全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1237·
但并不影响扩增结果，但高盐低pH法所提DNA呈
棕色，含有较多抑制酶活性的多酚类物质。为消除多
酚类物质对扩增的影响，本研究参照其他研究者的
经验，在RAPD反应体系中添加BSA，用于减少内
源抑制物的干扰作用[1州。结果证实，对于杂质多的
样品，添加BSA是可以改善扩增效果的。据报道
BSA的一个可能作用机制是作用于多酚体系，通过
其上富含赖氨酸的阳离子与多酚化合物的阴离子相
互作用而消除内源的多酚类化合物，阻止它们与
Taq酶结合，从而提高酶的活性，改善扩增效果[1“。
致谢：本研究分子生物学实验在西南农业大学
蚕桑学重点实验室完成。
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肉苁蓉愈伤组织培养及所含有效成分量的研究
宋玉霞1，郭生虎1，张芦燕3，李苗1，马洪爱1，牛东玲1’2，郑国琦1’2，王英华3
(1．宁夏农业生物技术重点试验室，宁夏银川750002；2．宁夏大学生命科学学院，宁夏银川750021，
3．宁夏药品检验所，宁夏银川 750004)
摘 要：目的 为扩大和提高肉苁蓉Cistanchedes rticola资源的利用效率。方法以肉苁蓉肉质茎的不同组织部
位作为外植体，采用正交实验方法，筛选诱导愈伤组织产生的不同培养基和培养条件，并继代培养。应用HPLC方
法对愈伤组织培养物中松果菊苷和洋丁香苷(毛蕊花糖苷)的量进行测定。结果 肉苁蓉肉质茎的维管组织部分是
诱导愈伤组织的最适外植体，鳞片叶次之，髓组织部分诱导效果较差。在暗培养、25～27℃条件下以B5为基本培
养基附加6-BA(0．5～2mg／L)与IAA(o．5～1．5mg／L)诱导愈伤组织效果最佳；在半光照(光培养10h／d，暗培
养14h／d)条件下，愈伤组织生长正常，最佳继代时间为25～30d。愈伤组织培养物中松果菊苷和洋丁香苷(毛蕊花
糖苷)达4．37％。结论筛选出了适宜的肉苁蓉愈伤组织培养方法，且培养物中主要药用有效成分松果菊苷和洋丁
香苷(毛蕊花糖苷)的量达到并超过了《中国药典》要求(o．3％)的标准。
关键词：肉苁蓉；肉质茎；愈伤组织；洋丁香苷(毛蕊花糖苷)；松果菊苷
中图分类号：R282．1；R282．6文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08～1237—05
CalluscultureofCistanchedeserticolaandits cteosidecontent
SONGYu—xial，GUOSheng—hul，ZHANGLu—yan3，LIMia01，MAHong—ail，
NIUDong—lin92．ZHENGGuo—qi2，WANGYing—hua3
(1．NingxiaAgriculturalBiotechnologicalKeyLaboratory，Yinchuan750002，China；2．SchoolofLifeScience，
NingxiaUniversity，Yinchuan750021，China；3．NingxiaInstituteforDrugControl，Yinchuan750004，China)
收稿日期：2005—11-10
基金项目：国家自然科学基金项目(30260008)；国家科技部攻关西部专项(2002BA901A32)；宁夏自然科学基金项目(NZ0522)
作者简介：宋玉霞(1963一)，女，硕士，研究员，主要从事结构植物学和药用植物资源方面的研究。E—mail：songyx666@163．com
万方数据
·1238· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
Abstract：ObjectiveInordertoexploreandimprovethutilizationefficiencyofCistanchedeserticola
resources．MethodsThedifferenttissuepartsoffleshystemofC．deserticolaweretestedasthexplants
