全 文 ：·1084· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
镰100◆一t／d图4切口外缠膜对嫁接成活率的影响Fig．4Effectofincisiontwistedwithparafilmonsurvivalrateofshoot—tipgrafting
的愈伤组织可快速填满伤I=I，明显提高嫁接成活率。
3讨论
柑桔属植物的病害较为严重，如黄龙病是由类
细菌(类菌原体)侵染所致，以木虱作为传播媒介，是
一种毁灭性的病害。现有的防治措施，主要是喷洒农
药杀灭木虱及烧毁病株，从切断传染源方面来控制
其蔓延，但对病害本身并没有有效的防治手段。同时
农药残留超标，严重制约了高产、优质、低残留药材
和水果的生产。因此，无病苗木的培育具有重要的意
义。目前，柑桔属植物无病苗木的培育方法主要有热
处理法、珠心胚培养、茎尖培养及茎尖微嫁接等4
种。热处理法较为简便易行，但经处理后的苗木和接
穗存活率较低，且对于病毒脱除困难[7]。珠心胚培养
会产生童期症状，且多变异[8]。茎尖培养脱除病原
体，在许多植物上获得成功并应用于生产，但柑桔属
植物的离体实验表明，茎尖培养难以成活且存在生
根难的问题[5]。采用茎尖微嫁接可以克服此类困难，
自Navarro等[2]首次应用于柑桔脱毒后，20多年来
得到了迅速的发展，并产生了巨大的经济效益。由于
它既不会产生变异，也无童期现象，同时，又能脱除
大部分病原体，因此已成为获得柑桔属植物无病原
体苗木的最佳途径[2~5]。通过茎尖微嫁接试验，笔者
建立了佛手茎尖微嫁接方法，获得了较高的嫁接成
活率，为培育佛手脱病原体苗奠定了基础。本实验首
次报道佛手茎尖微嫁接技术，有关微嫁接苗病原体
的检测及繁殖，还有待进一步研究。
References：
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海南胡椒药材的HPLC指纹图谱研究
张艳秋，洪金波
(海南省药物研究所，海南海口 570314)
摘 要：目的 建立胡椒药材的指纹图谱，为胡椒的质量控制提供新方法。方法 采用高效液相色谱法，选用
YMCC，8色谱柱(250mm×4．6mm，5脚)，流动相为甲醇一水(65：35)；体积流量为lmL／rnin；检测波长为245
am。结果建立了胡椒药材的指纹图谱，并检测了不同来源10批胡椒药材HPLC指纹图谱，相似度较高，并且利
用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”生成了胡椒药材的对照指纹图谱，共有指纹峰12个，各色谱峰分离良好；
对比分析4批市售胡椒粉HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度。结论所建立的胡椒药材的指纹图谱有良好的精
密度、重现性、稳定性，适于胡椒的质量控制。
关键词：胡椒；HPLC；指纹图谱；相似度
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)07—1084一04
收稿日期：2006—10—20
基金项目：海南省自然科学基金项目(20103)
作者简介：张艳秋(1962一)，女，吉林人，研究员，研究方向为中药质量控制的方法学研究和薪品开发。
E—mail：zyq@hifda．gov．cn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1085·
HPLCFingerprintsofFructusPiperisfromHainan
ZHANGYan—qiu，HONGJin—bo
(HainanInstituteofMateriaMedica，Haikou570314，China)
Keywords：FructusPiperis；HPLC；fingerprint；similarity
胡椒为胡椒科胡椒属多年生藤本植物胡椒
PipernigrumLinn．的果实，主产国是印度、印度尼
西亚和马来西亚。中国于20世纪50年代引入海南
试种，主产地为海南岛和广东湛江地区。未成熟时干
后果皮皱缩，黑色称黑胡椒；成熟时红色，去掉中果
皮则为灰白色称白胡椒。胡椒可药食两用，日常用于
调味或药用均以白胡椒为佳‘1|。胡椒始载于《新修本
草》，其性热，味辛，有温中散寒、下气、消痰之功效，
用于胃寒呕吐、腹痛泄泻、食欲不振、癫痫痰多[2]。现
代药理研究表明，胡椒有明显的镇静作用，所含胡椒
碱有对抗戊四唑惊厥及对抗电惊厥的作用，抗癫痫
作用较强‰43；还能有效预防实验性动脉粥样硬化斑
块的形成[5]。
近年来，随着国际市场对胡椒需求的增加，海南
胡椒的种植、加工比较活跃，产量也大幅度增长，但
由于台风的影响，胡椒的产量并不稳定，质量也参差
不齐。市售的胡椒和胡椒粉，掺假现象多见，肉眼不
易识别，传统的分析方法仅能检测样品中胡椒碱的
量，并不能客观、有效地评价或控制其质量，对纯度
无法判断。而指纹图谱技术作为多组分复杂样品的
有效的质量控制方法，可以反映出待测样品的整体
性、特征性，目前已广泛被作为中草药及制剂的质量
控制手段之一。本实验采用高效液相色谱法，研究并
建立了胡椒药材(白胡椒)指纹图谱检测方法，对不同
来源的10批胡椒药材进行分析对比，发现胡椒有12
个共有指纹峰，通过分析建立了胡椒药材的对照指纹
图谱。为胡椒与胡椒粉产品的质量控制提供参考。
1仪器与材料
