全 文 ：·368· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
了浸润过程和溶质扩散过程，使人参基块内部毛细
孑L内快速充满溶剂，提高了有效成分的传质速度。在
短时间(小于2min)内人参基块内部的溶液浓度与
外面周围介质浓度即可达到平衡。这样细胞就处于
高渗透压的介质(提取溶剂乙醇)中，在泄压过程中，
介质压力急速降低，细胞内外渗透压差迅速增大，从
而导致细胞破碎；同时在高压作用下，细胞骨架、细
胞膜等结构以及化学键发生变化，这样细胞内有效
成分与提取溶剂充分接触，因此缩短了提取时间、提
高了提取收率。
3．4超高压不会影响生物小分子的结构，但能够影
响蛋白质、核酸、脂质、淀粉等生物大分子的立体结
构，使蛋白质变性、淀粉糊化、酶失活、细菌等微生物
灭活[7]，因此超高压技术有待于进一步的深入研究。
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猪苓多糖长循环脂质体的制备
王凯平，张 玉，张俊
(华中科技大学同济医学院药学院，湖北武汉430030)
摘 要：目的 研究猪苓多糖长循环脂质体的制备方法，并对其质量进行控制。方法 用氯仿注入合并硫酸铵梯度
法制备猪苓多糖长循环脂质体，并采用紫外一Sephadex法测定脂质体中猪苓多糖的含量和包封率。结果猪苓多糖
长循环脂质体平均粒径为100nm，药物包封率为55．3％。结论用氯仿注入合并硫酸铵梯度法可制得包封率高、
粒径小的猪苓多糖长循环脂质体。紫外一Sephadex法测定该脂质体的包封率准确性高、重现性好、简便易行。
关键词：猪苓多糖；长循环脂质体；包封率；紫外一Sephadex法
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253～2670(2005)03—0368一03
PreparationofPolyporusumbellatuspolysaccharideslongcirculatingliposomes
WANGKai—ping，ZHANGYU，ZHANGJun
(SchoolfPharmacy，TongjiMedicalCo lege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China)
Abstract：ObjectiveTopreparethPolyporusumbellatuspolysaccharides(PUPS)longcirrculating
liposomes(LCLs)andtostudythequalitycontrolofPUPSLCLs．MethodsThePUPSLCLswere
preparedbychloroforminfusionc mbinedwiththeammoniumsulphategradientme hod．Thecontenta d
encapsulationeff ciencyofPUPSinLCLsweredeterminedbyUV—Sephadexmethod．ResultsMean
diameterofthePUPSLCLswas100nm，withthencapsulationefficiencyof55．3％．ConelusionThe
LCLswithhighencapsulationefficiencya dsmallparticlesizecouldbepreparedbychloroforminfusion
combinedwiththeammoniumsulphategradientme hod．UV—SephadexmethodiSsuitableforthequality
controlofPUPSLC：Lsandtheresultsarereliable．
Keywords：Polyporusumbellatuspolysaccharides(PUPS)；longcirculatingliposomes(LCLs)；
encapsulationeff ciency；UV—Sephadexmethod
猪苓Polyporusumbellatus(Pers．)Fries系多
孑L菌科多孑L菌属猪苓的菌核。从猪苓中提取的猪苓
收稿日期：2004—05—06
多糖具有抑制肿瘤生长，增强荷瘤动物及肿瘤病人
机体免疫功能的作用Ⅲ。脂质体是目前降低药物毒
万方数据