andculturedonvariousc lturemediaandconditionforcallusinductionandsubculturebyo thogonaltest．
ThecontentofacteosideincalluswasdeterminedbvHPLC．ResultsThevasculartissuepartsoffleshy
stemofC．deserticolawasptimumexplantsofcallusinduction。thefollowingascale ar。whilep th
tissuewasrelativelybad．Under25C一27。Cconditions，B5asbasicmediaandadding6一BA(O．5—2
mg／L)andIAA(0．5—1．5mg／L)wasabletoachievethbesteffectofcallusinductionbygrowinginthe
dark．Undergivenhalflight(thelightculturewas10h／d，thedarkculturewas14h／d)conditions，the
growthofcalluswasnormal，theoptimumtimeofsubculturewas25—30d．Thecontentofechinacoside
andacteosideincalluswas4．37％．ConclusionTheoptimizedculturemethodofcallusofC．deserticola
iSobtainedanthecontentoftheprimarymedicalonstituentincallushasbeeduptOorevenoverthe
standard(0．3％)inPharmacopoeiafChina．
Keywords：CistanchedeserticolaY．C．Ma；fleshystem；callus；acteoside；echinacoside
肉苁蓉CistanchedeserticolaY．C．Ma为列当
科肉苁蓉属多年生寄生草本植物，具肉质茎，属珍稀
药用植物，生长在干旱荒漠中。内含生物碱、黄酮类、
苯乙基糖苷、环烯醚萜苷等多种活性成分[1’2]，药用
价值很大。肉苁蓉具有补肾、益精、润肠、提高人体免
疫功能、抗衰老、抗疲劳等多种功能。多年来人们利
用的肉苁蓉全部为天然资源，由于市场需求量日益
增大，造成滥采乱挖严重。另外，肉苁蓉生长环境十
分恶劣，并具有独特的寄生生物学特性，野生资源严
重匮乏，成为濒危植物[3]。为扩大和保护野生资源，
人们开始从多种途径解决肉苁蓉的繁殖问题，进行
了人工栽培研究，并有成功报道[4]，但由于技术局限
性较大，推广应用还存在一些问题。利用组织培养技
术，诱导愈伤组织，提取药用活性成分的方法在许多
药用植物研究方面被采用[s“]。对肉苁蓉这类资源
少、难繁殖的药用植物采用愈伤组织培养技术提取
药用活性成分的研究更加重要。国内对肉苁蓉愈伤
组织的诱导研究有过研究报道[7’8]，但对肉苁蓉愈伤
组织物质中毛蕊花糖苷与松果菊苷定量测定的报道
较少。本试验对肉苁蓉的肉质茎进行了系统的愈伤
组织诱导和培养研究，并按照2005年版《中国药典》
一部[93的方法和标准，对其主要药用有效成分松果
菊苷和毛蕊花糖苷的量进行了测定，为利用愈伤组
织提取药用活性成分奠定基础。
1材料和方法
1．1材料：试验材料肉苁蓉C．deserticolaY．C．
Ma肉质茎采自内蒙古阿拉善左旗苏海图苏木乌兰
布和沙漠中(标本由宁夏大学马德滋教授鉴定)。
1．2方法
1．2．1外植体处理：肉苁蓉的肉质茎共有3个部分
构成：茎外部覆瓦状排列的鳞片叶；维管束呈环状排
列的维管组织部分；中心的髓组织部分。将肉苁蓉肉
质茎用自来水和蒸馏水反复冲洗干净后，分成3个
部分：鳞片叶、维管组织、髓组织作为诱导愈伤组织
的外植体。在超净工作台上，先用70％乙醇浸泡
1min，再用0．1％升汞浸泡9min，然后再用无菌水
冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸干表面水分，分别切成
0．5cm×0．5cm×0．3cm的小块，接种到不同的诱
