜下观察、记录CPE，CPE的破坏程度分为4级，即+⋯为≤25％，
++一一为≤50％，+++一为≤75，++++为≤
100％。CoxB。型病毒感染Vero细胞及原代培养大
鼠乳鼠心肌细胞的致细胞病变抑制实验结果均表明
给药组与病毒感染组有显著性差异(尸验结果为：虎杖葸醌提取物IC。。分别为27．86pg／
mL(Vero)和48．46pg／mL(原代培养心肌细胞)；
治疗指数(TI)分别为6．73(Vero)和4．oo(原代
培养心肌细胞)。抗病毒口服液IC。。均为32倍稀释；
TI为4．01(Vero)和3．56(原代培养心肌细胞)。
盐酸胍IC；。均为50pg／mL；TI为8．02(Vero)和
8．oo(原代培养心肌细胞)。结果表明，虎杖蒽醌提
·收稿日期：2008—05—09
作者简介：李凤新(1967一)，女，副研究员．博士生，研究方向为中药药理．E—mail：li．hw@sina．corn．cn
-通讯作者孙非
万方数据
·1700· 中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
取物对CoxBa病毒感染细胞的TI高于抗病毒口
服液。
2．1．2病毒繁殖抑制实验：感染和加药不同时间收
集上述细胞，裂解后离心取上清，以10倍系列稀
释，在Vero细胞上以MTT法检测病毒滴度，计算
TCID。。。加药组比病毒组TCID。。降低1个对数以上
示为有效[3]。根据病毒滴度测定，虎杖蒽醌提取物5
个质量浓度中75、50、37．5、25pg／mL有效，而
18．75pg／mL无明显效果，结果见表1。
裹1虎杖慧醌提取物对CoxB，繁殖的抑制作用
Table1 InhibitionofanthraquinoneextractfromRMzoma
PolygonionmultipIicationofCoxB3
2．1．3 干扰素诱生实验：用虎杖蒽醌提取物在
Balb／C小鼠脾细胞上诱生干扰素，然后在L929细
胞上以VSV测定干扰素效价。实验分为6组，每组
10只，依次为：正常对照组，病毒对照组，阳性药物
组(荣心丸4．68g／kg)，虎杖蒽醌提取物高、中、低
(100、50、25mg／kg)剂量组。除正常组外，各组小鼠
ip接种100LD；。CoxB。病毒液，正常组给同体积生
理盐水，3d后ig给药。给药7d后无菌取脾，于无
菌平皿内以100目钢网用针芯研磨，移至离心管，
静置10min后去块状物，离心洗涤3次。用含10％
小牛血清的IMDM培养液调节细胞浓度备用。将脾
细胞以2．5×106／mL接种24孔板，1mL／孔，加入
ConA10弘g／mL，37℃、5％C02培养箱培养48h，
收集上清液，1500r／min离心10min，取上清，
一20℃保存待测。用干扰素标准品采用6、12、24、
48、96、192、240U／mL7个浓度，测定吸光度(A)
值，建立回归方程，绘制标准曲线。用L929细胞接
种96孔板，0．1mL／孔，37℃培养24h。弃培养液
加入待测样品，每孔0．2mL，每个样品设4个复孔，
放入37℃、5％CO：培养箱培养24h。弃培养液，加
入50TCID；。VSV病毒攻击，0．1mL／孔。同时设正
常对照和病毒对照孔。以MTT法测定各孔的A
值，代入回归方程后求出每组的干扰素效价。回归方
程为y=0．0025X+0．2847。各组干扰素效价分别
为：正常对照组17．12U／mL，病毒对照组36．12
U／mL，荣心丸组77．12U／mL，虎杖蒽醌提取物
高、中、低剂量组83．12、79．12、69．12U／mL。
2．2 对病毒性心肌炎小鼠的治疗作用：取雄性
Balb／C小鼠，随机分为6组，每组15只动物。除正常
对照组外，各组动物均ip0．1TCID。。CoxB。病毒
0．2mL／只，连续3d。于第1次病毒攻击后72h开
始ig给药，分组及给药剂量同2．1．3项，连续给药
10d，于给药第3、6、10天将小鼠称体质量。于末次
给药后次日，摘除小鼠眼球取血，离心，取血清，测定
心肌酶乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转移酶
(AST)、肌酸激酶(CK)水平(按试剂盒方法测定，
试剂盒均为中生北控生物科技股份有限公司生产)，
并取出心脏，用4％多聚甲醛固定，制作心肌切片。
给药后第5天和第10天，每组随机取出4只小鼠，无
菌取血，离心取血清，采用ELISA方法进行中和抗
体测定，并按上述小鼠脾细胞干扰素测定方法对血
清进行干扰素的动态观察。同时将待测血清以
10-1～10叫进行稀释，在Vero细胞上测定病毒的
滴度。
2．2．1对心肌酶的影响：感染病毒后，小鼠血清中
LDH、AST、CK水平升高，各给药组能明显对抗各
酶水平的升高，其中高、中剂量组作用非常显著
(P表2虎杖慧醒提取物对病毒性心肌炎小■血清心肌酶的
影响(；士s，厅=10)
Table2 EffectofanthraquinoneextractfromRhizoma
Polygonioncardiacmuscleenzymeofviral