1．1仪器与试剂：美国Waters公司的高效液相色
谱仪，紫外检测器2487；KQ3200超声波清洗器(上
海洁净超声波设备厂)；甲醇为色谱纯，江苏汉邦科
技公司提供，水为自制超纯水。
1．2对照品：胡椒碱，由中国药品生物制品检定所
提供，批号：110775—200203。
1．3样品来源：试验用胡椒药材均来源于海南本岛，
从产地收集或市售购买，均经过鉴定确认为胡椒；胡
椒粉不同品牌的瓶装市售产品，来源列入表1。
2方法与结果
2．1 色谱条件与系统适应性：色谱柱为YMC的
表1样品来源
Table1 Samplesources
C18(250mm×4．6mm，5t-,m)，流动相为甲醇一水
(65：35)，体积流量为1mL／min；柱温为窒温，检
测波长为254nm，理论塔板数以胡椒碱计不低于
4500。
2．2对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱适量，加
甲醇制成胡椒碱约60pg／mL的溶液，作为对照品
溶液。
2．3供试品溶液的制备：取胡椒药材经60℃干燥
3h后粉碎，或直接称取过100目筛的胡椒粉末
0．25g，置50mL棕色量瓶中，加甲醇约30mL密
塞超声提取30min，放凉，加甲醇至刻度，摇匀，以
0．45肛m微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2．4测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品
溶液各20弘L，注入液相色谱仪，记录70rain的色谱
图，即得。
2．5 精密度试验：取同一份胡椒药材(样品编号
Ha)的供试品溶液重复进样5次，按上述色谱条件
测定，比较不同色谱中各峰的保留时间和峰面积相
对胡椒碱峰的比值，结果所标定的各色谱峰相对保
留时间和峰面积比值基本一致，其RSD分别为
0．22％～1．1％和o％～3．6％；与对照模式的色谱
图比较，各色谱相似度均大于0．999。
2．6 稳定性试验：取同一份胡椒药材(样品编号
Ha)的供试品溶液每间隔一定时间进样，比较不同
色谱中各峰的保留时间和峰面积相对胡椒碱峰的比
值，最后一次与第一次进样间隔时间为5d。结果所
万方数据
·1086· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
标定的各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值基本
一致，其RSD分别为0．22％～1．1％和0％～
3．6％；与对照模式的色谱图比较，相似度均大于
0．999，说明供试品溶液比较稳定。
2．7 重现性试验：取同一批胡椒药材(样品编号
Hi)均匀的粉末样品5份，分别精密称定，按供试品
的制备方法制备供试品溶液，并分别按照上述色谱
条件连续进样测定，以考察指纹图谱的重现性。数据
处理结果表明，5份样品所标定的各色谱峰的相对
保留时间基本一致，RSD为0．16％～1．9％，与对照
模式的色谱图比较，相似度均大于0．999，说明方法
的重现性良好。
2．8胡椒药材的HPLC指纹图谱中特征峰的标
定：根据10批不同来源的胡椒药材的HPLC指纹
图谱检测结果，利用“中药色谱指纹图相似度评价软
件”生成胡椒药材共有模式的对照HPLC指纹图谱
(见图1)，其中共有特征峰有12个，量最高的3号
峰为胡椒碱的指纹峰。
3
；一2 4^^5．6^78M9101j驻R．
t／rain
图1胡椒药材的对照指纹图谱
Fig．1ReferencefingerprintofFructusPiperis
2．9不同来源的胡椒药材的指纹图谱相似度评价：
采用“中药色谱指纹图谱相似度软件2004A版”评
价系统，对10批不同来源的胡椒药材的HPLC指
纹图谱检测结果进行数据处理，生成胡椒药材共有
模式的对照HPLC指纹图谱(图2中R，)，并通过
“中药色谱指纹图谱相似度软件2004B版”评价系
统，分析对比了10个样品的HPLC指纹图谱(图2
中S。～。。)与胡椒药材共有模式的对照HPLC指纹图
谱(R。)的相似度，结果分别为：0．999、1．000、
1．000、0．999、1．000、1．000、1．000、1．000、0．999、
1．000，相似度极高，说明胡椒药材在岛内不同产区
化学成分变化不大。
2．10市售胡椒粉的指纹图谱与胡椒对照模式的指
纹图比较：随机购买市售4种品牌的胡椒粉各1瓶，
分别进行HPLC指纹图谱分析，通过与胡椒药材共
有模式的对照HPLC指纹图比较其相似度，结果表
明，胡椒粉1、2、3、4号相似度分别为0．980、0．771、
0．727、0．640(见图3)。不难看出1号相似度较高，
说明1号为纯胡椒粉，其余则掺有其他物质。经与产
品配料表核对发现，1、3、4号胡椒粉标示配料与测
试结果相符；2号标示配料与测试结果不符。
0．00 11．6623．33 4．9946．6658．3269．98
t／min
图2 10批不同来源的胡椒药材的HPLC指纹图谱
Fig．2HPLCFingerprintsoftenbatchesofFructus
Piperisfromdifferentsources
{
． 4
————，。k—．————wJLn．，。—。。～；
1川 M^^JL．． 尽
0．0011．6623334．9946．66583269．98
t／min
图3 4批市售胡椒粉的指纹图谱与对照指纹图谱