导培养基上。
1．2．2愈伤组织诱导和培养条件：实验所选择的基
本培养基为MS、B5培养基，附加植物激素(2，4一D；
6一BA；NAA等)，培养基中加蔗糖30g，琼脂5．5g／
L，培养基的pH值为5．8。在暗培养条件下诱导愈
伤组织，培养温度为25～27。C，在半光照条件下(光
照10h／d)，进行愈伤组织继代培养，光照强度为
1500～2000lx，结合自然光照800lx左右。采用正
交实验方法，应用正交表L。(34)，对各因素进行了3
个水平试验筛选，见表1、2。
表1植物激素正交实验因素水平表
Table1 Factorsandlevelsoforthogonaltest
ofplanthormones
表2植物激素与培养条件正交实验因素水平表
Table2 Factorsandlevelsoforthogonaltestof
planthormonesandculturecondition
水
亚
因 素
愈伤组织 蔗糖／％6-BA／(mg·L_1)NAA／(mg·L_1)
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1239·
1．2．3 愈伤组织生长量测定：参考于荣敏等方
法[5]。以愈伤组织干质量为生长指标，所得结果为
10个平行试样的平均值。
1．2．4愈伤组织中毛蕊花糖苷和松果菊苷测定：采
用高效液相色谱法测定。Agilent1100高效液相色
谱仪；Agilent1100LC色谱工作站；G1313A自动
进样器；G1316A柱温箱；G1314A紫外检测器，
G1311A四元泵；G1379A脱气机。波长334nm。毛
蕊花糖苷C。。H。。0。。对照品(中国药品生物制品检定
所，批号：1530)，松果菊苷对照品(中国药品生物制
品检定所，批号：111670—200401)。色谱条件下系统
适用性试验，对照品溶液的制备，供试品溶液的制
备，测定方法和定量计算均按2005年版《中国药典》
一部进行凹j。
2结果与分析
2．1愈伤组织诱导
2．1．1诱导愈伤组织最佳外植体筛选：将消毒后并
分割成3个部分的外植体，在MS培养基上分别进
行接种，培养基中附加2，4-D1．0mg／L、6-BA2．0
mg／L、NAA1．0mg／L。在暗培养条件下诱导愈伤
组织。接种4d后，组织块开始变褐色，7d后开始有
不同程度的膨大。鳞片叶和髓组织整体膨大，维管组
织在表层上长出一层黄褐色的膨大组织。10d以后
膨大组织出现裂缝，愈伤组织从裂缝处产生。愈伤组
织诱导率最高的外植体是维管组织部分，见表3。
表3不同外植体愈伤组织诱导结果
Table3 Resultsofcallusinductiononvariousexplants
外植体接种数／块出愈时间／d出愈数／块诱导率／％ 愈伤组织形态
维管组织 51 16 30 59．5 白色、颗粒大、疏松
壁塑堡 !! !! ! !!：! 皂鱼：塑些查：堕丝
2．1．2基本培养基对愈伤组织诱导的影响：文献报
道口’8]，对多种基本培养基进行筛选认为，MS和B5
为诱导肉苁蓉愈伤组织的最适基本培养基，因此，选
择了肉质茎维管组织部分为外植体，MS和B5培养
基作为基本培养基，附加2，4一D1．0mg／L、6-BA
2．0mg／L、NAA1．0mg／L。在暗培养条件下诱导
愈伤组织。诱导结果表明，B5培养基中接种的维管
组织的愈伤组织诱导率达到78．2％，最早出愈时间
为14d，愈伤组织淡黄色，质地疏松，分散性好。MS
培养基中接种的维管组织的愈伤组织诱导率为
58．62％，最早出愈时间为16d，愈伤组织白色，颗粒
较大，紧实。
2．1．3植物激素对愈伤组织诱导的影响：选择B5
为基本培养基，按照表1设计对几种植物激素：2，4一
D、6-BA、NAA不同质量浓度和组合对愈伤组织诱
导的影响进行筛选。以B5为基本培养基，植物激素
最佳组合为A。B。C。即诱导愈伤组织的最佳组合为
B5+2，4一D1．0mg／L+6-BA2．0mg／L+NAA
0．5mg／L，愈伤组织诱导率最高。表4极差尺值可
看出，激素NAA对诱导愈伤组织影响较大，影响较
小的激素是2，4～D。从表5结果可知，3种植物激素
对愈伤组织的诱导率差异均无显著性。
表4植物激素诱导愈伤组织极差分析表
