全 文 ：·1886· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
表2不同温度处理下轮叶马先蒿发芽率及其发芽势
Table2 GerminationpercentageandtendencyofP．
verticilataundervarioustemperatures
处理 发芽率／％发芽势／％
恒温箱(28℃) 22．1
恒温箱(17～20℃)45．0
恒温箱(9～16℃)41．0
人工气候室(9．66、10．21、0．15、一0．83‘C)33．6
人工气候室(14．76、20．9、6．31、4．01℃)76．9
人工气候室(26．17、29．58、5．19、0．75℃)72 4
20．10
43．30
39．7
23．40
71．40
66．60
3轮叶马先蒿的开发与展望
新疆是我国五大牧区之一，有着丰富的草地资
源。但近年来由于部分地区乱采乱挖药材的现象非
常普遍，导致一些地区草地退化，严重影响了当地畜
牧业的发展和农牧民的生活。轮叶马先蒿具有很高
的药用价值，其应用前景广阔，合理利用轮叶马先
蒿，要加强以下几个方面的工作：1)制定相应的政策
和法规，轮叶马先蒿的开发要在相关部门的监管下
进行，禁止滥采滥挖。2)加大对新疆轮叶马先蒿药用
价值的宣传力度，鼓励药材部门和制药厂收购此药
材，在新疆为该药材开拓出一个广阔的市场。3)利用
人工种植和栽培的方式开发，实现其规模化生产，带
动当地经济的发展，缓解过度放牧对草地生态系统
的压力。
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HPLC—ELSD法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷
胡海云，王伟华，段启
(广东康美药业股份有限公司技术研究中心，广东普宁 515300)
黄芪性温，味甘，为常用补气药。具有补气固表、
利尿排毒、排脓、敛疮生肌等功效Ⅱ]。多年研究表明，
黄芪皂苷是黄芪药效物质基础的重要组成之一，在
抗衰老、调节免疫功能、保护心肌和大脑缺血等方面
具有显著作用。黄芪甲苷是主要有效成分之一，具有
抗炎镇痛、降压等重要生理活性[2]。本研究所用药材
为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus
(Fisch．)Bungevar．mongholicus(Bunge)Hsiao
或膜荚黄芪A．membranaceus(Fisch．)Bunge的
干燥根，多为栽培或野生，分布于山西、内蒙、吉林、
河北等地，本实验采用高效液相色谱一蒸发光散射
(HPLC—ELSD)法，测定了不同产地黄芪中黄芪甲
苷。据此对不同产地的黄芪质量进行了评价，为公司
采购合格的药材提供依据。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，包括：四元泵，
在线脱气机，柱温箱；蒸发光散射检测器(美国惠
收稿日期：2006—03—26
泽)；SartoriusBS400S--WEI万分之一天平(北京
塞多利斯天平有限公司)。乙腈(美国Fisher公司，
色谱纯)，甲醇、正丁醇、氨试液(AR，均为广州化学
试剂厂)，水为超纯水。黄芪甲苷(中国药品生物制
品检定所，批号：0781—20031l，供定量测定用)。
黄芪分别采自山西大同、陕西旬邑、陕西定边、
内蒙古固阳、河北青龙、甘肃岷县、甘肃陇西、山东文
登、吉林芜松，经江西中医学院鉴定教研室鉴定为正
品黄芪。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：HypersilODS(200mm×
4．61Tim，5gm)SN：1514654；流动相：乙腈一水
(32：68)；体积流量1．0mL／min；柱温：25℃；
ELSD参数：蒸发温度：45℃，N2压力：179260Pa衰
减参数：3．理论塔板数以黄芪甲苷计算不低于
4000。见图1。
2．2标准曲线与线性关系：精密称取黄芪甲苷对照
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第i2期2006年12月·1887·
1一贾芪甲苷
1一astragaloside
图1 对照品(A)和样品(B)HPLC—ELSD色谱图
Fig．1HPLC—ELSDChromatogramsfreference
substance(A)andsample(B)
品5．00mg置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，即得0．5mg／mL的黄芪甲苷对照品溶
液，精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20pL进样，
测定，以对照品溶液质量浓度的自然对数为横坐标
(x)，峰面积的自然对数为纵坐标(y)绘制标准曲
线，计算回归方程为Y一1．294×10-6X+