Fig．3FingerprintsoffourbatchesofFructus
Piperispowdersoldinmarketandtheir
referencefingerprints
3讨论
3．1 检测方法：由于胡椒中所含的主要活性成分为
酰胺生物碱类，在200～400nm可以有紫外吸收，
因此，色谱指纹图谱建立选用紫外检测器。
3．2对照品的选择：胡椒中胡椒碱量最高，且为活
性成分，因此选择胡椒碱作为对照品。
3．3流动相的选择：参考文献方法‘引，采用甲醇一水
系统试验。以尽量多地检测到胡椒的成分峰为目的，
万方数据
中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1087·
因其成分类型不复杂，经过试验选择甲醇一水(65：
35)分析时间70min，即可达到较好的分离效果，多
个样本分析结果表明，该分离系统产生的HPLC图
谱能够标示出胡椒的HPLC指纹特征，放被选用。
3．4检测波长的选择：试验过程中通过改变波长考
察指纹图谱的出峰效果，结果表明254nm测定的
信息量多，特征最为明显，图谱中的各指纹峰信号
强，分离效果较好。因此，选用该波长作为检测波长。
3．5提取溶剂的选择：胡椒中主要含胡椒碱类生物
碱成分，经过甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等溶剂提取试验，
甲醇提取部分成分相对多，量高，故选择甲醇提取。
3．6提取方法选择：采用超声提取与回流提取两种
方法进行对比试验，结果表明相同提取时间，前者提
取胡椒碱的峰面积高，而且一步完成操作减少转移
过程的损失，又节约能源，故选择超声提取。并对比
了样品的粉碎粒度，超声提取时间，最终选择用过
i00目筛的胡椒细粉，在棕色量瓶中直接加入溶剂
超声提取30min，滤过后取续滤液直接测试。
通过以上10批胡椒的HPLC指纹相似度结果
可以看出，海南岛内不同来源的胡椒指纹图谱相似
度较高，均大于0．99，说明药材组成一致性较好，质
量较稳定；但个别成分与胡椒碱的量比例有些不同，
使用者可根据需要选择所需成分量的高低。此外，还
对比分析了市售新鲜胡椒、经加热干燥的胡椒、黑胡
椒的指纹图谱，与胡椒药材共有模式的对照HPLC
指纹图谱比较其相似度均大于o．99，无明显区别，
只是黑胡椒各成分的量低于白胡椒；此外，陈年胡椒
(Ha)指纹图谱中各成分与胡椒碱峰面积相对比值
略低于存放时间短的各批，提示胡椒存放不宜过久。
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不同变异类型甘草中甘草苷及甘草酸量比较研究
杨全1’2，王文全p，魏胜利1，解军波1，陈千良1
(1．北京中医药大学中药学院，北京 100102；2．广东药学院中药学院，广东广州510006)
摘要：目的对人工栽培群体不同变异类型甘草中甘草苷及甘草酸的量进行分析，遴选优良的变异类型，为甘草
优良品种选育提供理论依据。方法采用HPLC法，以甘草苷、甘草酸量为检测指标，对变异类型甘草药材样品进
行比较分析。结果 甘草苷、甘草酸量在各变异类型甘草药材中的量存在较大差异。绿茎茎光滑类型、绿茎叶片皱
褶类型甘草中甘草苷及甘草酸量较高。结论甘草表型的变异已经引起了化学成分的变化，可以通过遴选优良的
变异类型，培育高产、优质的甘草栽培品种。
关键词：变异类型甘草；甘草苷；甘草酸
中圈分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)07—1087—04
Comparisoncontentsbetweenliquiritinandglycyrrhizicacidindifferent
variantGlycyrrhizauralensis
YANGQuanl一。WANGen—quanl，WElSheng—lil，XIEJun_b01，CHENQfan—lian91
(1．SchoolofChineseMateriaMedica，BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Beijing100102，China；
2．SchoolfChineseMateriaMedica，GuangdongParmaceuticalUn versity，Guangzhou510006，China)
Keywords：variantofGlycyrrhizauralensisFisch．；liquiritin；glycyrrhizicacid
收稿日期：2006—11-06
基金项目：国家自然科学基金(30400588)，北京市自然科学基金(6042021)
作者简介：杨全(1972一)，男，讲师，在读博士研究生，主要从事中药资源开发及利用方面的研究工作。
E—mail：yangquan7208@vip．163．com
*通讯作者王文全Tel；(010)84738623E—mail：wwq57@126．tom
万方数据
海南胡椒药材的HPLC指纹图谱研究
作者： 张艳秋， 洪金波， ZHANG Yan-qiu， HONG Jin-bo
作者单位： 海南省药物研究所,海南,海口,570314
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)

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