Table4 Analysisofextremedifferenceofplant
hormonesoncallusinduction
表5愈伤组织诱导率方差分析表
Table5 Varianceanalysisofcallusinductionrate
方差来源 离差平方和 自由率 均方 F值
Z，4一D 91．74 2 45．87 0．70
6一BA 109．47 2 54．75 0．84
IAA 345．07 2 172．54 2．64
误差 130．54 2
总和 676．82 8
Fo．05一19．00Fo 1—99．01
2．1．4培养条件对诱导愈伤组织的影响：选择了合
适的培养基后，通常培养条件对外植体愈伤组织的
诱导影响也比较大，对诱导条件进行了正交试验，结
果见表6。
表6不同培养条件正交设计及诱导结果
Table6 Orthogonaldesignandinductionresults
undervariousc ltureconditions
％一
一．．Ⅲ
最度‘
率一
一培-至
雕浓掣警囊囊黧器黧删
组一
一坩+
侈一条
伤一
一¨艋
愈c．钐
愈一
一M
h
争]污
～
一#旧
鞋牛培
照一
D
D
D
L翳．⋯
诿√置
D¨D
L型州～
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旦蚰锄瞄瞄㈣蚰㈣铋们坚川一
删洼渡零霎豢。麓
度一。踮o
o弱o
o弱。
一HⅢ“针H。“
浓一仉m
m
m
m
m
m
m
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o一。山h曰△日5
脂一
¨一举c¨6且H
琼一
一粥h“茛2q
p
号～
一咣川
从中％
验～l
2
3
4
5
6
7
8
9
R—L
L似
，条5焉㈠甚麓
万方数据
·1240· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
光照是主要影响因子，其次是pH、琼脂浓度，温度的
影响较小。
2．2愈伤组织继代培养
2．2．1愈伤组织继代培养基和培养条件：外植体上
诱导出的愈伤组织生长25d左右开始变褐，20d时
将愈伤组织及时切下进行继代培养，以后每25d继
代1次。继代的基本培养基为B5，在暗培养条件下
生长缓慢，在半光照(10h／d)条件下生长速度明显
加快。采用正交实验方法L。(34)，对外植体、植物生
长调节物质和蔗糖浓度在半光照(10h／d)培养条件
下的生长情况进行了筛选，愈伤组织生长量为生长
52d时的结果，见表7。在半光照(10h／d)条件下，
对愈伤组织生长影响较大的培养条件是蔗糖浓度，
其次是激素6-BA和NAA，而采用愈伤组织o～2
代材料培养对愈伤组织生长的影响不是主要因素。
方差分析结果(表8)表明这几种因素对愈伤组织的
生长量影响差异均无显著性。
表7植物激素与培养条件正交设计表及结果
Table7 Orthogonaldesigna dresultsofplant
hormonesandcultureconditions
2．2．2愈伤组织生长与褐化：愈伤组织在培养初期
生长缓慢，在O～10d属于生长延迟期，生长速度接
近于0，此阶段后期生长略有加快，在15～25d内，
生长速度明显加快，生长量增加显著，是延迟期的
6．3倍，25～30d生长最快，生长速度是延迟期的
a
A
表8愈伤组织生长■方差分析表
Table8 Variancea alysisofcallusgrowth
Fo．05—19．00Fo．01—99．01
14．5倍，愈伤组织的最佳继代时间是25～30d。45
d后愈伤组织生长量下降到与延迟期相当的水平，
且开始褐化，50d后褐化加重，彻底停止生长。愈伤
组织生长曲线见图1。
o
嵩
k
一＼
卿
世
卜
《
≤
蠼
拯
图1 肉苁蓉愈伤组织生长曲线
Fig．1Time-curveofcallusgrowthofC．deserticola
2．3愈伤组织物质中有效成分的测定：将在B5培
养基中继代培养40d左右的愈伤组织取出并自然
干燥后，应用《中国药典)2005年版一部方法对愈伤
组织中毛蕊花糖苷和松果菊苷进行测定，结果见图
2。经换算肉苁蓉愈伤组织培养物中松果菊苷达