myocarditismodelmice(；士j．矗一10)
彻。?芒。，。fLX。， 。U并，， 。ucKL：。，(Ⅲg·kg一1)(u·_1) (·L．1) (U·一1)
与病霉感染组比较：。尸‘P2．2．2对心肌病理结构的影响：给药结束后，取新
鲜心肌标本，切片，HE染色，可见荣心丸和虎杖蒽
醌提取物能明显减轻CoxB。病毒引起的心肌细胞病
变，使心肌充血出血、水肿变性及心肌坏死、炎细胞
浸润等症状改善，虎杖蒽醌提取物高剂量组优于荣
心丸组。
2．2．3对血清中和抗体及病毒滴度的影响：病毒性
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 701·
中和抗体检测表明，虎杖蒽醌提取物可以降低小鼠 组，也低于荣心丸组(表3、4)。给药10d后，高、中、
模型抗体的产生，高、中剂量组效价均低于病毒对照 低剂量组血清病毒滴度明显下降。
裹3各组小鼠血清CoxB，病毒中和抗体的动态变化
Table3 DynamicchangesofCoxB，virusco nteractingn bodyinmiceserumofeachgroups
2．2．4机体干扰素动态观察结果：实验组通过给
药，诱导干扰素水平进一步升高，且干扰素水平随着
药物剂量的增加而上升，表明虎杖蒽醌提取物具有
体内诱生干扰素的作用。小鼠血清干扰素动态变化
测试证明了这一机制(表5)。
裹4各组小鬣血清病毒滴度结果
Table4 Serumvirustiterineachgroupsofmice
表5各组小鼠血清干扰素测定结果
Table5 Determinationofinterferoninmice
serumofeachgroups
3讨论
体内、体外试验结果表明，虎杖蒽醌提取物对
CoxB。型病毒所感染的细胞病变有明显的抑制作
用，能够有效抑制CoxB。型病毒在靶器官中的繁殖；
虎杖蒽醌提取物能促进模型小鼠的自身干扰素产
生，对病毒的复制具有明显的抑制作用。体内实验结
果表明，虎杖蒽醌提取物对CoxB。型病毒感染的模
型小鼠具有一定的保护作用，表明虎杖蒽醌提取物
对CoxB。型病毒引起的病毒性心肌炎具有一定的治
疗作用。
实验组通过给药，诱导干扰素水平进一步升高，
而且干扰素水平随着药物剂量的增加而上升，表明
虎杖蒽醌提取物具有体内诱生干扰素的作用。可以
推测这是虎杖蒽醌提取物具有抵抗CoxB。型病毒感
染作用的另一重要机制。
参考文献：
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2000，25(11)：651—653．
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Is]薪药(西药)临床研究指导原则汇编(药理学药学毒理学)
[S]．1993．
3-大豆苷元磺酸钠对家兔胸主动脉条收缩的影响
肖 海h2，黄志华2，叶和扬2，曾靖”
(1．江西中医学院，江西南昌 330006f2．赣南医学院，江西赣州341000)
摘 要：目的 研究3’一大豆昔元磺酸钠(DSS)对家兔脾主动脉条的作用及与ca”的关系。方法采用常规动脉
条收缩实验方法。结果DSS可使NE、KCl和CaCI：引起的家兔胸主动脉条量一效收缩曲线右移，最大效应降低，与
收疆日期：2008—01—05
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30560173)；江西省自然科学基金资助项目(0640003)
作者简介：肖 海(1977一)，男，江西萍乡市人，江西中医学院硕士研究生，讲师，主要从事病理学、中草药药理的研究．
Tel：13576675898E—mail：xh669168@sina．corn
·通讯作者曾靖E—maillzengjin961@hotmail．corn
万方数据
虎杖蒽醌提取物抗柯萨奇B3型病毒作用及机制研究
作者： 李凤新， 孙振国， 苏红， 王巍巍， 王金霞， 孙非
作者单位： 李凤新(吉林省药物研究院,吉林,长春,130061;吉林大学药学院,吉林,长春,130021)， 孙振
国,苏红,王巍巍,王金霞(吉林省药物研究院,吉林,长春,130061)， 孙非(吉林大学药学院
,吉林,长春,130021)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 5次

参考文献(3条)
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2.王亚凡 一种测定细胞增殖和衰减的快速比色分析方法 1994(06)
3.新药(西药)临床研究指导原则汇编(药理学药学毒理学) 1993

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5.余红.韩淑英.包巨太.储金秀.张搏男 抗柯萨奇病毒B心肌炎胶囊对慢性心肌损伤的保护作用[期刊论文]-时珍国
医国药 2011(8)
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