。中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·369·
性常见的制剂学手段之一，是较理想的药物载体。但
以传统的卵磷脂、胆固醇制备的常规脂质体在体内
多被网状内皮系统吞噬，在血液循环中驻留时间较
短，且主要靶向于肝、脾脏。近年来，采用PEG脂质
衍生物修饰脂质体的研究受到广泛关注，并取得很
大进展。主要是这类脂质体延长了体内循环时间，故
称为长循环脂质体。由于经PEG修饰后的脂质体表
面亲水性增加，降低了其与吞噬细胞的亲和性，因而
能逃避网状内皮系统的识别而减少其对脂质体的捕
获，故又称为隐形脂质体[2矗]。为了延长猪苓多糖在
血液中的滞留时间，增强靶向性，提高治疗肿瘤的疗
效，本实验以PEG作为修饰脂质体膜材，制备了猪
苓多糖长循环脂质体，并对其质量控制进行了研究。
1仪器与材料
真空旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，722
紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)，激光散射
粒度测定仪(SubmicronPa ticleSizeModel370，
USA)。大豆卵磷脂(上海伯奥生物科技有限公司)，
胆固醇(上海化学制剂公司)，PEG2000(上海浦东高
南化工厂)，葡聚糖凝胶(SephadexG一50，
Pharmacia，进口分装)。猪苓多糖(连云港东风制药
厂药物研究所)。
2方法和结果
2．1猪苓多糖的制备卧~6]：猪苓(切片)200g，8倍水
量煎煮1．5h，煎煮4次，合并煎煮液，冷却，加10％
氢氧化钙溶液调pH12～13(出现大量沉淀)，放置过
夜。上清液抽滤，得棕黄色滤液。滴加3mol／L硫酸至
pH5～6，抽滤。滤液浓缩至150mL，趁热抽滤，除去
灰白色沉淀。浓缩液置冰箱过夜，抽滤。加入无水乙
醇约200mL，搅拌后静置，弃上清液，抽滤，得淡黄
色沉淀。低温干燥，得棕黄色猪苓多糖粉末。
2．2猪苓多糖的测定
2．2．1苯酚溶液的制备：苯酚i00g、铝片0．1g、
NaHCO。0．05g，常压蒸馏，收集约180oC馏份。称
取10g，加水约190mL溶解，棕色瓶盛装，置冰箱
备用。
2．2．2对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的
葡萄糖10mg，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，
即得。
2．2．3标准曲线的绘制：精密量取葡萄糖对照品溶
液0．3、0．4、0．5、0．6、0．7、0．8、0．9、1．0mL，分别置
试管中，加水至2mL，再加苯酚溶液1．0mL，摇匀。
迅速滴加浓硫酸5．0mL，放置5min后沸水浴中加
热15min，取出后置冷水中冷却。以不含对照品溶
液的一管做空白，按分光光度法于490nm处测吸
光度(A)值。以葡萄糖质量浓度C(ttg／mL)对A进
行线性回归，得回归方程C一23．677A一0．0932，
T-一---0．9989。表明葡萄糖在4．01～13．38ttg／mL与
A存在良好线性关系。
2．3 提取物中猪苓多糖的测定：精密称取样品
0．01g，置100mL量瓶中加水溶解稀释至刻度。精
密吸取1．2mL，按标准曲线的绘制项下操作，测得
A值。将A带入标准曲线方程求质量浓度，计算猪
苓多糖的质量分数。3批样品中猪苓多糖的平均质
量分数为12．6％。
2．4空白脂质体的制备：采用薄膜超声法[7’8]。大豆
卵磷脂、胆固醇和PEG2000按摩尔比7：2：0．4
精密称定质量后溶于2～3mL氯仿中，旋转蒸干除
去有机溶剂。另取0．12mol／L硫酸铵溶液3mL水
化。水浴式超声30min得脂质体混悬液。超速离心
(5000r／rain)15min，上清液即为空白脂质体。
2．5载药脂质体的制备：将空白脂质体装于透析袋
中，置于100mL生理盐水中，室温透析2次，每次1
h。取透析后的脂质体1．5mL，加入0．3％猪苓多糖
水溶液1．5mL，于40℃水浴中放置30min，并旋涡
振摇，即得猪苓多糖长循环脂质体。
2．6载药脂质体中猪苓多糖的测定：取载药脂质体
1mL，置100mL量瓶中，加蒸馏水至刻度。另取空
白脂质体同法作为空白。各取1．2mL按苯酚一硫酸
法在490nm处测定A值，由标准曲线方程计算载
药脂质体中猪苓多糖的含量。3批载药脂质体中猪
苓多糖的平均质量分数为0．78mg／mL。
2．7包封率的测定[9]：吸取1．0mL载药脂质体加