3．92％，洋丁香苷(毛蕊花糖苷)可达0．45％；野生
肉苁蓉肉质茎中松果菊苷达2．59％，毛蕊花糖苷
1．40％。
0 5 10 15 20 25 30
f／min
a一松果菊苷 b一毛蕊花糖苷
a—．echinacosideb．．acteoside
图2松果菊苷和洋丁香苷(毛蕊花糖苷)对照品(A)、肉苁蓉愈伤组织(B)、野生肉苁蓉(c)的HPLC图谱
Fig．2tlPLCChromatogramofechinaeosideandacteosideref rencesubstances(A)，callus(B)，andC．de erticola(C)
3 讨论 质茎中维管组织部分诱导肉苁蓉愈伤组织是最合适
对药用植物肉苁蓉进行愈伤组织的诱导研究对 的外植体，在适宜的培养条件下可以诱导产生大量愈
扩大和保护自然资源具有重要的意义。肉苁蓉以其肉 伤组织。愈伤组织继代条件与诱导条件略有不同。
质茎入药，肉质茎的粗度通常在10cm左右，利用肉 对于药用植物，特别是一些濒危药用植物，利用
一b^∥～～
c
j—i|A—
l
k一}一
万方数据
中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1241·
愈伤组织培养提取药用活性成分是一种行之有效的
方法。郭志刚[53等对盐生肉苁蓉愈伤组织培养方法
与苯乙醇苷化合物合成进行了研究，认为愈伤组织
中的主要成分与天然肉苁蓉基本相同。于荣敏等[63
对银杏愈伤组织培养和其代谢产物银杏内酯进行了
研究，筛选出了银杏内酯高产细胞系，银杏内酯量达
万分之一，与天然植物的量相当。
笔者利用高效液相色谱技术对野生肉苁蓉肉质
茎和由肉质茎诱导出的愈伤组织物质中主要药用活
性成分麦角甾苷的测定比较，证明了愈伤组织培养
物质中含有较高质量浓度的毛蕊花糖苷。《中国药
典>>2005年版一部[9]中对肉苁蓉药材质量标准的要
求中明确指出，样品干样中松果菊苷(C。。H。。O。。)和
毛蕊花糖苷(C：。H。。O，。)的量应不低于0．3％。测定
的愈伤组织干物质中松果菊苷(C。。H。。O。。)和毛蕊花
糖苷(C。。H。。O。。)的量为4．37％，野生肉苁蓉肉质茎
为3．99％。充分说明利用肉苁蓉愈伤组织培养技术
来提取药用有效成分是可行的，可以减少对自然资
源的采挖压力。
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槲寄生对光合细菌生长的促进作用
杨官娥1’2，张肇铭¨，王玉军1，马怀彦1，白红娟1
(1．山西大学生命科学与技术学院，山西太原030006；2．山西医科大学药学院，山西太原030001)
摘要：目的考察槲寄生对光合细菌生长的促进作用。方法通过光合细菌培养液中不同槲寄生浓度及常规培
养基浓度对光合细菌活菌数的影响、不同浓度槲寄生对光合细菌生长曲线的影响及槲寄生提取液对光合细菌脱氢
酶活性的影响来考察槲寄生对光合细菌生长的促进作用。结果 培养液中添加槲寄生最高可使光合细菌活菌数增
加达8倍以上；而且可以使光合细菌不经过延迟期直接进入指数期，缩短光合细菌的生长周期；且使光合细菌脱氢
酶活性提高8．4倍。结论培养液中添加槲寄生提取物可促进光合细菌生长，提高光合细菌的活力。
关键词：槲寄生；光合细菌；生长促进作用
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08—1241一04
Improvementffec sofViscumcoloratumongrowthofphotosyntheticbacteria
YANGGuan—e1“，ZHANGhao—min91，WANGYu—junl，MAHuai—yanl，BAIHong～juanl
(1．CollegeofLifeScienceandTechnology，ShanxiUnivers ty，Taiyuan030006，China；2．School
ofPharmaceuticalSciences，ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheimprovementeffectsofViscumcoloratumongrowthof