0．02748，r一0．9996，黄芪甲苷在2．024～10．120
lug的线性关系良好。
2．3供试品溶液的制备：精密称取黄芪粉末(过40
目筛)4．0g，置60mL索氏提取器中，加40mL甲
醇冷浸过夜，再加30mL甲醇，80℃水浴回流4
h[3]，提取液回收并浓缩至于，残渣加10mL水，微
热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次(4×40
mL)，合并正丁醇液，用40mL氨试液充分洗涤2
次，每次40mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加5
mL水使溶液，通过DlOl型大孑L吸附树脂柱(内径
1．5cm，长12cm)，以水50mL洗脱，弃去水液，再
用40％乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，继用70％
乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并
定容至5mL量瓶中，摇匀，即得。
2．4精密度试验：取黄芪甲苷对照品溶液，在1d
之内连续进样5次，每次20肛L，计算峰面积RSD
为1．3％(，z=5)。
2．5稳定性试验：取所制备的黄芪样品溶液，分别
在0、3、6、12、18、24、36、48h测定黄芪甲苷的峰面
积，计算黄芪甲苷峰面积的RSD为1．24％。结果表
明，供试品溶液在48h内稳定。
2．6重现性试验：精密称取同一批黄芪药材5份，各
约4．0g，制备供试品溶液，进样分析，测定相应的峰
面积，计算黄芪甲苷平均质量分数为1．57mg／g，
RSD—1．26％(胛一5)，表明方法的重现性良好。
2．7 回收率试验：精密称定已测定的药材中粉6
份，各约2．0g，分别精密加入黄芪甲苷3．0mg，按
药材供试品溶液制备项下操作，计算回收率，平均回
收率为98．0％，RSD为0．87％。
2．8样品的测定：取不同批次的药材，按照供试品
液制备项下方法操作，得供试品溶液，分别精密吸取
供试品溶液10gL，按照上述色谱条件分析测定，以
外标两点法计算，样品的测定结果见表1。
表1不同产地黄芪样品中黄芪甲苷(席一3)
Table1 AstragalosideinRadixAstragali
fromvarioushabitats(席一3)
3讨论
3．1 为了获得最高灵敏度，需要调节ELSD的检
测器的载气压力、雾化温度和蒸发温度这3个重要
的参数，通过实验发现，在1．0mL／min的体积流量
条件下，设定17．926×104Pa的载气压力、30℃的
雾化温度和45℃的蒸发温度可以获得最大的检测
灵敏度。当载气压力较低时，会因喷出的雾滴不均匀
产生色谱峰顶端尖刺的现象；而载气压力较低，则会
因为雾滴的粒度过小，使灵敏度降低；温度过低时，
流动相的蒸发会不完全，直接由蒸发管流出，导致检
测信号较低；温度过高，则会使形成的微粒大小不均
匀，导致精密度较差。另外，设置衰减值为3，可以使
信号的响应较高，且基线的噪音不会对检测产生任
何影响。
3．2直接以峰面积与样品的质量浓度计算标准曲
线的线性较差，而将峰面积与样品的质量浓度值分
别取自然对数后可得到理想的线形关系，这种现象
与ELSD的检测机制是一致的。当颗粒与光发生作
用时，会有多个类型的散射过程，均与颗粒的大小及
波长有关，其散射光的强度是由不同类型组合而成
的，与样品的质量呈双对数线性关系。
3．3对黄芪甲苷进行测定时，提取液以氨试液洗涤
的量远高于未用氨试液处理，据文献报道r4]，黄芪中
有5种黄芪皂苷，它们的基本母核均为黄芪皂苷IV
(黄芪甲苷)，这几种皂苷的糖链上连结有l～3个
乙酰基，用碱处理时，乙酰基易脱落成为黄芪甲苷。
因此经氨试液处理后的样品，所测得结果应该是黄
万方数据
·1888· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
芪总皂苷的量。
3．4 通过高效液相色谱一蒸发光散射法对不同产地黄
芪中黄芪甲苷的测定，对黄芪质量进行比较，得出如下
结论：不同产地黄芪中黄芪甲苷的量有一定差异。
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高效液相色谱法测定不同产地枳壳中柚皮苷和新橙皮苷
杨武亮1，杨世林2，黄加龙1，李霞兰1，欧阳辉2，刘颖2，王少军2
(1．江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，江西南昌 330004；
2．中国固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330006)
枳壳始载于《药性论》，历代本草多有记载。经考
证，宋代以前使用的枳实(壳)为枸橘Poncirus
trifoliata(L．)Raf．的干燥幼果及未成熟果实；明、
清以后则以质量更优的酸橙CitrusaurantiumL．
及其栽培变种的干燥幼果及未成熟果实为主流作枳
实及枳壳入药，并沿用至今。枳壳具有理气宽中、行