到葡聚糖G一50柱上，以1mL／min体积流量用生理
盐水洗脱。收集脂质体洗脱液(乳白色，约6mL)和
后续液(约30mL)。分别置100mL量瓶中，加生理
盐水至刻度，另取空白脂质体过柱洗脱做空白。分别
取1．2mL按苯酚一硫酸法在490nm处测定A值，计
算猪苓多糖含量，并按下式计算包封率，结果见表1。
表1长循环脂质体包封率的测定结果
Table1 Resultsofencapsulationeff ciencyofLCL
包封率一(1--Cf／C总)×100％
Ct为过柱后游离猪苓多糖含量；C总为脂质体中猪苓多糖包
封量与Ct之和
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
2．8粒径的测定：用激光散射粒度测定仪测定猪苓
多糖长循环脂质体的平均粒径为(100±40)rim。
2．9 稳定性试验：4批猪苓多糖长循环脂质体在
(6士2)℃存放6个月，于0、1、3、6个月末考察外
观、含量和包封率。结果外观没有发生明显改变，0、
1、3、6个月的猪苓多糖质量分数分别为0．78、0．77、
0．75、0．73mg／mL，包封率分别为55．3％、56．8％、
54．6％、55．1％。
3讨论
根据文献报道[1⋯，猪苓多糖含量测定方法一般
为分光光度法，本法建立的紫外一Sephadex测定脂
质体中猪苓多糖的含量条件简单，结果可靠。
本实验在对SephadexG一50柱分离猪苓多糖长
循环脂质体最佳柱色谱分离条件进行探讨中发现，
乳白色脂质体完全流出后，开始的2mL流出液无
吸光度，说明脂质体与游离多糖完全分离。在过
Sephadex柱时，洗脱速度及上样量均对分离效果产
生影响。上样量大，脂质体有拖尾现象，选取1。0mL
可避免拖尾。洗脱速度太快，凝胶微孔内外猪苓多糖
来不及平衡，提前出峰，造成分离不好，故控制流速
不大于1mL／min。
SephadexG一50紫外法测定猪苓多糖长循环脂
质体包封率准确性高、重现性好。药物脂质体的包封
率测定方法很多，有超滤膜法、超速离心法、分子筛
法等。本实验根据猪苓多糖长循环脂质体直径大小
及猪苓多糖的吸收特征图谱，设计了紫外一Sephadex
法测定猪苓多糖长循环脂质体包封率及含量。另外，
在测定脂质体中猪苓多糖含量时，用空白脂质体作
空白可以消除脂质体膜材成分对测定的干扰。
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正交优选法筛选荆芥炭炮制的最佳工艺
张 丽，包贝华，孙 磊，丁安伟
(南京中医药大学药学院，江苏南京210029)
摘 要：目的 筛选荆芥炭炮制的最佳工艺。方法 采用分光光度法，测定不同工艺炮制的荆芥炭中总黄酮的含
量。结果荆芥炭炮制的最佳条件是210℃、加热10min。结论重复试验表明，所选的最佳炮制工艺较为合理。
关键词：荆芥炭；炮制；总黄酮
中图分类号：R283．1；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)03—0370—03
OptimumprocessingtechniqueofHerbaSchizonepetaeCarbonisatusbyorthogonaldesign
ZHANGLi，BAOBei—hua，SUNLei，DingA —wei
(CollegeofPharmacy。NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210029，China)
Keywords：HerbaSchizonepetaeCarbonisatus(HSC)；processing；totalflavono ds
收稿日期：2004—07—16
基金项目：国家“十五”攻关项目(2001BA701A11)
作者简介：张丽(1971一)，女，南京中医药大学药学院药物分析教研室副主任，现攻读南京中医药大学中药炮制学博士。
Tel：(025)51998192
万方数据
猪苓多糖长循环脂质体的制备
作者： 王凯平， 张玉， 张俊， WANG Kai-ping， ZHANG Yu， ZHANG Jun
作者单位： 华中科技大学同济医学院药学院,湖北,武汉,430030
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 9次

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