photosyntheticbac eria(PSB)．MethodsImprovementffectofV．coloratumongrowthofPSBwas
researchedbyobservingtheffectsofvariousV．coloratumconcentrationsndge eralcu turemedium
concentrationonthenumberofalivebacteria，observingth ffectsofV．coloratumongrowthcurveof
收稿日期：2005一11—20
基金项目：国家科技攻关项目(2001BA540C)
作者简介：杨官娥(1967一)，女，山西怀仁人，副教授，在读博士，研究方向为天然药物化学。
Tel：(0351)4690143E—mail：yangguane@yahoo．corn．cn
*通讯作者张肇铭Tel：(0351)7011409
万方数据
肉苁蓉愈伤组织培养及所含有效成分量的研究
作者： 宋玉霞， 郭生虎， 张芦燕， 李苗， 马洪爱， 牛东玲， 郑国琦， 王英华， SONG Yu-
xia， GUO Sheng-hu， ZHANG Lu-yan， LI Miao， MA Hong-ai， NIU Dong-ling，
ZHENG Guo-qi， WANG Ying-hua
作者单位： 宋玉霞,郭生虎,李苗,马洪爱,SONG Yu-xia,GUO Sheng-hu,LI Miao,MA Hong-ai(宁夏农业生
物技术重点试验室,宁夏,银川,750002)， 张芦燕,王英华,ZHANG Lu-yan,WANG Ying-hua(宁
夏药品检验所,宁夏,银川,750004)， 牛东玲,郑国琦,NIU Dong-ling,ZHENG Guo-qi(宁夏农
业生物技术重点试验室,宁夏,银川,750002;宁夏大学生命科学学院,宁夏,银川,750021)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 2次

参考文献(9条)
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本文读者也读过(10条)
1. 郭志刚.于金梅.刘瑞芝.巨勇.肖强 盐生肉苁蓉愈伤组织培养与苯乙醇苷类化合物合成的研究[期刊论文]-中草
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3. 赵云丽.马铭研.高晓霞.刘涛.于治国.毕开顺.ZHAO Yunli.MA Mingyan.GAO Xiaoxia.LIU Tao.YU Zhiguo.BI
Kaishun 槲寄生中高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的分离及含量测定[期刊论文]-色谱2006,24(5)
4. 张俊娥.ZHANG Jun-e 碳源对柑橘愈伤组织生长及体细胞胚胎发生能力的影响[期刊论文]-河北农业大学学报
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6. 郑荣.张立国.倪力军 一种新的肉苁蓉甙类化合物的分离方法[期刊论文]-天然产物研究与开发2001,13(4)
7. 赵志莲.李海峰 培养基和培养条件对云南红豆杉细胞生长量及产生10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的影响[期刊论文]-安徽
农业科学2009,37(11)
8. 张庆增.宿艳萍.顾地周.丛小力.何晓燕.ZHANG Qing-Zeng.SU Yan-Ping.GU Di-Zhou.CONG Xiao-Li.HE Xiao-
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引证文献(2条)
1.洪森荣.尹明华.邵兴华 野葛叶片和茎段高频再生体系的建立[期刊论文]-植物研究 2008(4)
2.杨凯.杨巧荷.杨树青.张硕.罗素琴 肉苁蓉属药用植物的研究进展[期刊论文]-内蒙古医学院学报 2011(5)


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