滞消胀功效。其目前已知主要成分为黄酮类化合物、
挥发油和少量的生物碱等成分。《中国药典92005年
版一部[11在定量测定项下采用HPLC测定柚皮苷
的量来控制枳壳的质量。只以柚皮苷为指标来控制
枳壳的质量，不能很好地反映枳壳药材的基原植物
就是酸橙，因为柑橘属有多种植物果实含有柚皮苷
而不含有新橙皮苷，也不作为枳壳的基原植物。本研
究同时以柚皮苷和新橙皮苷为对照品，采用HPLC
法同时控制枳壳药材中柚皮苷和新橙皮苷的量，能
反映目前枳壳主产区枳壳的来源，可以保证药材质
量的均匀和稳定。此方法简便、可靠，能为枳壳的质
量评价提供更为可靠的依据。
1仪器与试药
1．1 仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VwD检
测器，Agilent1100色谱工作站；电子天平
(METTI。ERAE240)。
1．2试药：乙腈(HPLC级，Merck)；其他试剂均为
分析纯；水为重蒸水。新橙皮苷对照品(自制，经
HPLC峰面积归一化法测定质量分数99．34％)；柚
皮苷对照品购于中国药品生物制品检定所(供定量
测定用，批号0722—200108)。枳壳药材2002年购
(采)于江西、湖南、四川、重庆、浙江等地。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为HypersilC。8柱(200mlTl×
4．6mrll，5弘m)。流动相为乙腈一水(磷酸调pH3)
(20：80)；检测波长为283nm；体积流量：1．0mE／
min；柱温：25℃。理论塔板数按柚皮苷峰计算应不
得低于2000。
2．2对照品溶液的制备：精密称取减压干燥至恒重
的柚皮苷和新橙皮苷对照品各10mg，分别置50mL
量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，从中各精密量取5mL，
同置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2．3供试品溶液的制备：取枳壳粉末(过40目筛)
约0．5g，精密称定，置100mL圆底烧瓶中，加25
mI。甲醇，水浴回流提取1．5h，滤过，滤液置50mL
量瓶中，残渣用甲醇再提取两次，每次加甲醇10mL
提取10min，合并提取液，冷却，最后加甲醇至刻
度，摇匀。准确吸取该溶液5mL置50mL量瓶中，
加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0．45弘m滤膜，取续滤
液作为供试品溶液。
2．4线性范围考察：精密称取柚皮苷对照品9．73
mg和新橙皮苷对照品9．69hag，分别置25mL量
瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上
述两个对照品溶液各l、2、3、4、5、6mL分别置25
mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到混合
对照品溶液。分别进样10肛L，以对照品的量为横坐
收稿日期：2006—04—10
基金项目：国家科技部2002年“中药材标准及其相关临床疗效评价标准”资助项目(ZTS一334—17)
作者简介：杨武亮(1965一)，男，江西南昌人，现为江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室副教授，硕士生导师，重点研究方向为
中药质量控制。E—mail：yangwuliang@163．corn
万方数据
HPLC-ELSD法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷
作者： 胡海云， 王伟华， 段启
作者单位： 广东康美药业股份有限公司技术研究中心,广东,普宁,515300
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(12)
被引用次数： 4次

参考文献(4条)
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引证文献(4条)
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2.王春怡.李卫民 HPLC-ELSD法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量[期刊论文]-辽宁中医药大学学报 2008(10)
3.张丽.佟巍.龚海英.李灵芝 双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量[期刊论文]-武警医学院
学报 2008(6)
4.王春怡.叶雪兰.李卫民.高英 黄芪总皂苷提取物的质量标准研究[期刊论文]-时珍国医国药 2012(1)


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